專利名稱：以適體為識別單元的膠體晶體凝膠非標(biāo)記可視化檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種非標(biāo)記可視化檢測方法，特別涉及一種以適體為識別單元的膠體晶體凝膠薄膜為載體的非標(biāo)記可視化檢測方法。
背景技術(shù)：
生物傳感器是簡單、快速、廉價的重要檢測工具。在生物傳感器的分子識別元件中，目前應(yīng)用最為成熟的就是抗體。但抗體由于制備繁瑣、成本高、耗時長、保存條件苛刻、 固定化易失活等缺點使其應(yīng)用受到限制。探索新型高特異高穩(wěn)定的分子識別物質(zhì)，建立高選擇性高靈敏的生物傳感技術(shù)成為現(xiàn)代分析化學(xué)研究的前沿課題之一。隨著人類基因組計劃的完成及核酸研究的發(fā)展，特別是1990年美國科學(xué)家Tuerk和Ellington篩選出首個核酸適體，隨后核酸適體及SELEX技術(shù)的快速發(fā)展，抗體技術(shù)受到了前所未有的挑戰(zhàn)。利用體外篩選技術(shù)獲得的適體，由于其獨特的優(yōu)點，成為新一代理想的傳感器識別元件，適體傳感器的研究受到了科學(xué)家們的極大關(guān)注。與目前在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用的抗體相比，核酸適體是一種全新的分子識別方法，核酸適體不僅能和抗體一樣與目標(biāo)分子高效專一結(jié)合，還具有許多抗體無法比擬的優(yōu)點篩選周期短，成本低、靶分子種類廣泛、高特異性和高親和力、修飾靈活、穩(wěn)定性好等。 正是由于以上種種優(yōu)勢，適體已成為一種極富應(yīng)用潛力的識別分子識別探針，可應(yīng)用于各種小分子、蛋白質(zhì)、及細(xì)胞檢測系統(tǒng)的構(gòu)建，為生物傳感器的研究提供了一個嶄新的平臺。膠體晶體是由一種或多種單分散的膠體顆粒(無機或有機，尺度在微米或亞微米級)組裝形成的具有二維或三維有序結(jié)構(gòu)的一類物質(zhì)，其最基本的特征是光子帶隙。膠體晶體衍射波峰位置遵循布拉格衍射公式，即πιλ =2ndsin0，其中m為衍射級數(shù)，λ為衍射波長，η為膠體晶體的平均折射率，d為膠體晶體的晶格間距，Θ為入射光角度。由此可見， 衍射光的中心波長(即特征反射峰)與平均折射率和晶格常數(shù)有關(guān)。響應(yīng)性膠體晶體是指光子帶隙對外界環(huán)境的變化具有響應(yīng)性的膠體晶體。自1997年Asher等開發(fā)了新型的膠體晶體化學(xué)智能傳感材料以來，響應(yīng)不同外界環(huán)境的膠體晶體逐漸成為膠體晶體研究領(lǐng)域的一大熱點。膠體晶體傳感器主要是利用膠體晶體能夠產(chǎn)生布拉格衍射的性質(zhì)，通過外界環(huán)境的激勵改變其平均折射率或晶格常數(shù)，從而會引起衍射峰的改變。在某些情況下膠體晶體受外界刺激的響應(yīng)而引起的特征反射峰的變化，可以被人的裸眼直接觀察到，因此膠體晶體作為一種新的可視化傳感材料在生物、化學(xué)傳感等方面已嶄露頭角。通過膠體晶體結(jié)構(gòu)的設(shè)計，目前已經(jīng)有許多基于膠體晶體的傳感器被制備出來。但是目前已開發(fā)的膠體晶體傳感器還存在的傳感器功能簡單，分子識別單元抗體易失活，檢測方法單一等缺點，嚴(yán)重制約了膠體晶體傳感器的靈敏度、選擇性、重復(fù)使用性和快速響應(yīng)能力等性能指標(biāo)。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有非標(biāo)記可視化檢測選擇性差，成本高等缺點，本發(fā)明提供一種以適體為分子識別單元的膠體晶體凝膠非標(biāo)記可視化檢測方法。為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的這些問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是一種以適體為識別單元的膠體晶體凝膠非標(biāo)記可視化檢測方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(I)膠體晶體水凝膠薄膜的制備將單分散的膠體納米粒子加入水凝膠前聚體溶液中，調(diào)節(jié)膠體納米粒子溶液中膠體納米粒子的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為10% 