專(zhuān)利名稱(chēng)：在無(wú)癥狀患者中基于il-6檢測(cè)的全身炎性應(yīng)答綜合征和敗血癥的早期診斷和預(yù)測(cè)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在無(wú)癥狀患者中，優(yōu)選地在接受手術(shù)介入的患者中使用11-6作為診斷性和預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物對(duì)全身炎性應(yīng)答綜合征(SIRS)或敗血癥的早期診斷和預(yù)測(cè)的技術(shù)領(lǐng)域。還提供了相應(yīng)的療法監(jiān)測(cè)和死亡率預(yù)測(cè)方法、部分的試劑盒。盡管現(xiàn)代醫(yī)學(xué)有所進(jìn)展，SIRS和敗血癥仍代表在世界范圍內(nèi)頻率增加的常見(jiàn)且災(zāi)難性的綜合征。其屬于重癥護(hù)理患者中最常見(jiàn)的死因。 流行病學(xué)評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)，可描述定義處于發(fā)展出敗血癥和嚴(yán)重?cái)⊙Y的風(fēng)險(xiǎn)的患者的大量病況。被描述的風(fēng)險(xiǎn)因素是性別(男)、種族(黑)、人種(西班牙裔(Hispanic))、高齡和下述共病(co-morbidities):糖尿病、惡性腫瘤、醇中毒、HIV感染、用免疫抑制性試劑治療(Hodgin KE,Moss M. The epidemiology of Sepsis. Current Pharm Design 2008 ; 14 :1833-1839)。此外，實(shí)際的事件，例如導(dǎo)致大面積傷口的大手術(shù)、創(chuàng)傷或燒傷代表了額外的風(fēng)險(xiǎn)。沒(méi)有感染的SIRS可在例如胰腺炎、休克、局部缺血和多器官損傷等事件中發(fā)生。從1991 年起 American College of Chest Physicians (ACCP)和 Society ofCritical Care Medicine(SCCM)提供了定義對(duì)感染的全身炎性應(yīng)答的概念和實(shí)踐框架(American College of Chest Physicians/Society of Critical Care MedicineConsensus Conference definitions for sepsis and organ failure and guidelinesfor the use of innovative therapies in sepsis. Crit Care Med. 1992Jun ；20(6)864-74)。之前，多種術(shù)語(yǔ)可互換使用，導(dǎo)致很多混亂。該會(huì)議的主要貢獻(xiàn)是發(fā)展了對(duì)于敗血癥多個(gè)階段的統(tǒng)一定義，這可普適地并且統(tǒng)一地應(yīng)用于罹患這些病癥的患者。在出現(xiàn)臨床征兆的時(shí)間點(diǎn)時(shí)，已經(jīng)開(kāi)始了 SIRS的發(fā)展和惡化。IL-6屬于gpl30細(xì)胞因子的家族。所有家族成員共享四螺旋蛋白結(jié)構(gòu)，并且它們經(jīng)由含有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)受體糖蛋白gpl30的至少一個(gè)亞單位的受體復(fù)合體施加它們的信號(hào)。IL-6首先與IL-6受體(IL-6R)結(jié)合，并且該IL-6/IL-6R復(fù)合體與gpl30結(jié)合，導(dǎo)致同源二聚化以及隨后的Jak/Stat-和Ras/Map/Akt-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的活化(Taga T, KishimotoT. Gpl30and the Interleukin-6 Family of Cytokines. Annu. Rev. Immunol. 1997 ；15 797-819 ；Drucker C, Gewiese J, Malchow S, Scheller J, Rose-John S. Impact ofInterleukin-6 Classic—and Trans-signaling on Liver Damage and Regeneration. JAutimm 2009,印制中)。描述了兩種不同的信號(hào)途徑，一種中IL-6與膜結(jié)合的IL-6受體結(jié)合，這導(dǎo)致二聚化和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白gpl3的活化。該途徑限于在其表面表達(dá)IL-6受體的細(xì)胞，這僅是一些細(xì)胞群中的情況。然而，存在備選的途徑，其中IL-6與天然存在的可溶IL-6R(sIL-6R)結(jié)合，并且該IL-6/sIL-6R復(fù)合體活化gpl30。以這種方式，缺少膜結(jié)合的IL-6-受體的細(xì)胞可應(yīng)答IL-6。第二種所謂的轉(zhuǎn)信號(hào)途徑也影響表達(dá)膜結(jié)合的IL-6受體的細(xì)胞，例如肝細(xì)胞。在該情況中，IL-6轉(zhuǎn)信號(hào)的活化可增強(qiáng)IL-6的刺激效果。1988年，提出命名細(xì)胞因子IL-6，因?yàn)檫M(jìn)一步的研究表明，該蛋白不僅在B-細(xì)胞上顯示活性，還在T-細(xì)胞、造血干細(xì)胞、肝細(xì)胞和腦細(xì)胞上顯示活性(Kishimoto T,Hirano T. A New Interleukinwith Pleitropic Activities. Bio Essays 1988Jul ；9(I) :11-15)。已經(jīng)在1989年報(bào)道，具有局部急性感染的患者的體液和具有革蘭氏陰性和革蘭氏陽(yáng)性菌血癥的患者的血清含有升高的水平的生物活性的IL-6。假設(shè)急性感染期間IL-6在血清中的存在提示該細(xì)胞因子可能參與幫助限制組織損傷的局部和全身性事件的級(jí)聯(lián)(Helfgott DC, Tatter SB, Santhanam U，Clarick RH, Bhardwaj N, May LT,Sehgal PB. Multiple Forms of IFN-^ 2/IL-6 in Serum and Body Fluids during AcuteBacterial Infection. J Immuology 1989;142:948-953.)。對(duì)I⑶(重癥護(hù)理單元)接受的已有敗血癥臨床征兆的患者的血清或血漿中IL-6的依序測(cè)量顯示出其在評(píng)價(jià)SIRS(全身炎性應(yīng)答綜合征)、敗血癥和膿毒性休克的嚴(yán)重性以及預(yù)測(cè)這些患者的后果中是有用的(Pinsky MR, Vincent JL,Alegre M,Dupont E. SerumCytokine Levels in Human Septic Shock. Relation to Multiple Organ Failure and Mortality. Chest 1993 ; 103 :565-575 ;0da S,Hirasawa H,Shiga H,Nakanishi K,MatsudaK, Nakamura M. Sequential measurements of IL-6 blood levels in patients withSIRS/sepsis. Cytokine 2005 ;29 :169-175 ;Marti L, Cervera C, Filella X, Marin JL,Almela M, Moreno A. Cytokine-release patterns in elderly patients with systemicinflammatory response syndrome. Gerontology. 2007 ；53 (5) :239-44)。Mokart D等(Br J Anaesth. 2005Jun ；94(6) :767-7)公開(kāi)了基于在接受癌癥手術(shù)的患者中的PCT和IL-6檢測(cè)，其中IL-6是在手術(shù)之前的早晨以及手術(shù)后的早晨取樣的，即，以超過(guò)至少20小時(shí)的時(shí)間間隔取樣。基于PCT和IL-6，使用測(cè)量來(lái)預(yù)測(cè)展示出SIRS及手術(shù)后第I天的患者中的敗血癥，即，IL-6水平不允許在手術(shù)后第I天沒(méi)有展示出SIRS癥狀的患者中診斷或預(yù)測(cè)罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)。Mokart D 等(World J Surgery，2009，33 :558-566)公開(kāi)了基于 IL-6 和 PCT 的、基于每日一次收集的血樣品鑒定處于發(fā)展出敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)的患者的方法?？偠灾鲜龉_(kāi)內(nèi)容均不允許在SIRS和敗血癥的一般認(rèn)可的臨床征兆和癥狀發(fā)作之前(即，在無(wú)癥狀患者中)診斷SIRS和敗血癥，或者預(yù)測(cè)罹患或發(fā)展出SIRS和敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)。因此，需要這樣的診斷方法和治療監(jiān)測(cè)方法，它們?cè)试S在SIRS的臨床征兆和癥狀發(fā)作之前靈敏且早期地檢測(cè)SIRS或敗血癥以及預(yù)測(cè)罹患或發(fā)展出SIRS和敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)。因此，本發(fā)明的目的之一在于提供解決至少一些迄今已知的診斷SIRS和敗血癥的方式的缺點(diǎn)的工具和方法。此外，目的是提供方法和治療檢測(cè)方法，其二者允許在臨床癥狀發(fā)作之前早期檢測(cè)罹患或發(fā)展出SIRS和敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)。還有一個(gè)目的是提供適于進(jìn)行這些方法的試劑盒和計(jì)算機(jī)程序。
發(fā)明總結(jié)通過(guò)提供權(quán)利要求和下文中定義的主體來(lái)完成下述目的中的至少一種。在第一個(gè)方面，提供了在無(wú)癥狀患者中檢測(cè)或診斷全身炎性應(yīng)答綜合征(SIRS)或敗血癥、或檢測(cè)或診斷發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下述步驟a)在來(lái)自患者的樣品中測(cè)定IL-6或其變體的水平；
b)將步驟a)中測(cè)定的IL-6或其變體的水平與參照水平相比較；c)檢測(cè)或診斷SIRS，或者檢測(cè)或診斷發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)；其中以短間隔至少兩次分離樣品，并且針對(duì)每份樣品重復(fù)步驟a)和b)。還提供了在無(wú)癥狀患者中檢測(cè)IL-6水平以檢測(cè)或診斷發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下述步驟a)在來(lái)自患者的樣品中測(cè)定IL-6或其變體的水平；以及b)將步驟a)中測(cè)定的IL-6或其變體的水平與參照水平相比較；優(yōu)選地基于比較檢測(cè)或診斷患者是否處于發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)；其中以短間隔至少兩次分離樣品，并且針對(duì)每份樣品重復(fù)步驟a)和b)。還提供了在無(wú)癥狀患者中檢測(cè)或診斷發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)的方 法，所述患者是選自創(chuàng)傷患者、具有燒傷的患者、接受侵入性治療的患者、接受手術(shù)的患者的患者，所述方法包括下述步驟a)在來(lái)自患者的樣品中測(cè)定IL-6或其變體的水平；b)將步驟a)中測(cè)定的IL-6或其變體的水平與參照水平相比較；c)檢測(cè)或診斷SIRS，或者檢測(cè)或診斷發(fā)展出或罹患SIRS的風(fēng)險(xiǎn)；其中以短間隔至少兩次分離樣品，并且針對(duì)每份樣品重復(fù)步驟a)和b)，優(yōu)選地，在接收患者時(shí)分離至少一份樣品，以及在已啟動(dòng)或終止治療后分離至少一份樣品。例如，如果無(wú)癥狀患者將接受侵入性治療，則在手術(shù)介入之前分離至少一份樣品，或者以獲得基線(xiàn)11-6水平，然后在完成侵入性治療之后以短間隔分離至少另一份樣品，以及針對(duì)IL-6水平加以分析。優(yōu)選地，使用IL-6或檢測(cè)IL-6的工具在無(wú)癥狀患者中檢測(cè)或診斷發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)，其中以短間隔測(cè)定IL-6的水平至少2次。