專利名稱：一種精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種體外診斷用試劑盒及其檢測(cè)方法， 具體地說(shuō)是一種精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在男性不育相關(guān)研究中，精漿鋅濃度的檢測(cè)是評(píng)估前列腺功能的最可靠的生化指標(biāo)之一。精液中的鋅直接參與精子的生成、成熟和獲能過(guò)程，還可保護(hù)精子膜，通過(guò)延緩精子細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化作用從而維持精子活力，對(duì)精子活力、運(yùn)動(dòng)性和功能都有著重要得作用。另外，精液中的鋅對(duì)精子頂體酶、精子核染色質(zhì)解聚都有可逆性抑制作用，使精子能順利通過(guò)透明帶和放射冠與卵子結(jié)合，進(jìn)而保證精子的質(zhì)量、受精能力和生精功能正常。研究表明，精子活力良好者與低下者相比，精漿中鋅的濃度有著顯著的差異。精漿中鋅的含量明顯升高時(shí)，多見(jiàn)于阻塞性無(wú)精子癥和死精子癥患者中；精漿中鋅的含量降低時(shí)，多見(jiàn)于患有前列腺炎等影響前列腺分泌功能以及精漿不液化的患者中。目前，精漿中鋅濃度定量檢測(cè)的方法主要是化學(xué)比色法，多為手工或半自動(dòng)操作， 加樣程序多，所用試劑量大，試劑和樣品混勻一定的時(shí)間后，通過(guò)分光光度計(jì)逐一比色測(cè)定，然后根據(jù)公式計(jì)算出結(jié)果，一次只能測(cè)定一個(gè)項(xiàng)目，耗費(fèi)了大量的時(shí)間和人力，而且不同人之間的操作誤差較大?，F(xiàn)在，臨床生化檢驗(yàn)基本上都實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化分析。全自動(dòng)生化儀就是將原始手工操作過(guò)程中的取樣、混勻、溫育(37°C)檢測(cè)、結(jié)果、計(jì)算、判斷、顯示和打印結(jié)果及清洗等步驟全部或者部分自動(dòng)運(yùn)行，由于其測(cè)量速度快、準(zhǔn)確性高、消耗試劑量小，現(xiàn)已在各級(jí)醫(yī)院、 防疫站、計(jì)劃生育服務(wù)站等得到了廣泛的應(yīng)用，配合使用可大大提高常規(guī)生化檢驗(yàn)的效率及收益。遺憾的是，截止到目前，無(wú)論是國(guó)外還是國(guó)內(nèi)，對(duì)于精漿鋅項(xiàng)目的檢測(cè)，除了早期的科研成果外，尚沒(méi)有一種可與全自動(dòng)生化儀相配套的、商品化的檢測(cè)試劑盒問(wèn)世，因此，建立一種與全自動(dòng)生化儀相配套使用的精漿鋅濃度檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法就顯得尤為迫切和重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，填補(bǔ)市場(chǎng)上的空缺，提供一種與全自動(dòng)生化儀相配套使用的精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明的另一目的在于提供所述精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)精漿鋅濃度中的應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案1、一種精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒，包括Rl試劑和鋅標(biāo)準(zhǔn)液；其中，1) Rl試劑是包括以下含量的組份氯化銨110-120mmol/L ；氟化銨260-280mmol/L ；