80%，超聲分散，直至膠體納米粒子溶液產(chǎn)生結(jié)構(gòu)色；然后加入引發(fā)劑后，灌入模具，靜置O. I 2h，經(jīng)紫外光照射聚合或烘箱內(nèi)通過熱固化法對結(jié)構(gòu)色膠體溶液進(jìn)行固化，即得膠體晶體水凝膠薄膜， 將所得到的膠體晶體水凝膠薄膜從模具上剝落，洗滌后置于純水中保存；(2)適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜的制備通過化學(xué)鍵偶聯(lián)方法將適體偶聯(lián)在步驟(I)中洗滌后的膠體晶體水凝膠薄膜上， 制成適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜，將制備好的薄膜用磷酸緩沖液洗滌之后得到檢測用的膠體晶體水凝膠薄膜，測定檢測用的膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜；(3)目標(biāo)分析物的檢測將步驟(2)中得到的檢測用的膠體晶體水凝膠薄膜在緩沖溶液中與待測樣品混合進(jìn)行適體和樣品的特異性結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)完畢，洗滌后檢測反應(yīng)后的膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜，通過比較反應(yīng)前后膠體晶體水凝膠薄膜的顏色或通過測定膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜，確定待測物質(zhì)的含量。優(yōu)選的，所述方法步驟(2)采用的適體為分子識別單元，為核酸適體或RNA適體中的一種或多種。優(yōu)選的，所述方法步驟⑴采用膠體納米粒子材料選自二氧化硅、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、二氧化鈦、鐵的氧化物、金、銀中的一種或兩種以上的材料；所述的水凝膠前聚體為丙烯酰胺、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸羥乙酯、醋酸丁酸纖維素、硅氧烷甲基丙烯酸酯、氟硅甲基丙烯酸酯、全氟醚、N-乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、甲基丙烯酸縮水甘油酯或二甲基丙烯酸乙二醇酯中的一種或兩種以上的任意混合。優(yōu)選的，所述方法步驟⑴中膠體納米粒子的粒徑在10納米到500納米之間；所述膠體納米粒子的濃度在10% 80%。優(yōu)選的，所述方法步驟(2)中適體修飾的化學(xué)鍵偶聯(lián)方法選自氨基與氨基的反應(yīng)、氨基與羧基的反應(yīng)或羧基與羥基的反應(yīng)中的一種或兩種以上的任意組合。優(yōu)選的，所述方法步驟(3)中待測樣品中檢測對象為離子、藥物分子、毒品分子、 添加劑、小分子、神經(jīng)遞質(zhì)、激素、蛋白質(zhì)、酶、抗原抗體、細(xì)胞因子、生長因子、腫瘤標(biāo)志物或各種生物分子中的一種。優(yōu)選的，所述方法步驟(3)中待測樣品中檢測對象為汞離子、鉛離子、鉀離子、可卡因、凝血酶中的一種。本發(fā)明從構(gòu)建膠體晶體傳感器的分子識別元件入手，以核酸適體作為切入點，開發(fā)了一種新型的以適體為識別單元的膠體晶體非標(biāo)記可視化檢測方法。檢測步驟為第一步制備膠體晶體水凝膠薄膜將單分散的膠體納米粒子加入水凝膠前聚體溶液中，調(diào)節(jié)膠體納米粒子溶液中膠體納米粒子的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)到10% 80%，超聲分散，直至膠體納米粒子溶液產(chǎn)生結(jié)構(gòu)色。加入引發(fā)劑后，灌入模具，靜置O. I 2h，經(jīng)紫外光照射聚合或烘箱內(nèi)通過熱固化法對結(jié)構(gòu)色膠體溶液進(jìn)行固化，即得膠體晶體水凝膠薄膜，將所得到的膠體晶體水凝膠薄膜從模具上剝落，洗滌后置于純水中保存。第二步，制備適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜通過化學(xué)鍵偶聯(lián)方法將適體偶聯(lián)在步驟(I)中制得的膠體晶體水凝膠薄膜上，制成適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜，將制備好的薄膜用緩沖液洗滌之后，測定膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜。