專利名稱：一種氯吡脲快速檢測(cè)卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種氯吡脲快速檢測(cè)卡，是一種檢測(cè)氯吡脲的檢測(cè)器具，屬于果蔬膨大劑檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
氯吡脲(forch lorfenuron)，商品名為吡效隆，化學(xué)名稱為1_(2-氯_4_吡啶基)-3-苯基脲，是一種廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的新型高效植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。因氯吡脲可能會(huì)對(duì)人體帶來(lái)潛在的健康危害，歐盟、日本等對(duì)其殘留量作出了嚴(yán)格限定，其中日本“肯定列表”限量為0. 02mg/kg。到目前為止，關(guān)于氯吡脲在果蔬中的殘留測(cè)定方法國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道， 經(jīng)常使用的檢測(cè)方法是高效液相色譜法。但這些方法對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備要求高，操作繁瑣，對(duì)操作人員的專業(yè)知識(shí)要求高，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。因此建立一種準(zhǔn)確可靠又快速方便的檢測(cè)水果中膨大劑含量成分分析方法是非常必要的。本實(shí)用新型擬發(fā)明一種基于小分子物質(zhì)氯吡脲偶聯(lián)蛋白質(zhì)后而具有抗原性的免疫學(xué)檢測(cè)方法，采取免疫學(xué)競(jìng)爭(zhēng)法的原理，結(jié)合膠體金標(biāo)記技術(shù)和免疫層析法設(shè)計(jì)的一種快速檢測(cè)試劑，可快速特異地檢測(cè)水果樣品中的氯吡脲。根據(jù)檢測(cè)卡樣品檢測(cè)帶和質(zhì)控帶的有無(wú)顯色來(lái)判定水果樣品中的氯吡脲含量。反應(yīng)是利用氯吡脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物抗原性而建立的一種檢測(cè)方法，具有特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，可避免其它檢測(cè)方法的假陽(yáng)性導(dǎo)致的誤檢問(wèn)題。 同時(shí)檢測(cè)卡操作簡(jiǎn)單快速，無(wú)需特殊的儀器設(shè)備，既可以在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，也可在超市、家庭、 車(chē)間等實(shí)地進(jìn)行測(cè)定。由于樣本量需要少、簡(jiǎn)便快速，適用于大量樣本的篩查，結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，準(zhǔn)確率大。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的在于提供一種能檢測(cè)氯吡脲的檢測(cè)器具，直接應(yīng)用免疫學(xué)的方法檢測(cè)水果樣品中氯吡脲的含量，克服現(xiàn)有色譜法檢測(cè)的操作繁瑣等缺點(diǎn)，建立基于免疫學(xué)特異性的檢測(cè)方法。本實(shí)用新型的技術(shù)方案一種氯吡脲快速檢測(cè)卡，其為在長(zhǎng)條扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼1中設(shè)置測(cè)試條2，檢測(cè)卡外殼表面有檢測(cè)窗孔3和加樣孔4 ；測(cè)試條2是由支承背板5上通過(guò)不干膠在其上依次粘貼樣品墊8、膠體金膜或乳膠顆粒膜7、硝酸纖維素膜6、和吸水膜9所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，支承背板一端疊置粘貼吸水膜9， 另一端疊置粘貼樣品墊8，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜7 ；膠體金膜為含抗氯吡脲抗體膠體金標(biāo)記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗氯吡脲抗體的乳膠顆粒標(biāo)記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測(cè)帶和一條質(zhì)控帶，依次是含氯吡脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)帶10，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶11，測(cè)試條置入檢測(cè)卡外殼內(nèi)，樣品墊正對(duì)加樣孔，硝酸纖維素膜正對(duì)檢測(cè)窗孔。應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測(cè)樣品中氯吡脲的含量，檢測(cè)樣品為西瓜、葡萄、獼猴
