專利名稱：試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種診斷試劑盒。更具體地，本實(shí)用新型涉及包括五項(xiàng)檢測(cè)試紙條的診斷試劑盒，所述五項(xiàng)試紙條分別包被有五種不同的抗原，用于體外定性檢測(cè)人血液中的AMA-M2抗體、SP100抗體、GP210抗體、SLA抗體或LKM-I抗體，輔助診斷自身免疫性肝病。背景肝炎是影響人類健康的最常見疾病之一，慢性肝炎對(duì)患者與社會(huì)影響更大。近幾年國(guó)外相繼報(bào)道自身免疫性肝病，特 別是自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)和原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC),其發(fā)病率均有明顯上升的趨勢(shì)。AIH是由自身免疫反應(yīng)引起的肝臟損傷，表現(xiàn)為慢性漸進(jìn)性肝炎，直至肝硬化，血清學(xué)表現(xiàn)為高丙種球蛋白和特征性自身抗體等。由于AIH的檢測(cè)指標(biāo)經(jīng)常和其他自身免疫性肝病的指標(biāo)重疊，因此對(duì)病因不明的肝病患者篩查AIH的同時(shí)，有必要排除其他疾病的干擾。例如，已發(fā)現(xiàn)，AIH與PBC的重疊占8%，與原發(fā)性硬化性膽管炎重疊占6%，與慢性病毒型肝炎重疊占11%，與自身免疫性膽管炎重疊占10%，其他不明原因的慢型肝炎占13%。其中PBC的發(fā)病率較高，因此，有必要在篩查AIH的同時(shí)排除PBC的干擾。PBC是以破壞肝內(nèi)小及中等大小膽管為主的器官特異性自身免疫性肝病，表現(xiàn)為肝門脈區(qū)炎癥導(dǎo)致纖維化，肝硬化甚至功能性衰竭。PBC患者90%以上為女性，年齡一般為30至65歲之間，隨年齡增長(zhǎng)期發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。過(guò)去明確PBC診斷的方法是肝臟穿刺活檢，但這種創(chuàng)傷性的檢測(cè)手段限制了其應(yīng)用。迄今為止，自身免疫性疾病的診斷手段主要是在結(jié)合臨床的基礎(chǔ)上，依賴實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)到一種或多種高效價(jià)的自身抗體。在國(guó)際權(quán)威機(jī)構(gòu)制定的某些自身免疫性疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)中就包括了自身抗體，如原發(fā)性膽汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis, PBC),美國(guó)肝病學(xué)會(huì)(AASLD) 2000年發(fā)表的PBC診斷程序中，將抗線粒體抗體(AMA)列為診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。線粒體膜上存在9種自身抗原(Ml 9)，針對(duì)其中M2亞型相應(yīng)的AMA(AMA-M2)診斷PBC的敏感性和特異性最高。而對(duì)自身免疫性肝炎(AIH)的診斷，甚至可以根據(jù)患者血清中自身抗體的不同，將其分型。當(dāng)然，以上各種自身抗體在疾病診斷過(guò)程均存在其局限性，不能一概而論。如有一些M2陰性的PBC患者就無(wú)法得到及時(shí)的診斷和治療。近年已有不少報(bào)道在M2陰性的PBC患者的體內(nèi)檢測(cè)到一些特殊類型的自身抗體，對(duì)PBC的診斷具有高度特異性，最具臨床價(jià)值的為SP100抗體和GP210抗體。SP100抗體可在約31 %的PBC患者體內(nèi)被檢測(cè)到，由于不能在其他各種類型的自身免疫性肝病中檢測(cè)到該抗體，因此被視為PBC的標(biāo)志物。GP210抗體雖然僅僅在約10%的PBC患者體內(nèi)被檢測(cè)到，但對(duì)M2陰性的PBC具有較高診斷價(jià)值，可在21%的M2陰性患者體內(nèi)查到，因此聯(lián)合SP100和GP210抗體指標(biāo)，提高了單項(xiàng)M2檢測(cè)對(duì)PBC的診斷率。SLA抗體對(duì)III性自身免疫性肝炎具有高度特異性，其陽(yáng)性率占自身免疫性肝炎的11% 32. 5%，至今尚未發(fā)現(xiàn)在其他疾病或正常人群中存在SLA抗體，因而診斷價(jià)值很高。LKM抗體(抗肝/腎微粒體抗體)能與肝細(xì)胞質(zhì)、近端腎小管起反應(yīng)，經(jīng)鑒定LKM抗體有3種亞型，LKM-I是II型自身免疫性肝炎的血清學(xué)標(biāo)忐。