第三步，檢測將步驟(2)中得到的檢測用的膠體晶體水凝膠薄膜在緩沖溶液中與待測樣品混合進(jìn)行適體和樣品的特異性結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)完畢，洗滌后比較反應(yīng)前后膠體晶體水凝膠薄膜的顏色或通過測定膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜，確定待測物質(zhì)的含量。待測樣品可以是離子、藥物分子、毒品分子、添加劑、小分子、神經(jīng)遞質(zhì)、激素、蛋白質(zhì)、酶、抗原抗體、細(xì)胞因子、生長因子、腫瘤標(biāo)志物或各種生物分子中的任意一種。本發(fā)明以適體為識別單元的膠體晶體凝膠非標(biāo)記可視化檢測方法采用的載體為膠體晶體水凝膠薄膜。所述的膠體晶體凝膠薄膜中的分子識別單元是核酸適體或RNA適體中的一種或多種。方法中所述的膠體納米粒子材料選自二氧化硅、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、二氧化鈦、鐵的氧化物、金、銀中的一種或兩種以上的材料；所述的水凝膠前聚體為丙烯酰胺、 甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸羥乙酯、醋酸丁酸纖維素、硅氧烷甲基丙烯酸酯、氟硅甲基丙烯酸酯、全氟醚、N-乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、甲基丙烯酸縮水甘油酯或二甲基丙烯酸乙二醇酯中的一種或兩種以上的任意混合。所述膠體納米粒子的粒徑在10納米到500納米之間；所述膠體納米粒子的濃度在10% 80%。方法中所述的適體修飾的化學(xué)鍵偶聯(lián)方法可以是氨基與氨基的反應(yīng)、氨基與羧基的反應(yīng)或羧基與羥基的反應(yīng)中的一種或兩種以上的任意組合。所述的檢測對象為離子(如汞離子、鉛離子、鉀離子等)、藥物分子、毒品分子(如可卡因)、添加劑、小分子、神經(jīng)遞質(zhì)、 激素、蛋白質(zhì)、酶(如凝血酶)、抗原抗體、細(xì)胞因子、生長因子、腫瘤標(biāo)志物或各種生物分子中的任意一種。本發(fā)明的以適體為分子識別單元的膠體晶體凝膠非標(biāo)記可視化檢測方法與現(xiàn)有的非標(biāo)記可視化檢測方法相比較具有以下優(yōu)點(I)本發(fā)明以適體為分子識別單元，適體分子的可設(shè)計性、高選擇性、高靈敏度、高穩(wěn)定性、可修飾性以及廣泛的檢測對象等優(yōu)點，使得膠體晶體膜的穩(wěn)定性大大提高，副反應(yīng)干擾現(xiàn)象小，同時也可以滿足不同檢測樣本的需要。(2)本發(fā)明將適體與膠體晶體凝膠薄膜相結(jié)合，利用適體結(jié)合目標(biāo)分子后構(gòu)象的變化而導(dǎo)致的膠體晶體凝膠光子帶隙的變化來進(jìn)行檢測。光子帶隙的變化所帶來的膠體晶體膜顏色的變化能直接被人眼所鑒別，使得檢測工具大大簡化，檢測成本大大降低。(3)本發(fā)明中，待檢的目標(biāo)分子無需進(jìn)行標(biāo)記或其他的預(yù)處理，可以簡化檢測步驟，減小因目標(biāo)分子標(biāo)記所帶來的失活等影響。(4)膠體晶體凝膠薄膜高度的親水性、高含水量、優(yōu)良的生物相容性及刺激響應(yīng)性，可以使檢測靈敏度大大提高。


下面結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述圖I為以適體為識別單元的膠體晶體凝膠檢測過程示意圖。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例對上述方案做進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，這些實施例是用于說明本發(fā)明而不限于限制本發(fā)明的范圍。實施例中采用的實施條件可以根據(jù)具體廠家的條件做進(jìn)一步調(diào)整，未注明的實施條件通常為常規(guī)實驗中的條件。