十二烷基硫酸鈉30-45mmol/L;氨水70-90mmol/L ；甲醇480_510mmol/ L ；填充劑0.5-3.0%;防腐劑0.01-0.1%;顯色劑0. 05-0. 2mmo ；2)鋅標(biāo)準(zhǔn)液是包括以下含量的組份硫酸鋅2-6mmol/L ；防腐劑0.01-0.1%;其中，所述顯色劑為1-(2_吡啶偶氮)-2-萘酚或4-(2-吡啶偶氮)_間苯二酚；所述防腐劑為疊氮鈉、硫柳汞、慶大霉素或ProClin系列防腐劑中的任意一種；所述填充劑為 Triton X-100 或 Triton X-114。精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)精漿鋅濃度中的應(yīng)用。所述的應(yīng)用精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)精漿鋅濃度中的應(yīng)用，包括以下步驟1)樣品制備新鮮精液液化后通過(guò)3000 5000rpm離心10 20min，所獲得的上
清液即是；2)在全自動(dòng)生化儀的操作軟件上輸入基本參數(shù)如下檢測(cè)項(xiàng)目Zn ；樣品試劑比1 100;檢測(cè)方法終點(diǎn)法；定標(biāo)方法單點(diǎn)定標(biāo)或兩點(diǎn)定標(biāo)；主波長(zhǎng)540-560nm ；反應(yīng)方向上升；反應(yīng)時(shí)間300-600秒；3)定標(biāo)操作用鋅標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行定標(biāo)，儀器會(huì)根據(jù)鋅標(biāo)準(zhǔn)液的濃度及其吸光度值， 得出一個(gè)鋅濃度和吸光度之間的關(guān)系式Y(jié) = AX(單點(diǎn)定標(biāo))或Y = AX+B(兩點(diǎn)定標(biāo))；其中，單點(diǎn)定標(biāo)的常數(shù)A或兩點(diǎn)定標(biāo)的常數(shù)A、B在定標(biāo)結(jié)束后自動(dòng)給出，Y代表鋅標(biāo)準(zhǔn)液的濃度，X代表鋅標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度；4)樣本檢測(cè)將制備好的樣本和Rl試劑放在全自動(dòng)生化儀的相應(yīng)位置上，輸入樣本的檢測(cè)信息后，開(kāi)始檢測(cè)；測(cè)試結(jié)束后，儀器根據(jù)定標(biāo)關(guān)系式自動(dòng)計(jì)算出樣本中鋅的濃度，單點(diǎn)定標(biāo)關(guān)系式Y(jié) = AX，或兩點(diǎn)定標(biāo)關(guān)系式Υ = ΑΧ+Β其中，X即樣本的吸光度，在全自動(dòng)生化儀上自動(dòng)測(cè)定給出，單點(diǎn)定標(biāo)關(guān)系式中的常數(shù)A或兩點(diǎn)定標(biāo)關(guān)系式中的常數(shù)A、B在定標(biāo)結(jié)束后為已知。所述Rl試劑中，氨水的濃度為70-90mmol/L，用于為反應(yīng)提供適宜的堿性反應(yīng)條件；氯化銨、氟化銨的含量分別為100-120mmOl/L、260-280mmOl/L，該范圍是樣本中鎂離子的有效結(jié)合量，可有效消除樣本中鎂離子的干擾；十二烷基硫酸鈉的含量為25-45mmol/ L，是發(fā)揮其作用的有效用量，用于使反應(yīng)生成的有色物質(zhì)溶于反應(yīng)混合液中；甲醇的含量為480-510mmol/L，是發(fā)揮其作用的有效用量，用于顯色劑的溶解；填充劑為曲拉通 X-IOO (Triton X-100)，其含量為2. 0-5. 0%，是發(fā)揮其作用的有效用量，用于穩(wěn)定Rl試劑， 使其在2 8°C環(huán)境中不會(huì)出現(xiàn)分層或沉淀現(xiàn)象，另外，填充劑還可以是其它具有類似功能的物質(zhì)如曲拉通X-100 (Triton X-114)等所述Rl試劑中，顯色劑為1-(2_吡啶偶氮)-2_萘酚 (l-(2-pyridylazo)-2-naphthol, PAN),或 4-(2-吡啶偶氮)-間苯二 酚 (4- (2-pyridylazo) -resorcinol, PAR)，用作樣本中鋅的顯色底物；顯色劑的含量為 0. 05-0. 15mmol/L，低于其下限0. 05mmol/L時(shí)，會(huì)導(dǎo)致試劑盒的線性范圍降低，顏色變化不是很明顯，高于其上限0. 15mmol/L時(shí)，會(huì)使顏色反應(yīng)過(guò)深，超出全自動(dòng)生化儀的吸光度檢出范圍，在0. 