專利名稱：用于嗎啡檢測的試紙條制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于嗎啡檢測的試紙條的制備方法，還涉及用于嗎啡檢測的試紙條的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
嗎啡(Morphine)是由阿片提煉的一種阿片生物堿，為純粹的阿片受體激動劑，有強大的鎮(zhèn)痛作用，故在醫(yī)學(xué)上，嗎啡為麻醉性鎮(zhèn)痛藥。該類物質(zhì)于使用初有欣快感，無法集中精神，會產(chǎn)生夢幻現(xiàn)象，過量使用造成急性中毒，極易產(chǎn)生耐受性和成癮。目前，檢測食品藥品中嗎啡，運用比較成熟的檢測方法薄層色譜法(LC)、氣相色譜法(GC)、液相色譜法(HPLC)，液質(zhì)聯(lián)用法等。這些方法雖有力的加強了對食品藥品的監(jiān)管， 但是各具有優(yōu)勢但具有明顯的缺陷，液相、氣相、液質(zhì)聯(lián)用等儀器分析因儀器價格昂貴，需要特定的實驗室，檢測周期長，一般需要一天的時間，需要專業(yè)人員的操作；薄層層析法操作繁雜，而且由于被測樣品中往往含有多種香料，對實驗造成嚴重干擾，可能得到不準確結(jié)^ ο

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供用于嗎啡檢測的試紙條制備方法及其應(yīng)用。本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是
用于嗎啡檢測的試紙條制備方法，包括如下步驟
1)制備膠體金標記抗嗎啡單克隆抗體，將其包被在膠體金結(jié)合墊上；
2)制備嗎啡與BSA的偶聯(lián)物，將其和羊抗鼠IgG噴在硝酸纖維素膜上，分別作為檢測線和控制線，干燥；
3)試紙條組裝試紙條由PVC模板和PVC背板組成，在PVC背板上按順序粘上樣品墊、 膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。優(yōu)選的，步驟3)硝酸纖維素膜從樣品墊到吸水墊方向依次噴有檢測線、控制線。優(yōu)選的，步驟3) PVC背板上粘貼的各部分間有1 2mm的重疊。上述的用于嗎啡檢測的試紙條在食品、藥品中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果是
本發(fā)明的用于嗎啡檢測的試紙條，專屬性強、靈敏度高，準確度高，不需要專門設(shè)備，適合于現(xiàn)場操作，操作人員沒有專業(yè)知識也可快速掌握，非常適合監(jiān)督執(zhí)法部門日常監(jiān)督中使用，能夠滿足基層的監(jiān)督檢驗需求，廣泛應(yīng)用于食品、藥品的檢測。


圖1是用于嗎啡檢測的試紙條操作示意圖； 圖2是用于嗎啡檢測的試紙條結(jié)果判斷圖3是陽性樣品與陰性樣品檢測結(jié)果對比圖。
具體實施例方式為便于對本發(fā)明進一步理解，現(xiàn)結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細描述。用于嗎啡檢測的試紙條制備方法，包括如下步驟
1.制備膠體金標記抗嗎啡單克隆抗體
膠體金顆粒的大小平均為30nm，在IOOml去離子水中加入1%檸檬酸三鈉1ml，煮沸后迅速加入1%氯金酸1ml，繼續(xù)煮沸5min，冷卻后，得膠體金溶液，4°C下保存?zhèn)溆谩Ｈ∫阎苽浜玫哪z體金溶液100ml，用0. 2mol/L碳酸鈉溶液調(diào)pH到8. 0。邊攪拌邊加入抗嗎啡單克隆抗體1. 5mg，攪拌30min，再逐滴加入IOml 10%BSA，攪拌15min。12000G 離心15min,棄上清液，加入10mlpH7. 4PBS緩沖液(含1%BSA)，共清洗3次。將沉淀用5ml 含1%BSA的PBS緩沖液(pH7. 4)溶解，用0. 2 μ m無菌過濾器過濾后，得膠體金標記抗嗎啡單克隆抗體，4°C保存?zhèn)溆谩?br> 2.制備嗎啡與BSA的偶聯(lián)物
嗎啡是小分子化合物，分子量為觀5，具有氫化毗咤菲的綢環(huán)母核，3位的酚輕基、6位的醇輕基活性較強，其本身無免疫原性，采用一氯醋酸鈉法和唬拍酸配法合成唬拍酞化嗎啡半酷，在EDC催化下，與大分子載體蛋白交聯(lián)，形成3位、6位偶聯(lián)復(fù)合物，
包被抗原為嗎啡與BSA的偶聯(lián)物(MOP-BSA)，其合成方法為先將20mg嗎啡琥珀酸鹽、 15mgEDC及30mgBSA混合溶于ImlTris緩沖液中，0 4°C下避光攪拌lh，再加入5mgEDC，在 0°C下攪拌反應(yīng)12h，靜置過夜后，用Tris緩沖液透析3d，得嗎啡與BSA的偶聯(lián)物。3.包被抗體及偶聯(lián)物
用BioJetXYDOOO型點膜儀將嗎啡與BSA的偶聯(lián)物及羊抗鼠IgG噴在硝酸纖維素膜(NC膜)上，分別作為檢測線(T)和控制線(C)，在37°C烘箱干燥他。以同樣方法，將制備好的膠體金標記抗嗎啡單克隆抗體包被在膠體金結(jié)合墊上。4.用于嗎啡檢測的試紙條組裝
