專利名稱：檢測(cè)蛋黃油中二十二碳六烯酸含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬功能因子檢測(cè)方法的技術(shù)領(lǐng)域，涉及氣相色譜外標(biāo)法檢測(cè)蛋黃油中
二十二碳六烯酸含量。
背景技術(shù)：
DHA(Docosahexaenoic acid)是二十二碳六烯酸的英文簡(jiǎn)稱，是ω-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。國(guó)際上普遍承認(rèn)DHA是人腦神經(jīng)細(xì)胞膜中主要的脂質(zhì)成分，也是大腦細(xì)胞優(yōu)先吸收利用的脂肪酸成分，具有重要的營(yíng)養(yǎng)保健功能，是嬰幼兒神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中重要的營(yíng)養(yǎng)成分，與其成長(zhǎng)過(guò)程中的反應(yīng)靈敏程度有很大關(guān)系。另外，DHA在視神經(jīng)細(xì)胞及視網(wǎng)膜組織中的含量高達(dá)40% 47%，如果食物中缺乏DHA，可使視網(wǎng)膜組織中DHA含量下降，從而導(dǎo)致視力下降。2002年美國(guó)《臨床營(yíng)養(yǎng)學(xué)雜志》報(bào)道，食品中補(bǔ)充DHA的嬰兒在進(jìn)食52個(gè)星期后，視覺(jué)明顯比同組中未進(jìn)食DHA的健康嬰兒靈敏。除此之外DHA具有防血栓、防動(dòng)脈硬化、降血脂、延緩腦衰老等功效。我國(guó)對(duì)于DHA的研究起步較晚，始于80年代，而且當(dāng)時(shí)更多的關(guān)注于防治心血管病的功能。隨著研究的進(jìn)一步深入和人們對(duì)其功能特性的認(rèn)識(shí)，尤其是富含DHA的保健產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)上的廣泛出現(xiàn)，開(kāi)發(fā)健康有效的DHA保健產(chǎn)品具有極大的現(xiàn)實(shí)意義?，F(xiàn)有的對(duì)于食品中各存在狀態(tài)下的DHA的定性和定量測(cè)定方法單一，測(cè)定所需的標(biāo)準(zhǔn)品量較大，成本高。比如專利CN 1920554Α中提到的液相色譜法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是，彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種氣相色譜(GC)與火焰離子化(FID)檢測(cè)器聯(lián)用的技術(shù)，結(jié)合外標(biāo)法對(duì)蛋黃油中DHA進(jìn)行定量檢測(cè)。本發(fā)明的方法，適用于家禽、飛禽或爬行動(dòng)物所產(chǎn)蛋中的蛋黃或蛋黃油。本發(fā)明的技術(shù)方案如下。一種檢測(cè)蛋黃油中二十二碳六烯酸含量的方法，步驟有被測(cè)樣品制備、氣相色譜 (GC)與火焰離子化(FID)檢測(cè)器聯(lián)用檢測(cè)和計(jì)算蛋黃油中二十二碳六烯酸含量；所述的被測(cè)樣品制備，是將蛋黃油組分提取出后，取0. 1 0.5g加入到6mLNa0H 甲醇溶液中在40°C恒溫皂化至油滴消失，NaOH甲醇溶液濃度為0. 5 lmol/L ；再經(jīng)過(guò)質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為14%的BF3 · CH3OH溶液甲酯化15 30min后，以正己烷提取脂肪酸甲酯混合物， 再加正己烷稀釋至50 500倍后，經(jīng)過(guò)0. 45 μ m有機(jī)膜過(guò)濾；所述的采用氣相色譜與火焰離子化檢測(cè)器聯(lián)用檢測(cè)，是以極性的熔融二氧化硅毛細(xì)管柱為分析柱，以高純氮?dú)鉃檩d氣，采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，檢測(cè)得到二十二碳六烯酸甲酯的峰面積y ；所述的計(jì)算蛋黃油中二十二碳六烯酸含量，是將檢測(cè)得到的峰面積y代入線性回歸方程為y = 1908. 9x，求出的χ乘以相應(yīng)的脂肪酸甲酯混合物加正己烷稀釋的倍數(shù)，通過(guò)二十二碳六烯酸甲酯與二十二碳六烯酸分子量之比進(jìn)行系數(shù)轉(zhuǎn)化，得到以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為單位的蛋黃油中的二十二碳六烯酸的濃度。在采用氣相色譜與火焰離子化檢測(cè)器聯(lián)用檢測(cè)步驟中，具體的檢測(cè)條件為進(jìn)樣口溫度230 250°C，進(jìn)樣采用自動(dòng)進(jìn)樣器，進(jìn)樣量1 μ L，火焰離子化(FID)檢測(cè)器溫度 250 ^0°C，燃燒氣:H2,35mL/min ；助燃?xì)饪諝猓?50mL/min ；尾吹氣(氮?dú)?流量27. 5mL/ min ；載氣為恒定流量模式；載氣流速設(shè)定為2. 