05-0. 15mmol/L范圍內(nèi)，顯色劑的濃度越高，顯色反應(yīng)越深，吸光度越大。所述防腐劑為疊氮鈉，含量為0.01-0. 1%，該范圍在有效殺菌的同時(shí)不會(huì)對(duì)反應(yīng)起任何副作用，可延長(zhǎng)試劑盒的有效期；還可以是其它具有防腐作用的硫柳汞、慶大霉素或 ProClin系列防腐劑中的任意一種，在緩沖溶液中起防腐的作用，可以延長(zhǎng)試劑的有效期。上述的檢測(cè)方法，所述步驟1)中，所制備的精漿樣本可于分離當(dāng)天檢測(cè)，也可于-20°C以下凍存?zhèn)溆?，至少可保?周以上，但應(yīng)避免反復(fù)凍融；所述步驟2)中，樣本試劑比應(yīng)根據(jù)全自動(dòng)生化儀的參數(shù)而定，應(yīng)考慮到儀器的最小加樣量，比色皿的反應(yīng)液體積范圍等；所述步驟3)中，定標(biāo)模式可以自行選擇，可以選用單點(diǎn)定標(biāo)，即單用一個(gè)鋅標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行定標(biāo)；也可以選用兩點(diǎn)定標(biāo)，即用蒸餾水作為一個(gè)濃度點(diǎn)，鋅標(biāo)準(zhǔn)液作為另外一個(gè)濃度點(diǎn)進(jìn)行定標(biāo)；所述步驟4)中，當(dāng)樣本中鋅的濃度過(guò)高，超出試劑盒的線性范圍時(shí)，應(yīng)用生理鹽水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)即可。本發(fā)明的檢測(cè)方法是終點(diǎn)法，檢測(cè)原理是，樣本中的鋅與顯色劑PAN發(fā)生反應(yīng)，生成有色復(fù)合物，該復(fù)合物在540-560nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，通過(guò)監(jiān)測(cè)其在540-560nm波長(zhǎng)處的吸光度，進(jìn)而計(jì)算出樣本中鋅的濃度。與現(xiàn)有技術(shù)相比，突出的技術(shù)效果在于1、本試劑盒采用終點(diǎn)法檢測(cè)精漿樣本中鋅的濃度，僅采用2種液體試劑，可于 2_8°C保存?zhèn)溆?，所加入的特殊填充劑，使試劑盒?-8°C低溫條件下不會(huì)出現(xiàn)分層或沉淀現(xiàn)象，克服了以往檢測(cè)精漿鋅至少需要3 5種試劑，使用之前需要平衡至室溫以使沉淀復(fù)溶的弱點(diǎn)；2、采用本試劑盒及檢測(cè)方法，樣本制備好后不需再去蛋白，檢測(cè)過(guò)程也不需單獨(dú)再做空白管、標(biāo)準(zhǔn)管，簡(jiǎn)化了操作步驟，降低了人為誤差；另外，試劑盒中的相關(guān)成分，可有效屏蔽樣本中有可能產(chǎn)生干擾的物質(zhì)，使得檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性更高，特異性更強(qiáng)；3、本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了從手工或半自動(dòng)向全自動(dòng)檢測(cè)方法的轉(zhuǎn)變，填補(bǔ)了市場(chǎng)上的空缺，采用全自動(dòng)生化儀進(jìn)行自動(dòng)化、規(guī)?；臋z測(cè)，釋放了大量的人力，節(jié)約了大量的耗材， 對(duì)反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)過(guò)程的準(zhǔn)確控制和監(jiān)測(cè)，使檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性都得到了顯著的提尚；4、采用本發(fā)明可以在檢測(cè)同一份精漿樣本鋅濃度的同時(shí)，還可以與全自動(dòng)生化儀相配套的精漿Y-L-谷氨?；D(zhuǎn)肽酶、α-糖苷酶、果糖等試劑盒聯(lián)合使用，并同時(shí)檢測(cè)這些項(xiàng)目，檢測(cè)結(jié)束后，可以以報(bào)告的形式打印出同一份樣本所測(cè)項(xiàng)目的所有結(jié)果，可滿足醫(yī)院男性不育相關(guān)科室、人類精子庫(kù)、計(jì)劃生育研究所等機(jī)構(gòu)對(duì)精液質(zhì)量、精子篩選的需要，以及對(duì)于男性不育癥的輔助診斷等，大大提高了精液常規(guī)生化分析的效率和收益，非常適于常規(guī)檢測(cè)和推廣。
