專利名稱：富硒保健品中硒形態(tài)的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種富硒保健品硒形態(tài)的測(cè)定方法，特別是涉及一種富硒保健品進(jìn)行前處理后進(jìn)行硒形態(tài)的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
硒是人體必需的微量元素之一，是谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的組成成分， 具有抗氧化、抗癌、防衰老、提高人體免疫力、保護(hù)心腦血管等作用(Rotruck J T，Pope A L, Ganther H E, et al Selenium :biochemicalrole as a component of glutathione peroxidase. Science, 1973,179, 588-590.) 我國有 2/3 的地區(qū)缺硒，其中有 1/3 的地區(qū)為嚴(yán)重缺硒地區(qū)。人和動(dòng)物體缺硒會(huì)導(dǎo)致克山病，大骨節(jié)病，動(dòng)物的白肌病等，除此以外一些癌癥，地方性甲狀腺障礙等疾病也與低硒環(huán)境密切相關(guān)(Ip C. Lessons frombasic research in selenium and cancer prevention.Journal Nutrition,1998,128, 1845-1854.)。人們?nèi)粘ｏ嬍持械奈o機(jī)硒和有機(jī)硒，其中無機(jī)硒毒性較大，中毒量與需要量的界限非常接近，而且吸收和利用率差，生物有效性低，因而被嚴(yán)格限制其使用量。 有機(jī)硒更利于人體吸收利用，生物活性強(qiáng)，毒性低(盧嵐，魯兵，王春娥.保健食品中有機(jī)硒和無機(jī)硒的分析探討.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志.2010，2(K4) :767-769.),是更高效、安全的人體補(bǔ)硒形式。硒的生物學(xué)功能的發(fā)揮主要依賴于其存在形態(tài)，特別是有機(jī)硒(硒代氨基酸) 的形態(tài)。因此，準(zhǔn)確的檢測(cè)分析硒代氨基酸的形態(tài)具有重大的意義，不僅能指導(dǎo)消費(fèi)者科學(xué)補(bǔ)硒，還能進(jìn)一步了解硒的生物化學(xué)特性和硒在自然界遷移變化的規(guī)律。
目前，我國測(cè)定有機(jī)硒含量的方法主要為差減法(秦昉.植物中有機(jī)硒含量的測(cè)定.無錫輕工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào).1998，17 (4) :74-77.),差減法的原理是先利用不同的試劑將待測(cè)樣品中的有機(jī)硒和無機(jī)硒分離，因無機(jī)硒主要以硒酸根(Se042_)和亞硒酸根(Se032_) 陰離子形式存在，易溶于水。有機(jī)硒主要是與蛋白質(zhì)、纖維素和碳水化合物中的C、N等結(jié)合，以大分子的有機(jī)物形態(tài)存在，所以可利用環(huán)己烷或甲苯等有機(jī)溶劑萃取出有機(jī)硒，再通過測(cè)定總硒和無機(jī)硒的含量，差減得到有機(jī)硒的含量。此方法操作步驟繁瑣，重復(fù)性差，只能得到有機(jī)硒的總量，對(duì)于具體的有機(jī)硒形態(tài)并不清楚，且所用的環(huán)己烷、甲苯等有機(jī)溶劑存在一定的毒性。硒形態(tài)研究屬于前沿研究，目前國內(nèi)、外并無硒形態(tài)研究方法的標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明利用溫和的提取方式，提取含硒化合物，利用酶水解含硒化合物后再利用液相色譜進(jìn)行有效分離，最后利用高靈敏度的原子熒光(AM)進(jìn)行不同形態(tài)硒的測(cè)定，最后得到有機(jī)硒的含量。此方法的優(yōu)點(diǎn)是能測(cè)定富硒植物中不同形態(tài)的硒含量和有機(jī)硒含量，能進(jìn)一步了解植物富集吸收硒的轉(zhuǎn)化規(guī)律，此方法簡(jiǎn)單易操作，重復(fù)性好，精確度高，所用試劑無毒、 無污染。
國外對(duì)硒形態(tài)測(cè)定的前處理方法也有報(bào)道，Selenium species in leavesof chicory, dandelion, lamb' s lettuce and parsley(Darja Mazej, VekoslavaStibilj, et al. Food Chemistry, 2008,107 :75-83.)公開了一種單獨(dú)利用蛋白酶水解樣品然后進(jìn)行硒形態(tài)測(cè)試的方法，該方法蛋白酶用量與樣品的比例為1 2 1 5，成本很高。
所以，開發(fā)一種針對(duì)以硒代氨基酸為主要分析目標(biāo)、低成本高效率的樣品前處理及測(cè)試方法十分有必要。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有硒形態(tài)測(cè)定技術(shù)特別是提取技術(shù)中存在的不足，提供一種操作簡(jiǎn)便，提取效率高，重復(fù)性好，成本低的富硒保健品中硒形態(tài)的測(cè)定方法。
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的這些問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下