出乎本發(fā)明人意料，本發(fā)明的方法顯示，對(duì)IL-6的密篩式連續(xù)測(cè)量，優(yōu)選地在治療(例如與導(dǎo)致SIRS或敗血癥的顯著風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的療法，例如大手術(shù))前開(kāi)始，允許在臨床征兆或傳統(tǒng)用于診斷SIRS/敗血癥的實(shí)驗(yàn)室參數(shù)的病理性改變(見(jiàn)例如實(shí)施例)發(fā)作前良久就清楚鑒定出處于罹患或發(fā)展出SIRS(包括敗血癥)的風(fēng)險(xiǎn)中的無(wú)癥狀患者。具體地，本發(fā)明首次描述了無(wú)癥狀患者中的IL-6動(dòng)力學(xué)，其中一些可被鑒定為發(fā)展出SIRS。發(fā)現(xiàn)在展示出支持SIRS和敗血癥診斷的臨床癥狀或征兆之前良久，較之基線(xiàn)水平，IL濃度的大幅上升指示發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的高風(fēng)險(xiǎn)。因此，與此前已知的相反，并非分析樣品中IL-6的絕對(duì)水平，對(duì)罹患或發(fā)展出SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)的診斷基本上基于測(cè)定IL-6水平隨時(shí)間的增加。由于本發(fā)明的方法在出現(xiàn)SIRS和敗血癥的臨床征兆和癥狀之前的早期應(yīng)答性質(zhì)，較之迄今已知的診斷SIRS和敗血癥的方法，現(xiàn)可在較早的時(shí)間點(diǎn)啟動(dòng)合適的治療。因此，成功治療SIRS和預(yù)防SIRS或敗血癥的可能性增加，并且可將患者從SIRS或敗血癥導(dǎo)致的死亡中拯救出來(lái)。在本文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“全身炎性應(yīng)答綜合征(SIRS)”是技術(shù)人員通常已知的。該術(shù)語(yǔ)優(yōu)選涵蓋如 ACCP/SCCM Consensus Conference Definitions (1992/2003)定義的 SIRS(見(jiàn)例如 American College of Chest Physicians/Society of Critical CareMedicine Consensus Conference definitions tor sepsis and organ failure andguidelines for the use of innovative therapies in sepsis. Crit Care Med. 1992Jun ；20 (6) :864-74))。優(yōu)選地,如果患者展示出下述a)至d),優(yōu)選地,下述a)至e)中的至少兩種癥狀，則認(rèn)為患者罹患SIRS a)白血細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC) >約 12，000/ U /L 或<約 4000/ U /L，b)體溫 > 約 38 °C 或 < 約 36 °Cc)心率>約90次跳動(dòng)/分鐘d)呼吸速率>約20次呼吸/分鐘或CO2分壓低于約32mmHg，和e)在計(jì)數(shù)的白血細(xì)胞中超過(guò)10%的未成熟白血細(xì)胞。白血細(xì)胞計(jì)數(shù)通常是通過(guò)自動(dòng)計(jì)數(shù)設(shè)備測(cè)定的。
當(dāng)考慮到兒童時(shí)，用于診斷兒童中SIRS的共有標(biāo)準(zhǔn)被公開(kāi)于Goldstein等(Pediatr. Crit Care Med 2005，6 (I)，2_8，特別見(jiàn)表2和3)中。在本發(fā)明意義中，無(wú)癥狀兒童患者是展示出Goldstein等人(見(jiàn)上文，其通過(guò)引用并入本文)中描述的那些癥狀中少于2項(xiàng)、優(yōu)選少于I項(xiàng)的患者。優(yōu)選地，基于在患者樣品中檢測(cè)到的高于參照水平的IL-6水平來(lái)診斷或檢測(cè)罹患或發(fā)展出SIRS的風(fēng)險(xiǎn)。在該情況下，優(yōu)選地?zé)o須對(duì)展示出上述SIRS癥狀(a)至(e)中至少兩項(xiàng)的患者診斷或檢測(cè)罹患或發(fā)展出SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)。優(yōu)選地，可僅基于測(cè)定到的高于參照水平的IL-6水平，來(lái)診斷或檢測(cè)罹患或發(fā)展出SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)。優(yōu)選地，參照值是通過(guò)用在給定的患者中較早測(cè)定的IL-6水平(例如基線(xiàn)IL-6水平)乘以本文其它地方定義的因子(例如，至少約50、或者至少約100、或者至少約500或至少大約1000的因子)來(lái)測(cè)定的。在收集較早的樣品(其優(yōu)選提供基線(xiàn)水平)之后，在從給定的患者中分離的樣品中測(cè)定的任何IL-6水平高于參照水平則指示患者處于發(fā)展出或罹患SIRS的高風(fēng)險(xiǎn)中。本發(fā)明人令人吃驚地揭示，基于IL-6測(cè)定，早期檢測(cè)和診斷出罹患或發(fā)展出SIRS的風(fēng)險(xiǎn)是可能的，優(yōu)選地，在患者展示出上述SIRS癥狀(a)至(e)中的兩種或更多種之前。當(dāng)患者額外展示出被診斷的感染時(shí)，認(rèn)為患者處于發(fā)展出或罹患敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)。在本文中使用時(shí)，上文中針對(duì)“SIRS”提到的診斷標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)必要修正也適用于“敗血癥”，但是，在敗血癥中，被診斷的感染是必要的額外診斷參數(shù)。用于檢測(cè)或診斷感染的方法是本領(lǐng)域通常已知的。作為本發(fā)明的結(jié)果，現(xiàn)可優(yōu)選地基于僅兩個(gè)參數(shù)，即，高于參照水平的IL-6的水平和被診斷的感染，來(lái)檢測(cè)或診斷罹患或發(fā)展出敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)。在本發(fā)明的意義中，“感染”優(yōu)選是病毒、真菌或細(xì)菌感染，優(yōu)選是與選自大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鏈球菌或銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeroginosa)的細(xì)菌相關(guān)的細(xì)菌感染。感染還可以是通過(guò)選自白色念珠菌(Candida albicans)、熱帶念珠菌(Candida tropicalis)或煙曲霉(Aspergillus fumigatus)的真菌的感染?；卺t(yī)師通常已知的測(cè)定和標(biāo)準(zhǔn)來(lái)診斷感染。優(yōu)選地，基于細(xì)菌培養(yǎng)測(cè)定(例如用來(lái)自患者的樣品接種的培養(yǎng)基)，或者基于分子診斷方法，來(lái)診斷感染。真菌感染例如可基于通常已知的測(cè)試測(cè)定(例如Septifast)來(lái)測(cè)定。術(shù)語(yǔ)“患者”在本文中使用時(shí)指動(dòng)物，優(yōu)選是哺乳動(dòng)物，優(yōu)選是狗、貓、馬、牛，最優(yōu)選是人，優(yōu)選是男性或女性，優(yōu)選是出生前(prenatal)、圍產(chǎn)期(perinatal)、出生后(postnatal)和新生(neonatal)兒童。優(yōu)選地,患者是成人。優(yōu)選地，患者不是出生前、圍產(chǎn)期、出生后的和新生兒童。在本文中使用時(shí)，表達(dá)法“無(wú)癥狀患者”表示涵蓋不展示出通常被認(rèn)為建立了 SIRS診斷的臨床征兆和癥狀的患者。優(yōu)選地，無(wú)癥狀患者展示出少于2種、優(yōu)選地少于I種下述中的癥狀a)白血細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC) >約 12，000/ U /L 或<約 4000/ U /L，b)體溫 > 約 38 °C 或 < 約 36 °C，c)心率>約90次跳動(dòng)/分鐘，d)呼吸速率>約20次呼吸/分鐘或CO2分壓低于約32mmHg，和e)在計(jì)數(shù)的白血細(xì)胞中超過(guò)10%的未成熟白血細(xì)胞。優(yōu)選地,無(wú)癥狀患者包括下述患者,所述患者選自創(chuàng)傷患者、具有燒傷的患者、接 受侵入性治療的患者、接受手術(shù)介入(優(yōu)選地，選自?xún)?nèi)窺鏡介入的手術(shù)介入，或選自CT-掃描或PET-CT掃描的結(jié)果)的患者，或處于發(fā)展出SIRS或敗血癥風(fēng)險(xiǎn)的患者，例如達(dá)到下述標(biāo)準(zhǔn)中至少一種的患者-敗血癥的遺傳傾向，-早熟(圍產(chǎn)期或新生)或老年，-性別是男性，-人種是非洲裔美國(guó)人，-醫(yī)療共病，包括慢性疾病(例如糖尿病、充血性心力衰竭)，已存在的器官機(jī)能障礙(例如肝硬化或腎衰竭)，身體或精神損傷，-之前的臨床介入(例如大手術(shù)、氣管內(nèi)插管、抗生素)，和-社會(huì),宗教或文化因素；上述所有標(biāo)準(zhǔn)均在Marshall JC, " Predisposition to Sepsis "，Anaesthesia，Pain，Intensive Care and Emergency A. P. I. C. E. , Springer Verlag，ISBN88-470-0772-0中被進(jìn)一步詳細(xì)描述。通常已知，當(dāng)實(shí)踐本發(fā)明時(shí)可優(yōu)選考慮這些因素。任選地，本發(fā)明的無(wú)癥狀患者排除IL-6代謝受損的患者，例如其中經(jīng)由內(nèi)臟和腎器官的 IL-6 清除受損的患者(Garibotta 等(Cytokine, 2007, 37, 51-54))。在本發(fā)明的上下文中，“白介素-6(IL_6) ”優(yōu)選表示涵蓋IL-6，如本領(lǐng)域所已知
的那樣。優(yōu)選地，IL-6包括干擾素f22，漿細(xì)胞瘤生長(zhǎng)因子、肝細(xì)胞刺激因子和人B-細(xì)
胞刺激因子2(BSF2)。IL-6優(yōu)選是從編碼212個(gè)氨基酸的產(chǎn)物、更優(yōu)選地在212個(gè)氨基酸的肽的N-末端切割的184個(gè)氨基酸的IL-6肽的單個(gè)基因產(chǎn)生的蛋白(見(jiàn)Song M，Kellum JA. Interleukin-6. Crit Care Med 2005 ；33 (Suppll2) :463-465 和 212 個(gè)氨基酸長(zhǎng)的IL-6前體的NCBI序列，檢錄號(hào)NP—000591)。優(yōu)選地，IL-6涵蓋不結(jié)合其受體IL-6R的游離IL-6。此外，IL-6還可涵蓋處于IL-6/IL-6R復(fù)合體狀態(tài)中的IL-6(見(jiàn)Taga T，Kishimoto T.Gpl30 and the Interleukin_6Family of Cytokines. Annu. Rev.Immunol. 1997 ；15 :797-819 ；Drucker C，Gewiese J，Malchow S，Scheller J，Rose-JohnS. Impact of Interleukin-6Classic_and Trans-signaling on Liver Damage andRegeneration. J Autimm 2009，印制中) 優(yōu)選地，IL-6是可被或被單克隆抗IL-6抗體M-BE8(如EP0430193中定義的，即，由細(xì)胞系BE-8產(chǎn)生的抗體，或如KLEIN，B.，等1991，Murine anti-interIeukin 6 monoclonal antibody therapy for a patient with plasmacell leukemia，Blood 78,1 198-1204 中定義的)或 M-23C7 結(jié)合的 IL-6 蛋白。優(yōu)選地，IL-6是可被或被用于Elecsys和cobas免疫測(cè)定系統(tǒng)(Roche)的Roche的IL測(cè)定的抗體結(jié)合的IL-6。術(shù)語(yǔ)IL-6還優(yōu)選地涵蓋前述IL-6的變體，優(yōu)選地是人IL-6的變體。變體涵蓋與特定的參照IL-6分子(優(yōu)選與人IL-6)基本相似的蛋白或肽。術(shù)語(yǔ)基本相似是本領(lǐng)域技術(shù)人員很好理解的。