專利名稱：一種快速定量檢測美沙酮的膠體金試紙條及其試劑卡的制作方法
技術領域：
本實用新型涉 及膠體金免疫層析法快速檢測領域，特別是涉及ー種以膠體金免疫層析法快速定量檢測血清或全血中美沙酮含量的試紙條試劑條及其試劑卡。
背景技術：
鹽酸美沙酮(簡稱美沙酮)為μ阿片受體激動劑，藥效與嗎啡類似，具有鎮(zhèn)痛作用，并可產生呼吸抑制、縮瞳、鎮(zhèn)靜等作用。與嗎啡比較，具有作用時間長、不易產生耐受性、要去依賴性低的特點，是ニ戰(zhàn)時期德國合成的替代嗎啡的麻醉性鎮(zhèn)痛藥。由于它的使用可以減少或消除依賴者對阿片類藥物的渴求而被廣泛地用于阿片類成癮的治療。國外早在20世紀60年代就使用美沙酮替代治療阿片類依賴。近年來，國內也使用美沙酮對海洛因依賴者進行治療，并獲得了較好的臨床療效。美沙酮ロ服后吸收完全，吸收后與血漿蛋白高度結合(85% )，主要分布在肺、肝、腎和脾臟。美沙酮的生物利用度高(90% )，胃腸道給藥于3小時后可達到血濃峰值，血峰濃度能維持2 6小吋。美沙酮的半衰期為15小吋，ロ服后能有效地抑制戒斷癥狀24 32小吋。美沙酮的治療血濃度為O. 45 O. 86mg/L,中毒血藥濃度為2mg/L，致死血濃度為> 4mg/L。肝臟是美沙酮代謝的主要場所，從尿中和大便中排出未經變化的藥量小于服入量的10%。由于鹽酸美沙酮的治療范圍窄，而ロ服抗病毒藥物對其血藥濃度有較大干擾，影響其療效，因此有必要在合用抗病毒藥物時進行鹽酸美沙酮血藥濃度變化的監(jiān)測，以便指導臨床用藥。據文獻報道，目前對美沙酮快速檢測的方法和儀器較多，主要是依靠高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GS)、質譜(MS)和毛細管電泳等方法進行檢測，但存在儀器昂貴、檢測時間長，并且需要專業(yè)的技術人員進行操作，因此急需ー種能快速、準確、簡便的檢測方法。免疫層析膠體金技術是ー種新型的診斷技術，已得到較為廣泛運用，其基本原理為利用膠體金標記ー種抗原或抗體，在試劑的NC膜上包被相應的配對抗原或抗體，檢測時當樣品中含有相應的特異性抗體或抗原時，膠體金標記顆粒和樣品中配體相結合形成復合物，然后在NC膜上層析，再被包被抗原或抗體捕獲，形成肉眼可見的檢測線，通過檢測線的有無實現對結果的判定。具有操作簡便、反應快速、敏感性高、特異性強、適合現場檢測而無需復雜設備等優(yōu)點。
發(fā)明內容本實用新型的目的在于通過對傳統(tǒng)的美沙酮檢測方法的改進，提供ー種快速定量檢測血清或全血中的美沙酮含量的試紙條及其試劑卡。實現本實用新型的技術方案為ー種快速定量檢測美沙酮的膠體金試紙條，包括上樣墊、標記物墊、NC膜、吸樣墊和支撐薄片，所述的上樣墊、標記物墊、NC膜和吸樣墊依次粘附于不吸水的支撐薄片，標記物墊上包被有膠體金標記的抗美沙酮單杭，NC膜上設置了檢測線T線和質控線C線。[0008]其中，所述的檢測線T線是由美沙酮合成免疫抗原包被制成，所述的質控線C線是由羊抗鼠IgG抗體包被制成，所述的支撐薄片是塑料板。在檢測線T線ー側距NC膜邊緣I. 0-2. 5mm處搭接標記物墊。在標記物墊另ー側距邊緣l_3mm處搭接上樣墊。在質控線C線ー側距NC膜邊緣O. 5-1. 5mm處搭接吸樣墊。同時，所述的膠體金試紙條的寬度為3-4_。ー種快速定量檢測美沙酮的膠體金試 劑卡，該膠體金試劑卡由上述的膠體金試紙條和包裹該膠體金試紙條的塑料外殼構成，塑料外殼上設有上樣孔。與現有技術相比，本實用新型涉及的檢測美沙酮的膠體金試劑條及其試紙卡具有如下優(yōu)點和進步性簡便、準確、快速定量、靈敏度和特異性高、經濟實用、適合于現場檢測而無需復雜設備等。

