專(zhuān)利名稱(chēng)：用于快速檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的試劑盒及藥膜玻璃管的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及殺蟲(chóng)劑毒力檢測(cè)技術(shù)，特別是一種用于快速檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的試劑盒及藥膜玻璃管。
背景技術(shù)：
煙粉虱Bemisia tabaci屬于半翅目、粉虱科，小粉虱屬。1889年發(fā)現(xiàn)于的希臘煙草上，命名為煙粉虱 Aleyrodes tabaci (Gennadius) (Gennadius, 1889)。1894 年，又發(fā)現(xiàn)于美國(guó)佛羅里達(dá)州的甘薯上，鑒定為甘薯粉虱(Bemisia inconspicua)。目前，煙粉虱已經(jīng)廣泛分布于除南極洲以外的100多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，包括熱帶，亞熱帶及相鄰溫帶地區(qū)。在中國(guó)，目前調(diào)查發(fā)現(xiàn)分布于如廣東、廣西、海南、福建、云南、上海、浙江、江西、湖北、四川、陜西、北京、臺(tái)灣、新疆、河北、山東等20多個(gè)省份和地區(qū)。煙粉虱是一種在農(nóng)業(yè)、園藝及觀賞作物上造成嚴(yán)重危害的世界性經(jīng)濟(jì)害蟲(chóng)(陳文雄和張煥英，1997 ；羅志義等，1989 ；Castle et al.，2002 ；Bacci et al.，2007Ahmad，2007 ； Dinsdale et al.，2010)，蔬菜作物上主要為害黃瓜、番茄、茄子、豇豆、菜用大豆、芥藍(lán)和花椰菜等。該蟲(chóng)具有寄主范圍廣、繁殖力強(qiáng)、世代重疊現(xiàn)象嚴(yán)重的特點(diǎn)，它以成蟲(chóng)和若蟲(chóng)在葉背刺吸為害寄主植物，可造成減產(chǎn)50%以上；煙粉虱產(chǎn)生的蜜露也是煤污病產(chǎn)生的重要原因；最重要的是，煙粉虱還是多種植物病毒病的的傳毒媒介，目前已確認(rèn)有100多種植物病毒由煙粉虱傳播。尤其是近些年在中國(guó)由南至北在生產(chǎn)上凸顯出來(lái)的、并在局部地區(qū)造成番茄棚絕收的番茄黃化曲葉病毒病(TYLCD)即由煙粉虱傳播所致。目前生產(chǎn)上防治煙粉虱主要依靠化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行，然而煙粉虱成蟲(chóng)具有一定的飛翔能力，逃避藥劑噴施的能力較強(qiáng)，屬于生產(chǎn)上最難以防治的害蟲(chóng)之一。隨著殺蟲(chóng)劑的使用， 煙粉虱對(duì)越來(lái)越多的不同種類(lèi)的殺蟲(chóng)劑逐漸產(chǎn)生了抗藥性，甚至由于某種單一殺蟲(chóng)劑的選擇壓力，使得煙粉虱的生物型也在發(fā)生演替，局部地區(qū)已由B型轉(zhuǎn)變?yōu)镼型，由于Q型煙粉虱對(duì)殺蟲(chóng)劑的耐藥性更強(qiáng)、生物學(xué)特性更強(qiáng)等，因此生產(chǎn)上防治該蟲(chóng)的挑戰(zhàn)性更大。聯(lián)苯菊酯是一種高效合成除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)、殺螨劑，具有觸殺、胃毒作用，無(wú)內(nèi)吸、 熏蒸作用，殺蟲(chóng)譜廣，對(duì)螨也有較好防效，毒殺作用迅速。在土壤中不移動(dòng)，對(duì)環(huán)境較為安全，殘效期長(zhǎng)，適用于包括茄子、白菜、花椰菜、萵苣等在內(nèi)的多種作物上各種鱗翅目幼蟲(chóng)、 粉虱類(lèi)、蚜蟲(chóng)類(lèi)、植食性葉螨的防治。該化學(xué)藥劑從20世紀(jì)80年代開(kāi)始進(jìn)入市場(chǎng)，至今仍然在生產(chǎn)上發(fā)揮著其防治作用。