專利名稱：Hplc-icp-ms聯(lián)用技術(shù)檢測水產(chǎn)品中二價鎘離子的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于水產(chǎn)品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種用高效液相色譜-電感耦合等離子質(zhì)譜儀(HPLC-ICP-MS)聯(lián)用技術(shù)測定水產(chǎn)品中二價鎘離子的方法。
背景技術(shù)：
鎘不是人體所必需的微量元素。新生嬰兒體內(nèi)幾乎無鎘，人體中鎘全部是出生后通過外界環(huán)境(例如飲水、食物、香煙)進入人體的。研究顯示，鎘中毒會造成腎小管再吸收障礙，低分子量蛋白質(zhì)和鈣質(zhì)等由尿中流失，長期下去容易形成骨質(zhì)軟化，關(guān)節(jié)疼痛、骨折及腎骼變形等。長期攝入過量的鎘，會影響體內(nèi)其他有益元素的效能，造成肝腎損害、肺氣腫、支氣管炎、內(nèi)分必失調(diào)、食欲不振、失眠等問題。鎘轉(zhuǎn)移至動脈，使血壓上升，引致血管脂肪化。另外，鎘也是一種致癌物質(zhì)，可能誘發(fā)前列腺癌癥。鎘在正常環(huán)境中含量很低，但海藻、貝類等水生生物對鎘的富集能力極強，因此鎘是影響水產(chǎn)品食用安全的主要因素。鎘在生物體內(nèi)可以與蛋白質(zhì)、有機酸等結(jié)合成有機鎘形態(tài)存在，也可以無機態(tài)存在。環(huán)境學(xué)和毒理學(xué)研究結(jié)果證明，鎘的毒性與其存在形態(tài)有關(guān)，離子態(tài)鎘的毒性較高，結(jié)合態(tài)和有機態(tài)鎘無毒或毒性非常微弱。若簡單地僅采用鎘的總含量、并以其離子態(tài)的毒性效應(yīng)作為評價標準往往會高估其毒害效應(yīng)，因此鎘的形態(tài)差異成為影響海藻、貝類等水產(chǎn)品食用安全性評價的關(guān)鍵因素，但國內(nèi)外有關(guān)水產(chǎn)品中鎘形態(tài)的研究較少?，F(xiàn)行鎘的檢測方法是根據(jù)國標GB/T5009. 15-2003中規(guī)定的食品中鎘的測定方法，將水產(chǎn)品中各種形態(tài)鎘通過高溫、強氧化劑(硝酸和高氯酸)消解成離子態(tài)鎘，因此該方法檢測到的是水產(chǎn)品中鎘的總量。對水產(chǎn)品中鎘的食用安全評價尤其是對于具有高鎘積累特性的海藻和貝類，不能僅以鎘總量來評價，研究水產(chǎn)品中鎘的化學(xué)形態(tài)，并建立離子態(tài)鎘的分析技術(shù)已迫在眉睫。目前國際ISO和CAC標準中尚無測定水產(chǎn)中二價鎘離子的方法標準。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種HPLC-ICP-MS聯(lián)用技術(shù)檢測水產(chǎn)品中二價鎘離子的方法，使用高效液相色譜-電感耦合等離子質(zhì)譜儀聯(lián)用(HPLC-ICP-MS)形態(tài)分析技術(shù)，對水產(chǎn)品中的鎘元素進行定性和定量分析，準確測定水產(chǎn)品中的二價鎘離子含量。本發(fā)明是按照以下操作方法完成的一種HPLC-ICP-MS聯(lián)用技術(shù)檢測水產(chǎn)品中二價鎘離子的方法，包括以下步驟1)、 選用的儀器及設(shè)備，HPLC-ICP-MS聯(lián)用系統(tǒng)，2)、配置試劑與標準溶液，3)、樣品處理的步驟， 4)、實驗所用的儀器條件，5)、樣品檢測與結(jié)果計算；具體步驟如下I)選用的儀器及設(shè)備(I)、液相色譜儀HPLC :使用SERIES200高壓液相泵，配有自動進樣器，配有保護柱 CG5A4X50mm和相同材質(zhì)填料的CS5A 4X 250mm陽離子交換色譜柱；