一種富硒保健品中硒形態(tài)的測(cè)定方法，其特征在于所述方法包括以下步驟
(1)富硒保健品的預(yù)處理使用提取緩沖液Tris-HCl對(duì)富硒保健品樣品進(jìn)行提取，提取處理后依次加入有效量的蛋白酶K、蛋白酶XIV進(jìn)行水解提取得到待測(cè)樣品溶液；
(2)采用氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法與高效液相色譜法聯(lián)用分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)硒形態(tài)溶液和待測(cè)樣品溶液進(jìn)行測(cè)定；用峰高或峰面積進(jìn)行定量，用數(shù)據(jù)處理中的外標(biāo)法，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后保存，然后將樣品峰積分處理，利用外標(biāo)法校正，按照公式(1)可計(jì)算得到待測(cè)樣品溶液中硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸 (SeMet)的含量；
X = CXV/m (1)
其中X為樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量，單位為微克每千克(yg/kg) ；C為待測(cè)液中該物質(zhì)的濃度，單位為微克每升(yg/L) ；V為測(cè)定液體總體積，單位為毫升(mL) ；F為稀釋倍數(shù)；m為稱樣質(zhì)量(體積)，單位為克(g/mL)。
優(yōu)選的，所述方法中提取緩沖液Tris-HCl的濃度為lOOmmol/L，pH7. 5，液體保健品樣品與提取液的比例(V V)為1 5 1 10或者固體保健品樣品與提取液的比例 (m V)為 1 25 1 100。
優(yōu)選的，所述方法中提取方法采用超聲提取，提取時(shí)間為10 30min。
優(yōu)選的，所述方法中蛋白酶K與液體保健品樣品的比例(m V)為1 100 1 2000或者蛋白酶K與固體保健品樣品的比例(m m)為1 20 1 100 ；水解溫度控制在40 55 °C。
優(yōu)選的，所述方法中蛋白酶XIV與液體保健品樣品的比例(m V)為1 100 1 2000，蛋白酶XIV與固定保健品樣品的比例(m m)為1 20 1 100 ；水解溫度控制在30 45 °C。
優(yōu)選的，所述方法中水解處理后樣品溶液在0 10°C下，離心處理后上清液過 0. 2 0. 5 μ m的濾膜，制得待測(cè)上清液。
優(yōu)選的，所述方法中高效液相色譜法和氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法聯(lián)用時(shí)液相色譜及原子熒光條件為
流動(dòng)相(4(toimol/L(NH4)2HP04，pH6. 0)；流速 lmL/min ；進(jìn)樣體積 100 μ L ；蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速65rpm ；燈電流/輔陰極100mA，45mA ；光電倍增管負(fù)高壓300V ；載氣流速300mL/min ； 屏蔽氣流速700mL/min。
優(yōu)選的，所述方法中高效液相色譜法和氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法聯(lián)用時(shí)氫化物發(fā)生條件是
還原劑成分0.35 % NaOH+1. 2 % NaBH4,流速:6mL/min ；氧化劑成分0. 35 %Na0H+0. 8% H2O2，流速6mL/min ；載流10% HCl，流速6mL/min。
優(yōu)選的，所述方法開機(jī)后對(duì)液相色譜及原子熒光進(jìn)行設(shè)置，待儀器穩(wěn)定后，先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后測(cè)定處理好的樣品溶液，在上述條件下硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se(IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的保留時(shí)間依次為2. 6min,3. 2min,4. Omin, 5. Omin，待測(cè)樣品中的硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相比變化范圍在士5%之內(nèi)即認(rèn)為為該待測(cè)定物質(zhì)。
本發(fā)明涉及一種富硒保健品中硒形態(tài)的測(cè)定方法，是利用超聲提取后，再結(jié)合溫和的酶水解，使富硒保健品中的含硒化合物充分水解以利于硒形態(tài)的測(cè)定。所述的以硒代氨基酸為主要硒形態(tài)指標(biāo)的前處理方法，其步驟描述如下
(1)先移取混勻或稱取研磨過篩的富硒保健品于塑料離心管中，加入提取緩沖液 Tris-HCl (100mmOl/L，pH7. 5)，混勻。液體富硒保健品與提取液的比例(V V)為1 5 1 10，固體保健品與提取液的比例(m V)為1 25 1 100 ；
(2)將混合液放入超聲清洗器超聲提取10 30min ；
(3)再加入蛋白酶K，50°C條件下恒溫振蕩(轉(zhuǎn)速150 200rpm，使塑料離心管中的液體能充分振蕩)提取4 12h。蛋白酶K與液體樣品的比例(m V)為1 100 1 2000，蛋白酶K與固體樣品的比例(m m)為1 20 1 100;