具體實(shí)施例方式根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好的理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利 要求書(shū)中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。實(shí)施例1本實(shí)施例中的一種精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒，包括Rl試劑和4mmol/L鋅標(biāo)準(zhǔn)液，分別按以下成分和用量配制1)R1 試劑氯化銨112mmol/L;氟化銨270mmol/L ；十二烷基硫酸鈉 35mmol/L ；氨水84mmol/L ；甲醇494mmol/L ；PAN0. lmmol/L ；硫柳汞0.05%;Triton X-1002. 0% ；2)鋅標(biāo)準(zhǔn)液ZnSO4 · 7H204mmol/L ；疊氮鈉0.02%;上述試劑全部溶解后，分裝入瓶，制成液體單試劑和鋅標(biāo)準(zhǔn)液，于2_8°C保存?zhèn)溆谩?shí)施例2本實(shí)施例中的一種精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒，包括Rl試劑和2mmol/L鋅標(biāo)準(zhǔn)液，分別按以下成分和用量配制1)R1 試劑氯化銨IOOmmol/L ；氟化銨280mmol/L ；十二烷基硫酸鈉 45mmol/L ；氨水70mmol/L;甲醇5 IOmmol/L ；PAN0. 05mmol/L ；慶大霉素0.1%;Triton X-1003. 0% ；2)鋅標(biāo)準(zhǔn)液ZnSO4 · 7H202mmol/L ；硫柳汞0.02%;上述試劑全部溶解后，分裝入瓶，制成液體單試劑和鋅標(biāo)準(zhǔn)液，于2_8°C保存?zhèn)溆谩?br> 實(shí)施例3 本實(shí)施例中的一種精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒，包括Rl試劑和6mmol/L鋅標(biāo)準(zhǔn)液，分別按以下成分和用量配制1)R1 試劑氯化銨120mmol/L ；氟化銨260mmol/L ；十二烷基硫酸鈉 25mmol/L ；氨水90mmol/L ；甲醇480mmol/L ；PAN0. 15mmol/L ；硫柳汞0.1%;Triton X-1145. 0% ；2)鋅標(biāo)準(zhǔn)液ZnSO4 · 7H206mmol/L ；ProCl in3000. 01% ；上述試劑全部溶解后，分裝入瓶，制成液體單試劑和鋅標(biāo)準(zhǔn)液，于2_8°C保存?zhèn)溆?。?shí)施例4利用實(shí)施例1中的試劑盒檢測(cè)精漿中鋅濃度的方法，具體操作步驟如下1)樣品制備新鮮精液液化后通過(guò)3000rpm離心15min，所獲得的上清液即是；2)在Olympus AU400全自動(dòng)生化儀的操作軟件上輸入基本參數(shù)如下檢測(cè)項(xiàng)目Zn ；樣品量3μ1;Rl 試劑量300μ1;檢測(cè)方法終點(diǎn)法；定標(biāo)模式ΑΒ (單點(diǎn)定標(biāo))；主波長(zhǎng)540nm;反應(yīng)方向上升；主讀數(shù)點(diǎn)1 :27 ；主讀數(shù)點(diǎn)2 :27 ；3)定標(biāo)操作用4mmol/L鋅標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行定標(biāo)，儀器會(huì)根據(jù)鋅標(biāo)準(zhǔn)液的濃度及其吸光度值，得出一個(gè)鋅濃度和吸光度之間的關(guān)系式Y(jié) = AX ；其中，常數(shù)A在定標(biāo)結(jié)束后自動(dòng)給出，Y代表鋅標(biāo)準(zhǔn)液的濃度，X代表鋅標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度；例如，用4mmol/L鋅標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行定標(biāo)，測(cè)定的吸光度為0. 