(2)、電感耦合等離子體質(zhì)譜儀ICP-MS :配有動態(tài)反應(yīng)池，進樣系統(tǒng)，射頻發(fā)生器， 等離子體系統(tǒng)，Chromera形態(tài)分析全自動處理接口，離子透鏡系統(tǒng)，四極桿，真空系統(tǒng)，檢測器，氣路控制系統(tǒng)；(3)、冷卻循環(huán)水；
(4)、渦旋混合器；
(5)、純水系統(tǒng)；
(6)、循環(huán)式真空砂芯抽濾器；
(7)、高速冷凍離心機,轉(zhuǎn)速不小于8000r/min ；
(8)、數(shù)控超聲波清洗器；
(9) >0. 22 μ m的水相微孔濾膜；
(10)、純度彡99. 99%的氬氣；
2)配置試劑與標準溶液
(I)、浸提液超純水；
(2)、流動相50mM草酸+95mM氫氧化鋰溶液，使用前經(jīng)過O. 22 μ m濾膜過濾并超聲脫氣;
所有的試劑均是優(yōu)級純，整個實驗用水均為超純水；玻璃儀器使用前經(jīng)15%硝酸浸泡24h
(3)、二價鎘離子的標準使用液
將100 μ g/mL 二價鎘離子標準溶液稀釋至I. 00 μ g/mL的儲備液，置4°C冰箱存放
備用，由I. 00 μ g/mL的二價鎘離子儲備液用水稀釋成10. 0ng/mL、50. 0ng/mL、100. Ong/mL、 200. 0ng/mL>500. Ong/mL的標準使用液,現(xiàn)用現(xiàn)配；3)樣品處理的步驟稱取經(jīng)粉碎過40目篩的干樣O. 500g I. OOOg或鮮樣勻漿稱取2. OOOg 4. OOOg 置于50mL塑料具塞刻度離心管中，加水40mL渦旋混勻后，超聲浸提40min，8000r/min 4°C 離心lOmin，取出上清液用O. 22微米的水系微孔濾膜過濾后為待測樣液，移入進樣瓶中，上機測定待測樣液中鎘離子的值；4)實驗所用的儀器條件(I)、高效液相色譜條件流動相為50mM草酸+95mM氫氧化鋰溶液，流速I. OmL/ min ;進樣體積50 μ L,自動進樣；(2)、電感耦合等離子質(zhì)譜儀條件射頻功率1150W，等離子體氣流速15L/min，霧化氣流速O. 94L/min,透鏡電壓7. 00V,輔助氣流速I. 2L/min,檢測器模擬級電壓-1800V，檢測器脈沖級電壓900V，質(zhì)量通帶帶寬O. 25，采樣時間IOmin ；5)樣品檢測與結(jié)果計算開機后按上述儀器條件進行設(shè)置，待穩(wěn)定后，先做標準曲線，然后測定處理好的待測樣液；在上述高效液相色譜和電感耦合等離子質(zhì)譜儀條件下采用全自動進樣器進樣 50 μ L進行測定，高效液相色譜儀進行分離，電感耦合等離子質(zhì)譜儀對二價鎘離子進行檢測；在上述儀器條件下二價鎘離子保留時間約為3. 2min ；(2)、定量待測樣液中二價鎘離子的色譜峰保留時間與標準使用液相比變化范圍在±10%之內(nèi)即認為是該待測定物質(zhì)；
結(jié)果計算與表述用數(shù)據(jù)處理軟件中的外標法，確定二價鎘離子保留時間及分離度脈沖強度，以濃度為橫坐標，脈沖強度積分為縱坐標，繪制標準工作曲線，然后將待測樣液幸分析處理，即可得到待測樣液中的二價鎘離子的濃度，按下面式(I)計算，可得樣品中二價鎘離子的含X = CXV/mX1000..............................(I)式中X-樣品中二價鎘離子的含量，mg/kg ；C-待測樣液中二價鎘離子的濃度，ng/ml ；m-稱樣量，g;V-測定液體總體積，mL。 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的有益效果是I、本發(fā)明采用高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析水產(chǎn)品中的二價鎘離子，提取液首先由高效液相色譜，采用陽離子交換色譜技術(shù)洗脫分離提取液中的二價鎘離子，再由電感耦合等離子體質(zhì)譜儀做為檢測器進行分析。