特別地，IL-6變體可以是較之特定的參照IL-6分子的氨基酸序列顯示出至少一個(gè)氨基酸交換(優(yōu)選至多約25個(gè)，更優(yōu)選至多約15個(gè)，更優(yōu)選至多約10個(gè)，更優(yōu)選至多約5個(gè)，最優(yōu)選至多約3個(gè)氨基酸交換)的同工型或等位基因變體。優(yōu)選地，此類(lèi)IL-6變體具有與特定的參照IL-6分子有至少大約80%，優(yōu)選至少大約85%，更優(yōu)選至少大約90%，最優(yōu)選至少大約95%，最優(yōu)選至少大約98%的序列同一性，優(yōu)選地相對(duì)于人IL-6，甚至更優(yōu)選地在人IL-6的全長(zhǎng)上。兩條氨基酸序列間的同一性程度可通過(guò)本領(lǐng)域公知的算法來(lái)測(cè)定。優(yōu)選地，同一性程度是通過(guò)在比較窗上比較兩條被最優(yōu)比對(duì)的序列來(lái)測(cè)定的，其中，為了最優(yōu)比對(duì)，較之不包含添加或缺失的參照序列，在比較窗中的氨基酸序列的片段可包含添加或缺失(例如空位或突出端)。百分比是通過(guò)這樣來(lái)計(jì)算的測(cè)定兩條序列中出現(xiàn)相同氨基酸殘基的位置數(shù)目以產(chǎn)生匹配的位置的數(shù)目，用匹配的位置數(shù)目除以比較窗中的位置總數(shù)，并將結(jié)果乘以100，以產(chǎn)生序列同一性百分比。對(duì)用于比較 的序列的最優(yōu)比對(duì)可通過(guò)Smith and Waterman Add. APL. Math. 2 :482 (1981)的局部同源性算法，通過(guò)Needleman and Wunsch J. Mol. Biol. 48 :443 (1970)的同源性比對(duì)算法，通過(guò)Pearson and Lipman Proc. Natl. Acad Sci. (USA) 85 :2444 (1988)的相似性搜索方法，通過(guò)這些算法的計(jì)算機(jī)化實(shí)施(Wisconsin Genetics軟件包中的GAP、BESTFIT、BLAST、PASTA和 TFASTA, Genetics Computer Group (GCG), 575Science Dr. , Madison, WI),或通過(guò)視覺(jué)觀察來(lái)進(jìn)行。假定已鑒定了兩條序列用于比較，優(yōu)選使用GAP和BESTFIT來(lái)測(cè)定它們的最優(yōu)比對(duì)以及因此測(cè)定同一性程度。優(yōu)選地，針對(duì)空位權(quán)重使用5. 00的默認(rèn)值，針對(duì)空位權(quán)重長(zhǎng)度使用0. 30的默認(rèn)值。上文提到的變體可以是等位基因變體或者任何其它物種特異性同源體、旁系同源體或直向同源體。表達(dá)法變體還涵蓋仍被診斷工具或由針對(duì)各自的全長(zhǎng)蛋白或肽的配體識(shí)別的降解產(chǎn)物，例如蛋白水解降解產(chǎn)物。術(shù)語(yǔ)“變體”還表示覆蓋剪接變體。術(shù)語(yǔ)“變體”還涉及經(jīng)翻譯后修飾的肽，例如糖基化的肽?！白凅w”還是在收集樣品后經(jīng)修飾的肽，例如通過(guò)共價(jià)或非共價(jià)將標(biāo)記(特別是放射活性或熒光標(biāo)記)連結(jié)至肽來(lái)修飾的。優(yōu)選地，IL-6變體具有與特定參照肽基本相同的免疫學(xué)和/或生物學(xué)性質(zhì)，優(yōu)選地，與人IL-6相同的免疫學(xué)和/或生物學(xué)性質(zhì)，最優(yōu)選地，與人IL-6相同的生物學(xué)和/或免疫學(xué)性質(zhì)。優(yōu)選地，IL-6變體展示出人IL-6活性的至少大約70%，優(yōu)選至少大約80%，優(yōu)選至少大約90%，優(yōu)選至少大約95%，優(yōu)選至少大約98%。IL-6活性?xún)?yōu)選是IL-6受體結(jié)合活性(JAL Taga T,Kishimoto T. Gp130 and the Interleukin-6 Family of Cytokines.Annu. Rev. Immunol. 1997 ； 15 :797-819 ；Drucker C, Gewiese J, Malchow S, Scheller J,Rose-John S. Impact of Interleukin-6 Classic- and Trans- signaling on LiverDamage and Regeneration. J Autimm 2009,印制中)。優(yōu)選地，IL-6 變體展不出人 IL-6 的至少大約80%、優(yōu)選至少大約90%、優(yōu)選至少大約95%的人IL-6受體結(jié)合活性。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，測(cè)定指示SIRS或敗血癥的至少一種額外標(biāo)志物或參數(shù)，這包括選自炎性標(biāo)志物例如CRP，另外的白介素例如IL-I和/或IL-8，原降鈣素(procalcitonin),白血細(xì)胞計(jì)數(shù),體溫,心率,呼吸速率的至少一種參數(shù),和/或?qū)Ω腥?優(yōu)選地，細(xì)菌和/或真菌感染)的診斷。
此外，除了上文明確提到的那些，本發(fā)明的方法還可包括其它步驟。例如，其它步驟可涉及樣品收集、樣品預(yù)處理或?qū)νㄟ^(guò)所述方法獲得的結(jié)果加以評(píng)價(jià)。本發(fā)明的方法還可用于對(duì)發(fā)展出或罹患SIRS進(jìn)行監(jiān)測(cè)、驗(yàn)證、亞分類(lèi)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估以及用于治療性監(jiān)測(cè)本發(fā)明的疾病。還考慮到，在優(yōu)選的實(shí)施方式中，除了步驟a)中提到的兩個(gè)之外，還可測(cè)定至少一種額外的標(biāo)志物或參數(shù)，優(yōu)選用于獲得除檢測(cè)或診斷SIRS或敗血癥之外的額外診斷信息的目的。此類(lèi)額外參數(shù)可例如是估計(jì)的腎小球?yàn)V過(guò)率、NGAL或肌酸酐水平，這允許額外診斷患者是否罹患受損的腎清除。所述方法可人工進(jìn)行和/或通過(guò)自動(dòng)化輔助進(jìn)行。優(yōu)選地，步驟(a)、(b)和/或(C)和全部或部分通過(guò)自動(dòng)化輔助進(jìn)行，例如通過(guò)用于步驟(a)中的測(cè)定的合適的機(jī)器人或感知裝備或用于步驟(b)和/(c)中的計(jì)算機(jī)實(shí)施的比較來(lái)輔助進(jìn)行。術(shù)語(yǔ)“樣品”指體液樣品、分離的細(xì)胞的樣品或來(lái)自組織或器官的樣品。體液樣品可通過(guò)公知技術(shù)獲得，其優(yōu)選地包括血液、血漿、血清、液體(liquor)或尿的樣品，更優(yōu)選地包括血液、血漿或血清的樣品。體液樣品優(yōu)選通過(guò)靜脈穿刺、動(dòng)脈穿刺或腦室穿刺獲得。組織或器官樣品可通過(guò)例如活組織檢查從任何組織或器官獲得?？赏ㄟ^(guò)分離技術(shù)(例如離 心或細(xì)胞分選)從體液或組織或器官獲得分離的細(xì)胞。優(yōu)選地,從表達(dá)或產(chǎn)生本文提到的肽的那些細(xì)胞、組織或器官獲得細(xì)胞、組織或器官的樣品。本發(fā)明的方法可涵蓋收集樣品的步驟，這任選地可以是侵入性的步驟?？赏ㄟ^(guò)侵入性的步驟，優(yōu)選地，最小侵入性的步驟，例如通過(guò)靜脈穿刺，來(lái)收集樣品。最小侵入性收集還涵蓋下述情況，其中通過(guò)使用針頭(刺血刀(Iancette))來(lái)收集樣品，當(dāng)將其應(yīng)用到皮膚、優(yōu)選是手指皮膚時(shí)，引起少量血外流，然后可收集血用于測(cè)定樣品中標(biāo)志物的量。優(yōu)選地，通過(guò)安全常規(guī)流程，優(yōu)選由無(wú)須具有高超醫(yī)療訓(xùn)練的人員以侵入性方式或最小侵入性方式收集樣品，并且，樣品收集優(yōu)選地對(duì)接受樣品收集的人來(lái)說(shuō)不造成顯著的健康風(fēng)險(xiǎn)。優(yōu)選地，本發(fā)明的方法是離體或體外方法。從患者獲得以短間隔分離的樣品。在本文中使用時(shí)，“短間隔”涵蓋從大約15分鐘至大約12小時(shí)、優(yōu)選從大約15分鐘至大約6小時(shí)、優(yōu)選從大約15分鐘至大約3小時(shí)、優(yōu)選從大約I小時(shí)至大約12小時(shí)、優(yōu)選從大約I小時(shí)至大約6小時(shí)、優(yōu)選從大約I小時(shí)至大約3小時(shí)的范圍的間隔。更優(yōu)選地，短間隔是大約15分鐘、優(yōu)選大約30分鐘、優(yōu)選大約I小時(shí)、優(yōu)選大約2小時(shí)、優(yōu)選大約3小時(shí)、優(yōu)選大約4小時(shí)、優(yōu)選大約5小時(shí)、優(yōu)選大約6小時(shí)的間隔。優(yōu)選地，在至多大約10天的時(shí)間段、優(yōu)選至多大約7天的時(shí)間段、優(yōu)選至多大約5天的時(shí)間段、優(yōu)選至多大約3天的時(shí)間段，從患者分離樣品。取決于患者的病況和病況發(fā)展，還可進(jìn)一步延長(zhǎng)樣品的分離和IL-6檢測(cè)，例如，如果患者發(fā)展出SIRS或敗血癥，則取樣可延伸至直到SIRS或敗血癥療法已成功完成或者甚至該時(shí)間點(diǎn)后數(shù)日。優(yōu)選地，在進(jìn)行治療前取樣至少大約一次、優(yōu)選至少大約兩次，以及在治療后取樣至少一次、優(yōu)選至少大約兩次。優(yōu)選地，治療是上文定義的侵入性治療。例如，在治療進(jìn)行前，獲取一個(gè)或兩個(gè)IL-6水平。在治療后，在例如3至10天的時(shí)間內(nèi)，以規(guī)律間隔(例如3-6小時(shí))取數(shù)次樣品，其中測(cè)定IL-6以及優(yōu)選地還有患者的臨床狀態(tài)。術(shù)語(yǔ)“檢測(cè)和診斷SIRS”在本文中使用時(shí)表示評(píng)估、鑒定、評(píng)價(jià)或分類(lèi)無(wú)癥狀患者是否罹患SIRS，優(yōu)選地，罹患敗血癥。
術(shù)語(yǔ)“檢測(cè)和診斷發(fā)展出或罹患SIRS的風(fēng)險(xiǎn)”表示涵蓋在無(wú)癥狀患者中預(yù)測(cè)在未來(lái)的界定的時(shí)間窗(預(yù)測(cè)窗)內(nèi)發(fā)展出或罹患SIRS (包括敗血癥)的風(fēng)險(xiǎn)。預(yù)測(cè)窗是這樣的間隔，其中受試者將根據(jù)預(yù)測(cè)的概率發(fā)展出SIRS或者任選地將死亡。然而，優(yōu)選地，預(yù)測(cè)窗是(i)本發(fā)明的方法已進(jìn)行之后或(ii)獲得了其中檢測(cè)到的IL-6水平高于參照水平的第一份樣品之后或(iii)接收患者之后或(iv)已獲得/分離IL-6的第一次基線(xiàn)水平之后或(V)已啟動(dòng)或終止治療(例如侵入性治療)之后或(vi)已分離了用于測(cè)定IL-6水平的第一份治療后樣品之后，至多大約20天，優(yōu)選地至多大約10天，優(yōu)選地至多大約7天，優(yōu)選地至多大約5天，優(yōu)選地至多大約5天，優(yōu)選地至多大約4天，優(yōu)選地至多大約3天，優(yōu)選地至多大約2天的間隔。優(yōu)選地，被鑒定為處于發(fā)展出或罹患SIRS的風(fēng)險(xiǎn)的患者具有發(fā)展出或罹患SIRS的高概率。優(yōu)選地，高概率是至少大約30%，優(yōu)選至少大約40%，優(yōu)選至少大約50%，優(yōu)選 至少大約60 %，優(yōu)選至少大約70 %，優(yōu)選至少大約80 %，優(yōu)選至少大約90 %，優(yōu)選至少大約95%。任選地，發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的高概率涵蓋100%的概率，即，患者將發(fā)展出或確實(shí)罹患SIRS或敗血癥。備選地，患者具有罹患或發(fā)展出SIRS或敗血癥的低概率。優(yōu)選地，低概率是至多大約或低于大約30%，優(yōu)選至多大約20%，優(yōu)選至多大約10%，優(yōu)選至多大約5%。任選地，發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的低概率涵蓋0%的概率，S卩，患者將不會(huì)發(fā)展出或者并不罹患SIRS或敗血癥。用于測(cè)定罹患或發(fā)展出SIRS或敗血癥的％風(fēng)險(xiǎn)的方法是通常已知的。優(yōu)選地，在上文提到的預(yù)測(cè)窗內(nèi)進(jìn)行％風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)。優(yōu)選地，發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)程度與檢測(cè)的IL-6水平高于參照值的程度相關(guān)。