4025，則通過(guò)定標(biāo)關(guān)系式 Y = AX，儀器自動(dòng)計(jì)算出A = 9. 9379，也即，由定標(biāo)操作得出的鋅濃度和吸光度之間的關(guān)系式為 Y= 9. 9379X ；4)樣本檢測(cè)將步驟1)中制備好的樣本和Rl試劑放在全自動(dòng)生化儀的相應(yīng)位置上，輸入樣本的檢測(cè)信息后，開(kāi)始檢測(cè)。測(cè)試結(jié)束后，儀器根據(jù)定標(biāo)關(guān)系式自動(dòng)計(jì)算出樣本中鋅的濃度，即鋅濃度Y(mmol/L) = 9. 9379X，其中，X為樣本的吸光度，在全自動(dòng)生化儀上自動(dòng)測(cè)定給
出ο例如，全自動(dòng)生化儀測(cè)得某份精漿中的鋅的吸光度為0. 3214，則該份精漿中鋅的濃度 Y = 9. 9379X0. 3214 = 3. 194mmol/L
實(shí)施例5利用實(shí)施例2中的試劑盒檢測(cè)精漿中鋅濃度的方法，具體操作步驟如下1)樣品制備新鮮精液液化后通過(guò)4000rpm離心lOmin，所獲得的上清液即是；2)在Olympus AU640全自動(dòng)生化儀的操作軟件上輸入基本參數(shù)如下檢測(cè)項(xiàng)目Zn;樣品量2μ1;Rl 試劑量200μ1;檢測(cè)方法終點(diǎn)法；定標(biāo)模式ΑΑ (兩點(diǎn)定標(biāo))；主波長(zhǎng)540nm;反應(yīng)方向上升；主讀數(shù)點(diǎn)1:25;主讀數(shù)點(diǎn)2:25;3)定標(biāo)操作用蒸餾水即Ommol/L和2mmol/L鋅標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行定標(biāo)，儀器會(huì)根據(jù)各自的濃度及其吸光度值，得出一個(gè)鋅濃度和吸光度之間的關(guān)系式Y(jié) = AX+B ；其中，常數(shù)A、B在定標(biāo)結(jié)束后自動(dòng)給出，Y代表鋅標(biāo)準(zhǔn)液的濃度，X代表鋅標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度；例如，用蒸餾水和鋅標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行定標(biāo)操作后，測(cè)定的吸光度分別為0.0056和 0. 1536，則通過(guò)定標(biāo)關(guān)系式Y(jié) = AX+B，儀器自動(dòng)計(jì)算出A = 13. 514，B = -0. 0757，也即，由定標(biāo)操作得出的鋅濃度和吸光度之間的關(guān)系式為Y = 13. 514X-0. 0757 ；4)樣本檢測(cè)將1)中制備好的樣本和Rl試劑放在全自動(dòng)生化儀的相應(yīng)位置上，輸入樣本的檢測(cè)信息后，開(kāi)始檢測(cè)。測(cè)試結(jié)束后，儀器根據(jù)定標(biāo)關(guān)系式自動(dòng)計(jì)算出樣本中鋅的濃度，即鋅濃度Y(mmol/L) = 13. 514X-0. 0757，其中，X為樣本的吸光度，在全自動(dòng)生化儀上自動(dòng)測(cè)定給出；例如，全自動(dòng)生化儀測(cè)得某份精漿中的鋅的吸光度為0. 2876，則該份精漿中鋅濃度 Y = 13. 514X0. 2876-0. 0757 = 3. 811mmol/L。實(shí)施例6利用實(shí)施例3中的試劑盒檢測(cè)精漿中鋅濃度的方法，具體操作步驟如下1)樣品制備新鮮精液液化后通過(guò)5000rpm離心lOmin，所獲得的上清液即是；2)在勞拉Faith-IOOO全自動(dòng)生化儀的操作軟件上輸入基本參數(shù)如下檢測(cè)項(xiàng)目Zn;樣品量4μ1;Rl 試劑量400μ1;
