專利名稱：一種養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中多種獸藥殘留量的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具體地是指牛、羊、豬、雞、魚或蝦的養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中，對(duì)可能受到多種抗生素污染的水體或土壤樣品中多種獸藥殘留量同時(shí)進(jìn)行定性和定量測(cè)定，多種獸藥包括氯霉素、β內(nèi)酰胺類(青霉素類)、喹諾酮類、磺胺類、磺胺增效劑類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、硝基咪唑類、青霉素類在內(nèi)的共計(jì)9大類61種藥物。
背景技術(shù)：
近些年來，由于動(dòng)物養(yǎng)殖過程中，特別是牛、羊、豬、雞、魚和蝦的養(yǎng)殖或屠宰過程中各類獸藥的大量濫用和過度使用，導(dǎo)致對(duì)養(yǎng)殖或屠宰所在土壤和環(huán)境水出現(xiàn)間接性污染。目前土壤和環(huán)境水中多殘留測(cè)定項(xiàng)目主要集中在農(nóng)藥殘留、重金屬污染和有機(jī)物污染 (如多環(huán)芳烴等)，還沒有針對(duì)獸藥殘留污染的檢測(cè)方法報(bào)導(dǎo)。而多種獸藥殘留檢測(cè)主要都是針對(duì)動(dòng)物源性食品，如禽肉類、水產(chǎn)品等，沒有針對(duì)環(huán)境水和土壤方面的檢測(cè)方法研究。目前國內(nèi)外熱點(diǎn)檢測(cè)的抗生素大多為氨基糖苷類、內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、氯霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可胺類、磺胺類、硝基呋喃類和喹諾酮類等，在檢測(cè)技術(shù)方面，國際上已較多采用多殘留檢測(cè)技術(shù)和快速篩選檢測(cè)技術(shù)。但是其中有些藥物，如氨基糖苷類屬于極性較大的一類化合物，很難和其他類的抗生素使用同一類前處理方法和儀器檢測(cè)方法；硝基呋喃類需要測(cè)定其代謝物，須進(jìn)行酸水解并衍生化，因此也只能單獨(dú)分類檢測(cè)。其他如內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、氯霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可胺類、磺胺類和喹諾酮類抗生素的檢測(cè)多局限在某一類或幾類同時(shí)測(cè)定，目前還沒有關(guān)于多類抗生素同時(shí)測(cè)定的方法報(bào)道，這是由于不同類的獸藥因極性不同，化學(xué)性質(zhì)也不同，難以實(shí)現(xiàn)多類獸藥殘留的同時(shí)提取、凈化、檢測(cè)；此外，多殘留測(cè)定在儀器檢測(cè)設(shè)定上也存在一定的困難。國內(nèi)外獸藥殘留檢測(cè)主要采用 HPLC法，配有UV、FLD、MS以及MS/MS等檢測(cè)器，而當(dāng)多殘留的項(xiàng)目達(dá)到一定數(shù)量之后只能使用HPLC-MS/MS的方法進(jìn)行，由于各家主流質(zhì)譜生產(chǎn)廠家對(duì)于多殘留測(cè)定方法參數(shù)設(shè)置和儀器性能的側(cè)重點(diǎn)略有不同，導(dǎo)致多殘留檢測(cè)項(xiàng)目達(dá)到某一數(shù)量后，參數(shù)設(shè)置對(duì)于整個(gè)測(cè)定方法的穩(wěn)定性和精密度好壞起到了很重要的影響。如何簡化復(fù)雜樣品基質(zhì)的前處理步驟，提高靈敏度，縮短分析時(shí)間，建立簡便快速、可同時(shí)檢測(cè)多類獸藥殘留的分析方法是目前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一種能同時(shí)對(duì)養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中多種獸藥殘留量的測(cè)定方法，具體是對(duì)牛、羊、豬、雞、魚、蝦的養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境的水體或土壤中氯霉素、β內(nèi)酰胺類(青霉素類)、 喹諾酮類、磺胺類、磺胺增效劑類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、硝基咪唑類在內(nèi)的共9大類61種藥物殘留進(jìn)行快速篩選和定量檢測(cè)方法，提高分析效率，降低檢測(cè)成本。本發(fā)明方法包括以下步驟(1) 土壤和環(huán)境水樣品中加入磷酸鹽緩沖溶液(ρΗ控制在6 7. 5之間)(2)將步驟(1)的溶液離心過濾，收集濾液；
(3)濾液加入固相萃取柱中萃取，洗脫，棄去流出液，萃取柱吹干，然后用甲醇溶液洗柱，洗脫液用甲醇水溶液定容；(4)將定容樣品溶液用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行分析測(cè)試，測(cè)得樣品的色譜峰；(5)將測(cè)得的色譜峰與各已知藥物的標(biāo)準(zhǔn)色譜峰對(duì)照，準(zhǔn)定所檢出藥物的具體品種。上述步驟⑶所說固相萃取柱為反相固相萃取柱(優(yōu)化選擇Oasis HLB 500mg/6mL)。本方法利用液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)土壤或環(huán)境水中多種獸藥殘留。樣品溶液經(jīng)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)選擇離子分析，經(jīng)內(nèi)標(biāo)校正后，回收率在70% -120%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD< 18%。與現(xiàn)有的分類檢測(cè)方法相比，分析效率提高至少5倍，檢測(cè)成本約為原來的 30%。