陽離子交換色譜柱能吸附提取液中的二價鎘離子，通過流動相中草酸對鎘離子的絡(luò)合作用，將二價鎘離子洗脫，通過電感耦合等離子體質(zhì)譜儀對二價鎘離子進行分析，得到二價鎘離子的保留時間及其分離度的脈沖強度。根據(jù)標準系列溶液的強度和脈沖強度積分，由儀器計算機擬合得到線性回歸方程。該實驗條件選擇合理，檢測數(shù)據(jù)準確可靠。2、本發(fā)明對水產(chǎn)品中的鎘采用中性水超聲提取，鎘的形態(tài)不會被改變，因此提取液中存在自由的離子態(tài)鎘以及跟蛋白質(zhì)等有機物絡(luò)合的有機態(tài)鎘。采用的流動相中草酸對鎘離子具有很強的絡(luò)合作用，而對于提取液中穩(wěn)定的鎘絡(luò)合物沒有吸附洗脫作用，保證了對樣品中鎘離子和鎘絡(luò)合物很好的分離。3、本發(fā)明填補了目前國標中僅有總鎘測定方法而未有鎘元素形態(tài)檢測方法的空白，可以準確科學(xué)的評價水產(chǎn)品及其制品的質(zhì)量安全，同時對制定水產(chǎn)品中有害元素限量的新標準具有重要意義。


圖I : 二價鎘離子標準使用液色譜圖；圖2 :扇貝中二價鎘離子分析色譜圖
具體實施例方式下面通過實施例詳細敘述本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明為利用高效液相色譜-電感耦合等離子質(zhì)譜儀(HPLC-ICP-MS)聯(lián)用技術(shù)分析水產(chǎn)品中二價鎘離子的方法，步驟包括1、選用的儀器及設(shè)備，2、配置試劑與標準溶液，
3、樣品提取的步驟，4、實驗所用的儀器條件，5、樣品檢測與結(jié)果計算。水產(chǎn)品品種繁多，如貝類、魚類、甲殼類、頭足類以及各種藻類等；在其生長過程中對鎘的富集作用和機理各不相同，其體內(nèi)鎘的含量和存在形式也相差很大，其中海藻和貝類對鋪具有較強的富集能力，如紫菜、扇貝、牡販等。鋪在具有聞富集能力水廣品中的存在形態(tài)是影響其食用安全性評價的關(guān)鍵因素。因此，我們選擇水產(chǎn)品中最有代表性且爭議最大的紫菜、扇貝、牡蠣作為驗證的實施例。實施例I :扇貝中二價鎘離子即Cd(II)的測定I、本實施例選用的儀器及設(shè)備HPLC-ICP-MS聯(lián)用系統(tǒng)(I)、HPLC(美國 Perkin-Elmer 公司，型號 Series 200)部分使用 SERIES200 高壓液相泵，配有自動進樣器，配有保護柱CG5A 4 X 50mm和相同材質(zhì)填料的CS5A 4 X 250mm 陽離子交換色譜柱；(2)、ICP-MS(美國Perkin-Elmer公司，型號ELAN DRC II)部分配有動態(tài)反應(yīng)池， 自動進樣系統(tǒng)，射頻發(fā)生器，等離子體系統(tǒng)，Chromera形態(tài)分析全自動處理接口，離子透鏡系統(tǒng)，四極桿，真空系統(tǒng)，檢測器，氣路控制系統(tǒng)；(3)、冷卻循環(huán)水(美國P0LYSCIENCE公司，型號SHA-C)；(4)、鏇潤混合器(IKA MS 3 basic)；(5)、純水系統(tǒng)(美國 Millipore, Milli-Q Gradient A10)；(6)、循環(huán)式真空砂芯過濾器泵(真空泵，上海亞榮生化儀器廠、型號SHZ-III ;砂芯過濾裝置、型號SH/T0093)；(7)、高速冷凍離心機(Thermo，型號D-37520)；(8)、數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司，型號KQ-600DE)；(9)、水系微孔濾膜(O. 22 μ m)；(10)、氬氣(純度彡 99.99% )。2、配置試劑與標準溶液；(I)、浸提液超純水。(2)、流動相50mM草酸+95mM氫氧化鋰溶液，使用前經(jīng)過O. 22 μ m濾膜過濾并超
