專利名稱：大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物的定量測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)領(lǐng)域，尤其是涉及一種大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物的定量測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
酚酸是指具有某種羧酸功能的酚類(lèi)，它是植物中僅次于黃酮類(lèi)化合物的第二大次生代謝物，也是谷物中主要的結(jié)合態(tài)酚。酚酸是一種良好的抗氧化劑，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和保健領(lǐng)域，具有預(yù)防心血管疾病、抗癌、抗菌、消炎、抗突變和抗艾滋病病毒等多種生物活性。大麥?zhǔn)且环N在世界范圍內(nèi)廣泛種植的作物，價(jià)格低廉，目前主要用作飼料工業(yè)和釀造啤酒的原料。大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物含量較高且種類(lèi)豐富，其組成成分主要有沒(méi)食子酸、原兒茶酸、對(duì)羥基苯甲酸、間羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸、藜蘆酸、水楊酸、間沒(méi)食子酰沒(méi)食子酸、綠原酸、咖啡酸、對(duì)香豆酸、鄰香豆酸、阿魏酸等，因此，將大麥作為一種提取天然酚酸的重要原材料具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，這一產(chǎn)業(yè)的發(fā)展前景十分廣闊。另外，原料大麥中的酚酸是啤酒多酚的重要來(lái)源，對(duì)啤酒的質(zhì)量有著很大的影響，對(duì)原料大麥籽粒中的酚酸類(lèi)化合物進(jìn)行測(cè)定十分必要。因此，建立一種簡(jiǎn)單、快速測(cè)定大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物含量的方法十分重要。目前，大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物的測(cè)定方法主要有高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳、 薄層色譜法、氣相色譜法等。毛細(xì)管電泳重現(xiàn)性差，薄層色譜操作復(fù)雜且靈敏度較低，氣相色譜檢測(cè)酚酸類(lèi)化合物需要進(jìn)行衍生化處理，而高效液相色譜法操作簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、靈敏度高、準(zhǔn)確度高，在大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物的檢測(cè)中應(yīng)用最為廣泛。但是以往大多數(shù)高效液相色譜法分析的大麥籽粒酚酸類(lèi)化合物成分均較少，而當(dāng)所分析的成分較多時(shí)，往往分析條件復(fù)雜，分析時(shí)間較長(zhǎng)，從而使分析成本大大增加，不利于大批量樣品的測(cè)定。因此，有必要建立一種簡(jiǎn)單、快速、測(cè)定酚酸種類(lèi)齊全的大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物的測(cè)定方法，以利于生產(chǎn)企業(yè)的原料質(zhì)量評(píng)價(jià)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、靈敏度高、選擇性、重復(fù)性好、快速，可以滿足生產(chǎn)中對(duì)大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物進(jìn)行大批量快速測(cè)定和評(píng)價(jià)的基本要求，適用于任何大麥品種的酚酸類(lèi)化合物的定量測(cè)定方法。本發(fā)明主要分析方法步驟如下 1、樣品預(yù)處理
大麥籽粒烘干，粉碎，精確稱取一定量粉碎后的大麥粉，按液固比40:廣60:1加入濃度為4(Γ95%用0. 2NHC1調(diào)節(jié)PH值至4. 2的甲醇水溶液，并加入重量為大麥粉樣品重量的 1/10^1/20抗壞血酸作為抗氧化劑，在超聲頻率25 85ΚΗζ、超聲功率30(Γ60(Μ、5(Γ75τ條件下提取3(T50min，然后迅速冰浴以終止酸解，4000^5000g離心，上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干， 殘余物用甲醇溶解，1500(Tl8000g離心，上清液于棕色容量瓶中定容，進(jìn)樣前用微孔濾膜過(guò)濾；
2、色譜條件
(1)色譜柱以高純硅膠為填充劑的反相C18色譜柱；
(2)檢測(cè)器紫外檢測(cè)器；
(3)檢測(cè)波長(zhǎng)270-280nm;
(4)流動(dòng)相采用甲醇一甲酸水溶液做為流動(dòng)相，流動(dòng)相A為100%甲醇，流動(dòng)相B為濃度0. 1%-2%甲酸水溶液，HPLC分析前經(jīng)真空脫氣，采用梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?-20min， 25%-50%B ；20-22min,50%-25%B ；22-27min,25%B ；
(5)流速:0.6 0. 8mL/min ；
(6)柱溫4(T50°C；
3、濃度計(jì)算方法
用酚酸類(lèi)化合物標(biāo)準(zhǔn)品，包括沒(méi)食子酸、原兒茶酸、綠原酸、對(duì)羥基苯甲酸、咖啡酸、香草酸、丁香酸、間羥基苯甲酸、對(duì)香豆酸、阿魏酸、藜蘆酸、鄰香豆酸和水楊酸等13種配制成一定梯度濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，取5 20 μ 1進(jìn)樣，按外標(biāo)法，以峰面積-濃度做線性回歸，得出線性回歸方程，利用該方程和測(cè)得的樣品提取液中酚酸類(lèi)化合物的峰面積計(jì)算樣品提取液中酚酸類(lèi)化合物的濃度；
4、樣品檢測(cè)
(1)按照1中的方法進(jìn)行樣品預(yù)處理，取處理好的樣品提取液廣20μ1進(jìn)樣，為保證根據(jù)保留時(shí)間定性的準(zhǔn)確性，可在每一批次樣品檢測(cè)的過(guò)程中取5 20μ 1 —定濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液一起進(jìn)樣；