具體實(shí)施例方式實(shí)例1環(huán)境水樣品中多獸藥殘留檢測(cè)準(zhǔn)確取水樣品IOOmL過濾紙于干凈玻璃錐形瓶中，加入混合內(nèi)標(biāo)溶液50 μ L，加入磷酸鹽緩沖溶液50mL，調(diào)節(jié)溶液pH至6. 5，渦旋混勻。用6ml甲醇和6mL水活化的OasisHLB 柱，將調(diào)節(jié)好PH的樣品溶液過柱，流速控制在l_2d/s，流完后，用5mL水洗離心管和貯液管并過柱，棄去全部流出液。在65kPa的負(fù)壓下，減壓抽干lOmin，最后用6mL甲醇洗脫，收集洗脫液于IOmL試管中，于45°C用氮?dú)獯蹈蓛x吹干，用甲醇+水(l+9v/v)定容至l.OmL，過 0. 45 μ m的有機(jī)相尼龍濾膜到進(jìn)樣瓶中，供液相色譜-質(zhì)譜儀測(cè)定。實(shí)例2、土壤樣品中多獸藥殘留檢測(cè)準(zhǔn)確稱取土壤樣品IOg (士0. 05g)于500mL離心管中，加入混合內(nèi)標(biāo)溶液50 μ L，加入200mL磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)溶液pH值為約6. 5，在振蕩器上振蕩30min，將提取溶液過濾紙于干凈500mL錐形瓶中。用6mL甲醇和6mL水活化的Oasis HLB柱，將過濾好的樣品溶液過柱，流速控制在l_2d/s，流完后，用6mL水洗離心管和貯液管并過柱。在65kPa的負(fù)壓下， 減壓抽干lOmin，最后用5mL甲醇洗脫，收集洗脫液于IOmL試管中，于45°C用氮?dú)獯蹈蓛x吹干，用甲醇+水(30+70v/v)定容至l.OmL，過0.45 μ m的濾膜到進(jìn)樣瓶中，供液相色譜-質(zhì)譜儀測(cè)定。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定典型條件見表1和表2。表1正離子模式條件參數(shù)
液相條件色譜柱Varian Polaris C-18 100*2. Imm 5 μ m流動(dòng)相0. 甲酸水溶液(A)，甲醇(B)流速0.25mL/min進(jìn)樣量50 μ L
權(quán)利要求
1.一種養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中多種獸藥殘留量的測(cè)定方法，其特征是包括氯霉素、β內(nèi)酰胺類(青霉素類)、喹諾酮類、磺胺類、磺胺增效劑類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、硝基咪唑類在內(nèi)的共9大類61種藥物殘留，測(cè)定方法包括以下步驟(1)取土壤或環(huán)境水樣品，加入磷酸鹽緩沖溶液，PH控制在6 7.5 ；(2)將步驟(1)的溶液離心過濾，收集濾液；(3)濾液加入固相萃取柱中萃取，洗脫，棄去流出液，萃取柱吹干，然后用甲醇溶液洗柱，洗脫液用甲醇水溶液定容；(4)將定容樣品溶液用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行分析測(cè)試，測(cè)得樣品的色譜峰；(5)將測(cè)得的色譜峰與各已知藥物的標(biāo)準(zhǔn)色譜峰對(duì)照，準(zhǔn)定所檢出藥物的具體品種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中多種獸藥殘留量的測(cè)定方法，其特征是步驟C3)所述的固相萃取柱為反相固相萃取柱。
3.據(jù)權(quán)利要求2所述的養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中多種獸藥殘留量的測(cè)定方法，其特征是所述的固相萃取柱為Oasis HLB柱。
全文摘要
本發(fā)明提供一種養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中多種獸藥殘留量的測(cè)定方法，可同時(shí)對(duì)氯霉素、β內(nèi)酰胺類(青霉素類)、喹諾酮類、磺胺類、磺胺增效劑類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、硝基咪唑類在內(nèi)的共9大類61種藥物殘留進(jìn)行快速篩選和定量檢測(cè)。土壤或環(huán)境水樣品加磷酸鹽緩沖溶液，離心所得濾液入固相萃取柱中萃取，洗脫，萃取柱吹干，用甲醇溶液洗柱，洗脫液用甲醇溶液定容，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)得樣品的色譜峰，經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)色譜峰對(duì)照，準(zhǔn)定所檢出藥物的具體品種。本方法樣品溶液經(jīng)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)選擇離子分析，經(jīng)內(nèi)標(biāo)校正后，回收率在70％-120％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤18％。與現(xiàn)有檢測(cè)方法相比，分析效率提高至少5倍，檢測(cè)成本約為原來的30％。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102426209SQ20111036375
公開日2012年4月25日 申請(qǐng)日期2011年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日
發(fā)明者丁濤, 張睿, 蔣原, 薛峰 申請(qǐng)人:江蘇出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心