專利名稱：甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑有關(guān)物質(zhì)檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑的檢測方法，特別甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。
背景技術(shù)：
甲潑尼龍，具有抗炎、抗過敏、抗風(fēng)濕、免疫抑制作用，廣泛的用于治療過敏性與自身免疫性炎癥性疾病，如結(jié)締組織病、活動性風(fēng)濕病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、嚴(yán)重支氣管哮喘、嚴(yán)重皮炎、潰瘍性結(jié)腸炎、急性白血病等，也用于某些嚴(yán)重感染及中毒、惡性淋巴瘤的綜合治療。由于其為難溶的有機化合物，因此為了便于制備成注射劑，可以制備成為易溶于水的鹽，如甲潑尼龍琥珀酸鈉。中國專利CN200610076703.8提供了一種甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑，但并未公開其質(zhì)量檢測方法，并且目前關(guān)于注射用甲潑尼龍琥珀酸鈉的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1- (X-520) -2003Z中，只規(guī)定了采用內(nèi)標(biāo)法檢測含量和游離甲潑尼龍的方法， 也沒有規(guī)定對有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，但隨著對我國對藥品質(zhì)量控制工作要求的提高，建立有關(guān)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)和檢測方法成為提高和更好的控制甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑質(zhì)量的迫切需要。而經(jīng)過我們實驗發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在的含量和游離甲潑尼龍檢測方法，無法有效分離全部雜質(zhì)，并不適用于檢測有關(guān)物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
我們提供了一種甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑有關(guān)物質(zhì)檢測方法，一種甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑有關(guān)物質(zhì)檢測方法，采用高效液相色譜法進行檢測色譜條件為色譜柱選用硅膠為固定相；體積比為130 130 14 7 6的氯代正丁烷-水飽和氯代正丁烷-四氫呋喃-甲醇-冰醋酸為流動相；檢測波長為2Mnm。所述的有關(guān)物質(zhì)檢測方法，所述色譜條件還包括流動相流速0.5-1. 5ml/min柱溫20-40°C；進樣量5_50yL;進樣樣品濃度0· 1-0. 5mg(以甲潑尼龍計)。優(yōu)選，流動相流速1.Oml/min ；柱溫20-30°C;進樣量20yL;進樣樣品濃度0. 25mg/ml (以甲潑尼龍計)。所述的有關(guān)物質(zhì)檢測方法，其特征是檢測時操作方法如下對照品溶液的配制精密稱取琥珀酸甲潑尼龍14_17mg，置50ml量瓶中，加四氫呋喃5ml，加含3%冰醋酸(體積百分比)的氯仿使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml，置IOOml量瓶中，加3%冰醋酸(體積百分比)的氯仿溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的配制精密取甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑，用水配制成為甲潑尼龍琥珀酸鈉濃度4-6mg/ml的溶液，精密量取5ml，置分液漏斗中，加水10ml，加四氫呋喃 10ml，用3%冰醋酸的氯仿溶液提取三次，每次20ml，用脫脂棉加無水硫酸鈉濾過，合并濾液，置IOOml量瓶中，加3%冰醋酸的氯仿溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法量取對照品溶液20μ 1，注入液相色譜儀。再量取供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。本發(fā)明提供的甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑有關(guān)物質(zhì)檢測方法，與現(xiàn)有的甲潑尼龍琥珀酸鈉含量檢測方法用于檢測有關(guān)物質(zhì)時相比，調(diào)整了氯代正丁烷-水飽和氯代正丁烷的含量，成功的將用現(xiàn)有方法無法與主成分峰分開的雜質(zhì)峰A與主成分峰分離(見圖2)。 并且，對保留時間主成分峰之前出現(xiàn)的雜質(zhì)，分離效果也好于現(xiàn)有方法，通過圖1和圖2對可以看出，圖2保留時間在主成分峰之前分離出的雜質(zhì)峰多于圖1。


圖1是檢測方法實施例1的HPLC圖譜圖2是檢測方法實施例2的HPLC圖譜
具體實施例方式供試品市售甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑商品名甲強龍(Pfizer Manufacturing Belgium NV 生產(chǎn))規(guī)格40mg/瓶(以甲潑尼龍計)輔料為磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、乳糖檢測儀器Agilent 1200型高效液相色譜儀檢測器Agilent G1365B型多波長紫外檢測器色譜柱ZORBAX SIL (硅膠為固定相)，No. 880952-701 4. 6 X 250mm, 5 μ m,甲醇、氯代正丁烷為色譜純，四氫呋喃、冰醋酸、氯仿為分析純，水為經(jīng)抽濾的去離子水。檢測方法實施例1，采用現(xiàn)有的檢測含量與游離甲潑尼龍含量的HPLC條件進行有關(guān)物質(zhì)檢測，使用歸一化法，不采用內(nèi)標(biāo)物。檢測方法如下色譜條件氯代正丁烷-水飽和氯代正丁烷-四氫呋喃-甲醇-冰醋酸 (475 475 70 35 30)為流動相；檢測波長為2Mnm。