檢測(cè)方法終點(diǎn)法；定標(biāo)模式單點(diǎn)定標(biāo)；主波長(zhǎng)546nm;反應(yīng)方向上升；

主讀數(shù)點(diǎn)1 :36 ；主讀數(shù)點(diǎn)2 :36 ；3)定標(biāo)操作用6mmol/L鋅標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行定標(biāo)，儀器會(huì)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)液的濃度及其吸光度值，得出一個(gè)鋅濃度和吸光度之間的關(guān)系式Y(jié) = AX ；其中，常數(shù)A在定標(biāo)結(jié)束后自動(dòng)給出，Y代表鋅標(biāo)準(zhǔn)液的濃度，X代表鋅標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度；例如，用6mmol/L鋅標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行定標(biāo)，測(cè)定的吸光度為0. 5878，則通過(guò)定標(biāo)關(guān)系式 Y = AX，儀器自動(dòng)計(jì)算出A = 10. 208，也即，由定標(biāo)操作得出的鋅濃度和吸光度之間的關(guān)系式為 Y = 10. 208X ；4)樣本檢測(cè)將1)中制備好的樣本和Rl試劑放在全自動(dòng)生化儀的相應(yīng)位置上，輸入樣本的檢測(cè)信息后，開(kāi)始檢測(cè)。測(cè)試結(jié)束后，儀器根據(jù)定標(biāo)關(guān)系式自動(dòng)計(jì)算出樣本中鋅的濃度，即鋅濃度Y(mmol/L) = 10. 208X，其中，X為樣本的吸光度，在全自動(dòng)生化儀上自動(dòng)測(cè)定給出。例如，某份精漿用生理鹽水稀釋2倍后，全自動(dòng)生化儀測(cè)得的鋅的吸光度為 0. 2800，則該份精菜中鋅濃度 Y = 2X (10. 208X0. 2800) = 5. 716mmol/L。實(shí)施例7在實(shí)施例1和實(shí)施例4的基礎(chǔ)上進(jìn)行批內(nèi)和批間精密度的檢測(cè)(即本發(fā)明的試劑盒的檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性)選擇鋅濃度低、高值的混合精漿樣本各1份，準(zhǔn)備5個(gè)批次的檢測(cè)試劑盒，每個(gè)批次試劑盒測(cè)同一個(gè)濃度精漿樣本8次，共有40個(gè)數(shù)據(jù)，從5個(gè)批次中每一樣本重復(fù)測(cè)定8 次的結(jié)果算出批內(nèi)精密度，從所有40個(gè)結(jié)果計(jì)算出批間精密度，結(jié)果均以變異系數(shù)的百分?jǐn)?shù)即CV%表示。其中，CV%=標(biāo)準(zhǔn)差/平均值X100%，該系數(shù)越小，表明同一份樣本重復(fù)檢測(cè)結(jié)果的離散程度越小，即檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性越好。結(jié)果與手工或半自動(dòng)檢測(cè)的結(jié)果比較見(jiàn)表1，說(shuō)明使用該試劑盒檢測(cè)精漿鋅濃度的方法重復(fù)性好。表1手工、半自動(dòng)和全自動(dòng)檢測(cè)的精密度結(jié)果比較
權(quán)利要求
1.一種精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括Rl試劑和鋅標(biāo)準(zhǔn)液；其中， DRl試劑是包括以下含量的組份氯化銨110-120mmol/L ；氟化銨260-280mmol/L ；十二烷基硫酸鈉 30-45mmol/L ； 氨水70-90mmol/L ；甲醇480-5 IOmmol/L ；填充劑0.5-3.0%;防腐劑0.01-0.1%;顯色劑0. 05-0. 2mmo ；2)鋅標(biāo)準(zhǔn)液是包括以下含量的組份 硫酸鋅2-6mmol/L ；防腐劑0.01-0.1%;其中，所述顯色劑為1-(2_吡啶偶氮)-2-萘酚或4-(2-吡啶偶氮)_間苯二酚； 所述防腐劑為疊氮鈉、硫柳汞、慶大霉素或ProClin系列防腐劑中的任意一種；所述填充劑為 Triton X-100 或 Triton X-114。
