專利名稱：病原真菌致病性基因pcg4及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種病原真菌致病性基因PCG4及其用途。
背景技術(shù)：
稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)是子囊菌亞門的真菌，能侵染水稻、小麥、大麥、粟以及其它多種禾本科植物，導(dǎo)致瘟病。一般情況下，稻瘟病的危害可使水稻減產(chǎn)5-10%，重病田可導(dǎo)致水稻絕收。稻瘟病是我國水稻的主要病害之一，也是世界性的水稻病害。稻瘟菌以分生孢子作為侵染寄主植物的初侵染源和再侵染源。稻瘟菌的一部分菌絲在生長過程中分化為分生孢子梗。分生孢子梗頂端細(xì)胞膨大形成第一個分生孢子，此后， 頂端的極性向一邊偏移進(jìn)而依次產(chǎn)生另外的分生孢子。稻瘟菌的分生孢子呈梨形，由三個細(xì)胞組成。一般5至9個分生孢子以合軸的方式從一個分生孢子梗的頂端產(chǎn)生。分生孢子釋放后，在分生孢子梗上留下屈膝狀的疤痕。釋放后的分生孢子吸附到葉片上，經(jīng)過萌發(fā)形成附著胞，成熟的附著胞內(nèi)產(chǎn)生與累積膨脹壓；然后，附著胞下產(chǎn)生侵染釘直接穿透植物表皮，并在植物細(xì)胞內(nèi)形成侵染性菌絲；最后侵染性菌絲在植物細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間擴(kuò)展、定植。 稻瘟菌侵染感病寄主時，侵染性菌絲在植物組織內(nèi)擴(kuò)展形成直徑2-3毫米以上的灰色或灰褐色病斑，這些病斑中的侵染菌絲穿透植物組織向空中分化形成分生孢子梗，進(jìn)一步形成分生孢子。分生孢子在風(fēng)、雨的沖刷下釋放、附著，重新引起植物的再侵染。稻瘟菌從分生孢子附著到分生孢子再產(chǎn)生的周期一般所需時間為3-5天；在植物的生長季節(jié)，如果條件適宜，能夠多次侵染，造成危害。綜上所述，分生孢子的形成是稻瘟菌侵染植物所必需的過程，稻瘟病的嚴(yán)重度與稻瘟菌分生孢子的產(chǎn)生量呈正相關(guān)。如果能阻斷稻瘟菌的分生孢子形成，就可以控制稻瘟病的發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供病原真菌致病性蛋白Pcg4及其編碼基因PCG4的新用途。所述蛋白Pcg4為序列表序列3所示的蛋白質(zhì)，其編碼基因PCG4為序列表序列1中第2001位至第觀94位所示的核苷酸序列。本發(fā)明所提供的新用途之一是序列表序列3所示的蛋白質(zhì)可用于調(diào)控稻瘟菌 (Magnaporthe oryzae)分生孢子的產(chǎn)生，或調(diào)節(jié)序列表序列3所示的蛋白質(zhì)表達(dá)量的物質(zhì)用于調(diào)控稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)分生孢子的產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)證明，病原真菌致病性蛋白Pcg4的表達(dá)量降低時，稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)分生孢子的產(chǎn)生量減少?；谠搶?shí)驗(yàn)，本發(fā)明提供了一種調(diào)控稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)分生孢子產(chǎn)生的方法。所述調(diào)控稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)分生孢子產(chǎn)生的方法，包括調(diào)控所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，或調(diào)控所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平的步驟。所述調(diào)控稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)分生孢子產(chǎn)生的方法具體可為降低稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)分生孢子產(chǎn)生的方法，包括降低所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，或降低所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平的步驟。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明，稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)分生孢子的產(chǎn)生量減少，所述稻瘟菌對寄主植物的致病力減弱?；谠搶?shí)驗(yàn)，本發(fā)明提供一種降低稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)對植物致病力的方法。該方法包括抑制所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的編碼基因表達(dá)的步驟。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)實(shí)際需要，通過篩選或鑒定調(diào)控所述蛋白質(zhì)表達(dá)量的物質(zhì)來實(shí)現(xiàn)稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)分生孢子產(chǎn)生量的調(diào)控，最終控制植物稻瘟菌病害的發(fā)生和危害。