根據(jù)對(duì)不同地區(qū)煙粉虱的抗藥性檢測(cè)結(jié)果，目前很多地區(qū)煙粉虱對(duì)聯(lián)苯菊酯的抗藥性較高，敏感度不高，因此防治效果與之前相比隨之顯著下降。傳統(tǒng)的害蟲(chóng)對(duì)殺蟲(chóng)劑敏感度的檢測(cè)方法是通過(guò)室內(nèi)毒力測(cè)定實(shí)現(xiàn)的，而不同害蟲(chóng)的室內(nèi)毒力測(cè)定隨著害蟲(chóng)種類(lèi)的不同而存在差異。煙粉虱對(duì)聯(lián)苯菊酯等菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑的敏感度檢測(cè)主要是采用瓊脂浸葉法(Feng YT等，2010)進(jìn)行。然而，這種測(cè)定方法需要耗費(fèi) 2-3天的時(shí)間，尚能檢測(cè)到其藥劑的毒力程度。另外，這種方法需要一定的試驗(yàn)耗材(例如指形管、無(wú)蟲(chóng)苗、打孔器等)才能進(jìn)行，其中無(wú)蟲(chóng)苗的飼養(yǎng)更需要花費(fèi)大量的人力和財(cái)力； 另外，濾紙藥膜法的操作相對(duì)簡(jiǎn)便，耗時(shí)較短，但是由于煙粉虱成蟲(chóng)具有飛翔能力，且個(gè)體微小，極易夾在濾紙藥膜和承載體之間造成不同程度的損傷，尤其是對(duì)翅膀造成損傷時(shí)直接影響到了試驗(yàn)結(jié)果的檢查和記錄，造成很大的試驗(yàn)誤差。因此，建立并優(yōu)化一種新的殺蟲(chóng)劑快速檢測(cè)方法對(duì)于短時(shí)間內(nèi)評(píng)價(jià)殺蟲(chóng)劑對(duì)害蟲(chóng)的毒力、從而有針對(duì)性的選藥施藥具有重要的指導(dǎo)意義。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型根據(jù)上述領(lǐng)域的需要，提供一種檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的試劑盒及藥膜玻璃管，具有誤差小，效率高，穩(wěn)定性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)用于測(cè)定殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱成蟲(chóng)的毒力活性。檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的試劑盒，其特征在于，包括內(nèi)壁上附著有以待測(cè)殺蟲(chóng)劑為主要成分的藥膜的一端開(kāi)口的玻璃管，所述藥膜附著在玻璃管的管底至玻璃管高度的三分之一至二分之一處的內(nèi)壁上。所述藥膜附著在玻璃管管底至玻璃管高度的三分之一處的內(nèi)壁上。所述試劑盒包括5 7組內(nèi)壁上附著有殺蟲(chóng)劑藥膜的一端開(kāi)口的玻璃管，各組玻璃管之間的藥膜中殺蟲(chóng)劑的有效含量呈梯度。所述玻璃管為指形管。所述殺蟲(chóng)劑指聯(lián)苯菊酯。檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的藥膜玻璃管，其特征在于所述藥膜附著在玻璃管的管底至玻璃管高度的三分之一至二分之一處的內(nèi)壁上。本實(shí)用新型在傳統(tǒng)玻管藥膜法和濾紙藥膜法的基礎(chǔ)上，結(jié)合煙粉虱成蟲(chóng)善于飛翔的生物學(xué)特點(diǎn)，提供一種專(zhuān)用于煙粉虱成蟲(chóng)的殺蟲(chóng)劑毒力檢測(cè)試劑盒，包括至少一只其內(nèi)壁上附著有以待測(cè)殺蟲(chóng)劑為主要成分的藥膜的一端開(kāi)口的玻璃管。