(4)再加入蛋白酶XIV，37°C，恒溫振蕩(轉(zhuǎn)速150 200rpm，使塑料離心管中的液體能充分振蕩)提取4 12h。蛋白酶XIV與液體樣品的比例(m V)為1 100 1 2000，蛋白酶XIV與樣品的比例(m m)為1 20 1 100;
(5)將1 4步中獲得的溶液在4°C下，以轉(zhuǎn)速10000轉(zhuǎn)/分離心30min，取上清液過0. 22 μ m的濾膜，得到待測(cè)的溶液。
(6)設(shè)定液相色譜及原子熒光條件
流動(dòng)相(40mmol/L(NH4)2HP04, pH 6. 0)；流速 lmL/min ；進(jìn)樣體積 100 μ L ；蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速65rpm ；燈電流/輔陰極100mA，45mA ；光電倍增管負(fù)高壓300V ；載氣流速300mL/ min ； 屏蔽氣流速700mL/min。
氫化物發(fā)生條件
還原劑成分0.35 % NaOH+1. 2 % NaBH4,流速:6mL/min ；氧化劑成分0. 35 % NaOH+O. 8% H202，流速6mL/min ；載流10% HCl，流速6mL/min。
(7)開機(jī)后按上述條件對(duì)液相色譜及原子熒光進(jìn)行設(shè)置，待儀器穩(wěn)定后，先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后測(cè)定處理好的樣品溶液，在上述條件下硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se(IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的保留時(shí)間依次為2. 6min,3. 2min,4. Omin, 5. Omin，待測(cè)樣品中的硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相比變化范圍在士5%之內(nèi)即認(rèn)為為該待測(cè)定物質(zhì)。
(8)用峰高或峰面積進(jìn)行定量，用數(shù)據(jù)處理中的外標(biāo)法，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后保存，然后將樣品峰積分處理，利用外標(biāo)校正，即可得到待測(cè)溶液中硒代胱氨酸6e-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys) Je (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的濃度。
(9)按照公式(1)可計(jì)算得到待測(cè)樣品中硒代胱氨酸6e-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的濃度。
X = CXV/m ..................(1)
式中
X-樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量，單位為微克每千克(μ g/kg)；
C-待測(cè)液中該物質(zhì)的濃度，單位為微克每升(μ g/L)；
V—測(cè)定液體總體積，單位為毫升(mL)；
F-稀釋倍數(shù)；
m-稱樣質(zhì)量(體積)，單位為克(g/mL)。
本發(fā)明利用溫和的提取方式，超聲提取含硒化合物后再多種酶結(jié)合使用使含硒化合物徹底水解，這樣不僅使用的酶用量少，成本低廉而且水解效果好。此方法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單易操作，提取效率高，重復(fù)性好，成本低，所用試劑無毒、無污染。
相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下有益效果
1、選擇溫和的提取試劑pH近中性的Tris-HCl，使含硒化合物在提取過程中形態(tài)保持穩(wěn)定。
2、提取過程中采用超聲提取，使含硒化合物更多的溶入提取液中，提高了提取效率。
3、超聲提取在加酶之前，一是不破壞酶的結(jié)構(gòu)，影響酶的活性，二是使含硒化合物更多的溶入提取液后，更利于酶的水解。
4、使用2種蛋白酶水解，含硒化合物水解更徹底，與1種蛋白酶水解相比提取效率提高40%以上，且提取率均可達(dá)80%以上，所需使用的蛋白酶的量更少，成本節(jié)約10倍以上。
5、本發(fā)明方法簡(jiǎn)單易操作，重復(fù)性好，所用試劑無毒、無污染。


下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述
圖1為硒形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)分離譜圖；譜圖中揭示了硒代胱氨酸(％-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、％ (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的依次出峰順序、保留時(shí)間及濃度梯度。
圖2為本發(fā)明實(shí)施例1某知名品牌的富硒保健品的測(cè)定結(jié)果圖；由圖2可知，采用本發(fā)明的提取條件及利用高靈敏度的形態(tài)分析儀器可測(cè)定該品牌的富硒保健品存在4種硒形態(tài)，根據(jù)峰面積計(jì)算可得到各形態(tài)的含量及占總硒的比例。