3桃，處理方法如下隨機(jī)采集待測(cè)樣本，粉碎均勻；稱取5g粉碎后的樣品，加入IOmL樣品抽提液充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆颍鹗幏磻?yīng)30min ；4000r/min離心lOmin，取離心后的上清液按1 3的比例稀釋，即取上清液100 μ L加入300 μ L樣品稀釋液，混合后測(cè)定。必要時(shí)可用濾紙過(guò)濾上清液，取濾過(guò)的上清液按比例稀釋后測(cè)定。所述樣品抽提液為體積分?jǐn)?shù)70%甲醇溶液，即甲醇70mL加入30mL蒸餾水。所述樣品稀釋液為pH 7. 6、含IOmmol PBST緩沖液的溶液。當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測(cè)結(jié)果為陰性，表示被檢測(cè)樣品中氯吡脲含量未超標(biāo)。當(dāng)檢測(cè)帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，表示被檢測(cè)樣品中氯吡脲含量超標(biāo)。當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明測(cè)試條已失效。本實(shí)用新型的有益效果本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是能檢測(cè)水果樣品中含有的氯吡脲， 易于制備且節(jié)省檢測(cè)費(fèi)用，使用方便，檢測(cè)快速，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確。

圖1氯吡脲快速檢測(cè)卡外殼及測(cè)試條在外殼內(nèi)的安置圖。1、檢測(cè)卡外殼，2、測(cè)試條，3、檢測(cè)窗孔，4、加樣孔。圖2檢測(cè)試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、檢測(cè)帶， 11、質(zhì)控帶。圖3氯吡脲快速檢測(cè)卡的檢測(cè)試條結(jié)構(gòu)示意圖。5、支承背板，6、硝酸纖維素膜，7、 膠體金膜或乳膠顆粒膜，8、樣品墊，9、吸水膜。
具體實(shí)施方式
本實(shí)用新型結(jié)合具體實(shí)施例參見(jiàn)附圖進(jìn)一步說(shuō)明如下實(shí)施例1一種氯吡脲快速檢測(cè)卡，它是在檢測(cè)卡外殼1中設(shè)置測(cè)試條2，檢測(cè)卡外殼1的結(jié)構(gòu)及測(cè)試條2的設(shè)置參見(jiàn)附圖1，檢測(cè)卡外殼1為長(zhǎng)條扁平薄殼狀外殼，長(zhǎng)70mm，寬20mm，厚 5mm，薄殼壁厚1mm，由工程塑料制成。檢測(cè)卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，在檢測(cè)卡外殼1殼蓋上有檢測(cè)窗孔3和加樣孔4。測(cè)試條2放置在檢測(cè)卡外殼1的殼座內(nèi)。測(cè)試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，片長(zhǎng)約60mm，片寬約4mm，厚度約2. 5mm。測(cè)試條2是多層結(jié)構(gòu)底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0. 5mm,長(zhǎng)60mm，寬4mm ；支承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸纖維素膜厚0. 5mm,長(zhǎng)20_25mm，寬4mm。硝酸纖維素膜6上有二條間隔開(kāi)的橫向顯示印跡帶，參見(jiàn)附圖2，二條顯示印跡帶中，一條是檢測(cè)帶10，含氯吡脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物；另一條是質(zhì)控帶11，含抗兔抗體或抗鼠抗體。支承背板 5 一端部上疊置粘貼吸水膜9，支承背板5另一端部上疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內(nèi)端與樣品墊8內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜6 —端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜7，膠體金膜為含抗氯吡脲抗體膠體金標(biāo)記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗氯吡脲抗體的乳膠顆粒標(biāo)記的玻璃纖維膜，膠體金膜或乳膠顆粒膜7厚0. 5-0. 8mm,長(zhǎng)5mm，寬4mm。樣品墊8厚0. 5-0. 8mm,長(zhǎng)20mm，寬4mm。 吸水膜9厚0. 5-0. 8mm,長(zhǎng)16_20mm，寬4mm。膠體金膜或乳膠顆粒膜7、樣品墊8及吸水膜 9與硝酸纖維素膜搭接長(zhǎng)度為l_2mm。吸水膜9材料是吸水紙，樣品墊8材料是吸水玻璃纖維膜。本實(shí)用新型氯吡脲檢測(cè)卡用于檢測(cè)水果樣品中的氯吡脲的檢測(cè)。實(shí)施例2樣品的處理方法如下隨機(jī)采集待測(cè)樣本，粉碎均勻；稱取5g粉碎后的樣品，加入IOmL樣品抽提液充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆?，震蕩反?yīng)30min ；4000r/min離心lOmin，取離心后的上清液按1 3的比例稀釋，即取上清液100 μ L加入300 μ L樣品稀釋液，混合后測(cè)定。