用于嗎啡檢測的試紙條由一個PVC背板和一個PVC模板組成，在PVC背板上按順序粘上樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，各部分間有1 2mm的重疊。硝酸纖維素膜上從樣品墊到吸水墊方向依次噴有檢測線、控制線。用帶MARK膠帶繞背板覆蓋在樣品墊、膠體金結(jié)合墊及吸水墊上。用切條機將貼好的板切割成3mm寬的條。PVC模板包括加樣孔(S)、檢測區(qū)、控制區(qū)，其蓋于PVC背板上，加樣孔(S)對應(yīng)于樣品墊，檢測區(qū)能顯示硝酸纖維素膜的檢測線(T)，控制區(qū)能顯示控制線(C)。將制成的試紙條放入帶干燥劑的鋁箔袋中密閉儲存。上述試紙條在固體或半固體食品中的應(yīng)用
取樣品約5g (約2勺)于25mL樣品管中，加水10mL，強力振搖1分鐘，用一次性注射器吸取上層液體，用0. 45 μ m微孔濾膜過濾。如果樣品溶液太濃，無法過濾，可加等體積水稀釋后再過濾，點于上述試紙條的加樣孔后，1 5分鐘內(nèi)判斷結(jié)果，如圖1所示。上述試紙條在火鍋湯料中的應(yīng)用
取火鍋湯料靜置，除去上層油脂層，用一次性注射器吸取下層水層5mL于25ml樣品管中。用0.45 μ m微孔濾膜過濾。如果樣品溶液太濃，無法上樣，加等體積水稀釋后再過濾， 點于上述試紙條的加樣孔后，1 5分鐘內(nèi)判斷結(jié)果。
上述試紙條在膠囊或片劑藥品中的應(yīng)用
取2粒藥(藥若有膠囊，需棄膠囊外殼)，加水5ml，強力振搖1分鐘，用一次性注射器吸取液體，用0. 45 μ m微孔濾膜過濾，點于上述試紙條的加樣孔后，1 5分鐘內(nèi)判斷結(jié)果。上述試紙條在止咳糖漿中的應(yīng)用
取約5ml止咳糖漿，加等體積水稀釋，用一次性注射器吸取液體，用0. 45 μ m微孔濾膜過濾，點于上述試紙條的加樣孔后，1 5分鐘內(nèi)判斷結(jié)果。上述用于嗎啡檢測的試紙條的結(jié)果判斷
1)陰性(-):τ線(測試線，靠近加樣孔)比C線(對照線)深或一樣深，表示樣品中嗎啡濃度低于檢出限，或不含嗎啡，表明不含有嗎啡；
2)陽性(+) :Τ線比C線淺，或T線無顯色，則表示樣品中嗎啡濃度高于檢出限；T線比 C線越淺表示樣品中嗎啡濃度越高，表明含有嗎啡；
3)無效未出現(xiàn)質(zhì)控C線，表明操作過程不正確或檢測卡已失效?？蓞⒄請D2進行結(jié)果判定。用上述試紙條檢測兩種濃度的樣品1)陰性樣品；2)在陰性樣品中添加嗎啡至濃度為20ng/ml。檢測結(jié)果如圖3所示，左邊的試紙條檢測的是樣品2)，含有20ng/ml嗎啡， 右邊的試紙條檢測的是樣品1)，陽性樣品，如圖可知，左邊結(jié)果顯示為陽性，右邊顯示為陰性，結(jié)果一致。可見，本發(fā)明方法快速準確，且能檢測出20ng/ml的嗎啡。2011年，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法共檢測了 86批從廣東省各地市抽檢的火鍋底料及調(diào)料，確證6批添加嗎啡，用上述試紙條檢驗這86批樣品，若出現(xiàn)陽性結(jié)果， 須復(fù)試一次，并送實驗室進一步確證，結(jié)果如表1所示，由表1可知，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)假陽性樣品和假陰性樣品，試紙條檢測正確率為100%，誤檢率為0，漏檢率為0，靈敏度和特異度均為
權(quán)利要求
1.用于嗎啡檢測的試紙條制備方法，包括如下步驟1)制備膠體金標記抗嗎啡單克隆抗體，將其包被在膠體金結(jié)合墊上；2)制備嗎啡與BSA的偶聯(lián)物，將其和羊抗鼠IgG噴在硝酸纖維素膜上，分別作為檢測線和控制線，干燥；3)試紙條組裝試紙條由PVC模板和PVC背板組成，在PVC背板上按順序粘上樣品墊、 膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于嗎啡檢測的試紙條制備方法，其特征在于步驟3)硝酸纖維素膜從樣品墊到吸水墊方向依次噴有檢測線、控制線。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于嗎啡檢測的試紙條制備方法，其特征在于步驟3)PVC 背板上粘貼的各部分間有1 2mm的重疊。
4.權(quán)利要求1所述的用于嗎啡檢測的試紙條在食品、藥品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了用于嗎啡檢測的試紙條制備方法及其應(yīng)用，制備方法包括如下步驟制備膠體金標記抗嗎啡單克隆抗體，將其包被在膠體金結(jié)合墊上；制備嗎啡與BSA的偶聯(lián)物，將其和羊抗鼠IgG噴在硝酸纖維素膜上，分別作為檢測線和控制線，干燥；試紙條組裝。本發(fā)明的用于嗎啡檢測的試紙條，專屬性強、靈敏度高，準確度高，不需要專門設(shè)備，適合于現(xiàn)場操作，操作人員沒有專業(yè)知識也可快速掌握，非常適合監(jiān)督執(zhí)法部門日常監(jiān)督中使用，能夠滿足基層的監(jiān)督檢驗需求，廣泛應(yīng)用于食品、藥品的檢測。
文檔編號G01N33/577GK102393464SQ201110327560
公開日2012年3月28日 申請日期2011年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月25日
發(fā)明者余靖衡, 劉敏敏, 張朝正, 李延志, 溫家欣, 陳俏 申請人:廣東省藥品檢驗所