圖3為本發(fā)明實(shí)施例2某品牌硒酵母片的測(cè)定結(jié)果圖；由圖3可知，采用本發(fā)明的提取條件及利用高靈敏度的形態(tài)分析儀器可測(cè)定該品牌硒酵母片中僅存在兩種硒氨基酸形態(tài)，根據(jù)峰面積計(jì)算各形態(tài)的含量及占總硒的比例。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不能用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中采用的實(shí)施條件可以根據(jù)具體廠家的條件作進(jìn)一步調(diào)整，未說明的實(shí)施條件通常為常規(guī)實(shí)驗(yàn)中的條件。
目前，市場(chǎng)上的富硒保健品種類繁多，因其在生產(chǎn)過程中添加的硒源(無機(jī)硒源或有機(jī)硒源)及量不同，最終的富硒保健品中硒的含量及存在形式也存在很大的差別，市場(chǎng)上富硒保健品中硒的含量和硒究竟以什么樣的形式存在，消費(fèi)者該如何選擇安全、有效的富硒保健品存在很多疑惑，因此對(duì)此類產(chǎn)品中硒含量及形態(tài)的測(cè)定也提出了更高的要求，本發(fā)明選擇了占國內(nèi)富硒保健品市場(chǎng)份額較高的產(chǎn)品進(jìn)行了測(cè)定。
實(shí)施例1某知名品牌的富硒保健品(液體)中硒形態(tài)測(cè)定
對(duì)某知名品牌的富硒保健品(液體)的硒形態(tài)測(cè)定前處理方法步驟進(jìn)行了優(yōu)化， 優(yōu)化過程及結(jié)果如下
移取ImL富硒保健品于15mL塑料離心管中，加入5mL提取緩沖液Tris-HCl，超聲提取15min，加入Img蛋白酶K，50°C，恒溫振蕩培養(yǎng)他，再加入Img蛋白酶XIV，37°C，恒溫振蕩培養(yǎng)他后4°C下，每分鐘轉(zhuǎn)速10000轉(zhuǎn)，離心30min，上清液過0. 22 μ m的濾膜后，制備得到上機(jī)待測(cè)液。將液相色譜條件設(shè)置為流動(dòng)相(40mmol/L(NH4)2HP04，pH 6.0)；流速ImL/ min ；進(jìn)樣體積100 μ L ；蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速65rpm ；燈電流/輔陰極100mA，45mA ；光電倍增管負(fù)高壓300V ；載氣流速300mL/min ；屏蔽氣流速700mL/min。氫化物發(fā)生條件設(shè)置為還原劑成分0. 35% NaOH+1. 2% NaBH4，流速:6mL/min ；氧化劑成分0. 35% Na0H+0. 8% H202，流速 6mL/min ；載流10% HCl，流速6mL/min。
開機(jī)后按上述條件對(duì)液相色譜及原子熒光進(jìn)行設(shè)置，待儀器穩(wěn)定后，先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后測(cè)定處理好的樣品溶液，在上述條件下硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se(IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的保留時(shí)間依次為2. 6min,3. 2min,4. Omin, 5. Omin，待測(cè)樣品中的硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相比變化范圍在士5%之內(nèi)即認(rèn)為為該待測(cè)定物質(zhì)。
用峰高或峰面積進(jìn)行定量，用數(shù)據(jù)處理中的外標(biāo)法，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后保存，然后將樣品峰積分處理，利用外標(biāo)校正，即可得到待測(cè)溶液中硒代胱氨酸6e-Cys2)、硒甲基半胱氨酸GeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的濃度。并根據(jù)公式計(jì)算樣品硒形態(tài)數(shù)據(jù)。
表1優(yōu)化條件篩選及效果
超聲時(shí)間(min)O 5 10 15 20 30 40 60~
權(quán)利要求
1.一種富硒保健品中硒形態(tài)的測(cè)定方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(1)富硒保健品的預(yù)處理使用提取緩沖液Tris-HCl對(duì)富硒保健品樣品進(jìn)行提取，提取處理后依次加入有效量的蛋白酶K、蛋白酶XIV進(jìn)行水解提取得到待測(cè)樣品溶液；(2)采用氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法與高效液相色譜法聯(lián)用分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)硒形態(tài)溶液和待測(cè)樣品溶液進(jìn)行測(cè)定；用峰高或峰面積進(jìn)行定量，用數(shù)據(jù)處理中的外標(biāo)法，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后保存，然后將樣品峰積分處理，利用外標(biāo)法校正，按照公式(1)可計(jì)算得到待測(cè)樣品溶液中硒代胱氨酸(Se-Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se (IV)、硒代蛋氨酸 (SeMet)的含量；X=CXV/m (1)其中X為樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量，單位為微克每千克(μ g/kg);C為待測(cè)液中該物質(zhì)的濃度，單位為微克每升(μ g/L);V為測(cè)定液體總體積，單位為毫升(mL); F為稀釋倍數(shù)； m為稱樣質(zhì)量(體積)，單位為克(g/mL)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中提取緩沖液Tris-HCl的濃度為100 mmol/L,pH7. 