專利名稱：基于hplc指紋圖譜的啟脾口服液藥材水提液的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及啟脾口服液藥材水提液的質(zhì)量檢測方法，具體地說，涉及基于HPLC指紋圖譜的啟脾口服液藥材水提液的質(zhì)量檢測方法。
背景技術(shù)：
啟脾口服液是由吉林益民堂制藥有限公司生產(chǎn)的新藥(中藥)四類，主要由人參、 炒白術(shù)、茯苓、甘草、陳皮、山藥、炒蓮子、炒山楂、炒六神曲、炒麥甘芽、澤瀉原料藥組成，根據(jù)臨床前藥理及毒理研究，具有健脾和胃的功效，主要用于治療脾氣虛所致的脾胃虛弱，消化不良，腹脹便糖。根據(jù)中醫(yī)理論經(jīng)經(jīng)驗對處方進(jìn)行分析，脾胃虛弱之脾虛證，多因飲食不節(jié)，勞倦， 思慮過度等原因造成脾胃損傷，或先天稟賦脾胃虛弱，久病中氣不足導(dǎo)致運化失司，胃納呆滯，胃脘痞塞。運化功能失常，清陽不升，導(dǎo)致水谷停滯，水谷精微混雜而下而成便溏。中氣不足，樞機(jī)不利，失常引起腹脹。治療應(yīng)以健脾和胃、理氣利濕為主。臨床虛實互見為多，故消補兼施最為常用。本方以人參、山藥、蓮子健脾強(qiáng)胃，補益中氣為主藥，配以白術(shù)、茯苓利濕健脾；更以三仙消食導(dǎo)滯，和胃健脾為輔。陳皮理氣健脾，脾胃氣旺則食增，而生化有源；澤瀉利濕健脾；再配伍人參大補元氣，身強(qiáng)而脾自??；此三味，共為其佐。甘草益氣和中調(diào)節(jié)器合諸藥為使。諸藥合用，消補兼施，以補為主，符合所謂“虛則補之”、“損則益之”之原則。過補則留邪，過消則傷正，唯此甘而不膩。補而不滯，消不傷正，寓消于補中，實為健脾和胃之良方。目前，啟脾口服液生產(chǎn)工藝處方為人參20g、白術(shù)(炒)20g、茯苓20g、甘草10g、陳皮10g、山藥20g、蓮子(炒)20g、山楂(炒)10g、六神曲(炒)16g、麥芽(炒)10g、澤瀉IOgo 以上十一味，人參用6、5、5倍量70%乙醇回流提取三次，依次為3、2、1小時，提取液回收乙醇，藥液另器收集；陳皮、白術(shù)提取揮發(fā)油備用。藥渣及蒸餾后的水溶液與其余茯苓等八味藥合并，加6、5倍量水煎煮二次，第一次2小時，第二次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1. 12 1. 20 (850C )，加乙醇使含醇量為70%，攪勻，靜置M小時，取上清液回收乙醇，濾過。蔗糖1 50g制成單糖漿，山梨酸1.5g用乙醇溶解，將上述揮發(fā)油加入其中，混勻， 并與處理好的蜂蜜200g，一并加入上述濾液中，混勻，調(diào)節(jié)pH值4. 0 5. 5，制成1000ml，攪勻，濾過，分裝，滅菌，即得。其中藥渣及蒸餾后的水溶液與其余茯苓等八味藥合并，加6、5倍量水煎煮二次， 第一次2小時，第二次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1. 12 1. 20 (850C )，加乙醇使含醇量為70%，攪勻，靜置24小時，取上清液回收乙醇，濾過。采用乙醇進(jìn)行沉淀處理，既浪費人力、物力，也浪費能源，因此，尋找新的啟脾口服液藥材水提液的沉淀方法及其質(zhì)量檢查方法成為亟待解決的問題
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供基于HPLC指紋圖譜的啟脾口服液藥材水提液的質(zhì)量檢測方法。為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種基于HPLC指紋圖譜的啟脾口服液藥材水提液的質(zhì)量檢測方法，包括以下步驟(1)對照品溶液的制備稱取橙皮苷加入甲醇制成0. 4-0. 5mg/ml溶液，優(yōu)選 0. 42mg/ml ； (2)高效液相色譜測定將對照品溶液和啟脾口服液藥材水提液供試品溶液各 10μ 1注入到高效液相色譜儀中進(jìn)行測定，得到指紋圖譜；優(yōu)選啟脾口服液藥材水提液供試品溶液為在-20°C放置4 后，于室溫下溶化、過濾所得；(3)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立采用中藥色譜指紋圖譜相似性評價系統(tǒng)軟件對各供試品的指紋圖譜進(jìn)行分析，生成啟脾口服液藥材水提液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(4)啟脾口服液藥材水提液的質(zhì)量檢測取啟脾口服液藥材水提液樣品，按步驟(1)、步驟O)同法操作，得到啟脾口服液藥材水提液樣品指紋圖譜，采用中藥色譜指紋圖譜相似性評價系統(tǒng)軟件對所述樣品指紋圖譜和啟脾口服液藥材水提液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行分析，相似度大于0. 95為合格產(chǎn)品。前述方法中，色譜條件為色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈-0.25%磷酸溶液按9-11 41-39，優(yōu)選1 4的體積比的混合溶液；紫外檢測波長為 276nm ；流速為 1. Oml/min。前述方法中，步驟(3)中所述啟脾口服液藥材水提液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜由6個共有峰構(gòu)成，第6號峰為橙皮苷峰，以橙皮苷峰為參照峰S峰，計算各特征峰與S峰的相對保留時間，所述相對保留時間應(yīng)在第一規(guī)定值的士5%之內(nèi)，所述第一規(guī)定值分別為0. 38-峰1、