聲脫氣。所有的試劑均是優(yōu)級純，整個實驗都使用超純水；玻璃儀器使用前經(jīng)15%硝酸浸泡 24h ；(3)、二價鎘離子Cd(II)的標準使用液從國家標準物質(zhì)中心購得100 μ g/mL Cd(II)的標準溶液，稀釋至I. 00 μ g/mL作為Cd(II)的儲備液(置4°C冰箱存放備用)；1. 00 μ g/mL的Cd(II)儲備液用水稀釋成 10. 0ng/mL、50. Ong/mL、100. 0ng/mL、200. 0ng/mL、500. Ong/mL 的 Cd(II)標準使用液，現(xiàn)用現(xiàn)配。3、樣品處理的步驟稱取均勻勻漿扇貝約3. OOOg置于50mL具塞刻度離心管中，加水40mL混勻，超聲浸提40min。8000r/min 4°C離心lOmin，取出上清液用O. 22微米的水系微孔濾膜過濾，移入進樣瓶中，上機測定待測樣液中二價鎘離子的值。4、實驗所用的儀器條件(I)、高效液相色譜條件(HPLC):流動相50mM草酸+95mM氫氧化鋰溶液，流速 lmL/min ;進樣體積50 μ L,自動進樣。(2)、電感耦合等離子質(zhì)譜儀條件(ICP-MS):射頻功率1150W，等離子體氣流速 15L/min,霧化氣流速O. 94L/min,透鏡電壓7. 00V,輔助氣流速I. 2L/min,檢測器模擬級電壓-1800V，，檢測器脈沖級電壓900V，質(zhì)量通帶帶寬O. 25，采樣時間lOmin。5、樣品檢測與結(jié)果計算(I)、定性開機后按上述條件進行設(shè)置，待穩(wěn)定后，取標準使用溶液ImL移入進樣瓶中，自動進樣注入高效液相色譜儀(HPLC)，進行洗粉離成分，然后應(yīng)用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP/MS)作為檢測器對Cd(II)進行分析，確定Cd(II)的保留時間及其分離度的脈沖強度，以濃度為橫坐標，脈沖強度的積分為縱坐標，由儀器的計算機作線性擬合，得到標準曲線方程。在上述高效液相色譜和電感耦合等離子質(zhì)譜儀條件下采用全自動進樣器進樣 50 μ L樣品提取液進行測定，高效液相色譜儀進行分離，電感耦合等離子質(zhì)譜儀對Cd(II) 進行檢測；在上述儀器條件下Cd(II)保留時間約為3. 2min ;詳見圖I ;(2)、定量待測樣品中Cd(II)的色譜峰保留時間與標準使用液相比變化范圍在 ±10%之內(nèi)即認為是該待測定物質(zhì)；結(jié)果計算與表述用數(shù)據(jù)處理軟件(chromera)中的外標法，確定Cd(II)保留時間及分離度脈沖強度，以濃度為橫坐標，脈沖強度積分為縱坐標，繪制標準工作曲線，將標準工作曲線保存，然后將樣品峰分析處理，即可得到待測樣液中的Cd(II)的濃度，按下面式(I)計算，可得試樣中Cd(II)的含量X = CXV/mXIOOO..............................(I)式中X-樣品中 Cd(II)的含量，mg/kg ；C-待測樣液中Cd(II)的濃度，ng/ml ；m-稱樣量，g;V-測定液體總體積，mL ；6、結(jié)果本方法0(1(11)檢出限量為0.0311^/1^。通過對扇貝樣品的加標回收率試驗，回收率為> 85%，相對標準偏差< 5%，證明上述檢測方法的可行。對牡蠣中的二價鎘離子的測定方法與扇貝相同，扇貝和牡蠣加標回收率的測定結(jié)果見表I。表I、扇貝、牡蠣加標回收率的測定結(jié)果