圖I為快速定量檢測美沙酮的膠體金試紙條的結構示意圖；圖2為快速定量檢測美沙酮的膠體金試劑卡的平面圖；I、上樣墊；2、標記物墊；3、檢測線T線；4、質控線C線；5、硝酸纖維素(NC)膜；6、吸樣墊；7、加樣孔；8、塑料板。
具體實施方式
以下是本實用新型的具體實施例，對本實用新型的技術方案做進ー步作描述，但是本實用新型的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本實用新型構思的改變或等同替代均包括在本實用新型的保護范圍之內。本產品在制造過程中所用的美沙酮單克隆抗體、合成免疫抗原等材料均為杭州隆基生物股份有限公司提供，用于標記膠體金顆粒、包被NC膜；氯金酸和檸檬酸三鈉為Sigma公司產品，用于空白金制備；硝酸纖維素膜為Millipore公司產品；酪蛋白鈉、聚こニ醇20000為Sigma公司產品，用于膠體金封閉；其它試劑均為分析純試劑。制作所述的快速定量檢測美沙酮的膠體金試紙條時，首先標記美沙酮單克隆抗體，用氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為40nm的膠體金溶液，制備完成后取三份膠體金，分別用O. 2MK2C03可將溶液pH調到pH7. 5、pH8. 5、pH9. 5、然后將溶液置于磁力攪拌器上緩慢攪拌，按姆IOOml溶液O. 5mg、l. 0mg、l. 5mg美沙酮單克隆抗體緩慢滴加到膠體金溶液中，繼續(xù)攪拌I小吋，再加入終濃度為O. 2%酪蛋白鈉，O. I %聚こニ醇20000進行封閉30分鐘，12000轉離心30分鐘，棄上清，用膠體金工作液復溶至76. 5ml，按Iml溶液鋪16cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置于溫度為20 25°C、濕度小于30%的干燥間干燥2 4小時，制成標記物墊，備用。其次，合成免疫抗原包被，用O. OlM pH7. 2 PBS將美沙酮合成免疫抗原分別稀釋成O. 2mg/ml、0. 5mg/ml、0. 8mg/ml,然后用噴膜儀將抗μ鏈單克隆抗體在NC膜上按I. 3ul/cm劃線包被，同時包被羊抗鼠IgG抗體，包被完成后將NC膜置于干燥間干燥8 10小吋，備用。再次，制備快速定量檢測美沙酮的膠體金試紙條在干燥室內溫度20 25°C，濕度小于30%，取塑料支撐板，將已包被的NC膜放置在塑料支撐板的中部粘貼，在NC膜T線ー側距邊緣I. 5mm搭接標記物墊,在標記物墊另ー側距邊緣2mm搭接粘貼上樣墊；在NC膜C線ー側距邊緣Imm處搭接吸樣墊。然后用裁剪機將貼好的塑料板切成3. 5_寬的試紙條。最終結構為上樣墊(I)、標記物墊(2)、NC膜(5)和吸樣墊(6)依次粘附于不吸水的支撐薄片(8)，標記物墊(2)上包被有膠體金標記的抗美沙酮單杭，NC膜(5)上設置了檢測線T線
(3)和質控線C線(4)。參見圖I。其中，所述的檢測線T線(3) 是由美沙酮合成免疫抗原包被制成，所述的質控線C線⑷是由羊抗鼠IgG抗體包被制成，支撐薄片⑶為塑料板。最后，切好的試紙條裝入塑料卡內，且塑料卡上設有上樣孔(7)，由此制成美沙酮檢測試劑卡，參見圖2。快速定量檢測美沙酮的膠體金試紙條可以與免疫層析判讀記錄儀配套使用。在使用過程中，將被檢血清或全血平衡至室溫，將制備好的試劑卡平放，向加樣孔加入待檢血清IOul或全血20ul 5ul，然后在上樣墊上加稀釋液60 IOOul。若樣本中含有美沙酮則與抗美沙酮單克隆抗體競爭有限的抗體結合位點，當美沙酮濃度達到ー定量時，它將占據所有的抗體結合位點，因而阻止了美沙酮與其抗體膠體金的結合，這樣，檢測區(qū)無線條出現；若樣本中不含有美沙酮，美沙酮抗體膠體金將隨同樣品溶液在NC膜上運行至檢測線，與美沙酮合成免疫抗原結合呈現出ー肉眼可見的線條，15分鐘后放入配套的免疫層析判讀記錄儀中判讀，即可得出樣本中美沙酮的含量。