優(yōu)選地，在檢測(cè)到的IL-6水平低于參照水平的情況下，發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)低。優(yōu)選地，在檢測(cè)到的IL-6水平等于或高于參照值的情況下，發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)高。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的，此類(lèi)評(píng)估通常不旨在對(duì)100%待分析的受試者來(lái)說(shuō)都是正確的。但是該術(shù)語(yǔ)需要評(píng)估對(duì)于待分析受試者中的統(tǒng)計(jì)顯著部分來(lái)說(shuō)有效。一部分是否統(tǒng)計(jì)顯著可由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用多種公知統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)工具來(lái)確定而不費(fèi)周折，所述評(píng)價(jià)工具例如，測(cè)定置信區(qū)間，P值測(cè)定，學(xué)生t-檢驗(yàn),Mann-Whitney檢驗(yàn)等等。細(xì)節(jié)可見(jiàn)Dowdy and Wearden,Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983。優(yōu)選的置信區(qū)間是至少90 %，至少95 %，至少97 %，至少98 %或至少99 %。p值優(yōu)選是0. I、0. 05,0. 01,0. 005或0. 0001。優(yōu)選地，本發(fā)明設(shè)想的概率允許預(yù)測(cè)對(duì)于給定的受試者群體中優(yōu)選至少60%、至少70%、至少80%或至少90%來(lái)說(shuō)是正確的。根據(jù)本發(fā)明測(cè)定IL-6或其變體的水平，或任何其它蛋白性的生物標(biāo)志物的水平涉及測(cè)量量或濃度，優(yōu)選地，半定量或定量進(jìn)行。測(cè)量可直接或間接進(jìn)行。直接測(cè)量涉及基于從肽或多肽自身獲得的信號(hào)及與樣品中存在的肽分子的數(shù)目直接相關(guān)的信號(hào)的強(qiáng)度來(lái)測(cè)量肽或多肽的量或濃度。例如可通過(guò)測(cè)量肽或多肽的特異性物理或化學(xué)性質(zhì)的強(qiáng)度值，來(lái)獲得此類(lèi)信號(hào)(一些時(shí)候在本文中稱(chēng)為強(qiáng)度信號(hào))。間接測(cè)量包括測(cè)量從次級(jí)組分(即不是肽或多肽自身的組分)或生物讀出系統(tǒng)獲得的信號(hào)，例如，可測(cè)量的細(xì)胞應(yīng)答、配體、標(biāo)記或酶促反應(yīng)產(chǎn)物。
根據(jù)本發(fā)明，可通過(guò)所有已知的用于測(cè)定樣品中肽的量的工具，來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)IL-6肽或多肽的量的測(cè)定。所述工具包括免疫測(cè)定設(shè)備和方法，其可在多種夾心式(sandwich)、競(jìng)爭(zhēng)性或其它測(cè)定形式中利用經(jīng)標(biāo)記的分子。所述測(cè)定將顯示出指示肽或多肽存在或不存在的信號(hào)。此外，信號(hào)強(qiáng)度可優(yōu)選地與樣品中存在的多肽的量直接或間接(例如成反比)相關(guān)。其它合適的方法包括測(cè)量肽或多肽特異性的物理或化學(xué)性質(zhì)，例如其準(zhǔn)確的分子質(zhì)量或NMR譜。所述方法優(yōu)選包括生物傳感器、與免疫測(cè)定偶聯(lián)的光學(xué)設(shè)備、生物芯片、分析設(shè)備例如質(zhì)譜儀、NMR分析儀或色譜設(shè)備。此外，方法包括基于微板ELISA的方法、全自動(dòng)或機(jī)器人免疫測(cè)定(例如在Roche' s ElecsysTM分析儀上可獲得)、CBA (酶促鈷結(jié)合測(cè)定，例如在Roche-HitachiTM分析儀上可獲得)和乳膠凝聚測(cè)定(例如在Roche-HitachiTM分析儀上可獲得)、同質(zhì)和異質(zhì)免疫測(cè)定、競(jìng)爭(zhēng)性和非競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定。優(yōu)選地，測(cè)定IL-6肽或多肽的量包括下述步驟(a)將能引發(fā)細(xì)胞應(yīng)答(其強(qiáng)度指示肽或多肽的量)的細(xì)胞與所述肽或多肽接觸足夠的時(shí)間段，(b)測(cè)量細(xì)胞應(yīng)答。為測(cè)量細(xì)胞應(yīng)答，優(yōu)選地，將樣品或經(jīng)處理的樣品添加至細(xì)胞培養(yǎng)物，并且測(cè)量?jī)?nèi)部或外部的細(xì)胞應(yīng)答。細(xì)胞應(yīng)答可包括可測(cè)量到的報(bào)道基因的表達(dá)或者物質(zhì)(例如肽、多肽或小分子)的分泌。表達(dá)或物質(zhì)將生成與肽或多肽的量相關(guān)聯(lián)的強(qiáng)度信號(hào)。
測(cè)定IL-6肽或多肽的量也優(yōu)選地包括下述步驟測(cè)量可從樣品中(優(yōu)選地，選自血液、血清、血漿或液體的樣品中)的肽或多肽獲得的特異性強(qiáng)度信號(hào)。如上文所述，此類(lèi)信號(hào)可以是以在對(duì)于肽或多肽特異性的質(zhì)譜或NMR譜中觀察到的、對(duì)于肽或多肽特異性的m/z變量觀察到的信號(hào)強(qiáng)度。測(cè)定IL-6肽或多肽的量可優(yōu)選包括下述步驟(a)將肽與特異性配體接觸，(b)(任選地)移除未結(jié)合的配體，(C)測(cè)量結(jié)合的配體的量。結(jié)合的配體將生成強(qiáng)度信號(hào)。根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合包括共價(jià)和非共價(jià)結(jié)合兩者。根據(jù)本發(fā)明的配體可以是與本文描述的肽或多肽結(jié)合的任何化合物，例如肽、多肽、核酸，或小分子。優(yōu)選的配體包括抗體、核酸、肽或多肽，例如包含11-6肽的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的肽或多肽及其片段的受體或結(jié)合搭檔，以及適體，例如核酸或肽適體。制備此類(lèi)配體的方法是本領(lǐng)域公知的。例如，供應(yīng)商也提供合適的抗體或適體的鑒定和生產(chǎn)。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉開(kāi)發(fā)具有更高的親和性或特異性的此類(lèi)配體的衍生物的方法。例如，可向核酸、肽或多肽中引入隨機(jī)突變。然后可根據(jù)本領(lǐng)域已知的篩選流程(例如噬菌體展示)以結(jié)合來(lái)測(cè)試這些衍生物。用于檢測(cè)IL-6的工具是本領(lǐng)域中通常已知的，并且優(yōu)選包括抗IL-6抗體，包括多克隆和單克隆抗體及其片段，例如Fv、Fab和F (ab) 2片段，它們能結(jié)合IL-6抗原或半抗原。用于檢測(cè)本發(fā)明的IL-6的工具還包括單鏈抗體、嵌合的、人源化雜交抗體，其中表現(xiàn)出想要的抗原特異性的非人供體抗體的氨基酸序列與人受體抗體的序列組合。還包括來(lái)自哺乳動(dòng)物物種的抗IL-6抗體，優(yōu)選地，選自人、大鼠、小鼠、山羊、綿羊、牛和駱駝的抗體。優(yōu)選地，抗IL-6抗體是上文描述的M-BE8或M-23C7抗IL-6抗體，或是與由M-BE8和/或M-23C7抗體識(shí)別的IL-6表位結(jié)合的抗體。供體序列將通常至少包括供體的抗原結(jié)合氨基酸殘基，但也可包含供體抗體的其它結(jié)構(gòu)和/或功能相關(guān)的氨基酸殘基。可通過(guò)本領(lǐng)域公知的若干方法來(lái)制備此類(lèi)雜交體。優(yōu)選地，配體或試劑與IL-6肽或多肽特異性地結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明的特異性結(jié)合表示配體或試劑應(yīng)當(dāng)基本上不與待分析的樣品中存在的另外的肽、多肽或物質(zhì)結(jié)合(“交叉反應(yīng)”)。優(yōu)選地，特異性結(jié)合的IL-6肽或多肽應(yīng)當(dāng)以比任何其它相關(guān)肽或多肽高至少3倍、更優(yōu)選高至少10倍以及進(jìn)一步更優(yōu)選高至少50倍的親和性結(jié)合。非特異性結(jié)合可以是可忍耐的，如果其仍可被清楚地區(qū)分和測(cè)量，例如根據(jù)其在Western雜交印跡上的尺寸，或者通過(guò)其在樣品中相對(duì)更高的豐度來(lái)區(qū)分和測(cè)量?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法來(lái)測(cè)量配體的結(jié)合。優(yōu)選地，所述方法是半定量或定量的。合適的方法被描述于下文中。首先，可直接測(cè)量配體的結(jié)合，例如通過(guò)NMR或表面等離子共振來(lái)進(jìn)行。第二，如果配體還用作為目標(biāo)肽或多肽的酶促活性的底物，則可測(cè)量酶促反應(yīng)的產(chǎn)物(例如可通過(guò)測(cè)量被切割的底物的量(例如在Western雜交印跡上)來(lái)測(cè)量蛋白酶的量)。備選地，配體可自身表現(xiàn)出酶促性質(zhì)，并且可將“配體/肽或多肽”復(fù)合體或被肽或多肽結(jié)合的配體分別與合適的底物接觸，這允許通過(guò)生成強(qiáng)度信號(hào)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。為測(cè)量酶促反應(yīng)的產(chǎn)物，優(yōu)選地，底物的量是飽和的。還可在反應(yīng)前用可檢測(cè)的標(biāo)記對(duì)底物進(jìn)行標(biāo)記。優(yōu)選地，將樣品與底物接觸足夠的時(shí)間。足夠的時(shí)間表示產(chǎn)生可檢測(cè)(優(yōu)選可測(cè) 量)的量的產(chǎn)物所必需的時(shí)間?？蓽y(cè)量給定(例如，可檢測(cè)到的)量的產(chǎn)物出現(xiàn)所必需的時(shí)間代替測(cè)量產(chǎn)物的量。第三，可將配體與標(biāo)記共價(jià)或非共價(jià)偶聯(lián)，這允許對(duì)配體的檢測(cè)和測(cè)量。標(biāo)記可通過(guò)直接或間接方法完成。直接標(biāo)記涉及將標(biāo)記直接(共價(jià)或非共價(jià))偶聯(lián)至配體。間接標(biāo)記涉及二級(jí)配體與第一配體的結(jié)合(共價(jià)或非共價(jià))。二級(jí)配體應(yīng)當(dāng)與第一配體特異性地結(jié)合。所述二級(jí)配體可與合適的標(biāo)記偶聯(lián)和/或可以是與二級(jí)配體結(jié)合的三級(jí)配體的靶(受體)。二級(jí)、三級(jí)或者甚至更高級(jí)的配體的用途通常被用于增加信號(hào)。合適的二級(jí)和更高級(jí)配體可包括抗體、第二抗體和公知的鏈霉親和素-生物素系統(tǒng)(VectorLaboratories,Inc.)。也可用本領(lǐng)域已知的一種或多種標(biāo)簽來(lái)標(biāo)簽化配體或底物。此類(lèi)標(biāo)簽于是可以是更高級(jí)配體的靶。合適的標(biāo)簽包括生物素、地高辛、His標(biāo)簽、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、FLAG、GFP、myc標(biāo)簽、A型流感病毒血球凝集素(HA)、麥芽糖結(jié)合蛋白等等。在肽或多肽的情況下，標(biāo)簽優(yōu)選位于N-末端和/或C-末端。合適的標(biāo)記是可通過(guò)合適的檢測(cè)方法檢測(cè)到的任何標(biāo)記。典型的標(biāo)記包括金顆粒、乳膠珠、9,10-二氫化n丫唳(acridan)酯、魯米諾、釕、酶促活性標(biāo)記、放射活性標(biāo)記、磁性標(biāo)記(例如“磁珠”，包括順磁性和超順磁性標(biāo)記)，和熒光標(biāo)記。酶促活性標(biāo)記包括，例如，辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、3 -半乳糖苷酶、熒光素酶及其衍生物。用于檢測(cè)的合適底物包括二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、3，3' _5，5'-四甲基聯(lián)苯胺、NBT-BCIP (4-硝基藍(lán)四唑氯化物和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽，可作為預(yù)制儲(chǔ)液從 Roche Diagnostics 獲得)、CDP-Star (Amersham Biosciences)、ECF (AmershamBiosciences)。