下述以稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)中序列表序列3所示的蛋白質(zhì)或其編碼基因?yàn)榘悬c(diǎn)篩選或鑒定植物稻瘟菌殺菌劑的方法均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍本發(fā)明提供的篩選植物稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)殺菌劑的方法，包括以所述稻瘟菌中序列表序列3所示的蛋白質(zhì)為靶點(diǎn)對待檢測物質(zhì)進(jìn)行篩選，將得到的抑制序列表序列3所示蛋白質(zhì)表達(dá)的待檢測物質(zhì)作為候選的植物稻瘟菌殺菌劑的步驟。本發(fā)明提供的篩選植物稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)殺菌劑的方法，包括以所述稻瘟菌中序列表序列3所示的蛋白質(zhì)的編碼基因?yàn)榘悬c(diǎn)對待檢測物質(zhì)進(jìn)行篩選，將得到的抑制序列表序列3所示蛋白質(zhì)編碼基因轉(zhuǎn)錄的待檢測物質(zhì)作為候選的植物稻瘟菌殺菌劑的步驟。本發(fā)明提供的鑒定或輔助鑒定植物稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)候選殺菌劑的方法，包括如下步驟檢測待測物質(zhì)能否抑制所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的表達(dá)，如所述待測物質(zhì)能抑制所述稻瘟菌中序列表序列3所示的蛋白質(zhì)表達(dá)，則所述待測物質(zhì)為候選的所述植物稻瘟菌殺菌劑；如所述待測物質(zhì)不能抑制所述稻瘟菌中序列表序列3 所示的蛋白質(zhì)表達(dá)，則所述待測物質(zhì)為非候選的所述植物稻瘟菌殺菌劑。本發(fā)明提供的鑒定或輔助鑒定植物稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)候選殺菌劑的方法，包括如下步驟檢測待測物質(zhì)能否抑制稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄，如所述待測物質(zhì)能抑制所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄，則所述待測物質(zhì)為候選的所述植物稻瘟菌殺菌劑；如所述待測物質(zhì)不能抑制所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄，則所述待測物質(zhì)為非候選的所述植物稻瘟菌殺菌劑。下述以物質(zhì)在制備植物稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)殺菌劑中的應(yīng)用均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍本發(fā)明保護(hù)具有如下1)-4)中至少一種功能的物質(zhì)在制備植物稻瘟菌 (Magnaporthe oryzae) ■齊Ll 中白勺I^ffi 1)抑制序列表序列3所示氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的表達(dá)；2)抑制將序列表序列3所示氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基取代和/或缺失和/或添加、且具有調(diào)控稻瘟菌分生孢子產(chǎn)生功能的蛋白質(zhì)的表達(dá)；3)抑制序列表序列3所示氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄；4)抑制將序列表序列3所示氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基取代和/或缺失和/或添加、且具有調(diào)控稻瘟菌分生孢子產(chǎn)生功能的蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄。本發(fā)明還保護(hù)具有如下5)-8)中至少一種功能的物質(zhì)在制備植物稻瘟菌 (Magnaporthe oryzae) ■齊Ll 中白勺I^ffi 5)降低序列表序列3所示氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平；6)降低將序列表序列3所示氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基取代和/或缺失和/或添加、且具有調(diào)控稻瘟菌分生孢子產(chǎn)生功能的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平；7)降低序列表序列3所示氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平；8)降低將序列表序列3所示氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基取代和/或缺失和/或添加、且具有調(diào)控稻瘟菌分生孢子產(chǎn)生功能的蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平。本發(fā)明還保護(hù)具有如下功能的物質(zhì)在制備植物稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)殺菌劑中的應(yīng)用使序列表序列3所示氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)失活或使將序列表序列3所示氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基取代和/或缺失和/或添加、且具有調(diào)控稻瘟菌分生孢子產(chǎn)生功能的蛋白質(zhì)失活。