專利名稱：煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法
煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于農(nóng)藥殘留的理化檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
苦參堿是一種從苦參植株中提取出的生物堿，它作為一種天然植物源農(nóng)藥，具有植物源農(nóng)藥低毒、高效的特點(diǎn)。煙草中使用該農(nóng)藥的量不斷加大，以防治煙草中的蚜蟲、煙薊馬、煙粉虱等害蟲。但是，高劑量的苦參堿對(duì)小白鼠具較強(qiáng)的神經(jīng)急性毒性，且還具有一定的遺傳毒性。因此，苦參堿在煙草中的大量使用必將存在一定的安全隱患，進(jìn)而影響到煙草的質(zhì)量安全。現(xiàn)有技術(shù)中，對(duì)苦參堿的前處理方法常常采用堿性溶液將苦參堿轉(zhuǎn)化為分子形態(tài)，再用三氯甲烷等有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取或直接用極性較大的乙醇、乙腈進(jìn)行提取，再對(duì)提取液進(jìn)行一定的凈化，上述二種方法提取的色素等雜質(zhì)較多，需要較為復(fù)雜的凈化步驟。 此外，二種方法都要使用較多量的毒性較大的有機(jī)溶劑，這些缺點(diǎn)都不符合對(duì)苦參堿的常規(guī)殘留檢測(cè)要求，本發(fā)明提供了一種煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，具有良好的檢測(cè)效果。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種用乙酸水溶液提取，強(qiáng)陽離子交換固相萃取柱凈化后用氣相色譜-氮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器，直接測(cè)定煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的方法，以克服現(xiàn)有的方法前處理復(fù)雜和要使用毒性較大的有機(jī)溶劑的缺點(diǎn)，本方法還具有快速、準(zhǔn)確且干擾較少的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的技術(shù)方案本發(fā)明的煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，包括以下步驟(1)稱取研磨的煙葉于離心管中用乙酸水溶液提取，用水相濾膜過濾，得到濾液；(2)濾液用強(qiáng)陽離子交換固相萃取柱凈化；(3)用氣相色譜測(cè)定新鮮煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的方法。
所述的煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，所述的乙酸水溶液的pH為 3. 0 4· 0。
所述的煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，所述的水相濾膜的孔徑為0.45 μ m0
所述的煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，所述的濾液用強(qiáng)陽離子交換固相萃取柱凈化為先用HCl調(diào)節(jié)濾液的pH至1. 5^2. 5，依次用甲醇、水預(yù)淋洗活化Bond Elut-SCX柱，將濾液轉(zhuǎn)移至Bond Elut-SCX柱中，用HCl將殘余物清洗一次過柱，然后依次用HC1、甲醇淋洗萃取柱，棄去淋出液并將Bond Elut-SCX柱抽干，用氨水甲醇混合溶液洗脫萃取柱，收集洗脫液于試管中，氮?dú)獯蹈?，用甲醇溶解分析物，過0.45 μ m微孔有機(jī)濾膜， 將其轉(zhuǎn)移至微量玻璃平底內(nèi)插管，待進(jìn)樣。
所述的一種煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，所述的氨水甲醇混合溶液其組成體積比為氨水甲醇=5:95。
所述的一種煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，所述氣相色譜的檢測(cè)器為氮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器。