[0007]目前還沒有一種診斷裝置，能夠同時(shí)對(duì)AIH和PBC進(jìn)行方便、快捷和準(zhǔn)確的篩查。而對(duì)這兩種疾病的篩查對(duì)臨床診斷的準(zhǔn)確性，以及后續(xù)治療方案的選擇都具有重要的意義。在臨床診斷上，目前實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)自身抗體的方法主要有酶聯(lián)免疫吸附劑試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、間接免疫突光法(indirectimmunof lurescence, IFF)、免疫印跡法(immunoblotting test, IBT)、線性免疫分析法(Line immuno assay，LIA)等。免疫印跡法雖綜合了 SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特異性和敏感性，但操作相對(duì)復(fù)雜，且試劑具有較強(qiáng)的毒性和污染性。間接免疫熒光法可作半定量測(cè)定，但需有熒光顯微鏡觀察結(jié)果，結(jié)果判定的客觀性不足，標(biāo)準(zhǔn)化困難，技術(shù)程序比較復(fù)雜,也不適合高通量標(biāo)本的檢測(cè)。線性免疫分析法主要用于疾病大類的篩查,針對(duì)性相對(duì)較差，同時(shí)也不適合高通量樣本的檢測(cè)。ELISA法檢測(cè)可用于高通量標(biāo)本測(cè)定，靈敏度也較高，目前被廣泛認(rèn)可，但操作比較繁瑣，需多次加樣和洗滌，且易受溫度和孵育條件的影響，在專業(yè)實(shí)驗(yàn)室里進(jìn)行操作，給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)諸多不便。因此，本領(lǐng)域迫切需要提供一種在臨床中能夠快速準(zhǔn)確地檢測(cè)和篩查AIH和PBC的診斷裝置，以滿足臨床診斷的需要，實(shí)現(xiàn)即時(shí)檢測(cè)、床邊檢測(cè)的需求。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型提供了一種用于診斷自身免疫性肝病的診斷試劑盒，其包括五個(gè)試紙條，其中所述試紙條包括依次搭接的樣品墊、結(jié)合墊、檢測(cè)膜、和吸水墊，以及支撐底板。其中，所述結(jié)合墊上包被有可與人抗體結(jié)合的膠體金標(biāo)記的蛋白；所述檢測(cè)膜的檢測(cè)區(qū)上包被有一種檢測(cè)蛋白印跡，所述檢測(cè)膜的質(zhì)控區(qū)上包被有一種質(zhì)控蛋白印跡；所述試紙條的檢測(cè)膜上的所述檢測(cè)蛋白印跡與所述質(zhì)控蛋白印跡彼此分離，所述檢測(cè)蛋白印跡相比于所述質(zhì)控蛋白印跡更靠近于結(jié)合墊。在某些實(shí)施方式中，所述樣品墊是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無(wú)紡布制成，所述結(jié)合墊是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無(wú)紡布制成，和所述檢測(cè)膜是由硝酸纖維素膜制成，以及所述支撐底板由PVC板或其它硬質(zhì)地而不吸水的材料制成。在某些實(shí)施方式中，所述檢測(cè)蛋白印跡和/或所述質(zhì)控蛋白印跡的形狀分別為斑點(diǎn)狀或條帶狀。在某些實(shí)施方式中，所述檢測(cè)蛋白印跡和所述質(zhì)控蛋白印跡部為斑點(diǎn)狀。在某些實(shí)施方式中，所述檢測(cè)蛋白印跡和所述質(zhì)控蛋白印跡都為條帶狀。在某些實(shí)施方式中，每個(gè)所述試紙條上的檢測(cè)蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SP100蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，不同試紙條上包被的檢測(cè)蛋白印跡不相同。在某些實(shí)施方式中，所述質(zhì)控蛋白為可與樣品中抗體結(jié)合的抗體或蛋白，或者可與所述膠體金標(biāo)記的蛋白結(jié)合的抗體或蛋白。在某些實(shí)施方式中，所述試紙條的結(jié)合墊上還包被有第二種膠體金標(biāo)記的蛋白，且所述質(zhì)控蛋白印跡能夠結(jié)合所述第二種膠體金標(biāo)記的蛋白。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒進(jìn)一步包括至少一個(gè)固定底座，所述至少一個(gè)固定底座上固定有所述五個(gè)試紙條。