合適的酶-底物組合可造成有顏色的反應(yīng)產(chǎn)物、熒光或化學(xué)發(fā)光，它們可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法來(lái)測(cè)量(例如使用光敏感膠片或合適的照相系統(tǒng))。關(guān)于測(cè)量酶促反應(yīng)，類(lèi)似地應(yīng)用上文給出的標(biāo)準(zhǔn)。典型的熒光標(biāo)記包括熒光蛋白(例如GFP及其衍生物)、Cy3、Cy5、德克薩斯紅、熒光素和Alexa染料(例如Alexa 568)。其它熒光標(biāo)記例如可從Molecular Probes (Oregon)獲得。還包括了量子點(diǎn)(quantum dots)作為突光標(biāo)記的用途。典型的放射活性標(biāo)記包括35S、125I、32P、33P等等。可通過(guò)任何已知并且合適的方法來(lái)檢測(cè)放射活性標(biāo)記，例如光敏感膠片或磷成像儀。根據(jù)本發(fā)明的合適測(cè)量方法還包括沉淀(特別地免疫沉淀)、電化學(xué)發(fā)光(電生成的化學(xué)發(fā)光)、RIA(放射免疫測(cè)定)、ELISA (酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)、夾心式酶免疫測(cè)試、電化學(xué)發(fā)光夾心式免疫測(cè)定(ECLIA)、解離增強(qiáng)的鑭系氟免疫測(cè)定(DELFIA)、閃爍臨近測(cè)定(SPA)、比濁法、濁度法、乳膠增強(qiáng)的比濁法或濁度法、或固相免疫測(cè)試?？蓡为?dú)使用，或與上文所述的標(biāo)記或其它檢測(cè)方法組合使用本領(lǐng)域已知的其它方法(例如凝膠電泳、2D凝膠電泳、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE) ^Western雜交印跡和質(zhì)譜)。更優(yōu)選地，通過(guò)質(zhì)譜方法，優(yōu)選通過(guò)同位素稀釋微-HPLC-串聯(lián)質(zhì)譜方法，優(yōu)選通過(guò)實(shí)施例中和Kobold U等(Clin Chem 2008 ；54 =1584-6)中描述的方法，來(lái)測(cè)定IL-6的量。
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還可優(yōu)選地按照下文所述來(lái)測(cè)定IL-6肽或多肽的量(a)將包含上文指明的針對(duì)肽或多肽的配體的固體支持物與包含肽或多肽的樣品接觸，以及(b)測(cè)量與支持物結(jié)合的肽或多肽的量。優(yōu)選地選自核酸、肽、多肽、抗體和適體的配體優(yōu)選以固定化的形式存在于固體支持物上。用于生產(chǎn)固體支持物的材料是本領(lǐng)域公知的，并且尤其包括可商購(gòu)的柱材料、聚苯乙烯珠、乳膠珠、磁珠、膠體金屬顆粒、玻璃和/或硅芯片和表面、硝酸纖維素條帶、膜、片層、duracytes、反應(yīng)槽的孔和壁、塑料管等等。配體或試劑可與很多不同的運(yùn)載體結(jié)合。公知運(yùn)載體的實(shí)例包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、葡聚糖、尼龍、直鏈淀粉、天然和經(jīng)修飾的纖維素、聚丙烯酰胺、瓊脂糖和磁鐵礦。就本發(fā)明的目的而言，運(yùn)載體的本質(zhì)可以是可溶或不可溶的。用于裝置/固定(fixing/immobilizing)所述配體的合適方法是公知的，其包括但不限于離子、疏水、共價(jià)相互作用等等。還可使用“懸浮液陣列”作為根據(jù)本發(fā)明的陣列(Nolan 2002，Trends Biotechnol. 20(1) :9-12)。在此類(lèi)懸浮液陣列中，運(yùn)載體(例如微珠或微球)存在于懸浮液中。陣列由可能經(jīng)標(biāo)記，攜帶不同配體的不同微珠或微球構(gòu)成。例如基于固相化學(xué)和光不穩(wěn)定的保護(hù)基團(tuán)的生產(chǎn)此類(lèi)陣列的方法是通常已知的(US 5，744，305)。術(shù)語(yǔ)“約”在本文中使用時(shí)涵蓋相對(duì)于特定的值、量、濃度、水平等等而言+和-20%的范圍，例如，“約100”的值指示意為涵蓋100+/-20%的數(shù)值范圍的值，S卩，從80至120的范圍內(nèi)的值。優(yōu)選地，術(shù)語(yǔ)“約”涵蓋相對(duì)于特定的值、量、濃度、水平等等而言+和-10%的范圍，最優(yōu)選地，相對(duì)于特定的值、量、濃度、水平等等而言+和-5%的范圍。術(shù)語(yǔ)“比較”在本文中使用時(shí)涵蓋將待分析的樣品包含的IL-6肽或多肽的水平與本說(shuō)明書(shū)其它地方指出的合適的參照來(lái)源的水平相比較。應(yīng)當(dāng)理解，在本文中使用時(shí)，比較指對(duì)相應(yīng)參數(shù)或值的比較，例如，將絕對(duì)量與絕對(duì)參照水平相比較，而將濃度與參照濃度相t匕，或者將從測(cè)試樣品獲得的強(qiáng)度信號(hào)與參照樣品的相同類(lèi)型的強(qiáng)度信號(hào)相比較。本發(fā)明方法的步驟(b)中提到的比較可人工進(jìn)行或計(jì)算機(jī)輔助進(jìn)行。對(duì)于計(jì)算機(jī)輔助的比較，可通過(guò)計(jì)算機(jī)程序，將測(cè)定的水平的值與儲(chǔ)存于數(shù)據(jù)庫(kù)中的對(duì)應(yīng)于合適的參照的值相比較。計(jì)算機(jī)程序還可評(píng)價(jià)比較的結(jié)果，即，自動(dòng)提供合適的輸出形式的想要的評(píng)估。基于對(duì)步驟a)中測(cè)定的水平和參照水平的比較，確定患者中SIRS的診斷。因此，如此選擇參照水平使得被比較的水平中的差異或相似性允許將受試者劃分為SIRS或不罹患SIRS。因此，術(shù)語(yǔ)“參照水平”指定義截?cái)嘀档牧?、濃度或值。?dāng)與展示出低于截?cái)嘀档臏y(cè)定的量、水平或參數(shù)值的患者比較時(shí)，高于截?cái)嘀档牧俊舛然騾?shù)值導(dǎo)致不同的診斷。因此，通過(guò)將實(shí)際測(cè)定的IL-6的量、濃度或參數(shù)值與各自的截?cái)嘀颠M(jìn)行比較，能夠診斷或檢測(cè)患者發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)然，可應(yīng)用于個(gè)體受試者的參照水平可取決于多種生理參數(shù)例如年齡、性別、亞種群、醇攝入、近來(lái)的感染以及本文提到的用于測(cè)定多肽或肽的工具而變動(dòng)?？赏ㄟ^(guò)本發(fā)明的方法與測(cè)試樣品一起(即，同時(shí)或隨后)，從待分析的參照樣品來(lái)測(cè)定合適的參照水平。在實(shí)施例中驗(yàn)證本發(fā)明的參照水平。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的，此類(lèi)診斷評(píng)估通常不旨在對(duì)待鑒定的全部患者(即100%)來(lái)說(shuō)都是正確的。但是該術(shù)語(yǔ)要求能夠鑒定患者中統(tǒng)計(jì)上顯著的部分(即，群體研究中的群體)。一部分是否統(tǒng)計(jì)顯著可由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用多種公知統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)工具來(lái)確定而不費(fèi)周折，所述評(píng)價(jià)工具例如，測(cè)定置信區(qū)間，P值測(cè)定，學(xué)生t-檢驗(yàn),Mann-Whitney檢驗(yàn)等等。細(xì)節(jié)可見(jiàn) Dowdy and Wearden, Statistics for Resea rch, John Wiley & Sons,New York 1983。優(yōu)選的置信區(qū)間是至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。P值優(yōu)選是0. 1,0. 05,0. 01,0. 005或0. 0001。更優(yōu)選地，通過(guò)本發(fā)明的方法可正確地鑒定患者群體中的至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。一般而言，為根據(jù)本發(fā)明的各實(shí)施方式測(cè)定各水平以允許建立想要的診斷，(“閾值”、“參照水平”)，在合適的患者組中測(cè)定一種或多種各自的肽的量/水平或量比率。如之前指出的，優(yōu)選通過(guò)將在給定患者(優(yōu)選在受試者患者)中較早測(cè)定的IL-6水平(例如基線(xiàn)IL-6水平)乘以本文其它地方定義的因子(例如至少大約50或至少大約100、或至少大約500或至少大約1000的因子)來(lái)確定參照值。例如，基于回溯性臨床研究，如實(shí)施例中描述的那樣，其中對(duì)結(jié)果(沒(méi)有SIRS對(duì)SIRS對(duì)敗血癥)進(jìn)行分析并與患者中IL-6水平隨時(shí)間的改變相比較，可容易地統(tǒng)計(jì)學(xué)核實(shí)應(yīng)當(dāng)將受試者患者的基線(xiàn)IL-6水平乘以哪個(gè)“因子”，來(lái)建立與發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的特定風(fēng)險(xiǎn)概率相關(guān)的參照值。優(yōu)選地，參照水平是通過(guò)將IL-6基線(xiàn)水平乘以至少大約50的因子、優(yōu)選乘以至少大約100的因子、更優(yōu)選乘以至少大約500的因子、最優(yōu)選乘以至少大約1000的因子來(lái)計(jì)算的。例如，如果出現(xiàn)在醫(yī)師面前或醫(yī)院的無(wú)癥狀患者具有10pg/ml的基線(xiàn)IL-6水平，則計(jì)算的參照水平優(yōu)選為500pg/ml (50倍增加)、優(yōu)選lng/ml (100倍增加)、優(yōu)選5ng/ml (500倍增加)或優(yōu)選IOng (1000倍增加)。在此類(lèi)患者中，在患者接受(例如侵入性)治療(例如重大手術(shù))后檢測(cè)的IL-6的水平高于指示的參照水平則表明患者處于發(fā)展出或罹患SIRS的高風(fēng)險(xiǎn)中。在本文中使用時(shí)，“基線(xiàn)水平”涵蓋至少一種下述IL-6水平，所述水平是在(i)當(dāng)患者出現(xiàn)在醫(yī)師、急救單元、醫(yī)院、重癥護(hù)理單元、外科醫(yī)生或麻醉師處時(shí)，(ii)療法啟動(dòng)之前，例如手術(shù)之前，(iii)療法期間，例如手術(shù)期間，和/或Qv)治療完成之后,例如手術(shù)完成之后，獲得的。該術(shù)語(yǔ)還涵蓋在患者接受(例如侵入性)治療后測(cè)定的基線(xiàn)水平，例如在治療后大約24小時(shí)內(nèi)，優(yōu)選大約15小時(shí)內(nèi)，優(yōu)選大約12小時(shí)內(nèi)，優(yōu)選大約6小時(shí)內(nèi)。備選地，基線(xiàn)水平是通過(guò)測(cè)定采集的樣品的中位數(shù)或平均IL-6水平來(lái)計(jì)算的，所述樣品至多但不包括相對(duì)所述中位數(shù)或平均IL-6水平而言其中IL-6水平增加了多于大約20倍、多于大約30倍、多于大約50倍、多于大約50倍、多于大約100倍或者多于大約500倍的樣品?？墒褂糜行У姆治龇椒ǎㄟ^(guò)測(cè)定各參數(shù)，優(yōu)選通過(guò)測(cè)量IL-6的水平，來(lái)進(jìn)行對(duì)罹患或發(fā)展出SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)的診斷和檢測(cè)。通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法收集并分析獲得的結(jié)果。