所述的一種煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，所述氣相色譜的分析條件為 氣相色譜為=Agilent 7890A氣相色譜，氮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器為Agilent 255氮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器組成，色譜柱石英毛細(xì)管柱DB-17 ；He為載氣，流量為1 mL/min ；進(jìn)樣口溫度250 C ； 基座溫度250 C ；進(jìn)樣模式不分流進(jìn)樣量2 ？ L ；程序升溫初溫110 C，保持1 min， 以8 C/min升至230 C,保持5 min,以10 C/min升至260 C,保持4 min ；檢測(cè)器氫氣流量4. 0 mL/min ；氧氣流量10 mL/min，裂解溫度為950 ？ C，采集數(shù)據(jù)頻率為20Hz。
本發(fā)明達(dá)到的有益效果 (1)環(huán)保及前處理簡單相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)中使用較多量的毒性較大的有機(jī)溶劑，且前處理復(fù)雜，本發(fā)明采用用乙酸水溶液提取，濾液用強(qiáng)陽離子交換固相萃取柱凈化，具有環(huán)保及前處理簡單的優(yōu)點(diǎn)。
(2)檢測(cè)限低，線性關(guān)系好將不同濃度的苦參堿農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作溶液注入GC-NCD，以3倍信噪比(S/N=3)計(jì)算檢測(cè)限(LOD)，檢測(cè)限為 0. 03 mg/kg ；將濃度梯度為 0. 15 ug/mL，0. 3 ug/mL，0. 9 ug/mL, 1. 8 ug/mL 禾口 3 ug/mL 注入 GC-NCD，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，苦參堿的的回歸方程為 Y=68. 85Χ+0. 507，r2=0. 9998，表明線性關(guān)系較好。
(3)回收率高，精密度好苦參堿在新鮮煙葉中的回收率在89. 5%-91. 6%之間，變異系數(shù)(CV)為2. 73%_3. 62%，說明該方法回收率高，精密度好。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1(1)準(zhǔn)確稱取研磨的鮮煙葉2g于50 mL塑料離心管中，加入15 mL pH=3. 5的乙酸水溶液，將樣品渦旋30 s后振蕩提取30 min, 4000 rpm離心后取上層清液，再用8 mL乙酸水溶液洗滌2次，合并濾液過0. 45 μ m水相濾膜，待凈化；(2)先用0.5 mol/L的HCl調(diào)節(jié)濾液至pH=2，依次用甲醇、水各5 mL預(yù)淋洗活化Bond Elut-SCX，將濾液轉(zhuǎn)移至Bond Elut-SCX柱中，用5 mLO. 5 mol/L的HCl將殘余物清洗一次過柱，然后依次用0.5 mol/L的HC1、甲醇各5 mL淋洗萃取柱，棄去淋出液并將小柱抽干，用 10 mL氨水甲醇(5:95，V/V)溶液洗脫萃取柱，收集洗脫液于20 mL玻璃試管中，45 ？ C 下氮?dú)獯蹈?，?. 5 mL甲醇溶解分析物，過0. 45 μ m微孔有機(jī)濾膜，將其轉(zhuǎn)移至250 μ L微量玻璃平底內(nèi)插管，待進(jìn)樣；(3)GC-NCD由Agilent 7890A氣相色譜和Agilent 255氮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器組成，色譜柱石英毛細(xì)管柱DB-17(30 mXO. 25 mmXO. 25 ？ m) ；He為載氣，流量為1 mL/min ；進(jìn)樣口溫度250 C;基座溫度250 C;進(jìn)樣模式不分流進(jìn)樣量2 ？ L ；程序升溫初溫 110 C，保持 1 min，以 8 C/min 升至 230 C，保持 5 min,以 10 C/min 升至 260 C，保持4 min ；檢測(cè)器氫氣流量4. 0 mL/min ；氧氣流量10 mL/min，裂解溫度為950 ？ C，采集數(shù)據(jù)頻率為20Hz。
實(shí)施例2苦參堿標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用甲醇配制濃度為2 mg/mL的儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)溶液。工作標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇把儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋為相應(yīng)的濃度，即配制成不同濃度的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)序列為0. 15 ug/mL,0. 3 ug/mL,0. 9 ug/mL,1. 8 ug/mL 禾口 3 ug/mL。
