專利名稱：一種slc22a2基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體的是涉及一種SLC22A2基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片。
背景技術(shù)：
人類有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體2 (0CT2, SLC22A2)是一種有機(jī)陽離子的多特異性轉(zhuǎn)運(yùn)體，定位于染色體6q26，包含11個外顯子。SLC22A2主要分布在腎管上皮細(xì)胞的外側(cè)基底膜，是腎臟主動分泌有機(jī)陽離子的一個主要轉(zhuǎn)運(yùn)體，與藥物代謝相關(guān)。人體內(nèi)對于SLC22A2的表達(dá)調(diào)控在轉(zhuǎn)錄水平主要是類固醇激素調(diào)控，在蛋白水平則主要與多種蛋白激酶有關(guān)。研究表明，人類SLC22A2的多態(tài)性與SLC22A2功能的改變密切相關(guān)。目前，對SLC22A2基因多態(tài)性進(jìn)行檢測和分析的方法很少，主要是PCR-RFLP分析法，PCR-RFLP法是基于基因突變造成的限制性內(nèi)切酶識別位點(diǎn)的改變，如位點(diǎn)丟失或產(chǎn)生新位點(diǎn)，通過PCR擴(kuò)增某一特定片段，再用限制性內(nèi)切酶酶切擴(kuò)增產(chǎn)物，電泳觀察片段的大小，這種方法用于檢測酶切位點(diǎn)改變的基因突變，可直接判斷基因型，但該法不能用于沒有產(chǎn)生新酶切位點(diǎn)的基因突變檢測。再次，PCR-RFLP分析法存在著檢測通量的局限性，每次只能檢測一種突變類型，不能滿足實(shí)際應(yīng)用的需要。本發(fā)明目標(biāo)檢測的SLC22A2基因突變位點(diǎn)，如表所示
權(quán)利要求
1.一種SLC22A2基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，包括有 (A).針對SLC22A2基因不同多態(tài)性位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)的野生型和突變型的ASPE引物每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因多態(tài)性位點(diǎn)的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為:針對G120C位點(diǎn)的SEQ ID NO. 11及SEQ ID NO. 12 ;針對C122T位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 13 及 SEQ ID NO. 14 ;針對 A104C 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16 ；針對 C133G 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 17 及 SEQ ID NO. 18 ;和 / 或針對 C208T 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 19及 SEQ ID NO. 20 ;所述 tag 序列選自 SEQ ID NO. I SEQ ID NOlO ； (B).有anti-tag序列包被的、具有不 同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 21 SEQ ID NO. 30，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補(bǔ)配對； (C).用于擴(kuò)增出需要檢測的、具有相應(yīng)多態(tài)性位點(diǎn)的目標(biāo)序列的引物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的SLC22A2基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述擴(kuò)增引物為針對G120C位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 31 及 SEQ ID NO. 32 ;針對C122T 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 33 及SEQ ID NO. 34 ;針對 A104C 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 35 及 SEQ ID NO. 36 ;針對 C133G 位點(diǎn)的 SEQID NO. 37 及 SEQ ID NO. 38 ;和 / 或針對 C208T 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 39 及 SEQ ID NO. 40。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的SLC22A2基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述ASPE引物為針對G120C位點(diǎn)的由SEQ ID NO. I和SEQ ID NO. 11組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 12組成的序列；針對C122T位點(diǎn)的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 13組成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 14組成的序列；針對A104C位點(diǎn)的由SEQ ID NO. 5和SEQID NO. 15組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 16組成的序列；針對C133G位點(diǎn)的由SEQ ID NO. 7和SEQID NO. 17組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 18組成的序列；和/或針對C208T位點(diǎn)的由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 19組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQ ID NO. 20組成的序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的SLC22A2基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是， (A).所述ASPE引物為針對G120C位點(diǎn)的由SEQID NO. I和SEQ ID NO. 11組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 12組成的序列；針對C122T位點(diǎn)的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 13組成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 14組成的序列；針對A104C位點(diǎn)的由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 15組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 16組成的序列；針對C133G位點(diǎn)的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 17組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 18組成的序列；和針對C208T位點(diǎn)的由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 19組成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQ ID NO. 20組成的序列； (B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 21 SEQ ID NO. 30，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補(bǔ)配對； (C).所述擴(kuò)增引物為:針對G120C位點(diǎn)的SEQID NO. 31及SEQ ID NO. 32 ;針對C122T位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 33及 SEQ ID NO. 34 ;針對A104C位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 35及 SEQ ID NO. 36 ；針對 C133G 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 37 及 SEQ ID NO. 38 ;和針對 C208T 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 39 及SEQ ID NO. 40。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的SLC22A2基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述間隔臂為5-10個T。
6.用于SLC22A2基因多態(tài)性檢測的特異性引物，其特征是，所述特異性引物序列為針對 G120C 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 11 及 SEQ ID NO. 12 ;針對 C122T 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 13 及 SEQID NO. 14 ;針對 A104C 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16 ;針對 C133G 位點(diǎn)的 SEQ IDNO. 17 及 SEQ ID NO. 18 ;和 / 或針對 C208T 位點(diǎn)的 SEQ ID NO. 19 及 SEQ ID NO. 20。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種SLC22A2基因檢測特異性引物和液相芯片，該液相芯片主要包括有每種由tag序列和針對突變位點(diǎn)的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為針對G120C位點(diǎn)的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12；針對C122T位點(diǎn)的SEQ ID NO.13及SEQID NO.14；針對A104C位點(diǎn)的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16；針對C133G位點(diǎn)的SEQ IDNO.17及SEQ ID NO.18；和/或針對C208T位點(diǎn)的SEQ ID NO.19及SEQ ID NO.20；有anti-tag序列包被的微球；擴(kuò)增引物。本發(fā)明所提供的檢測液相芯片的檢測結(jié)果與測序法的吻合率高達(dá)100％，實(shí)現(xiàn)多個突變位點(diǎn)的野生型和突變型并行檢測。
文檔編號G01N21/64GK102952870SQ20111025157
公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月29日
發(fā)明者許嘉森, 郭靖 申請人:廣州益善生物技術(shù)有限公司