實施例I適體修飾的膠體晶體凝膠薄膜檢測環(huán)境水樣中的重金屬離子Hg2+I、制備膠體晶體水凝膠薄膜將直徑為200納米的單分散二氧化硅膠體納米粒子加入丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺的混合溶液中(29 1，摩爾比)，調(diào)節(jié)二氧化硅的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為30%，超聲分散，直至膠體納米粒子溶液產(chǎn)生透亮鮮艷的結(jié)構(gòu)色；向這種溶液中加入光引發(fā)劑1173(0. 1%，質(zhì)量體積比)，充分混勻后，通過氮氣5min，取500微升體積的膠體溶液加入模具內(nèi)，靜置20min， 4°C下高壓汞燈照射15min，即得膠體晶體水凝膠膜。 2、制備適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜將第一步所制備的膠體晶體凝膠膜在O. IM的NaOH(10% N, N，N'，N'-四甲基乙二胺)溶液中還原Ih后，用2-(N-嗎啡啉)乙磺酸(MES)緩沖溶液洗滌，在MES緩沖液中加入I-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化還原膜后，加入兩端帶氨基修飾的汞離子的適體偶聯(lián)制成適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜，將制備好的薄膜用磷酸鹽緩沖液洗滌之后，測定膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜。3、Hg2+檢測將制備得到的凝膠薄膜用三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖溶液洗滌后，在O. 5ml的 Tris緩沖液中與待測水樣混合，35°C反應(yīng)lh。反應(yīng)完畢后，用Tris緩沖液洗滌，根據(jù)反應(yīng)前后膠體晶體水凝膠薄膜的顏色或通過測定膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜，確定環(huán)境水樣中萊離子的含量。實施例2使用適體修飾的膠體晶體凝膠薄膜檢測毒品可卡因I、制備膠體晶體水凝膠薄膜將直徑為150納米的單分散聚苯乙烯膠體納米粒子加入聚乙二醇雙丙烯酸酯與丙烯酰胺的混合溶液中(I 10，摩爾比)，調(diào)節(jié)聚苯乙烯的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為40%，超聲分散， 直至膠體納米粒子溶液產(chǎn)生透亮鮮艷的結(jié)構(gòu)色；向這種溶液中加入光引發(fā)劑907(0. 1%, 質(zhì)量體積比)，充分混勻后，通過氮氣lOmin，取500微升體積的膠體溶液加入模具內(nèi)，靜置 10min，4°C下高壓汞燈照射20min，即得膠體晶體水凝膠膜。2、制備適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜將第一步所制備的膠體晶體凝膠膜在O. 3M的NaOH溶液中還原30min后，用磷酸鹽(PBS)緩沖溶液洗滌，在PBS緩沖液中加入EDC/NHS試劑活化還原膜后，加入兩端帶氨基修飾的可卡因的適體偶聯(lián)制成適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜，將制備好的薄膜用PBS緩沖液洗滌之后，測定膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜。
3、可卡因的檢測將制備得到的凝膠薄膜用PBS緩沖溶液洗滌后，在O. 5ml的PBS緩沖液中與待測樣品混合，35°C反應(yīng)lh。反應(yīng)完畢后，用PBS緩沖液洗滌，根據(jù)反應(yīng)前后膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜，確定樣品中可卡因的含量。實施例3使用適體修飾的膠體晶體凝膠薄膜檢測血小板衍生生長因子I、制備膠體晶體水凝膠薄膜將直徑為100納米的單分散聚甲基丙烯酸甲酯膠體納米粒子加入10% (質(zhì)量體積比)的PEGDA溶液中，調(diào)節(jié)聚甲基丙烯酸甲酯的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為50%，超聲分散，直至膠體溶液產(chǎn)生透亮鮮艷的結(jié)構(gòu)色；向這種溶液中加入引發(fā)劑過硫酸胺(O. 1%，質(zhì)量體積比)和加速劑TEMED (O. 1%,質(zhì)量體積比)，充分混勻后，通過氮氣30min，取500微升體積的膠體溶液加入模具內(nèi)，靜置30min，與烘箱中40V聚合40min，即得膠體晶體水凝膠膜。