(2)按照2中的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，分別得到樣品提取液和混合標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖，將樣品提取液色譜圖和同一批次檢測(cè)的混合標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖進(jìn)行比較，樣品提取液色譜圖中與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間相近誤差范圍標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間士0. 5min的色譜峰即為相應(yīng)的酚酸類(lèi)化合物成分；
(3)將樣品提取液中酚酸類(lèi)化合物各成分的色譜峰面積代入3中的線性回歸方程中， 計(jì)算樣品提取液中酚酸類(lèi)化合物各成分的濃度；
5、大麥籽粒樣品中酚酸類(lèi)化合物成分含量的計(jì)算
通過(guò)以下公式計(jì)算大麥籽粒樣品中酚酸類(lèi)化合物成分的含量
權(quán)利要求
1. 一種大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物的定量測(cè)定方法，其特征在于主要測(cè)定方法步驟如下一、樣品預(yù)處理大麥籽粒烘干，粉碎，精確稱取一定量粉碎后的大麥粉，按液固比40:廣60:1加入濃度為4(Γ95%用0. 2NHC1調(diào)節(jié)PH值至4. 2的甲醇水溶液，并加入重量為大麥粉樣品重量的 1/10^1/20抗壞血酸作為抗氧化劑，在超聲頻率25 85ΚΗζ、超聲功率30(Γ60(Μ、5(Γ75τ條件下提取3(T50min，然后迅速冰浴以終止酸解，400(T5(KK)g離心，上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干， 殘余物用甲醇溶解，1500(Tl8000g離心，上清液于棕色容量瓶中定容，進(jìn)樣前用微孔濾膜過(guò)濾；二、色譜條件(1)色譜柱以高純硅膠為填充劑的反相C18色譜柱；(2)檢測(cè)器紫外檢測(cè)器；(3)檢測(cè)波長(zhǎng)270-280nm;(4)流動(dòng)相采用甲醇一甲酸水溶液做為流動(dòng)相，流動(dòng)相A為100%甲醇，流動(dòng)相B為濃度0. 1%-2%甲酸水溶液，HPLC分析前經(jīng)真空脫氣，采用梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?-20min， 25%-50%B ；20-22min,50%-25%B ；22-27min,25%B ；(5)流速:0.6 0. 8mL/min ；(6)柱溫:40^500C；三、濃度計(jì)算方法用酚酸類(lèi)化合物標(biāo)準(zhǔn)品，包括沒(méi)食子酸、原兒茶酸、綠原酸、對(duì)羥基苯甲酸、咖啡酸、香草酸、丁香酸、間羥基苯甲酸、對(duì)香豆酸、阿魏酸、藜蘆酸、鄰香豆酸和水楊酸等13種配制成一定梯度濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，取5 20 μ 1進(jìn)樣，按外標(biāo)法，以峰面積-濃度做線性回歸，得出線性回歸方程，利用該方程和測(cè)得的樣品提取液中酚酸類(lèi)化合物的峰面積計(jì)算樣品提取液中酚酸類(lèi)化合物的濃度；四、樣品檢測(cè)(1)按照1中的方法進(jìn)行樣品預(yù)處理，取處理好的樣品提取液5 20μ1進(jìn)樣；(2)按照2中的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，分別得到樣品提取液和混合標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖，將樣品提取液色譜圖和同一批次檢測(cè)的混合標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖進(jìn)行比較，樣品提取液色譜圖中與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間相近誤差范圍標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間士0. 5min的色譜峰即為相應(yīng)的酚酸類(lèi)化合物成分；(3)將樣品提取液中酚酸類(lèi)化合物各成分的色譜峰面積代入3中的線性回歸方程中， 計(jì)算樣品提取液中酚酸類(lèi)化合物各成分的濃度；五、大麥籽粒樣品中酚酸類(lèi)化合物成分含量的計(jì)算通過(guò)以下公式計(jì)算大麥籽粒樣品中酚酸類(lèi)化合物成分的含量W = C×V/m×1000 式中W—大麥籽粒樣品中酚酸類(lèi)化合物成分的含量，mg/kg ；C一樣品提取液中酚酸類(lèi)化合物成分的濃度，mg/mL ；V—樣品提取液的最終定容體積，mL ； m—大麥籽粒樣品重量，g。
2.如權(quán)利要求1所述的大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物的定量測(cè)定方法，其特征在于所述的樣品預(yù)處理中所用的超聲頻率為45 50KHz。
3.如權(quán)利要求1或2所述的大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物的定量測(cè)定方法，其特征在于所述的樣品預(yù)處理中所用的超聲功率為50(T550W。
全文摘要
一種大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物的定量測(cè)定方法，本發(fā)明針對(duì)酚酸的理化性質(zhì)采用一定濃度的甲醇水溶液提取大麥籽粒中的酚酸類(lèi)化合物，然后將提取液離心、濃縮、過(guò)濾，取制備好的樣品提取液上機(jī)，用甲醇—甲酸水溶液進(jìn)行洗脫分離。本發(fā)明的分析方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，靈敏度高，選擇性、重復(fù)性好，在一次性測(cè)定大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物的種類(lèi)上比較全面，而且分析時(shí)間與以往方法相比大大縮短，可以滿足生產(chǎn)中對(duì)大麥籽粒中酚酸類(lèi)化合物進(jìn)行大批量快速測(cè)定和評(píng)價(jià)的基本要求，適用于任何大麥品種的籽粒。
文檔編號(hào)G01N30/89GK102426211SQ20111026450
公開(kāi)日2012年4月25日 申請(qǐng)日期2011年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月20日
發(fā)明者王祥軍, 齊軍倉(cāng) 申請(qǐng)人:石河子大學(xué)