測定元素產(chǎn)品種類本底測定值 ng/niL力口# ng/mL測定值 ng/mL回收率％含量mg/KgCd (II)扇貝58.6100147.889.2O. 754蝴19.55062.485.8O. 26實施例2 :對紫菜中Cd(II)的測定稱取紫菜粉碎干制樣品I. OOOg置于50mL具塞塑料刻度離心管中，加水40mL混勻。超聲提取40min，8000r/min 4°C離心lOmin，取出上清液用O. 22微米的水系微孔濾膜過濾，上機測定浸提液中Cd(II)的值。其它條件均與扇貝、牡蠣的相同。紫菜中樣品的加標回收率試驗，加標回收率為91. 2%，相對標準偏差< 5%，滿足
8分析要求，紫菜中二價鎘離子的測定結(jié)果見表2。表2、紫菜加標回收率的測定結(jié)果(以干基計)
測定元素產(chǎn)品種類核測定值 ng/mL力口 ng/mL測定值 ng/mL回收率％含量mg/KgCd (II)紫菜10.52028.791.2O. 42為確保實驗數(shù)據(jù)的準確可靠我們采取的描施有①干制樣品需粉碎過40目篩，鮮樣需勻漿可使樣品均勻，浸提完全；②采用中性冰提取液提取，可以保證冰產(chǎn)品中鎘形態(tài)不發(fā)生變化；③、選用的保護柱CG5A 4父50111111，分析柱0354 4X250mm陽離子交換柱能吸附離子態(tài)Cd(II)，再通過草酸的絡(luò)合作用洗脫，使離子態(tài)鎘與絡(luò)合態(tài)有機鎘很好的分離，見圖 2。因此高效液相色譜-電感耦合等離子質(zhì)譜儀聯(lián)用(HPLC-ICP-MS)技術(shù)是分析水產(chǎn)品中二價鎘離子的首選方法。這種方法可以將二價鎘離子與有機鎘很好的分離并對無二價鎘離子進行定性定量，該方法回收率高，穩(wěn)定性好，靈敏度高，前處理簡便，解決了水產(chǎn)品中的毒性較高的二價鎘離子的分析問題，特別是對于具有高富集特性的紫菜、扇貝、牡蠣等水產(chǎn)生物，該方法可以更為清晰、準確的反應(yīng)其中二價鎘離子的含量，為科學(xué)準確的進行質(zhì)量安全性評價提供重要技術(shù)支持。
權(quán)利要求
1.一種HPLC-ICP-MS聯(lián)用技術(shù)檢測水產(chǎn)品中二價鎘離子的方法，包括以下步驟1)、 選用的儀器及設(shè)備，HPLC-ICP-MS聯(lián)用系統(tǒng)，2)、配置試劑與標準溶液，3)、樣品處理的步驟，4)、實驗所用的儀器條件，5)、樣品檢測與結(jié)果計算；其特征在于具體步驟如下1)選用的儀器及設(shè)備(1)、液相色譜儀HPLC:使用SERIES200高壓液相泵，配有自動進樣器，配有保護柱 CG5A4X50mm和相同材質(zhì)填料的CS5A 4X 250mm陽離子交換色譜柱；(2)、電感耦合等離子體質(zhì)譜儀ICP-MS:配有動態(tài)反應(yīng)池，進樣系統(tǒng)，射頻發(fā)生器，等離子體系統(tǒng)，Chromera形態(tài)分析全自動處理接口，離子透鏡系統(tǒng)，四極桿，真空系統(tǒng)，檢測器， 氣路控制系統(tǒng)；(3)、冷卻循環(huán)水；(4)、渦旋混合器；(5)、純水系統(tǒng)；(6)、循環(huán)式真空砂芯抽濾器；(7)、高速冷凍離心機,轉(zhuǎn)速不小于8000r/min；(8)、數(shù)超聲波清洗器；(9)>0. 22 μ m的水相微孔濾膜；(10)、純度彡99.99%的氬氣；2)配置試劑與標準溶液(1)、浸提液超純水；(2)、流動相50mM草酸+95mM氫氧化鋰溶液，使用前經(jīng)過O.22 μ m濾膜過濾并超聲脫氣;所有的試劑均是優(yōu)級純，整個實驗用水均為超純水；玻璃儀器使用前經(jīng)15%硝酸浸泡24h ；(3)、二價鎘離子的標準使用液將100 μ g/mL 二價鎘離子標準溶液稀釋至I. 00 μ g/mL的儲備液，置4°C冰箱存放備用，由I. 00 μ g/mL的二價鎘離子儲備液用水稀釋成10. 