任選地，根據(jù)罹患或正處于罹患或發(fā)展出疾病的風(fēng)險(xiǎn)的期望概率，來(lái)建立參照值。例如，下述可能是有用的選擇將與健康和/或非健康患者集合中第60、70、80、90、95或甚至99百分位數(shù)的基線(xiàn)水平相乘的中位因子，以建立參照水平。用作為閾值的優(yōu)選參照水平可源于正常的上限(ULN)，即在種群中發(fā)現(xiàn)的生理量的上限。針對(duì)給定受試者種群的ULN可通過(guò)多種公知技術(shù)來(lái)測(cè)定。合適的技術(shù)可以是測(cè)定待在本發(fā)明的方法中測(cè)定的肽或多肽的量的種群中的中位數(shù)?？山⒑万?yàn)證診斷標(biāo)志物的參照水平，并且可簡(jiǎn)單地將患者樣品中標(biāo)志物的水平與參照水平相比。診斷和/或預(yù)后測(cè)試的靈敏性和特異性不僅取決于測(cè)試的分析“品質(zhì)”，它們還取決于對(duì)構(gòu)成異常結(jié)果的定義。實(shí)踐中，一般地，通過(guò)將變量的值對(duì)其在“正?！焙汀凹膊　比后w中的相對(duì)頻率作圖，來(lái)計(jì)算接收者工作特征(Receiver OperatingCharacteristic curves)曲線(xiàn)或“ROC”曲線(xiàn)。對(duì)于本發(fā)明的任何特別的參數(shù)而言,具有或沒(méi)有疾病的受試者的標(biāo)志物水平分布將可能重疊。在此類(lèi)情況下，測(cè)試并不能以100%的準(zhǔn)確性將正常與疾病絕對(duì)區(qū)分開(kāi)，重疊的區(qū)域表示測(cè)試在此處測(cè)試無(wú)法區(qū)分正常與疾病， 或者罹患或發(fā)展出疾病的高風(fēng)險(xiǎn)與低風(fēng)險(xiǎn)。選擇閾值(截?cái)嘀?，參照水?，高于其(或低于其，取決于標(biāo)志物如何隨疾病改變)時(shí)認(rèn)為測(cè)試是異常的，低于其時(shí)認(rèn)為測(cè)試是正常的。ROC曲線(xiàn)下的面積是感知的測(cè)量將允許正確鑒定或預(yù)測(cè)病況發(fā)作或發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)的概率的量度。甚至可在當(dāng)測(cè)試結(jié)果不一定給出準(zhǔn)確數(shù)字時(shí)使用ROC曲線(xiàn)。只要可對(duì)結(jié)果進(jìn)行排序，即可創(chuàng)造ROC曲線(xiàn)。例如，可根據(jù)疾病程度(例如I =低，2 =正常，以及3 =高)或罹患或發(fā)展出疾病的概率(例如I =低，2 =正常，以及3 =高)對(duì)“疾病”樣品的測(cè)試結(jié)果排序。可將該排序與“正?！比后w中的結(jié)果關(guān)聯(lián)，并且創(chuàng)造ROC曲線(xiàn)。這些方法是本領(lǐng)域公知的。見(jiàn)例如 Hanley 等，Radiology 1982 ； 143 :29_36。在某些實(shí)施方式中，選擇標(biāo)志物和/或標(biāo)志物小組，以表現(xiàn)出與至少大約70%的特異性、更優(yōu)選至少大約80%的特異性、進(jìn)一步更優(yōu)選至少大約85%的特異性、仍更優(yōu)選至少大約90%的特異性以及最優(yōu)選至少大約95%的特異性組合的至少大約70%的靈敏性、更優(yōu)選至少大約80%的靈敏性、進(jìn)一步更優(yōu)選至少大約85%的靈敏性、仍更優(yōu)選至少大約90%的靈敏性以及最優(yōu)選至少大約95%的靈敏性。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，靈敏性和特異性為至少大約75%、更優(yōu)選至少大約80%、進(jìn)一步更優(yōu)選至少大約85%、仍更優(yōu)選至少大約90%以及最優(yōu)選至少大約95%。在其它實(shí)施方式中，使用陽(yáng)性似然比、陰性似然比或優(yōu)勢(shì)比(odds ratio)作為對(duì)測(cè)試預(yù)測(cè)風(fēng)險(xiǎn)或診斷疾病的能力的量度。在陽(yáng)性似然比的情況下，I的值指示在“疾病”和“對(duì)照”兩組中的受試者中陽(yáng)性結(jié)果是等同可能的；高于I的值指示疾病組中更可能有陽(yáng)性結(jié)果；低于I的值指示對(duì)照組中更可能有陽(yáng)性結(jié)果。在陰性似然比的情況下，I的值指示在“疾病”和“對(duì)照”兩組中的受試者中陰性結(jié)果是等同可能的；高于I的值指示測(cè)試組中更可能有陰性結(jié)果；低于I的值指示對(duì)照組中更可能有陰性結(jié)果。在某些優(yōu)選的實(shí)施方式中，標(biāo)志物和/或標(biāo)志物小組優(yōu)選被選擇為表現(xiàn)出至少大約I. 5或更高或者大約0. 67或更低，更優(yōu)選地，至少大約2或更高或者大約0. 5或更低，仍更優(yōu)選地，至少大約5或更高或者大約0. 2或更低，進(jìn)一步更優(yōu)選地，至少大約10或更高或者大約0. I或更低，以及最優(yōu)選地，至少大約20或更高或者大約0. 05或更低的陽(yáng)性或陰性似然比。在本文上下文中，術(shù)語(yǔ)“大約”表示給定測(cè)量結(jié)果的+/-5%。
在優(yōu)勢(shì)比的情況下，I的值指示在“疾病”和“對(duì)照”兩組中的受試者中陽(yáng)性結(jié)果是等同可能的；高于I的值指示疾病組中更可能有陽(yáng)性結(jié)果；低于I的值指示對(duì)照組中更可能有陽(yáng)性結(jié)果。在某些優(yōu)選的實(shí)施方式中，標(biāo)志物和/或標(biāo)志物小組優(yōu)選被選擇為表現(xiàn)出至少大約2或更高或者大約0. 5或更低，更優(yōu)選地，至少大約3或更高或者大約0. 33或更低，仍更優(yōu)選地，至少大約4或更高或者大約0. 25或更低，進(jìn)一步更優(yōu)選地，至少大約5或更高或者大約0. 2或更低，以及最優(yōu)選地，至少大約10或更高或者大約0. I或更低的優(yōu)勢(shì)比。在本文上下文中，術(shù)語(yǔ)“大約”表示給定測(cè)量結(jié)果的+/-5 %。小組可包含至少一種額外的標(biāo)志物；疾病的特異性標(biāo)志物(例如，在細(xì)菌感染但不在其它疾病狀態(tài)中增加或減少的標(biāo)志物)和/或非特異性標(biāo)志物(例如，無(wú)關(guān)誘因，由于炎癥而增加或減少的標(biāo)志物；無(wú)關(guān)誘因，由于內(nèi)穩(wěn)態(tài)改變而增加或減少的標(biāo)志物等等)兩者。雖然某些標(biāo)志物在本文描述的方法中可能并非個(gè)體決定性的，但改變的特別的“指紋”圖式可實(shí)際作為疾病狀態(tài)的特異性指示物。如上文所述，改變圖式可從單份樣品獲得，或者可任選地考慮小組一個(gè)或多個(gè)成員中的時(shí)間的改變(或小組應(yīng)答值的時(shí)間的改變)。在本發(fā)明方法的一種優(yōu)選實(shí)施方式中， i)步驟a)中測(cè)定的IL-6或其變體的水平處于或高于參照水平指示患者處于罹患或發(fā)展出SIRS的高風(fēng)險(xiǎn)中；以及ii)步驟a)中測(cè)定的IL-6或其變體的水平低于參照水平指示患者處于罹患或發(fā)展出SIRS的低風(fēng)險(xiǎn)。已觀察到，IL-6濃度在無(wú)癥狀患者中顯著不同。例如，下述因子對(duì)該個(gè)體間差異有貢獻(xiàn)近來(lái)的醇消耗、身體鍛煉、壓力、近來(lái)的感染史、受傷和處于急性高血糖癥。因此，在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方式中，基于患者逐個(gè)確定IL-6參照水平。優(yōu)選地，密切監(jiān)測(cè)展示出高于對(duì)照水平的IL-6水平的患者SIRS或敗血癥的臨床征兆和癥狀的發(fā)作。更優(yōu)選地，對(duì)患者進(jìn)行下述參數(shù)的監(jiān)測(cè)IL-6水平，白血細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)和測(cè)定未成熟白細(xì)胞形式，體溫，心率，呼吸速率，收集來(lái)自引流物(drainages)、血清、氣管支氣管分泌物和尿的微生物標(biāo)本以及每日胸部X線(xiàn)照相。確保通過(guò)超聲和CT-掃描進(jìn)行的控制內(nèi)窺鏡和放射學(xué)檢查。更優(yōu)選地，按照下文所述對(duì)患者進(jìn)行治療啟動(dòng)廣譜抗生素治療、抗真菌治療。在有懷疑的情況下，自由安排重做手術(shù)。在本發(fā)明的另一方面，提供了監(jiān)測(cè)無(wú)癥狀患者發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下述步驟a)在來(lái)自患者的樣品中測(cè)定IL-6或其變體的水平；b)將步驟a)中測(cè)定的IL-6或其變體的水平與參照水平相比較；以及c)基于步驟c)中的比較，針對(duì)患者推薦、決定、啟動(dòng)、繼續(xù)、調(diào)節(jié)或停止SIRS或敗血癥療法。上述監(jiān)測(cè)的診斷和治療結(jié)果包括來(lái)自血清、引流物、氣管支氣管分泌物和尿的微生物標(biāo)本，內(nèi)窺鏡控制，放射學(xué)顯影流程如超聲、胸部X線(xiàn)照相和CT-掃描，啟動(dòng)廣譜抗生素治療或?qū)F(xiàn)有抗生素治療改變?yōu)楦行У闹委?，抗真菌治療。在有懷疑的情況下，自由安排重做手術(shù)。在IL-6或其變體水平高于參照水平的情況下，對(duì)樣品或額外收集的樣品進(jìn)行測(cè)定以鑒定出樣品中含有的感染生物(例如細(xì)菌、真菌等等)。此類(lèi)測(cè)定是本領(lǐng)域通常已知的，并且與對(duì)敗血癥的診斷相關(guān)。在本發(fā)明的另一方面，提供了在無(wú)癥狀患者中預(yù)測(cè)死亡風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下述步驟a)在來(lái)自患者的樣品中測(cè)定IL-6或其變體的水平；b)將步驟a)中測(cè)定的IL-6或其變體的水平與參照水平相比較；c)基于步驟b)中的比較，針對(duì)患者預(yù)測(cè)死亡風(fēng)險(xiǎn)。除非有不同說(shuō)明，以上關(guān)于檢測(cè)或診斷罹患或發(fā)展出SIRS的風(fēng)險(xiǎn)的方法所描述的定義和優(yōu)選的實(shí)施方式經(jīng)必要修正后還可應(yīng)用于本發(fā)明的本方面。
根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提供了適用于檢測(cè)或診斷罹患或發(fā)展出SIRS的風(fēng)險(xiǎn)的設(shè)備，優(yōu)選地，根據(jù)上文所述方法來(lái)檢測(cè)或診斷，所述設(shè)備包含a)第一分析單元，其包含針對(duì)IL-6或其變體的檢測(cè)工具，其中所述分析單元適用于測(cè)定通過(guò)檢測(cè)工具檢測(cè)的IL-6的水平；b)包含計(jì)算機(jī)的評(píng)價(jià)單元，所述計(jì)算機(jī)包含實(shí)際嵌入的計(jì)算機(jī)程序代碼，用于比較從第一分析單元獲得的測(cè)定的量和包含上文說(shuō)明的相應(yīng)參照水平的合適數(shù)據(jù)庫(kù)；優(yōu)選地，第一分析單元以及優(yōu)選還有評(píng)價(jià)單元互相有效連接。優(yōu)選地，設(shè)備還包含基于患者罹患或發(fā)展出SIRS或敗血癥的診斷或風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的、用于輸出所需的診斷和治療和/或預(yù)防的工具。更優(yōu)選地，設(shè)備還包含用于輸出進(jìn)展和/或?qū)IRS或敗血癥的治療和/或療法的應(yīng)答的工具。根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提供了適用于進(jìn)行上文所述的方法的試劑盒，所述試劑盒包含用于測(cè)定IL-6或其變體的水平的工具；用于比較IL-6或其變體的測(cè)定的水平和參照水平的工具；用于進(jìn)行所述方法的說(shuō)明書(shū)。術(shù)語(yǔ)“試劑盒”在本文中使用時(shí)指本發(fā)明的前述化合物、工具或試劑的集合，它們可被或可不被包裝到一起。試劑盒的組分可由單獨(dú)的管包裝(即，作為單獨(dú)的部分的試劑盒)，或在單個(gè)管中提供。此外，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的試劑盒將用于實(shí)踐上文中提到的方法。優(yōu)選地預(yù)想以即用(ready-to-use)方式提供所有組分，用于實(shí)踐上文提到的方法。此外，試劑盒優(yōu)選含有用于進(jìn)行所述方法的說(shuō)明書(shū)。說(shuō)明書(shū)可以以紙或電子形式通過(guò)用戶(hù)手冊(cè)提供。例如，手冊(cè)可包含用于解釋使用本發(fā)明的試劑盒進(jìn)行上文所述的方法時(shí)獲得的結(jié)果的說(shuō)明。根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提供了包含下述計(jì)算機(jī)程序代碼的計(jì)算機(jī)程序，所述代碼在計(jì)算機(jī)上運(yùn)行所述計(jì)算機(jī)程序時(shí)適用于進(jìn)行本發(fā)明的方法。