將不同濃度的苦參堿農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作溶液注入GC-NCD，以3倍信噪比(S/N=3)計(jì)算檢測(cè)限(LOD)，檢測(cè)限為0. 03 mg/kg將濃度梯度為 0. 15 ug/mL, 0. 3 ug/mL, 0. 9 ug/mL, 1. 8 ug/mL 禾口 3 ug/mL 注入 GC-NCD，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，苦參堿的的回歸方程為 Y=68. 85Χ+0. 507，r2=0. 9998，表明線性關(guān)系較好。
實(shí)施例3在新鮮煙葉中加入三個(gè)濃度梯度的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，放入0 ？ C左右冰箱中靜置過夜， 然后進(jìn)行前處理，再用GC-NCD檢測(cè)分析。并按照添加量和測(cè)定值計(jì)算其添加回收率。結(jié)果見表1，從表1可以看出，按照0. 05 mg/kg, 0. 2 mg/kg, 0. 4 mg/kg進(jìn)行添加時(shí)，苦參堿在新鮮煙葉中的回收率在89. 5%-91. 6%之間，變異系數(shù)(CV)為2. 73%_3. 62%，說明該方法回收率高，精密度較好。表1苦參堿在煙萆中的添加回收率
權(quán)利要求
1.一種煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，其特征在于包括以下步驟(1)稱取研磨的煙葉于離心管中用乙酸水溶液提取，用水相濾膜過濾，得到濾液；(2)濾液用強(qiáng)陽離子交換固相萃取柱凈化；(3)用氣相色譜測(cè)定新鮮煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，其特征在于所述的乙酸水溶液的PH為3. 0 4.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，其特征在于所述的水相濾膜的孔徑為0.45 μπι。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，其特征在于所述的濾液用強(qiáng)陽離子交換固相萃取柱凈化為先用HCl調(diào)節(jié)濾液的ρΗ至1. 5^2. 5，依次用甲醇、 水預(yù)淋洗活化Bond Elut-SCX柱，將濾液轉(zhuǎn)移至Bond Elut-SCX柱中，用HCl將殘余物清洗一次過柱，然后依次用HC1、甲醇淋洗萃取柱，棄去淋出液并將Bond Elut-SCX柱抽干，用氨水甲醇混合溶液洗脫萃取柱，收集洗脫液于試管中，氮?dú)獯蹈?，用甲醇溶解分析物，過0. 45 μ m微孔有機(jī)濾膜，將其轉(zhuǎn)移至微量玻璃平底內(nèi)插管，待進(jìn)樣。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，其特征在于所述的氨水甲醇混合溶液其組成體積比為氨水甲醇=5:95。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，其特征在于所述氣相色譜的檢測(cè)器為氮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，其特征在于所述氣相色譜的分析條件為氣相色譜為=Agilent 7890A氣相色譜，氮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器為 Agilent 255氮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器組成，色譜柱石英毛細(xì)管柱DB-17;He為載氣，流量為1 mL/min;進(jìn)樣口溫度250 C;基座溫度250 C;進(jìn)樣模式不分流進(jìn)樣量2 ？ L ；程序升溫初溫110 C，保持1 min，以8 C/min升至230 C，保持5 min,以10 C/min升至 260 C，保持4 min;檢測(cè)器氫氣流量4.0 mL/min ；氧氣流量10 mL/min，裂解溫度為950 ？ C，采集數(shù)據(jù)頻率為20Hz。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法，包括以下步驟稱取研磨的煙葉于離心管中用乙酸水溶液提取，用水相濾膜過濾，得到濾液；濾液用強(qiáng)陽離子交換固相萃取柱凈化，用氣相色譜測(cè)定新鮮煙葉中苦參堿農(nóng)藥殘留量的方法，本發(fā)明的方法具有前處理簡單和避免使用了毒性較大的有機(jī)溶劑，本方法還具有快速、準(zhǔn)確且干擾較少的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102520107SQ20121000619
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2012年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月9日
發(fā)明者向章敏, 周淑平, 張婕, 耿召良, 蔡凱, 陳興江 申請(qǐng)人:貴州省煙草科學(xué)研究所