本發(fā)明提供一種敲除載體和重組稻瘟菌，所述敲除載體為敲除稻瘟菌 (Magnaporthe oryzae)中序列表序列3所示蛋白質(zhì)編碼基因的重組載體；所述重組載體具體可為pZl ；所述重組稻瘟菌為將稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)中序列表序列3所示蛋白質(zhì)編碼基因敲除得到的重組菌，所述重組稻瘟菌具體可通過包括如下步驟的方法得到將所述重組載體導(dǎo)入所述稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)中，敲除所述稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的編碼基因。本發(fā)明保護(hù)所述敲除載體在敲除稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)中序列表序列3 所示蛋白質(zhì)編碼基因中的應(yīng)用。本發(fā)明提供一種DNA分子，所述DNA分子的核苷酸序列是序列表序列1中的第1 位至第2000位所示的核苷酸序列。本發(fā)明保護(hù)所述DNA分子在作為啟動子中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)證明，蛋白Pcg4的編碼基因PCG4被潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(hph)置換后得到的敲除體PY9不能產(chǎn)生分生孢子，且在劃傷的水稻葉片上不能形成病斑，而PCG4基因的互補(bǔ)體DE7與野生型稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)菌株P(guān)131的分生孢子產(chǎn)生量相同，且在劃傷的水稻葉片上均能形成病斑。更進(jìn)一步地說，基因PCG4的缺失即蛋白Pcg4不表達(dá)， 可導(dǎo)致稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)對水稻的侵染能力喪失。本發(fā)明所提供的方法和應(yīng)用在植物稻瘟菌病害的控制方面具有重要意義。


圖1為野生型稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)菌株P(guān)131及其突變體XXY7683的菌落。其中，左圖為野生型稻瘟菌菌株P(guān)131的菌落，右圖為突變體XXY7683的菌落。圖2為突變體XXY7683中的T-DNA在PCG4啟動子區(qū)域的插入位置示意圖。其中， 黑色矩形代表外顯子，L和R分別代表T-DNA的左邊緣和右邊緣，E和H分別代表EcoRI和 Hindlll，各位置以PCG4的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)為基準(zhǔn)，T-DNA片段大小為51Λ。圖3為突變體XXY7683的Southern雜交圖。其中，從左至右的泳道依次為=EcoRI 酶切野生型稻瘟菌菌株P(guān)131的基因組、EcoRI酶切突變體XXY7683的基因組、HindIII酶切野生型稻瘟菌菌株P(guān)131的基因組和HindIII酶切突變體XXY7683的基因組；第2泳道有雜交信號的條帶大小為12. 41Λ，第4泳道有雜交信號的條帶大小為8. 11Λ。圖4為敲除載體pZl的構(gòu)建示意圖。其中，Sa、K、X、P、S分別代表限制性內(nèi)切酶 Sail, KpnI, XhoI, PstI, SpeI, hph代表潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因，上方為野生型稻瘟菌菌株 P131的基因組片段，下方為敲除載體pZl的基因片段。圖5為PCG4基因敲除體PY9的Southern雜交驗(yàn)證。其中，左側(cè)泳道為Mil酶切的野生型菌株Ρ131的基因組，右側(cè)泳道為MlI酶切的敲除體ΡΥ9的基因組，左側(cè)雜交帶大小為1，449bp，右側(cè)雜交帶大小為3，829bp。圖6為PCG4基因的敲除體PY9和互補(bǔ)體DE7的RT-PCR驗(yàn)證。其中，P131為野生型，PY9為PCG4的敲除體，DE7為PCG4敲除體PY9的互補(bǔ)體，Actin為對照。圖7為野生型稻瘟菌菌株P(guān)131、敲除體PY9和互補(bǔ)體DE7的菌落生長外觀。圖8為野生型稻瘟菌菌株P(guān)131、敲除體PY9和互補(bǔ)體DE7的菌落直徑大小。圖9為野生型稻瘟菌菌株P(guān)131、敲除體PY9和互補(bǔ)體DE7的菌絲及分生孢子產(chǎn)生量。其中，A為野生型稻瘟菌菌株P(guān)131、敲除體PY9和互補(bǔ)體DE7的分生孢子梗以及分生孢子產(chǎn)生情況，標(biāo)尺為50微米；B為野生型稻瘟菌菌株P(guān)131、敲除體PY9和互補(bǔ)體DE7的分生孢子產(chǎn)生量。圖10為野生型稻瘟菌菌株P(guān)131、敲除體PY9和互補(bǔ)體DE7對水稻侵染能力的比較。圖11為PCG4的表達(dá)情況。其中，左列DIC為相差視野下明視場下拍攝，右列GFP 為熒光視野下暗視場藍(lán)光下拍攝，標(biāo)尺長度為20微米；A為含有PCG4-eGFP融合載體的互補(bǔ)體DE7的分生孢子，B為含有PCG4-eGFP融合載體的互補(bǔ)體DE7的附著胞，C為含有 PCG4-eGFP融合載體的互補(bǔ)體DE7的菌絲。