2.權(quán)利要求1所述的精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)精漿鋅濃度中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于包括以下步驟1)樣品制備新鮮精液液化后通過(guò)3000 5000rpm離心10 20min，所獲得的上清液即是；2)在全自動(dòng)生化儀的操作軟件上輸入基本參數(shù)如下 檢測(cè)項(xiàng)目Zn ；樣品試劑比1 100 ； 檢測(cè)方法終點(diǎn)法； 定標(biāo)方法單點(diǎn)定標(biāo)或兩點(diǎn)定標(biāo)； 主波長(zhǎng)540-560nm ； 反應(yīng)方向上升； 反應(yīng)時(shí)間300-600秒；3)定標(biāo)操作用鋅標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行定標(biāo)，儀器會(huì)根據(jù)鋅標(biāo)準(zhǔn)液的濃度及其吸光度值，得出一個(gè)鋅濃度和吸光度之間的關(guān)系式Y(jié) = AX(單點(diǎn)定標(biāo))或Y = AX+B(兩點(diǎn)定標(biāo))；其中，單點(diǎn)定標(biāo)的常數(shù)A或兩點(diǎn)定標(biāo)的常數(shù)A、B在定標(biāo)結(jié)束后自動(dòng)給出，Y代表鋅標(biāo)準(zhǔn)液的濃度，X 代表鋅標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度；4)樣本檢測(cè)將制備好的樣本和Rl試劑放在全自動(dòng)生化儀的相應(yīng)位置上，輸入樣本的檢測(cè)信息后， 開(kāi)始檢測(cè)；測(cè)試結(jié)束后，儀器根據(jù)定標(biāo)關(guān)系式自動(dòng)計(jì)算出樣本中鋅的濃度， 單點(diǎn)定標(biāo)關(guān)系式Y(jié) = ΑΧ，或兩點(diǎn)定標(biāo)關(guān)系式Υ = ΑΧ+Β其中，X即樣本的吸光度，在全自動(dòng)生化儀上自動(dòng)測(cè)定給出，單點(diǎn)定標(biāo)關(guān)系式中的常數(shù) A或兩點(diǎn)定標(biāo)關(guān)系式中的常數(shù)A、B在定標(biāo)結(jié)束后為已知。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒，R1試劑包括氯化銨110-120mmol/L；氟化銨260-280mmol/L；十二烷基硫酸鈉30-45mmol/L；氨水70-90mmol/L；甲醇480-510mmol/L；填充劑0.5-3.0％；防腐劑0.01-0.1％；顯色劑0.05-0.2mmo；鋅標(biāo)準(zhǔn)液包括硫酸鋅2-6mmol/L；防腐劑0.01-0.1％。本發(fā)明還公開(kāi)了精漿鋅濃度定量檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)精漿鋅濃度中的應(yīng)用。本發(fā)明僅采用2種液體試劑，可于4℃保存并且不會(huì)出現(xiàn)分層或沉淀情況，試劑中的某些成分會(huì)屏蔽掉樣本中的鎂離子的干擾；樣本不需去蛋白，與全自動(dòng)生化儀配套使用，簡(jiǎn)化了步驟，節(jié)省了試劑，降低了人為誤差，自動(dòng)化、規(guī)?；臋z測(cè)，在提高檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性的同時(shí)，大大提高了檢測(cè)效率。
文檔編號(hào)G01N1/28GK102288604SQ20111023367
公開(kāi)日2011年12月21日 申請(qǐng)日期2011年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月16日
發(fā)明者陸金春, 陳曉慧, 高建 申請(qǐng)人:南京欣迪生物藥業(yè)工程有限責(zé)任公司