5，液體保健品樣品與提取液的比例(V: V)為1 5 1 10或者固體保健品樣品與提取液的比例(m:V)為1:25 1:100。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中提取方法采用超聲提取，提取時(shí)間為1(T30 min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中蛋白酶K與液體保健品樣品的比例(m:V)為1 :10(Tl :2000或者蛋白酶K與固體保健品樣品的比例(m:m)為1 :2(Tl :100 ； 水解溫度控制在40 55°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中蛋白酶XIV與液體保健品樣品的比例(m:V)為1 :10(Tl :2000，蛋白酶XIV與固定保健品樣品的比例(m:m)為1 :2(Tl 100 ；水解溫度控制在30 45°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中水解處理后樣品溶液在0 10°C下，離心處理后上清液過0. 2 0. 5 μ m的濾膜，制得待測(cè)上清液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中高效液相色譜法和氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法聯(lián)用時(shí)液相色譜及原子熒光條件為流動(dòng)相(40 mmo VL(NH4)2HPO4, pH 6. 0)；流速 1 mL/min ；進(jìn)樣體積 100 μ L ；蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速65 rpm ；燈電流/輔陰極100mA，45mA ；光電倍增管負(fù)高壓300V ；載氣流速300mL/ min ； 屏蔽氣流速700mL/min。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述方法中高效液相色譜法和氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法聯(lián)用時(shí)氫化物發(fā)生條件是還原劑成分0. 35%Na0H+l. 2%NaBH4,流速6 mL/min ；氧化劑成分 0. 35%Na0H+0. 8%H202，流速6 mL/min ；載流10% HCl，流速6 mL/min。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述方法開機(jī)后對(duì)液相色譜及原子熒光進(jìn)行設(shè)置，待儀器穩(wěn)定后，先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后測(cè)定處理好的樣品溶液，在上述條件下硒代胱氨酸(Se-Cys2 )、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys )、k (IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的保留時(shí)間依次為2.6 min, 3. 2 min, 4.0 min, 5.0 min，待測(cè)樣品中的硒代胱氨酸(Se_Cys2)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)、Se(IV)、硒代蛋氨酸(SeMet)的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相比變化范圍在士5%之內(nèi)即認(rèn)為為該待測(cè)定物質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種富硒保健品中硒形態(tài)的測(cè)定方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(1)富硒保健品的預(yù)處理使用提取緩沖液Tris-HCl對(duì)富硒保健品樣品進(jìn)行提取，提取處理后依次加入有效量的蛋白酶K、蛋白酶XIV進(jìn)行水解提取得到待測(cè)樣品溶液；(2)采用氫化物發(fā)生——原子熒光光譜法與高效液相色譜法聯(lián)用分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)硒形態(tài)溶液和待測(cè)樣品溶液進(jìn)行測(cè)定。該方法簡(jiǎn)單易操作，重復(fù)性好，所用試劑無毒、無污染。
文檔編號(hào)G01N30/06GK102520090SQ20111042829
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月20日
發(fā)明者朱元元 申請(qǐng)人:蘇州硒谷科技有限公司