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實(shí)施例中所使用的野生型稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)菌株P(guān)131、ρΚΝΗ、 pKNTG和水稻(Oryzae sativa)小種麗江新團(tuán)黑谷(Lijiangxintuanheigu)與如下文獻(xiàn)中所使用的相同，公眾可從中國農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得Jun Yang et al. A Novel Protein Coml Is Required for Normal Conidium Morphology and Full Virulence in Magnaporthe oryzae. Mol Plant Microbe Interact. 2010 Jan ；23(1) :112-23.實(shí)施例1、稻瘟菌PCG4基因的克隆一、突變體的篩選與鑒定1、分生孢子的制備使用涂菌產(chǎn)孢的方法制備分生孢子，具體方法如下將野生型稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)菌株P(guān)131的各根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)(ATMT) 的轉(zhuǎn)化體的菌絲充分打斷，均勻地涂布到西紅柿汁燕麥片培養(yǎng)基平板上，26°d8°C培養(yǎng)， 當(dāng)肉眼可見新生菌絲長出培養(yǎng)基表面時，用棉簽輕輕將菌絲洗下，并用水沖洗干凈，蓋上單層紗布，于光照培養(yǎng)48小時后，在培養(yǎng)基表面即可見大量的稻瘟菌孢子。
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西紅柿汁燕麥片培養(yǎng)基的配制取150ml西紅柿汁、30_50克燕麥片煮沸30分鐘過濾后的濾液和20克瓊脂，用水定容至1升。2、分生孢子產(chǎn)孢量相關(guān)突變體的篩選將各ATMT轉(zhuǎn)化體通過步驟1的方法制備得到的分生孢子用30ml水洗、收集，利用血球記數(shù)板在顯微鏡下測定其分生孢子數(shù)；并以野生型稻瘟菌菌株P(guān)131為對照，篩選產(chǎn)孢量有顯著差異的菌，結(jié)果獲得一個產(chǎn)孢量顯著降低的突變體XXY7683。取野生型菌株P(guān)131和突變體XXY7683各6皿進(jìn)行產(chǎn)孢量測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)突變體 XXY7683的產(chǎn)孢量顯著降低，只有野生型菌株的1/100(見表1)，其菌落生長速度較野生型菌株P(guān)131也有了明顯的下降，為P131的75% (圖1)，圖1為各菌株在西紅柿汁燕麥片培養(yǎng)基平板上活化后，采用打孔器分別挖取大小一致的菌絲塊，繼續(xù)轉(zhuǎn)移到西紅柿汁燕麥片培養(yǎng)基板上，28°C培養(yǎng)120小時后照相。表1.突變體與野生型菌分生孢子產(chǎn)量的區(qū)別
權(quán)利要求
1.序列表序列3所示的蛋白質(zhì)在調(diào)控稻瘟菌(Magnaportheoryzae)分生孢子產(chǎn)生中的應(yīng)用。
2.調(diào)控稻瘟菌(Magnaportheoryzae)分生孢子產(chǎn)生的方法，包括調(diào)控所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，或調(diào)控所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平的步驟。
3.降低稻瘟菌(Magnaportheoryzae)對植物致病力的方法，包括抑制所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的編碼基因表達(dá)的步驟。
4.一種篩選植物稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)殺菌劑的方法，包括以所述稻瘟菌中序列表序列3所示的蛋白質(zhì)為靶點(diǎn)對待檢測物質(zhì)進(jìn)行篩選，將得到的抑制序列表序列3所示蛋白質(zhì)表達(dá)的待檢測物質(zhì)作為候選的植物稻瘟菌殺菌劑的步驟；或，包括以所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的編碼基因?yàn)榘悬c(diǎn)對待檢測物質(zhì)進(jìn)行篩選，將得到的抑制序列表序列3所示蛋白質(zhì)編碼基因轉(zhuǎn)錄的待檢測物質(zhì)作為候選的植物稻瘟菌殺菌劑的步驟。
5.一種鑒定或輔助鑒定植物稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)候選殺菌劑的方法，包括如下步驟檢測待測物質(zhì)能否抑制所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的表達(dá)，如所述待測物質(zhì)能抑制所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的表達(dá)，則所述待測物質(zhì)為候選的所述植物稻瘟菌殺菌劑；如所述待測物質(zhì)不能抑制所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的表達(dá)，則所述待測物質(zhì)為非候選的所述植物稻瘟菌殺菌劑；或，檢測待測物質(zhì)能否抑制稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄，如所述待測物質(zhì)能抑制所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄，則所述待測物質(zhì)為候選的所述植物稻瘟菌殺菌劑；如所述待測物質(zhì)不能抑制所述稻瘟菌中序列表序列3所示蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄，則所述待測物質(zhì)為非候選的所述植物稻瘟菌殺菌劑。