測定法對照品溶液的配制精密稱取琥珀酸甲潑尼龍適量(約15. 84mg)，置50ml 量瓶中，加四氫呋喃5ml，加3 %冰醋酸氯仿使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置 IOOml量瓶中，加3%冰醋酸氯仿溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的配制精密稱取供試品適量(約相當(dāng)于甲潑尼龍0. 25g)，置50ml量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置分液漏斗中，加水IOml，加四氫呋喃10ml，用3%冰醋酸的氯仿溶液提取三次，每次20ml，用脫脂棉加無水硫酸鈉濾過，合并濾液，置IOOml量瓶中，加3%冰醋酸的氯仿溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法量取對照品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%。再量取供試品溶液20μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分(甲潑尼龍琥珀酸鈉)峰保留時間的2倍。得到的HPLC圖譜見圖1，其中，與主成分峰(保留時間t = 8. 873min)相鄰的雜質(zhì)峰A (保留時間t = 9. 579min)，與主成分峰沒有完全分開，二者分離度R小于1。并且與主成分峰前，分別分離出保留時間t = 6. 098,6. 393,6. 982,7. 468,8. 018等五個雜質(zhì)峰。檢驗方法實施例2采用本發(fā)明提供的方法進行有關(guān)物質(zhì)含量檢測有關(guān)物質(zhì)含量采用以下方法色譜條件體積比為130 130 14 7 6的氯代正丁烷-水飽和氯代正丁烷-四氫呋喃-甲醇-冰醋酸為流動相；檢測波長為2Mnm。對照品溶液的配制精密稱取琥珀酸甲潑尼龍適量(約15. 84mg)，置50ml量瓶中， 加四氫呋喃5ml，加3 %冰醋酸氯仿使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取Iml，置IOOml量瓶中，加3 %冰醋酸氯仿溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的配制精密稱取供試品適量(約相當(dāng)于甲潑尼龍0. 25g)，置50ml量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置分液漏斗中，加水10ml，加四氫呋喃10ml，用3%冰醋酸的氯仿溶液提取三次，每次20ml，用脫脂棉加無水硫酸鈉濾過，合并濾液，置IOOml量瓶中，加3%冰醋酸的氯仿溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法量取對照品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%。再量取供試品溶液20μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。得到的HPLC圖譜見圖2，通過圖2可以看出，所有的雜質(zhì)峰都得到了完全分離，特別是與主成分峰(t = 18. 522min)相鄰的雜質(zhì)峰A(t = 18. 035)與已經(jīng)完全分開，分離度R 大于1.5。符合中國藥典中對有關(guān)物質(zhì)檢測方法中關(guān)于分離度的要求。并且與主成分峰前， 分別分離出保留時間t = 7. 722,8. 025,8. 832,9. 646、12. 311、13. 270等六個雜質(zhì)峰(保留時間6^68的峰為溶劑峰)。
權(quán)利要求
1.一種甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑的有關(guān)物質(zhì)檢測方法，采用高效液相色譜法，其特征在于色譜條件為色譜柱選用硅膠為固定相；體積比為130 130 14 7 6氯代正丁烷-水飽和氯代正丁烷-四氫呋喃-甲醇-冰醋酸為流動相；檢測波長為2Mnm。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述的色譜條件還包括流動相流速0. 5-1. 5ml/minml/min ；柱溫:20-40 0C ；進樣量5-50 μ L ；進樣樣品濃度0. 1-0. 5mg(以甲潑尼龍計)。
3.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述的色譜條件還包括流動相流速1. Oml/min ；柱溫:20-30 0C ；進樣量:20uL ；進樣樣品濃度0. 25mg/ml (以甲潑尼龍計)。
4.如權(quán)利要求1-3任一所述的檢測方法，其特征在于檢測時操作方法如下對照品溶液的配制精密稱取琥珀酸甲潑尼龍14-17mg，置50ml量瓶中，加四氫呋喃 5ml，加含3%冰醋酸(體積百分比)的氯仿使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml，置 IOOml量瓶中，加3%冰醋酸(體積百分比)的氯仿溶液稀釋至刻度，搖勻，即得；供試品溶液的配制精密取甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑，用水配制成為甲潑尼龍琥珀酸鈉濃度為4-6mg/ml的溶液，精密量取5ml，置分液漏斗中，加水10ml，加四氫呋喃10ml， 用3%冰醋酸的氯仿溶液提取三次，每次20ml，用脫脂棉加無水硫酸鈉濾過，合并濾液，置 IOOml量瓶中，加3%冰醋酸的氯仿溶液稀釋至刻度，搖勻，即得測定法量取對照品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，再量取供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。
全文摘要
甲潑尼龍琥珀酸鈉凍干粉針劑有關(guān)物質(zhì)檢測方法，采用高效液相色譜法，其特征在于色譜條件為色譜柱選用硅膠為固定相；體積比為130∶130∶14∶7∶6氯代正丁烷-水飽和氯代正丁烷-四氫呋喃-甲醇-冰醋酸為流動相；檢測波長為254nm。
文檔編號G01N30/06GK102323356SQ201110244019
公開日2012年1月18日 申請日期2011年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月24日
發(fā)明者何光杰, 吳俊文, 張寶文, 袁英 申請人:天津金耀集團有限公司