在某些實(shí)施方式中，所述固定底座的板面上設(shè)有突起，其中所述試紙條放置在由所述突起界定的、可容納單個(gè)試紙條的容納部?jī)?nèi)。在某些實(shí)施方式中，所述固定底座的板面上設(shè)有突起，所述突起界定至少一個(gè)可容納單個(gè)試紙條的容納部。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒包括兩個(gè)或兩個(gè)以上所述固定底座，其中每個(gè)所述固定底座上分別固定有至少一個(gè)所述試紙條。[0014]在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒還包括與所述固定底座和所述試紙條配套使用的上蓋，每個(gè)所述上蓋帶有加樣口和觀察窗口，所述加樣口位于所述試紙條的所述樣品墊上方，所述觀察窗口位于所述試紙條上的所述檢測(cè)膜上方。在某些實(shí)施方式中，所述五個(gè)試紙條相互平行。在某些實(shí)施方式中，所述試紙條的檢測(cè)膜上包被的檢測(cè)蛋白印跡基本位于同一水平線上，所述試紙條的檢測(cè)膜上包被的質(zhì)控蛋白印跡基本位于同一水平線上。在某些實(shí)施方式中，所述診斷試劑盒還包括一種或多種選自下組的組成部分固定底座、上蓋、干燥劑、滴管、說(shuō)明書、顏色標(biāo)簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。

圖I為單個(gè)試紙條的剖面示例圖，其中I指示樣品墊，2指示結(jié)合墊，3指示檢測(cè)膜，4指示吸水墊，5指示檢測(cè)區(qū)，6指示質(zhì)控區(qū)，7指示支撐底板。圖2為單個(gè)試紙條的分解示例圖，其中1-7所表示的結(jié)構(gòu)同圖I。圖3為可以設(shè)置單個(gè)試紙條的設(shè)有突起的固定底座的不例圖,其中(a)為俯視圖，(b)為剖視圖。其中8指示固定底座，9指示突起，20指示容納部。圖4為可與固定底座配合的上蓋的示例俯視圖，其中10指示上蓋，11指示加樣口，12指示觀察窗口。圖5為設(shè)有試紙條的固定底座和上蓋配合時(shí)的結(jié)構(gòu)示意圖，其中(a)為俯視圖，(b)為剖視圖，其中1-12所表示的結(jié)構(gòu)同圖I、圖2和圖4。圖6為可以設(shè)置多個(gè)試紙條的設(shè)有突起的固定底座及可與之配合的上蓋的示例圖，其中(a)為固定底座的示例俯視圖，(b)為固定底座的示例剖視圖，(C)為上蓋的示例俯視圖。其中V指示固定底座，8’指示突起，9’指示上蓋，10’指示加樣口，11’指示觀察窗口，20指示容納部。圖7為用試紙條進(jìn)行檢測(cè)得到的檢測(cè)結(jié)果示意圖，其中13指示檢測(cè)區(qū)內(nèi)出現(xiàn)的深色帶，14指示質(zhì)控區(qū)內(nèi)出現(xiàn)的深色帶。
具體實(shí)施方式
本實(shí)用新型提供了用于診斷自身免疫性肝病的含有試紙條的診斷試劑盒，所述試紙條能夠用于進(jìn)行樣品的層析，并且能夠檢測(cè)樣品中存在的被檢物質(zhì)。在某些實(shí)施方式中，所述樣品可以是人體液樣品，例如血液，血漿等。在某些實(shí)施方式中，所述樣品中存在的被檢物質(zhì)是一種或多種人抗體，例如，AMA-M2抗體、SP100抗體、GP210抗體、SLA抗體或LKM-I抗體。上述這些人抗體被證明與自身免疫性肝病有關(guān)，通過(guò)檢測(cè)血液或血漿中是否存在一種或多種這些抗體，可以輔助診斷自身免疫性肝病。這些被檢抗體能夠特異性結(jié)合其對(duì)應(yīng)的抗原，因此，將這些抗體的抗原包被在所述試紙條的檢測(cè)區(qū)，可以檢測(cè)與之對(duì)應(yīng)的被檢抗體。表I中列出了能夠與AMA-M2抗體、SP100抗體、GP210抗體、SLA抗體或LKM-I抗體特異性結(jié)合的抗原的示例，以及相關(guān)聯(lián)的疾病。[0025]表I
權(quán)利要求1.一種用于診斷自身免疫性肝病的診斷試劑盒，包括五個(gè)試紙條，其中所述試紙條包括依次搭接的樣品墊(I)、結(jié)合墊(2)、檢測(cè)膜(3)、和吸水墊(4)，以及支撐底板(7)，其中 所述試紙條的結(jié)合墊(2)上包被有可與人抗體結(jié)合的膠體金標(biāo)記的蛋白； 所述試紙條的檢測(cè)膜(3)的檢測(cè)區(qū)(5)上包被有一種檢測(cè)蛋白印跡； 所述試紙條的檢測(cè)膜(3)的質(zhì)控區(qū)(6)上還包被有一種質(zhì)控蛋白印跡；以及 所述試紙條的檢測(cè)膜(3)上的所述檢測(cè)蛋白印跡與所述質(zhì)控蛋白印跡彼此分離，所述檢測(cè)蛋白印跡相比于所述質(zhì)控蛋白印跡更靠近于結(jié)合墊(2)。