6.具有如下1)-4)中至少一種功能的物質(zhì)在制備植物稻瘟菌(Magnaportheoryzae) 殺菌劑中的應(yīng)用1)抑制序列表序列3所示氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的表達(dá)；2)抑制將序列表序列3所示氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基取代和/或缺失和 /或添加、且具有調(diào)控稻瘟菌分生孢子產(chǎn)生功能的蛋白質(zhì)的表達(dá)；3)抑制序列表序列3所示氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄；4)抑制將序列表序列3所示氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基取代和/或缺失和 /或添加、且具有調(diào)控稻瘟菌分生孢子產(chǎn)生功能的蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄。
7.具有如下5)-8)中至少一種功能的物質(zhì)在制備植物稻瘟菌(Magnaportheoryzae) 殺菌劑中的應(yīng)用5)降低序列表序列3所示氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平；6)降低將序列表序列3所示氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基取代和/或缺失和 /或添加、且具有調(diào)控稻瘟菌分生孢子產(chǎn)生功能的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平；7)降低序列表序列3所示氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平；8)降低將序列表序列3所示氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基取代和/或缺失和 /或添加且、具有調(diào)控稻瘟菌分生孢子產(chǎn)生功能的蛋白質(zhì)的編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平。
8.具有如下功能的物質(zhì)在制備植物稻瘟菌(Magnaportheoryzae)殺菌劑中的應(yīng)用使序列表序列3所示氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)失活或使將序列表序列3所示氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基取代和/或缺失和/或添加、且具有調(diào)控稻瘟菌分生孢子產(chǎn)生功能的蛋白質(zhì)失活。
9.敲除載體、重組稻瘟菌或應(yīng)用，所述敲除載體為敲除稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)中序列表序列3所示蛋白質(zhì)編碼基因的重組載體；所述重組稻瘟菌為將稻瘟菌 (Magnaporthe oryzae)中序列表序列3所示蛋白質(zhì)編碼基因敲除得到的重組菌；所述應(yīng)用為所述敲除載體在敲除稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)中序列表序列3所示蛋白質(zhì)編碼基因中的應(yīng)用。
10.DNA分子或應(yīng)用，所述DNA分子的核苷酸序列是序列表序列1中的第1位至第2000 位的核苷酸序列；所述應(yīng)用為所述DNA分子在作為啟動子中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種病原真菌致病性基因PCG4及其用途。所述基因PCG4編碼的蛋白質(zhì)是序列表序列3所示蛋白質(zhì)，可用于調(diào)控稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)分生孢子的產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)證明，蛋白Pcg4的編碼基因PCG4被潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(hph)置換后得到的敲除體PY9不能產(chǎn)生分生孢子，且在劃傷的水稻葉片上不能形成病斑，而PCG4基因的互補(bǔ)體DE7與野生型稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)菌株P(guān)131的分生孢子產(chǎn)生量相同，且在劃傷的水稻葉片上均能形成病斑。更進(jìn)一步地說，基因PCG4的缺失即蛋白Pcg4不表達(dá)，可導(dǎo)致稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)對水稻的侵染能力喪失。本發(fā)明所提供的方法和應(yīng)用在植物稻瘟菌病害的控制方面具有重要意義。
文檔編號G01N33/53GK102517246SQ201110439479
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月23日
發(fā)明者左玉山, 張燕, 彭友良, 朱紅艷, 楊俊 , 趙文生, 陳小林 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)