必要時(shí)可用濾紙過(guò)濾上清液，取濾過(guò)的樣品按比例稀釋后測(cè)定。所述樣品抽提液為體積分?jǐn)?shù)70%甲醇溶液，即甲醇70mL加入30mL蒸餾水。所述樣品稀釋液為pH 7. 6、含IOmmol PBST緩沖液的溶液。使用氯吡脲快速檢測(cè)卡進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，先將待檢測(cè)的樣品液從加樣孔4中滴注入氯吡脲快速檢測(cè)卡測(cè)試條2的樣品墊8上，由于虹吸作用原理，帶動(dòng)待檢測(cè)的樣品液及膠體金膜或乳膠顆粒膜7所含的抗氯吡脲單克隆抗體膠體金或乳膠顆粒標(biāo)記物一起向硝酸纖維素膜6擴(kuò)散，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。檢測(cè)卡的主要反應(yīng)是免疫學(xué)的抗原和抗體反應(yīng)，在硝酸纖維素膜上遷移的膠體金或乳膠顆粒標(biāo)記的抗體，在測(cè)試帶上分別與含氯吡脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，以及質(zhì)控帶上的抗兔抗體或抗鼠抗體反應(yīng)，形成棕紅色條帶。若樣品中有待檢氯吡脲存在，當(dāng)樣品加入后即與抗體發(fā)生反應(yīng)，而不會(huì)與檢測(cè)帶所含的氯吡脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物反應(yīng)，從而不顯色。主要反應(yīng)的結(jié)果有以下3種情況1、當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示檢測(cè)結(jié)果為陰性，說(shuō)明被檢測(cè)樣品中氯吡脲含量未超標(biāo)。2、當(dāng)檢測(cè)帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明被檢測(cè)樣品中氯吡脲含量超標(biāo)。3、當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明檢測(cè)試條已失效。
權(quán)利要求1. 一種氯吡脲快速檢測(cè)卡，其特征在于在長(zhǎng)條扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼(1)中設(shè)置測(cè)試條(2)，檢測(cè)卡外殼表面有檢測(cè)窗孔(3)和加樣孔(4);測(cè)試條(2)是由支承背板(5)上通過(guò)不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜或乳膠顆粒膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、和吸水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段含抗氯吡脲抗體的膠體金膜或乳膠顆粒膜(7)；硝酸纖維素膜上有一條檢測(cè)帶和一條質(zhì)控帶，依次是含氯吡脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)帶(10)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶(11)，測(cè)試條(2)置入檢測(cè)卡外殼(1)內(nèi)，樣品墊(8)正對(duì)加樣孔(4)，硝酸纖維素膜(6)正對(duì)檢測(cè)窗孔(3)。
專利摘要一種氯吡脲快速檢測(cè)卡，屬于果蔬膨大劑檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本實(shí)用新型氯吡脲快速檢測(cè)卡外殼內(nèi)有測(cè)試條，由支承背板上依次粘貼樣品墊、膠體金膜或乳膠顆粒膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；膠體金膜為含抗氯吡脲抗體膠體金標(biāo)記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗氯吡脲抗體的乳膠顆粒標(biāo)記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有兩條檢測(cè)帶，一條為含氯吡脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)帶，另一條為含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶。本實(shí)用新型優(yōu)點(diǎn)是應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測(cè)水果如西瓜、葡萄等的氯吡脲含量。本實(shí)用新型氯吡脲快速檢測(cè)卡易于制備，使用方便快速，結(jié)果準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)G01N33/544GK202066859SQ20112016508
公開(kāi)日2011年12月7日 申請(qǐng)日期2011年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月23日
發(fā)明者吳文曄, 周堅(jiān), 熊曉芳 申請(qǐng)人:無(wú)錫安迪生物工程有限公司