5mL/min ；升溫條件為50°C保持lmin， 25°C /min 升溫到 190°C，保持 IOmin 后，3°C /min 升溫到 220°C并保溫 15 30min。本發(fā)明在柱壓可承受的范圍內(nèi)，通過(guò)提高流速，極大的提前了 DHA甲酯的出峰時(shí)間，并保證了出峰時(shí)間的穩(wěn)定性和峰形的對(duì)稱性。DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍是 0. 005mg/mL 0. 100mg/mL。載氣為恒定流量模式，極大的提高了方法的精密度和重現(xiàn)性。 經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)，證明本方法精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性良好，檢出限低，準(zhǔn)確度高，而且與專利CN 1920554A中提到的液相色譜法相比，標(biāo)準(zhǔn)品量小，檢測(cè)成本低；本發(fā)明采用外標(biāo)法進(jìn)行定量，DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍是5yg/mL 100yg/mL，檢出限最低可以達(dá)被檢出 1. 3880μ g/mL。


圖1為順式二十二碳六烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖2為標(biāo)準(zhǔn)品檢出限氣相色譜圖放大圖；圖3為順式二十二碳六烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品氣相色譜圖；圖4為實(shí)施例3蛋黃油脂肪酸甲酯混合物氣相色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面用具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的方法。實(shí)施例1本發(fā)明技術(shù)方案的選擇確定。(1)分析柱的選擇采用Supelco公司生產(chǎn)的SP -2560(100mX0. 25mmX0. 2μπι)毛細(xì)管柱為分析柱，該熔融二氧化硅毛細(xì)管柱屬于極性柱子，更有柱長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)對(duì)于分析對(duì)象脂肪酸甲酯類(lèi)物質(zhì)的分離效果較好，對(duì)于飽和度及脂肪酸碳鏈長(zhǎng)度相近的物質(zhì)(如DPA、EPA)可以保證較好的分離度。相比HP-5(J&W，30mX0. 25mmX0. 25μπι，5%苯基聚硅氧烷)或DB-1 (J&W， 30mX0. 32mmX0. 25 μ m，100 %二甲基聚硅氧烷)等非極性柱，限于柱長(zhǎng)和極性，很難保證分離度和峰形。(2)流速和流量模式的確定通過(guò)對(duì)主要組分沸點(diǎn)所屬區(qū)間的判斷，目標(biāo)物質(zhì)理論塔板數(shù)的計(jì)算，確定條件優(yōu)化為載氣采用恒流模式進(jìn)樣，流速設(shè)定為2. 5mL/min ；最大限度的減少由于分流歧視對(duì)于測(cè)定結(jié)果重現(xiàn)性和精密度的影響，分流比為19 1 1 1，當(dāng)分流量與進(jìn)入檢測(cè)器的比為 1 1，最大限度的消除了分流的歧視現(xiàn)象；氮?dú)馕泊?7.5mL/min。(3)升溫和檢測(cè)條件的確定進(jìn)樣口溫度230 250°C，升溫條件50°C保持lmin，25°C /min升溫到190°C，保持 IOmin后，3°C /min升溫到220°C并保溫15min ；FID檢測(cè)器溫度250 280°C，燃燒氣=H2， 35mL/min ；助燃?xì)饪諝猓?50mL/min。
(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作準(zhǔn)確吸取0. 5mg/mL的順式二十二碳六烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品2mL、l. 5mL、lmL、0. 5mL、 0. 3mL、0. 2mL、0. lmL，分別置于七個(gè)IOmL的容量瓶中，并用色譜純正己烷定容，得到濃度分另Ij 為 0. lmg/mL、0. 075mg/mL、0. 050mg/mL、0. 025mg/mL、0. 015mg/mL、0. 010mg/mL、0. 005mg/ mL的順式二十二碳六烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。分別將其在已確定的色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)定目標(biāo)峰的峰面積。以順式二十二碳六烯酸甲酯系列溶液的濃度為橫坐標(biāo)X，以響應(yīng)的峰面積y為縱坐標(biāo)繪制峰面積-濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示，得到的線性回歸方程為y = 1908. 