在本發(fā)明的另一方面，提供了計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)，其具有儲(chǔ)存于其上的本發(fā)明的計(jì)算機(jī)程序。在本發(fā)明的另一方面，提供了計(jì)算機(jī)程序產(chǎn)品，其具有儲(chǔ)存于其上的本發(fā)明的計(jì)算機(jī)程序。優(yōu)選地，計(jì)算機(jī)程序還包含基于診斷的疾病、用于輸出所需的預(yù)防和/或療法的工具，所述工具被儲(chǔ)存于計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)上。除非有不同指明，以上關(guān)于全身炎性應(yīng)答綜合征(SIRS)的檢測(cè)或診斷的方法或用于檢測(cè)或診斷罹患或發(fā)展出SIRS的風(fēng)險(xiǎn)的方法所描述的定義和優(yōu)選的實(shí)施方式也應(yīng)用于本發(fā)明的本方面。在本發(fā)明的另一方面，提供了適用于進(jìn)行本發(fā)明的方法的試劑盒，所述試劑盒包含i)用于測(cè)定IL-6或其變體的水平的工具；ii)用于比較IL-6或其變體的測(cè)定的水平與參照水平的工具；以及任選地，iii)用于進(jìn)行所述方法的說(shuō)明書(shū)。在本發(fā)明的另一方面，提供了用于在無(wú)癥狀患者中檢測(cè)或診斷全身炎性應(yīng)答綜合征(SIRS)或敗血癥，或用于檢測(cè)或診斷罹患或發(fā)展出SIRS的風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下述步驟 a)在來(lái)自患者的樣品中測(cè)定CRP的水平；b)比較步驟a)中測(cè)定的CRP的水平與參照水平；c)檢測(cè)或診斷SIRS，或檢測(cè)或診斷發(fā)展出SIRS的風(fēng)險(xiǎn)；其中以短間隔至少兩次分離樣品，并且針對(duì)每份樣品重復(fù)步驟a)和b)。在本發(fā)明的另一方面，提供了用于在無(wú)癥狀患者中檢測(cè)或診斷發(fā)展出或罹患全身炎性應(yīng)答綜合征(SIRS)或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下述步驟a)在來(lái)自患者的樣品中測(cè)定原降鈣素的水平；b)比較步驟a)中測(cè)定的原降鈣素的水平與參照水平；c)檢測(cè)或診斷發(fā)展出或罹患全身炎性應(yīng)答綜合征(SIRS)或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)；其中以短間隔至少兩次分離樣品，并且針對(duì)每份樣品重復(fù)步驟a)和b)。在本發(fā)明的另一方面，提供了選自抗IL-2抗體、抗IL-3抗體、抗IL-4抗體、抗IL-5抗體和抗IL-6抗體的抗體。附圖
簡(jiǎn)述圖I手術(shù)前和手術(shù)后無(wú)癥狀患者中的IL_6(pg/ml)動(dòng)力學(xué)。針對(duì)基線(xiàn)I (手術(shù)前)、基線(xiàn)2 (手術(shù)期間)和手術(shù)后(第1、2、3和4天；以6小時(shí)間隔采樣)，對(duì)IL-6水平作圖。附圖顯示了對(duì)發(fā)展出SIRS/敗血癥的患者群和沒(méi)有發(fā)展出SIRS/敗血癥的患者群之間的比較。示出了中位數(shù)和百分位數(shù)。圖2對(duì)于第I至7號(hào)患者繪制的隨時(shí)間的IL-6濃度(pg/ml)。三角形表示診斷出臨床SIRS征兆的時(shí)間點(diǎn)。圖3非SIRS患者的特征。對(duì)于非SIRS患者繪制隨時(shí)間的IL-6濃度(pg/ml)。圖4手術(shù)前和手術(shù)后無(wú)癥狀患者中的CRP (pg/ml)動(dòng)力學(xué)。針對(duì)基線(xiàn)I (手術(shù)前)、基線(xiàn)2(手術(shù)期間)和手術(shù)后(第1、2、3和4天；以6小時(shí)間隔采樣)，對(duì)CRP水平作圖。附圖顯示了對(duì)發(fā)展出SIRS/敗血癥的患者群和沒(méi)有發(fā)展出SIRS/敗血癥的患者群之間的比較。示出了中位數(shù)和百分位數(shù)。圖5手術(shù)前和手術(shù)后無(wú)癥狀患者中CRP對(duì)IL-6動(dòng)力學(xué)。附圖顯示了對(duì)發(fā)展出SIRS/敗血癥的患者群和沒(méi)有發(fā)展出SIRS/敗血癥的患者群之間的比較。示出了中位數(shù)。本說(shuō)明書(shū)中提到的所有參照文獻(xiàn)的全部公開(kāi)內(nèi)容和本說(shuō)明書(shū)中特別提到的公開(kāi)內(nèi)容都通過(guò)引用并入本文。下述實(shí)施例將僅僅闡述本發(fā)明。它們無(wú)論如何不應(yīng)被理解為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例患者特征研究中包括48名患者(36名男性和12名女性)?；颊咂骄挲g為61歲，范圍從19至87歲。所有患者被Medizinische Universitat Graz,奧地利的胸外科接收,進(jìn)行選擇性手術(shù)。37名患者由于多種癌類(lèi)型接受了肺手術(shù)，9名患者由于食管癌進(jìn)行了食管切除術(shù)，I名患者接受了胃切除術(shù)，以及I名患者由于化學(xué)燒傷接受了胃切除術(shù)和食管切除術(shù)。在所有患者中，在手術(shù)日的早晨啟動(dòng)抗生素治療。手術(shù)前所有患者均進(jìn)行兩次基線(xiàn)水平測(cè)量，以測(cè)定IL-6和常規(guī)實(shí)驗(yàn)室參數(shù)。全身炎性應(yīng)答綜合征(SIRS)是基于ACCP/SCCM Consensus ConferenceDefinitions (1992/2003)診斷的，即，被診斷為SIRS的患者展示出下述中的至少2種癥 狀a)白血細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)高于約12，000/U/L或低于約4000/ii /L，b)體溫高于約38°C或低于<約36°C，c)心率高于約90次跳動(dòng)/分鐘或CO2分壓低于約32mmHg，和d)呼吸速率高于約20次呼吸/分鐘，e)在計(jì)數(shù)的白血細(xì)胞中超過(guò)10%的未成熟白血細(xì)胞。48名患者中有10名(21%)在研究的監(jiān)測(cè)時(shí)間窗內(nèi)發(fā)展出了 SIRS。顯示SIRS臨床征兆的10名患者中有三名額外具有驗(yàn)證了敗血癥的陽(yáng)性血培養(yǎng)物。病例中兩名應(yīng)答于抗生素治療的改變，盡管僅在I名患者中通過(guò)陽(yáng)性血培養(yǎng)物驗(yàn)證了感染。10名患者中的5名在研究期間單純顯示SIRS征兆而沒(méi)有感染?；颊咧蠭名在監(jiān)測(cè)窗結(jié)束后很短的時(shí)間發(fā)展出SIRS。根據(jù)下文討論的結(jié)果，這顯示，基于IL-6的診斷和預(yù)測(cè)不限于敗血癥，其還可應(yīng)用于SIRS。材料和方法基于Roche Cobas Elecsys IL-6 測(cè)定(Roche, Mannheim,德國(guó))，使用夾心式ELISA免疫測(cè)定來(lái)測(cè)定IL-6。簡(jiǎn)言之，用經(jīng)生物素化的單克隆IL-6-特異性抗體孵育30ii L血漿或血清樣品。添加用釕復(fù)合體標(biāo)記的單克隆IL-6特異性抗體和鏈霉親和素涂布的微顆粒之后，抗體與樣品的抗原形成夾心式復(fù)合體。然后將反應(yīng)混合物吸入至Elecsys電化學(xué)發(fā)光設(shè)備的測(cè)量室中，微顆粒在此處被磁性捕獲到電極表面。然后用ProCell移除未結(jié)合的物質(zhì)。然后向電極應(yīng)用電壓誘導(dǎo)化學(xué)發(fā)光發(fā)射，其通過(guò)光電倍增器來(lái)測(cè)量。經(jīng)由校正曲線(xiàn)(由2點(diǎn)校正儀器特異性地生成的)和經(jīng)由試劑條形碼提供的主曲線(xiàn)(master curve)來(lái)測(cè)定結(jié)果。使用標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，對(duì)測(cè)定的IL-6濃度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。根據(jù)研究方案，以在手術(shù)前和手術(shù)期間的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)取得的2個(gè)基線(xiàn)水平開(kāi)始，監(jiān)測(cè)登記的患者的SIRS的臨床和實(shí)驗(yàn)室征兆。手術(shù)后，通過(guò)在手術(shù)前兩次和手術(shù)后6天期間每6小時(shí)采集血樣，對(duì)患者密切調(diào)查。在采血的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，根據(jù)建立的SIRS和敗血癥標(biāo)準(zhǔn)，記錄臨床狀態(tài)。
令人吃驚地，SIRS/敗血癥患者的IL-6濃度值與沒(méi)有發(fā)展出SIRS的患者的中位數(shù)值顯著不同。盡管在手術(shù)后所有患者中IL-6水平都增加了，但僅SIRS組的患者展示出相對(duì)于他們各自基線(xiàn)水平而言的IL-6濃度的大幅增加，而非SIRS患者僅顯示出IL-6濃度較之各自的基線(xiàn)水平增加了至多10倍見(jiàn)附圖)。一些SIRS患者的特征(見(jiàn)圖I和2)第I號(hào)患者的患者特征如下所示男性，62歲，食管癌，食管切除術(shù)。手術(shù)前的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室參數(shù)和IL-6值是不明顯的(IL-6基線(xiàn)水平14. 3和2. 9pg/ml)。在手術(shù)后第一天，中午測(cè)量到了 6. 4pg/ml IL-6的基線(xiàn)水平。6小時(shí)后IL-6水平為2279. 00pg/ml。雖然值隨著時(shí)間減少，但直到第6天仍保持很高，大約500pg/ml。當(dāng)陽(yáng)性血培養(yǎng)物指示細(xì)菌感染，并且記錄了> 38°C的升高的體溫時(shí)，在第4天才首次識(shí)別臨床SIRS/敗血癥征兆。第6天心率> 90次跳動(dòng)/分鐘。該病例令人信服地顯示，密切和頻繁的IL-6監(jiān)測(cè)允許在支持SIRS或敗血癥診斷的臨床征兆和癥狀發(fā)作前很久就對(duì)發(fā)展出或罹患SIRS的高風(fēng)險(xiǎn)做出早期診斷和檢測(cè)。
第2號(hào)患者的患者特征如下所示男性，81歲，食管胃接合處癌。手術(shù)前患者白血球計(jì)數(shù)較低。第二基線(xiàn)水平實(shí)際為< 4000個(gè)白血細(xì)胞。手術(shù)后第I天，患者體溫<36°C，并且呼吸速率>20/分鐘。兩種征兆被采納為暗示SIRS。同時(shí)處于基線(xiàn)l(1.6pg/ml)以及處于基線(xiàn)2 (37. 9) pg/ml的IL-6值增加至1400. 00pg/ml。除從第2天直到第6天增加至>12的血細(xì)胞計(jì)數(shù)之外，僅有IL-6值保持高水平(至多500pg/ml)直到第4天，然后緩慢降低。沒(méi)有獲得陽(yáng)性血培養(yǎng)物結(jié)果，即，沒(méi)有檢測(cè)到敗血癥相關(guān)感染。該病例顯示，高于參照水平的IL-6水平允許對(duì)發(fā)展出或罹患SIRS的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行早期診斷和檢測(cè)。第3號(hào)患者的患者特征如下所示男性，70歲，肺癌，肺切除術(shù)。該患者最初(基線(xiàn)I)具有增加的白血細(xì)胞計(jì)數(shù)(> 12000)，但在一周后的基線(xiàn)2時(shí)間點(diǎn)具有標(biāo)準(zhǔn)化的值?；€(xiàn)IL-6水平也在正常范圍內(nèi)，為23. 5和16. 5pg/ml。在手術(shù)后的所有時(shí)間點(diǎn)，除了升高的IL-6水平外沒(méi)有出現(xiàn)指向SIRS或敗血癥的臨床征兆。第2天后白血細(xì)胞計(jì)數(shù)增加至大約13000的水平并且不減少。IL-6在手術(shù)后增加至200至300pg/ml的值，瞬間峰值600pg/ml，甚至在I個(gè)測(cè)量點(diǎn)為850pg/ml。在第5天晚上，IL-6值突然增加至3994. 00pg/ml，6小時(shí)前值是148. 6pg/ml。兩天后，在超出研究方案時(shí)間線(xiàn)的時(shí)候，患者發(fā)展出SIRS標(biāo)準(zhǔn)，并且發(fā)展出嚴(yán)重的病況，但能被穩(wěn)定。除了 IL-6，沒(méi)有其它實(shí)驗(yàn)室或臨床參數(shù)反映了患者的急性惡化。