本實(shí)用新型主要的改進(jìn)之處在于，藥膜并非完全覆蓋玻璃管的內(nèi)壁，而只是覆蓋玻璃管底部至以上的三分之一至一半的高度，可一定程度上減少所用藥劑，從而減少農(nóng)藥的污染和殘留；使用中，將煙粉虱成蟲(chóng)接入管內(nèi)時(shí)，需要用棉塞堵住一段開(kāi)口處，棉塞塞至藥膜上沿，使得煙粉虱成蟲(chóng)既可以自由活動(dòng)，且其活動(dòng)范圍處于藥物環(huán)境中；這樣的設(shè)計(jì)，可以適度提高殺蟲(chóng)藥劑的濃度，在短短3個(gè)小時(shí)或者更長(zhǎng)時(shí)間(根據(jù)殺蟲(chóng)劑特性不同)之內(nèi)快速檢測(cè)出所測(cè)試殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱成蟲(chóng)的毒力高低；采用這種方法在測(cè)定敏感煙粉虱種群的基礎(chǔ)上，可以快速測(cè)定出不同地區(qū)田間煙粉虱種群對(duì)殺蟲(chóng)劑的抗藥性程度及其高低，為田間采用化學(xué)藥劑防治該害蟲(chóng)時(shí)提供及時(shí)、快速的選藥用藥。本實(shí)用新型的試劑盒，用于檢測(cè)一種殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱的毒力活性，需要較大范圍的殺蟲(chóng)劑劑量范圍，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在試劑盒中設(shè)置若干組藥膜玻璃管，各藥膜玻璃管之間的殺蟲(chóng)劑劑量呈梯度變化，以便于準(zhǔn)確找出一種殺蟲(chóng)劑對(duì)于煙粉虱不同種群的致死劑量。從節(jié)約成本和檢測(cè)效率上考慮，本實(shí)用新型優(yōu)選設(shè)置5 7組藥膜玻璃管。每組可以設(shè)置一個(gè)或多個(gè)。本實(shí)用新型中所用的玻璃管優(yōu)選常用的指形管。本實(shí)用新型的優(yōu)選實(shí)施里中，殺蟲(chóng)劑指聯(lián)苯菊酯，之前發(fā)現(xiàn)部分地區(qū)煙粉虱對(duì)聯(lián)苯菊酯的抗藥性較高，敏感度不高，傳統(tǒng)的用藥劑量的防治效果與之前相比隨之顯著下降。 檢測(cè)聯(lián)苯菊酯對(duì)不同地區(qū)的煙粉虱的毒力，對(duì)于有效使用該藥劑對(duì)煙粉虱進(jìn)行有效的防治具有非常實(shí)用的意義。綜上所述，本實(shí)用新型的試劑盒可作為快速定性地檢測(cè)害蟲(chóng)對(duì)藥劑的敏感性，建立的對(duì)聯(lián)苯菊酯敏感性的診斷劑量LC6tlGO. 6644mg/L)可以快速評(píng)價(jià)不同地區(qū)煙粉虱對(duì)殺蟲(chóng)劑(聯(lián)苯菊酯)的抗藥性的實(shí)用手段。該試劑盒可快速建立起害蟲(chóng)對(duì)更多藥劑的診斷劑量，以便在害蟲(chóng)大發(fā)生時(shí)生產(chǎn)上進(jìn)行化學(xué)藥劑防治時(shí)指導(dǎo)快速地選藥施藥。

圖1.本實(shí)用新型試劑盒中藥膜玻璃管示意圖，其中1-玻璃管，2-藥膜，3-藥膜上沿。圖2.不同溫度和保存時(shí)間下玻璃管藥膜的穩(wěn)定性檢驗(yàn)。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1.試劑盒的制備及使用方法1.供試?yán)ハx(chóng)及飼養(yǎng)煙粉虱于2004年10采自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所北圃場(chǎng)甘藍(lán)菜地，經(jīng) mtCOI (mitochondrial cytochrome oxidase I gene)分子標(biāo)記鑒定為 B 型煙粉虱，命名為 SS種群。在無(wú)蟲(chóng)‘京豐一號(hào)，甘藍(lán)(Brassica oleracea L.，cv Jingfeng 1)苗上飼養(yǎng)至