0.52-峰2、0. 63-峰3、0. 70-峰4、0. 84-峰5、1. 00-峰S ；所述共有峰的峰面積在第二規(guī)定值士20%之內(nèi)，采用面積歸一化法計算，第二規(guī)定值分別為3. 84% -峰1、5. 47% -峰2、 9. 91% -峰 3、34. 23% -峰 4、2. 55% -峰 S、44. 03% -峰 6。所述6個共有峰的保留時間分別為6. 45、10. 48、11. 58、13. 91、14. 64、16. 58，峰面積分別為 1103782、1584063、2868435、9911527、738537、12748335。上述啟脾口服液藥材水提液由以下重量份的原料藥經(jīng)水提獲得，陳皮10、白術(shù) (炒)20、茯苓20、甘草10、山藥20、蓮子(炒)20、山楂(炒)10、六神曲(炒)16、麥芽 (炒)10和澤瀉10 ；其制備方法為將陳皮、白術(shù)蒸餾提取后的藥渣及水溶液與茯苓、甘草、 山藥、蓮子、山楂、六神曲、麥芽和澤瀉合并，加水煎煮二次后，合并濾液，濃縮至相對密度為
1.12-1.20(85°C )，在-20°C放置至溶液完全凍結(jié)。前述方法中，陳皮、白術(shù)蒸餾提取的過程為陳皮、白術(shù)分別加4倍重量的水進(jìn)行蒸餾提取，采用油水分離器分離出揮發(fā)油(油相)，得到藥渣及水溶液(水相)。前述方法中，第一次煎煮，水的加入量為藥材總重的6倍，煎煮池，第二次煎煮，水的加入量為藥材總重的5倍，煎煮lh。借由上述技術(shù)方案，本發(fā)明至少具有下列優(yōu)點及有益效果(一)本發(fā)明方法以橙皮苷為對照品，建立的啟脾口服液藥材水提液HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜能有效、準(zhǔn)確地表征啟脾口服液藥材水提液冷凍液的質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量，為藥品的質(zhì)量檢測提供可靠的依據(jù)。( 二)啟脾口服液藥材水提液的指紋圖譜注重各個構(gòu)成指紋特征峰的前后順序和相互關(guān)系，注重整體面貌特征。
(三)本發(fā)明的質(zhì)量檢測方法能有效地監(jiān)控啟脾口服液藥材水提液冷凍液的質(zhì)量，保證其質(zhì)量的穩(wěn)定、均一、可控。具有方法簡便、穩(wěn)定性好、精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點， 可快速、準(zhǔn)確地鑒別產(chǎn)品的真?zhèn)蝺?yōu)劣。


圖1為啟脾口服液橙皮苷對照品溶液的HPLC指紋圖譜。圖2為啟脾口服液藥材水提液冷凍液的8批次原始HPLC指紋圖譜。圖3為啟脾口服液藥材水提液冷凍液的標(biāo)準(zhǔn)HPLC指紋圖譜。圖4為啟脾口服液(水提)分別采用冷藏、_5°C冷凍5小時、-20°C冷凍的溶液與醇沉溶液采用HPLC法進(jìn)行比較分析的結(jié)果。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。實施例1冷凍啟脾口服液藥材水提液的制備稱取陳皮10g、白術(shù)(炒)20g、茯苓20g、甘草10g、山藥20g、蓮子(炒)20g、山楂 (炒)10g、六神曲(炒)16g、麥芽(炒)10g和澤瀉10g，將陳皮、白術(shù)蒸餾提取后的藥渣及水溶液與茯苓、甘草、山藥、蓮子、山楂、六神曲、麥芽和澤瀉合并，加6、5倍量水煎煮二次， 第一次2小時，第二次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1. 12 1.20(85°C )， 在_20°C放置48小時(至溶液完全凍結(jié)后放置M小時以上)。陳皮、白術(shù)蒸餾提取的過程為陳皮、白術(shù)分別加4倍重量的水進(jìn)行蒸餾提取，采用油水分離器分離出揮發(fā)油(油相)，得到藥渣及水溶液(水相)。實施例2啟脾口服液藥材水提液冷凍液HPLC指紋圖譜的構(gòu)建1.儀器、試藥1. 1儀器島津LC-2010AHT高效液相色譜儀(四元泵、在線脫氣機(jī)、柱溫箱 (柱溫)、自動進(jìn)樣器、UVD檢測器)；BS210S電子天平；色譜柱Agilent ZORBAX SB-C18 (5 μ m，4. 6 X 250mm)。1.2試藥橙皮苷對照品(購自中國藥品生物制品鑒定所)。液相色譜分析用試劑為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。2.高效液相色譜2. 1對照品溶液的制備精密稱取橙皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每 Iml分別含0. 42mg的溶液。2. 2供試品溶液的制備水提取液，解凍，過濾后的溶液。2. 3色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈-0. 25% 磷酸溶液(體積比1 4)的混合溶液；紫外檢測波長為276nm ；流速為1. Oml/min。理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于2000。2. 4測定精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜，如圖1所示。實施例3啟脾口服液藥材水提液冷凍液的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的構(gòu)建