因此，緊密監(jiān)測(cè)IL-6令人驚奇地允許早期檢測(cè)到發(fā)展出SIRS或敗血癥的高風(fēng)險(xiǎn)，這允許早期治療介入。第4號(hào)患者的患者特征如下所示女性，50歲，軟骨肉瘤，肺轉(zhuǎn)移，肺切除術(shù)?；€(xiàn)處和整個(gè)6天的研究期間，WBC計(jì)數(shù)在正常范圍，最大值為第4天的11000。手術(shù)期間(基線(xiàn)2) IL-6已經(jīng)增加至282. 7pg/ml的值。在手術(shù)后第一次測(cè)量時(shí)(第I天/第I次)IL-6增加至1079pg/ml,并且6小時(shí)后達(dá)到2771pg/ml的峰。從該時(shí)間點(diǎn)起，值持續(xù)下降至研究結(jié)束時(shí)值大約70pg/ml。在與IL-6為其最高值時(shí)的相同時(shí)間點(diǎn)，該患者出現(xiàn)了溫度> 38°C和HR > 90/分鐘的SIRS標(biāo)準(zhǔn)，這驗(yàn)證了 IL-6是可靠的SIRS早期標(biāo)志物。第5號(hào)患者的患者特征如下所示男性，19歲，食管和胃化學(xué)燒傷。在手術(shù)前的基線(xiàn)處，所有參數(shù)在正常范圍。手術(shù)期間當(dāng)采集第二基線(xiàn)血樣時(shí)IL-6輕微增加至67. 4pg/ml。6小時(shí)后(第I天/第I次)采集的下一份血樣已經(jīng)顯示IL-6值高于700pg/ml，并在之后的幾天期間進(jìn)一步增加至高于1000pg/ml (第I天/第I次-第3天/第I次)。從第5天/第2次直到研究期間結(jié)束(第6天/第2次)，記錄到了 SIRS的臨床征兆(心率> 100/分鐘和呼吸速率> 20/分鐘)。第6號(hào)患者的患者特征如下所示女性，60歲，肺癌后葉切除術(shù)。在兩個(gè)基線(xiàn)水平處，所有參數(shù)都在正常范圍。手術(shù)后第一個(gè)IL-6值(第I天/第I次)顯示升高至幾乎500pg/mlo IL-6水平在整個(gè)研究期間增加,顯示550至150pg/ml之間的水平。從第I天/第4次起，白血球顯著增加并且達(dá)到20x 10的水平。與>38°C的增加的體溫結(jié)合，記錄為SIRS。兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)后，體溫趨于正常但在第6天/第2次又升高了一次。第7號(hào)患者的患者特征如下所示男性，48歲，肺癌，肺切除術(shù)。最初在基線(xiàn)處所有參數(shù)都處于正常范圍。在第二個(gè)基線(xiàn)時(shí)間點(diǎn)，患者已經(jīng)顯示出> 100/分鐘的增加的心率，其持續(xù)于幾乎全部研究時(shí)間點(diǎn)。IL-6值在第I天/第I次顯著增加至幾乎400pg/ml，之后在接下來(lái)的7個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)期間降低至大約70pg/ml的中度增加的值。在第4天/第I次時(shí)，IL-6開(kāi)始再次增加，達(dá)到多于500pg/ml的值。從第5天/第2次直到第6天/第2次 研究結(jié)束時(shí)，記錄到SIRS的臨床征兆(心率> 100/分鐘并且呼吸速率> 20/分鐘)。非SIRS患者的特征(見(jiàn)圖I和3至5)。48名患者中根據(jù)定義沒(méi)有發(fā)展出SIRS或敗血癥的38名在觀察期間在某時(shí)間點(diǎn)展示出SIRS的至多一種單個(gè)癥狀，但是從來(lái)沒(méi)有兩種或更多，因此，這些患者被診斷為沒(méi)罹患SIRS?；€(xiàn)IL-6值與SIRS患者之一的相當(dāng)。手術(shù)后，所有非SIRS患者也具有輕微增加的IL-6值,一些至多大約100pg/ml, —些至多400, —名具有900pg/ml的單峰,但是他們沒(méi)有顯示出在SIRS患者組中觀察到的IL-6水平的劇烈的升高。考慮到進(jìn)行的手術(shù)的嚴(yán)重性，在非SIRS患者中觀察到的IL-6的小幅增加在能預(yù)期的范圍內(nèi)?；谶@些患者中的結(jié)果(沒(méi)有發(fā)作SIRS或敗血癥)，數(shù)據(jù)驗(yàn)證了患者處于罹患或發(fā)展出SIRS或敗血癥的低風(fēng)險(xiǎn)。參考文獻(xiàn)I Kishimoto T， Hirano T.A New Interleukin with Pleitropic Activities.Bio Essays 1988 Jul ；9(1) :11-152 Song M，Kellum JA. Interleukin-6. Crit Care Med 2005 ；33 (Suppll2)463-465.3 Taga T，Kishimoto T. Gpl30 and the Interleukin-6 Family of Cytokines.Annu. Rev. Immunol. 1997 ；15 :797-8194 Drucker C，Gewiese J，Malchow S，Scheller J，Rose-John S. Impact ofInterleukin-6 Classic—and Trans-signaling on Liver Damage and Regeneration. JAutimm 2009 in press.5 Hodgin KE，Moss M. The epidemiology of Sepsis. Current Pharm Design2008 ；14 :1833-1839.6.American College of Chest Physicians/Society of Critical CareMedicine Consensus Conference !definitions for seps. is and organ failure andguidelines for the use of innovative therapies in sepsis. Crit Care Med. 1992Jun ；20(6) :864-74.
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權(quán)利要求
1.在無(wú)癥狀患者中檢測(cè)或診斷發(fā)展出或罹患全身炎性應(yīng)答綜合征(SIRS)或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下述步驟 a)在來(lái)自患者的樣品中測(cè)定IL-6或其變體的水平； b)將步驟a)中測(cè)定的IL-6或其變體的水平與參照水平相比較； c)檢測(cè)或診斷發(fā)展出或罹患全身炎性應(yīng)答綜合征(SIRS)或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)； 其中以范圍從約15分鐘至約12小時(shí)的短間隔至少兩次分離樣品，并且針對(duì)每份樣品重復(fù)步驟a)和b)。
2.權(quán)利要求I的方法，其中所述無(wú)癥狀患者是展示出下述a)至d)、優(yōu)選地下述a)至e)中的少于2種、優(yōu)選少于I種癥狀的患者 a)白血細(xì)胞計(jì)數(shù)多于約12，000/μ /L或少于約4000/ μ /L, b)體溫高于約38°C或低于約36°C， c)心率高于約90次跳動(dòng)/分鐘或CO2分壓低于約32mmHg，和 d)呼吸速率高于約20次呼吸/分鐘， e)在計(jì)數(shù)的白血細(xì)胞中多于約10%的未成熟白血細(xì)胞， 任選地,患者不展示出被診斷的感染。
3.權(quán)利要求I或2的方法，其中所述短間隔在從約I至6小時(shí)的范圍內(nèi)，優(yōu)選從約I小時(shí)至約3小時(shí)的范圍內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3中任意一項(xiàng)的方法，其中 i)步驟a)中測(cè)定的IL-6或其變體的水平高于參照水平指示患者處于罹患或發(fā)展出SIRS或敗血癥的聞風(fēng)險(xiǎn)；以及 )步驟a)中測(cè)定的IL-6或其變體的水平低于參照水平指示患者處于罹患或發(fā)展出SIRS或敗血癥的低風(fēng)險(xiǎn)。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至4中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述參照水平是通過(guò)將IL-6或其變體的基線(xiàn)水平乘以至少約50的因子、優(yōu)選乘以至少約100的因子、更優(yōu)選乘以至少約500的因子、最優(yōu)選乘以至少約1000的因子來(lái)獲得的。
6.權(quán)利要求I至5中任意一項(xiàng)的方法，其中IL-6是可被鼠抗IL-6單克隆抗體M-BE8或M-23C7結(jié)合的IL-6。
7.權(quán)利要求I至6中任意一項(xiàng)的方法，其中所述樣品中IL-6或其變體的水平是通過(guò)下述來(lái)測(cè)定的 i)結(jié)合IL-6的抗體，或通過(guò)其片段或變體； )特異性結(jié)合IL-6的抗體，或其片段或變體； iii)結(jié)合可被鼠抗IL-6單克隆抗體M-BE8或M-23C7結(jié)合的IL-6的抗體，或通過(guò)其片段或變體； iv)鼠抗IL-6單克隆抗體M-BE8或M-23C7，或通過(guò)其片段或變體。
8.權(quán)利要求I的任意一項(xiàng)的方法，其中測(cè)定CRP代替IL-6，并且所述方法用于診斷SIRS或敗血癥。
9.權(quán)利要求I至8中任意一項(xiàng)的方法，其中所述無(wú)癥狀患者是選自創(chuàng)傷患者、具有燒傷的患者、接受治療的患者、接受侵入性治療的患者、接受手術(shù)介入的患者的患者。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述患者正接受侵入性治療，并且在所述治療前采集至少一次所述樣品，以及在所述治療后采集至少一次所述樣品。
11.根據(jù)權(quán)利要求I至10中任意一項(xiàng)的方法，其中所述方法 i)還包括通過(guò)最小侵入性步驟從所述患者收集樣品的步驟， ii)排除收集樣品的手術(shù)步驟，或 iii)是體外方法。
12.監(jiān)測(cè)無(wú)癥狀患者SIRS發(fā)作或評(píng)估發(fā)展出或罹患SIRS的風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下述步驟 a)在來(lái)自所述患者的樣品中測(cè)定IL-6或其變體的水平； b)比較在步驟a)中測(cè)定的IL-6或其變體的水平與參照水平；以及 c)基于步驟b)中的比較，針對(duì)患者推薦、決定、啟動(dòng)、繼續(xù)、調(diào)節(jié)或停止SIRS療法。
13.適用于進(jìn)行權(quán)利要求I至12中任意一項(xiàng)的方法的試劑盒，所述試劑盒包含 i)用于測(cè)定IL-6或其變體的水平的工具； )用于將測(cè)定的IL-6或其變體的水平與參照水平進(jìn)行比較的工具；以及任選地 iii)用于進(jìn)行所述方法的說(shuō)明書(shū)。
14.用于在無(wú)癥狀患者的樣品中檢測(cè)IL-6或其變體的工具，其用于早期檢測(cè)或診斷發(fā)展出或罹患SIRS或敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)，或用于早期檢測(cè)或診斷SIRS或敗血癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及在無(wú)癥狀患者中，優(yōu)選地在接受手術(shù)介入的患者中對(duì)全身炎性應(yīng)答綜合征(SIRS)(包括敗血癥)的早期診斷和預(yù)測(cè)的技術(shù)領(lǐng)域，特別地，提供了用于在無(wú)癥狀患者中檢測(cè)或診斷SIRS，或者用于檢測(cè)或診斷罹患或發(fā)展出SIRS的風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括下述步驟a)在來(lái)自患者的樣品中測(cè)定IL-6或其變體的水平；b)將步驟a)中測(cè)定IL-6或其變體的水平與參照水平相比較；c)檢測(cè)或診斷SIRS，或者檢測(cè)或診斷罹患或發(fā)展出SIRS的風(fēng)險(xiǎn)；其中以短間隔至少兩次分離樣品，并且針對(duì)每份樣品重復(fù)步驟a)和b)。還提供了相應(yīng)的療法監(jiān)測(cè)和死亡率預(yù)測(cè)方法、部分的試劑盒。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102782501SQ201180011904
公開(kāi)日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2011年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月2日
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