2.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其中所述樣品墊(I)是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無(wú)紡布制成；所述結(jié)合墊(2)是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無(wú)紡布制成；所述檢測(cè)膜(3)是由硝酸纖維素膜制成；且所述支撐底板(7)由PVC板或其它硬質(zhì)地而不吸水的材料制成。
3.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其特征在于所述檢測(cè)蛋白印跡和質(zhì)控蛋白印跡的形狀分別為斑點(diǎn)狀或條帶狀。
4.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其中每個(gè)所述試紙條上的檢測(cè)蛋白印跡為一種選自下組的物質(zhì)AMA-M2蛋白印跡、SPlOO蛋白印跡、GP210蛋白印跡、SLA蛋白印跡和LKM-I蛋白印跡，且不同試紙條上包被的檢測(cè)蛋白印跡不相同。
5.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其中質(zhì)控蛋白印跡為與樣品中抗體結(jié)合的抗體或蛋白，或者與所述膠體金標(biāo)記的蛋白結(jié)合的抗體或蛋白。
6.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其中所述試紙條的結(jié)合墊(2)上還包被有第二種膠體金標(biāo)記的蛋白，且所述質(zhì)控蛋白印跡能夠結(jié)合所述第二種膠體金標(biāo)記的蛋白。
7.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，進(jìn)一步包括至少一個(gè)固定底座，所述至少一個(gè)固定底座上固定有所述五個(gè)試紙條。
8.如權(quán)利要求7所述的診斷試劑盒，其特征在于所述固定底座的板面上設(shè)有突起，其中所述試紙條放置在由所述突起界定的、可容納單個(gè)試紙條的容納部?jī)?nèi)。
9.如權(quán)利要求7所述的診斷試劑盒，其特征在于所述固定底座的板面上設(shè)有突起，所述突起界定至少一個(gè)可容納單個(gè)試紙條的容納部。
10.如權(quán)利要求7所述的診斷試劑盒，其包括兩個(gè)或兩個(gè)以上所述固定底座，其中每個(gè)所述固定底座上分別固定有至少一個(gè)所述試紙條。
11.如權(quán)利要求7或10任一所述的診斷試劑盒，其特征在于還包括與所述固定底座和所述試紙條配套使用的上蓋，每個(gè)所述上蓋帶有加樣口和觀察窗口，所述加樣口位于所述試紙條的所述樣品墊上方，所述觀察窗口位于所述試紙條上的所述檢測(cè)膜上方。
12.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，其中所述五個(gè)試紙條相互平行。
13.如權(quán)利要求12所述的診斷試劑盒，其中所述試紙條的檢測(cè)膜(3)上包被的檢測(cè)蛋白印跡基本位于同一水平線上，所述試紙條的檢測(cè)膜(3)上包被的質(zhì)控蛋白印跡基本位于同一水平線上。
14.如權(quán)利要求I所述的診斷試劑盒，進(jìn)一步包括一種或多種選自下組的組成部分用于固定所述試紙條的固定底座、上蓋、干燥劑、滴管、說(shuō)明書、顏色標(biāo)簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。
專利摘要本實(shí)用新型提供了一種試劑盒，包括五個(gè)相互獨(dú)立的試紙條，其中每一個(gè)試紙條都包括依次搭接的樣品墊、結(jié)合墊、檢測(cè)膜、和吸水墊，所述檢測(cè)膜上設(shè)置有相互分離的檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)，其中檢測(cè)區(qū)包被有檢測(cè)蛋白，質(zhì)控區(qū)包被有質(zhì)控蛋白。本申請(qǐng)?zhí)峁┑脑噭┖心軌蛴糜跈z測(cè)樣品中AMA-M2抗體、SP100抗體、GP210抗體、SLA抗體或LKM-1抗體的存在，并且可用于輔助診斷自身免疫性肝病。
文檔編號(hào)G01N33/576GK202362304SQ20112034745
公開日2012年8月1日 申請(qǐng)日期2011年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月16日
發(fā)明者包駿, 張玥 申請(qǐng)人:上?？菩律锛夹g(shù)股份有限公司