取啟脾口服液藥材水提液冷凍液8批次，按實施例1的條件進(jìn)行檢測，得到8批次樣品的HPLC圖譜，如圖2所示。通過8批HPLC圖譜的比較，采用中國藥典委員會推薦的 《中藥色譜指紋圖譜相似性評價系統(tǒng)》軟件對HPLC圖譜進(jìn)行相似度評價，確定共有特征峰， 得到啟脾口服液的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。在標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，啟脾口服液藥材水提液冷凍液的指紋圖譜中含有6個共有特征峰，其中參照峰為橙皮苷(6號峰)。啟脾口服液藥材水提液HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中各共有峰的保留時間和峰面積如表 1所示表1啟脾口服液藥材水提液HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中共有峰的保留時間和峰面
權(quán)利要求
1.基于HPLC指紋圖譜的啟脾口服液藥材水提液的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，包括以下步驟(1)對照品溶液的制備稱取橙皮苷加入甲醇制成0.4-0. 5mg/ml溶液；(2)高效液相色譜測定將對照品溶液和啟脾口服液藥材水提液供試品溶液各10μ 1 注入到高效液相色譜儀中進(jìn)行測定，得到指紋圖譜；(3)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立采用中藥色譜指紋圖譜相似性評價系統(tǒng)軟件對各供試品的指紋圖譜進(jìn)行分析，生成啟脾口服液藥材水提液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(4)啟脾口服液藥材水提液的質(zhì)量檢測取啟脾口服液藥材水提液樣品，按步驟(1)、 步驟O)同法操作，得到啟脾口服液藥材水提液樣品指紋圖譜，采用中藥色譜指紋圖譜相似性評價系統(tǒng)軟件對所述樣品指紋圖譜和啟脾口服液藥材水提液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行分析， 相似度大于0. 95為合格產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，色譜條件為色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈-0.25%磷酸溶液按9-11 41-39的體積比的混合溶液；紫外檢測波長為276nm ；流速為1. Oml/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，對照品溶液濃度為0.42mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，所述流動相為乙腈-0.25%磷酸溶液按14的體積比的混合溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述啟脾口服液藥材水提液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜由6個共有峰構(gòu)成，第6號峰為橙皮苷峰，所述6個共有峰的保留時間分別為 6. 45,10. 48,11. 58,13. 91,14. 64,16. 58，峰面積分別為 1103782、1584063、 2868435、9911527、738537、12748335。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，啟脾口服液藥材水提液由以下重量份的原料藥經(jīng)水提獲得，陳皮10、炒白術(shù)20、茯苓20、甘草10、山藥20、炒蓮子20、炒山楂10、炒六神曲16、炒麥芽10和澤瀉10。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，啟脾口服液藥材水提液的制備方法為將陳皮、白術(shù)蒸餾提取后的藥渣及水溶液與茯苓、甘草、山藥、蓮子、山楂、六神曲、麥芽和澤瀉合并，加水煎煮二次后，合并濾液，濃縮至相對密度在85°C下為1. 12-1.20，在-201放置至溶液完全凍結(jié)，然后解凍，過濾即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，陳皮、白術(shù)蒸餾提取的過程為陳皮、白術(shù)分別加4倍重量的水進(jìn)行蒸餾提取。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，第一次煎煮，水的加入量為藥材總重的6 倍，煎煮池，第二次煎煮，水的加入量為藥材總重的5倍，煎煮lh。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種基于HPLC指紋圖譜的啟脾口服液藥材水提液的質(zhì)量檢測方法，包括對照品和供試品溶液的制備、高效液相色譜測定、標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立以及樣品檢測的步驟。該法能有效表征啟脾口服液藥材水提液的冷凍工藝和質(zhì)量，節(jié)省能源、減少工時，有利于監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量；具有方法簡便、穩(wěn)定性好、精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點。
文檔編號G01N30/06GK102435692SQ20111045498
公開日2012年5月2日 申請日期2011年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月30日
發(fā)明者丁愛英, 崔業(yè)波, 徐有章, 徐陽, 李艷茹 申請人:吉林益民堂制藥有限公司