9x,相關(guān)系數(shù)R值為0. 9988。實(shí)施例2方法學(xué)驗(yàn)證性試驗(yàn)及檢出限和定量限的計(jì)算。精密度及穩(wěn)定性的考察，精確稱取蛋黃油油樣200mg，經(jīng)過(guò)6mLNa0H甲醇溶液在 40°C恒溫皂化至油滴消失，再經(jīng)過(guò)14% (m/m)BF3 · CH3OH甲酯化30min后，以已正己烷提取脂肪酸甲酯混合物并用正己烷將其準(zhǔn)確稀釋數(shù)倍后，經(jīng)過(guò)0. 45 μ m有機(jī)膜過(guò)濾，依上述條件每隔Ih自動(dòng)進(jìn)樣一針，共進(jìn)樣5次，統(tǒng)計(jì)分析，RSD值為0. 4893%，如表1所示。表1方法精密度及穩(wěn)定性結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)蛋黃油中二十二碳六烯酸含量的方法，步驟有被測(cè)樣品制備、氣相色譜與火焰離子化檢測(cè)器聯(lián)用檢測(cè)和計(jì)算蛋黃油中二十二碳六烯酸含量；所述的被測(cè)樣品制備，是將蛋黃油組分提取出后，取0. 1 0. 5g加入到6mLNa0H甲醇溶液中在40°C恒溫皂化至油滴消失，NaOH甲醇溶液濃度為0. 5 lmol/L ；再經(jīng)過(guò)質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為14%的BF3 · CH3OH溶液甲酯化15 30min后，以正己烷提取脂肪酸甲酯混合物，再加正己烷稀釋至50 500倍后，經(jīng)過(guò)0. 45 μ m有機(jī)膜過(guò)濾；所述的采用氣相色譜與火焰離子化檢測(cè)器聯(lián)用檢測(cè)，是以極性的熔融二氧化硅毛細(xì)管柱為分析柱，以高純氮?dú)鉃檩d氣，采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，檢測(cè)得到二十二碳六烯酸甲酯的峰面積Y ；所述的計(jì)算蛋黃油中二十二碳六烯酸含量，是將檢測(cè)得到的峰面積y代入線性回歸方程為y = 1908. 9x，求出的χ乘以相應(yīng)的脂肪酸甲酯混合物加正己烷稀釋的倍數(shù)，通過(guò)二十二碳六烯酸甲酯與二十二碳六烯酸分子量之比進(jìn)行系數(shù)轉(zhuǎn)化，得到以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為單位的蛋黃油中的二十二碳六烯酸濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)蛋黃油中二十二碳六烯酸含量的方法，其特征在于，采用氣相色譜與火焰離子化檢測(cè)器聯(lián)用檢測(cè)步驟中，具體的檢測(cè)條件為進(jìn)樣口溫度230 250°C，進(jìn)樣采用自動(dòng)進(jìn)樣器，進(jìn)樣量1 μ L，火焰離子化檢測(cè)器溫度250 280°C，燃燒氣 H2,35mL/min ；助燃?xì)饪諝猓?50mL/min ；尾吹氣流量27. 5mL/min ；載氣為恒定流量模式；載氣流速設(shè)定為2. 5mL/min ；升溫條件為50°C保持lmin，25°C /min升溫到190°C，保持IOmin 后，3°C /min升溫到220°C并保溫15 30min。
全文摘要
本發(fā)明的檢測(cè)蛋黃油中二十二碳六烯酸含量的方法屬功能因子檢測(cè)方法的技術(shù)領(lǐng)域。將蛋黃油組分提取出后經(jīng)恒溫皂化至油滴消失，再經(jīng)BF3·CH3OH溶液甲酯化，以正己烷提取脂肪酸甲酯混合物并稀釋過(guò)濾；采用氣相色譜與火焰離子化檢測(cè)器聯(lián)用檢測(cè)得到二十二碳六烯酸甲酯的峰面積y；用線性回歸方程并經(jīng)數(shù)據(jù)處理得到蛋黃油中的二十二碳六烯酸濃度。本發(fā)明在柱壓可承受的范圍內(nèi)通過(guò)提高流速極大的提前了二十二碳六烯酸甲酯的出峰時(shí)間，并保證了出峰時(shí)間的穩(wěn)定性和峰形的對(duì)稱性；經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)，證明本方法精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性良好，檢出限低，準(zhǔn)確度高。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102565261SQ201110433100
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2011年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月21日
發(fā)明者于一丁, 劉博群, 劉靜波, 梁春瑋 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)