2、制備適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜將第一步所制備的膠體晶體凝膠膜在O. 2M的KOH溶液中還原50min后，用Tris 緩沖溶液洗滌，在Tris緩沖液中加入EDC/NHS試劑活化還原膜后，加入兩端帶氨基修飾的血小板衍生生長因子的適體偶聯(lián)制成適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜，將制備好的薄膜用 Tris緩沖液洗滌之后，測定膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜。3、血小板衍生生長因子的檢測將制備得到的凝膠薄膜用Tris緩沖溶液洗滌后，在I. Oml的Tris緩沖液中與待測樣品混合，4°C反應(yīng)2h。反應(yīng)完畢后，用Tris緩沖液洗滌，根據(jù)反應(yīng)前后膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜，確定樣品中血小板衍生生長因子的含量。實施例4使用適體修飾的膠體晶體凝膠薄膜檢測凝血酶I制備膠體晶體水凝膠薄膜將直徑為250納米的單分散二氧化硅膠體納米粒子加入聚乙二醇雙丙烯酸酯和甲基丙烯酸羥乙酯的混合溶液中(質(zhì)量體積比I : 5)的溶液中，調(diào)節(jié)二氧化硅的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為60%，超聲分散，直至膠體溶液產(chǎn)生透亮鮮艷的結(jié)構(gòu)色；向這種溶液中加入光引發(fā)劑1173(0. 1%，質(zhì)量體積比)和光引發(fā)劑907 (O. I%，質(zhì)量體積比)，充分混勻后，通過氮氣 15min,取500微升體積的膠體溶液加入模具內(nèi)，靜置150min，4°C下高壓汞燈照射20min，即得膠體晶體水凝膠膜。2制備適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜將第一步所制備的膠體晶體凝膠膜在O. 2M的NaOH(含5% TEMED)溶液中還原 Ih后，用Tris緩沖溶液洗滌，在Tris緩沖液中加入EDC/NHS試劑活化還原膜后，加入兩端帶氨基修飾的凝血酶的適體偶聯(lián)制成適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜，將制備好的薄膜用 Tris緩沖液洗滌之后，測定膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜。3凝血酶的檢測將制備得到的凝膠薄膜用Tris緩沖溶液洗滌后，在I. Oml的Tris緩沖液中與待測樣品混合，4°C反應(yīng)lh。反應(yīng)完畢后，用Tris緩沖液洗滌，根據(jù)反應(yīng)前后膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜，確定樣品中凝血酶的含量。上述實例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術(shù)的人是能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種以適體為識別單元的膠體晶體凝膠非標(biāo)記可視化檢測方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(1)膠體晶體水凝膠薄膜的制備將單分散的膠體納米粒子加入水凝膠前聚體溶液中， 調(diào)節(jié)膠體納米粒子溶液中膠體納米粒子的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為10% 80%，超聲分散，直至膠體納米粒子溶液產(chǎn)生結(jié)構(gòu)色；然后加入引發(fā)劑后，灌入模具，靜置O. I 2 