本裝置在使用過程中根據小樣的檢測結果，確定試劑的最佳標記pH值為8. 5，最佳標記量為O. 6mg每IOOml膠體金溶液，最佳膠體金工作液為pH9. O的Tris-鹽酸緩沖液，含O. 3%的酪蛋白，5%蔗糖，O. 1%的BSA，0. 3%的吐溫，最佳的抗原包被濃度為O. 5mg/ml。15分鐘時免疫層析判讀記錄儀上判讀結果。本裝置在使用時注意事項如下(I)本檢測方法可以直接從判讀儀上讀出樣本中MTD的濃度，無需經過計算；(2)檢測范圍0 2000ng/mL內判讀儀可顯示出定量結果，大于2000ng/ml得出定性結果。判定結果與線的顏色深淺無關；(3)使用前請不要浸濕測試卡或觸摸反應膜；(4)如使用冰箱中冷藏保存的樣本，檢測前應從冰箱內取出，放置到室溫再打開使用，否則會影響檢測結果；(5)打開鋁箔袋后，請勿將試紙卡置于空氣中過久，以免受潮；(6)試劑卡的質控區(qū)[未出現紫紅色帶，表明測試卡失效；(7)要求讀數時間要盡量準確，否則判讀結果誤差很大。
權利要求1.一種快速定量檢測美沙酮的膠體金試紙條，包括上樣墊(I)、標記物墊(2)、NC膜(5)、吸樣墊(6)和支撐薄片(8)，其特征在于，所述的上樣墊(I)、標記物墊(2)、NC膜(5)和吸樣墊(6)依次粘附于不吸水的支撐薄片(8)，標記物墊(2)上包被有膠體金標記的抗美沙酮單抗，NC膜(5)上設置了檢測線T線(3)和質控線C線(4)。
2.根據權利要求I所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述的檢測線T線(3)是由美沙酮合成免疫抗原包被制成。
3.根據權利要求I所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述的質控線C線(4)是由羊抗鼠IgG抗體包被制成。
4.根據權利要求I所述的膠體金試紙條，其特征在于，在檢測線T線(3)—側距NC膜(5)邊緣I. 0-2. 5mm處搭接標記物墊(2)。
5.根據權利要求4所述的膠體金試紙條，其特征在于，在標記物墊(2)另一側距邊緣I-3mm處搭接上樣墊(I)。
6.根據權利要求4所述的膠體金試紙條，其特征在于，在質控線C線(4)一側距NC膜(5)邊緣0. 5-1. 5mm處搭接吸樣墊(6)。
7.根據權利要求1、2、3、4、5或6所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述的膠體金試紙條的寬度為3-4mm。
8.根據權利要求I所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述的支撐薄片(8)是塑料板。
9.一種快速定量檢測美沙酮的膠體金試劑卡，其特征在于，所述的膠體金試劑卡由權利要求1-8任意一條所述的膠體金試紙條和包裹該膠體金試紙條的塑料外殼構成，塑料外殼上設有上樣孔(7)。
專利摘要本實用新型公開了一種快速定量檢測美沙酮的膠體金試紙條及其試劑卡，該膠體金試紙條包括上樣墊、標記物墊、NC膜、吸樣墊和支撐薄片，所述的上樣墊、標記物墊、NC膜和吸樣墊依次粘附于不吸水的支撐薄片，標記物墊上包被有膠體金標記的抗美沙酮單抗，NC膜上設置了檢測線T線和質控線C線，還可在所述試紙條的外部包裹塑料外殼構成膠體金試劑卡。該試紙條與現有技術相比，具有簡便、準確、快速定量、靈敏度和特異性高、經濟實用、適合于現場檢測等優(yōu)點。
文檔編號G01N33/577GK202443021SQ201120256490
公開日2012年9月19日 申請日期2011年7月20日 優(yōu)先權日2011年7月20日
發(fā)明者李洲, 許俊艷 申請人:天津中新科炬生物制藥有限公司