水1。聯(lián)苯菊酯抗性煙粉虱種群的生物型也為B型，命名為L(zhǎng)B-RR種群，室內(nèi)經(jīng)過(guò)瓊脂浸葉法生物測(cè)定，發(fā)現(xiàn)其相對(duì)于SS種群的抗性倍數(shù)約為13. 9983倍。室內(nèi)以無(wú)蟲(chóng)甘藍(lán)苗繼代飼養(yǎng)并噴施相應(yīng)殺蟲(chóng)劑進(jìn)行抗性汰選。2.殺蟲(chóng)劑95. 6%聯(lián)苯菊酯原藥，由江蘇常隆化工有限公司生產(chǎn)。3.傳統(tǒng)的瓊脂浸葉法生物測(cè)定在指形管底部鋪上1. 8% 2%的瓊脂約2mL，待瓊脂凝固后，用吸水紙拭干管壁水汽。采未施藥的平整甘藍(lán)葉片，避開(kāi)粗大葉脈用打孔器打出直徑22mm葉圓片。設(shè)置5_7 個(gè)藥劑處理濃度及1組空白對(duì)照，每濃度設(shè)置4次重復(fù)，稀釋用水配成含0. 125%。曲拉通 X-100的蒸餾水溶液。配好藥液后每葉圓片浸液10秒，晾干后正面朝瓊脂平貼于管底。管口朝下，輕拍停有粉虱的葉片讓粉虱自由飛入，每管20 35頭，用棉塞塞入2/3管長(zhǎng)，保持與葉片距離不低于15mm。瓊脂朝上使指形管倒置于光照培養(yǎng)箱，設(shè)置溫度25°C，光周期 14h 8h(L D)，4 后檢查各管死亡蟲(chóng)數(shù)。各濃度總數(shù)和死亡數(shù)數(shù)據(jù)采用武漢市蔬菜科學(xué)研究開(kāi)發(fā)的PBT數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分析各殺蟲(chóng)劑濃度處理一定時(shí)間內(nèi)粉虱的死亡比例，得出藥劑對(duì)應(yīng)的LC5(I、LC9tl、回歸方程、95%置信限、標(biāo)準(zhǔn)差、卡平方值及相關(guān)系數(shù)等。4.本實(shí)用新型玻璃管藥膜生物測(cè)定法稱(chēng)取計(jì)算質(zhì)量的95. 6%聯(lián)苯菊酯原藥用丙酮溶解并二倍梯度稀釋成6個(gè)不同濃度的藥液，同時(shí)設(shè)置丙酮空白對(duì)照，每個(gè)處理設(shè)置4次重復(fù)，一共觀只藥膜玻璃管(如圖 1)。用移液槍吸取500 μ L藥液注入管底，小心傾斜轉(zhuǎn)動(dòng)指形管，藥液隨著丙酮的揮發(fā)而固著在玻璃管1的內(nèi)壁上，使之在管底往上約1/3管長(zhǎng)范圍內(nèi)形成藥膜2，玻璃管藥膜部分每 m2的藥量約為9. 3%ig。待玻璃管內(nèi)部藥膜放置至完全干透后(大于2h)進(jìn)行接蟲(chóng)。輕拍植株把煙粉虱成蟲(chóng)趕入管內(nèi)，棉塞推入到藥膜2上沿3。處理后把指形管(玻璃管1)倒置放置在25士 1°C的培養(yǎng)箱內(nèi)，池后(根據(jù)殺蟲(chóng)劑作用特性的不同，可適當(dāng)延長(zhǎng)觀察時(shí)間)檢
查結(jié)果。此項(xiàng)試驗(yàn)顯示聯(lián)苯菊酯的快速擊倒作用可使煙粉虱表現(xiàn)翻身、拍翅、滾動(dòng)且無(wú)法正常飛翔等癥狀。由于快速檢測(cè)僅池后(或者更長(zhǎng)時(shí)間)即檢查結(jié)果，藥膜作用來(lái)不及將擊倒的粉虱徹底殺死，故檢查時(shí)所用判定標(biāo)準(zhǔn)為煙粉虱存在運(yùn)動(dòng)障礙(包括徹底死亡和存在不能爬行、不能飛動(dòng)等運(yùn)動(dòng)障礙)。對(duì)室內(nèi)b型敏感種群( 采用上述步驟進(jìn)行生測(cè)，選取連續(xù)三次lc5tl最為接近的生測(cè)進(jìn)行綜合，再用ftx)bit軟件進(jìn)行處理，選擇lc5(i、lc6(i、lc8(i所對(duì)應(yīng)的濃度作為診斷劑量的備選濃度。如表1所示。表1聯(lián)苯菊酯對(duì)煙粉虱診斷劑量的初篩濃度及其各自的校正死亡率
初步建立的診斷劑校正死亡率(％)
旦診斷劑量的濃度(mg/L)
量LCm22. 754341. 59
LC6040.664460. 70
LC80156. 571678.69由表1可知LC6tl的校正死亡率最與預(yù)計(jì)的60%死亡率相符，指示性最穩(wěn)定，此外，LC80對(duì)應(yīng)的濃度較高，夏季炎熱季節(jié)使用玻璃管藥膜法，藥膜容易吸濕變潮，從而粘住煙粉虱成蟲(chóng)的翅膀，為實(shí)際操作帶來(lái)不便，且為試驗(yàn)帶來(lái)不可避免的誤差。故最后確定以 LC60 (40. 6644mg/L)作為診斷劑量。實(shí)施例2.殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的診斷劑量確定及其驗(yàn)證1診斷劑量的確定采用實(shí)施例1的試劑盒及其使用和統(tǒng)計(jì)方法，以室內(nèi)敏感煙粉虱種群為試蟲(chóng)，進(jìn)行煙粉虱成蟲(chóng)對(duì)不同藥劑的敏感度檢測(cè)，分別連續(xù)進(jìn)行3-4次試驗(yàn)，待結(jié)果穩(wěn)定后，取實(shí)驗(yàn)結(jié)果最為一致的三次數(shù)據(jù)進(jìn)行合并，計(jì)算其LC5。、LC60, LC70, LC80等不同的劑量。對(duì)上述計(jì)算的不同濃度條件下，對(duì)敏感煙粉虱ss種群進(jìn)行上述各劑量的驗(yàn)證，試驗(yàn)重復(fù)3-4次，計(jì)算其校正死亡率。選取結(jié)果最穩(wěn)定的劑量作為診斷劑量。為了對(duì)LC6tl的診斷可靠性進(jìn)行驗(yàn)證，采用藥膜法處理三組不同試蟲(chóng)第一組，完全室內(nèi)B型聯(lián)苯菊酯抗性品種(LB-RR)；第二組，完全室內(nèi)B型聯(lián)苯菊酯敏感品種(SQ ；第三組，R品系與S品系以1 1的比例混合，同時(shí)各處理組設(shè)置對(duì)照。結(jié)合各組處理對(duì)照的結(jié)果，分析三個(gè)處理組的死亡率，結(jié)果如表2。表2 LC60的穩(wěn)定性檢驗(yàn)
權(quán)利要求1.檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的試劑盒，其特征在于，包括至少一只其內(nèi)壁上附著有以待測(cè)殺蟲(chóng)劑為主要成分的藥膜的一端開(kāi)口的玻璃管，所述藥膜附著在玻璃管的管底至玻璃管高度的三分之一至二分之一處的內(nèi)壁上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的試劑盒，其特征在于所述藥膜附著在玻璃管管底至玻璃管高度的三分之一處的內(nèi)壁上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括5 7組內(nèi)壁上附著有殺蟲(chóng)劑藥膜的一端開(kāi)口的玻璃管，各組玻璃管之間的藥膜中殺蟲(chóng)劑的有效含量呈梯度。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的試劑盒，其特征在于所述玻璃管為指形管。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 4任一所述的檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的試劑盒，其特征在于 所述殺蟲(chóng)劑指聯(lián)苯菊酯。
6.檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的藥膜玻璃管，其特征在于所述藥膜附著在玻璃管的管底至玻璃管高度的三分之一至二分之一處的內(nèi)壁上。
專(zhuān)利摘要本實(shí)用新型“用于快速檢測(cè)殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱毒力的試劑盒及藥膜玻璃管”，屬于殺蟲(chóng)劑毒力檢測(cè)技術(shù)，所述試劑盒其特征在于包括至少一只其內(nèi)壁上附著有以待測(cè)殺蟲(chóng)劑為主要成分的藥膜的一端開(kāi)口的玻璃管，所述藥膜附著在玻璃管的管底至玻璃管高度的三分之一至二分之一處的內(nèi)壁上。具有誤差小，效率高，穩(wěn)定性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)用于快速測(cè)定殺蟲(chóng)劑對(duì)煙粉虱成蟲(chóng)的毒力活性。
文檔編號(hào)G01N33/50GK202166640SQ20112022022
公開(kāi)日2012年3月14日 申請(qǐng)日期2011年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月27日
發(fā)明者張友軍, 徐寶云, 王少麗, 胡小超, 鐵敏媛 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所