h，經(jīng)紫外光照射聚合或烘箱內(nèi)通過熱固化法對結(jié)構(gòu)色膠體溶液進(jìn)行固化，即得膠體晶體水凝膠薄膜，將所得到的膠體晶體水凝膠薄膜從模具上剝落，洗滌后置于純水中保存；(2)適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜的制備通過化學(xué)鍵偶聯(lián)方法將適體偶聯(lián)在步驟(I)中洗滌后的膠體晶體水凝膠薄膜上，制成適體修飾的膠體晶體水凝膠薄膜，將制備好的薄膜用磷酸緩沖液洗滌之后得到檢測用的膠體晶體水凝膠薄膜，測定檢測用的膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜；(3)目標(biāo)分析物的檢測將步驟(2)中得到的檢測用的膠體晶體水凝膠薄膜在緩沖溶液中與待測樣品混合進(jìn)行適體和樣品的特異性結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)完畢，洗滌后檢測反應(yīng)后的膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜，通過比較反應(yīng)前后膠體晶體水凝膠薄膜的顏色或通過測定膠體晶體水凝膠薄膜的反射光譜，確定待測物質(zhì)的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述方法步驟(2)采用的適體為分子識別單元，為核酸適體或RNA適體中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述方法步驟(I)采用膠體納米粒子材料選自二氧化硅、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、二氧化鈦、鐵的氧化物、金、銀中的一種或兩種以上的材料；所述的水凝膠前聚體為丙烯酰胺、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸羥乙酯、 醋酸丁酸纖維素、硅氧烷甲基丙烯酸酯、氟硅甲基丙烯酸酯、全氟醚、N-乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、甲基丙烯酸縮水甘油酯或二甲基丙烯酸乙二醇酯中的一種或兩種以上的任意混合。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述方法步驟(I)中膠體納米粒子的粒徑在10納米到500納米之間；所述膠體納米粒子的濃度在10% 80%。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述方法步驟(2)中適體修飾的化學(xué)鍵偶聯(lián)方法選自氨基與氨基的反應(yīng)、氨基與羧基的反應(yīng)或羧基與羥基的反應(yīng)中的一種或兩種以上的任意組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述方法步驟(3)中待測樣品中檢測對象為離子、藥物分子、毒品分子、添加劑、小分子、神經(jīng)遞質(zhì)、激素、蛋白質(zhì)、酶、抗原抗體、細(xì)胞因子、生長因子、腫瘤標(biāo)志物或各種生物分子中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述方法步驟(3)中待測樣品中檢測對象為汞離子、鉛離子、鉀離子、可卡因、凝血酶中的一種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種以適體為識別單元的膠體晶體凝膠非標(biāo)記可視化檢測方法，該方法采用膠體晶體水凝膠薄膜為載體，使適體與膠體晶體凝膠薄膜結(jié)合，通過適體與目標(biāo)檢測物之間高特異性、高靈敏的結(jié)合來對目標(biāo)分子進(jìn)行檢測。在適體結(jié)合目標(biāo)分子后，適體構(gòu)象的改變導(dǎo)致膠體晶體凝膠體積的變化，凝膠體積的變化直接體現(xiàn)在膠體晶體反射峰即膠體晶體顏色的變化，即待測物質(zhì)的有無或多少由膠體晶體凝膠薄膜的反射峰位移或顏色來體現(xiàn)。這種基于適體的膠體晶體水凝膠薄膜非標(biāo)記可視化檢測方法具有靈敏度高，特異性好，操作簡單、檢測成本低廉等優(yōu)點。
文檔編號G01N21/75GK102590185SQ20121000717
公開日2012年7月18日 申請日期2012年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月11日
發(fā)明者上官鳳棲, 葉寶芬, 程瑤, 謝卓穎, 趙遠(yuǎn)錦, 顧忠澤 申請人:東南大學(xué)