0ng/mL、50. 0ng/mL、100. Ong/mL、 200. 0ng/mL>500. Ong/mL的標準使用液,現(xiàn)用現(xiàn)配；3)樣品處理的步驟稱取經(jīng)粉碎過40目篩的干樣O. 500g I. OOOg或鮮樣勻漿稱取2. OOOg 4. OOOg置于50mL塑料具塞刻度離心管中，加水40mL渦旋混勻后，超聲浸提40min，8000r/min 4°C離心lOmin，取出上清液用O. 22微米的水系微孔濾膜過濾后為待測樣液，移入選樣瓶中，上機測定待測樣液中鎘離子的值；4)實驗所用的儀器條件(1)、高效液相色譜條件流動相為50mM草酸+95mM氫氧化鋰溶液，流速I.OmL/min ;進樣體積50 μ L，自動進樣；(2)、電感耦合等離子質(zhì)譜儀條件射頻功率1150W，等離子體氣流速15L/min，霧化氣流速O. 94L/min,透鏡電壓7. 00V,輔助氣流速I. 2L/min,檢測器模擬級電壓-1800V，檢測器脈沖級電壓900V，質(zhì)量通帶帶寬O. 25，采樣時間IOmin ；5)樣品檢測與結(jié)果計算開機后按上述儀器條件進行設(shè)置，待穩(wěn)定后，先做標準曲線，然后測定處理好的待測樣液；在上述高效液相色譜和電感耦合等離子質(zhì)譜儀條件下采用全自動進樣器進樣50 μ L進行測定，高效液相色譜儀進行分離，電感耦合等離子質(zhì)譜儀對二價鎘離子進行檢測；在上述儀器條件下二價鎘離子保留時間約為3. 2min ；(2)、定量待測樣液中二價鎘離子的色譜峰保留時間與標準使用液相比變化范圍在 ±10%之內(nèi)即認為是該待測定物質(zhì)；結(jié)果計算與表述用數(shù)據(jù)處理軟件中的外標法，確定二價鎘離子保留時間及分離度脈沖強度，以濃度為橫坐標，脈沖強度積分為縱坐標，繪制標準工作曲線，然后將待測樣液幸分析處理，即可得到待測樣液中的二價鎘離子的濃度，按下面式(I)計算，可得樣品中二價鎘離子的含量X = CXV/mX1000..............................(I)式中X-樣品中二價鎘離子的含量，mg/kg ；C-待測樣液中二價鎘離子的濃度，ng/ml ； m-稱樣量，g ；V-測定液體總體積，mL。
全文摘要
一種HPLC-ICP-MS聯(lián)用技術(shù)檢測水產(chǎn)品中二價鎘離子的方法，屬于水產(chǎn)品檢測技術(shù)領(lǐng)域，包括以下步驟1)、選用的儀器及設(shè)備，HPLC-ICP-MS聯(lián)用系統(tǒng)2)、配置試劑與標準溶液3)、樣品處理的步驟4)、實驗所用的儀器條件5)、樣品檢測與結(jié)果計算；本發(fā)明對水產(chǎn)品中的鎘采用中性水超聲提取，鎘的形態(tài)不會被改變，因此提取液中存在自由的離子態(tài)鎘以及跟蛋白質(zhì)等有機物絡(luò)合的有機態(tài)鎘。采用的流動相中草酸對鎘離子具有很強的絡(luò)合作用，而對于提取液中穩(wěn)定的鎘絡(luò)合物沒有吸附洗脫作用，保證了對樣品中鎘離子和鎘絡(luò)合物很好的分離；本發(fā)明填補了目前國標中僅有總鎘測定方法而未有鎘元素形態(tài)檢測方法的空白，可以準確科學(xué)的評價水產(chǎn)品及其制品的質(zhì)量安全，同時對制定水產(chǎn)品中有害元素限量的新標準具有重要意義。
文檔編號G01N30/88GK102590411SQ20121001271
公開日2012年7月18日 申請日期2012年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月16日
發(fā)明者寧勁松, 尚德榮, 翟毓秀, 譚志軍, 趙艷芳 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所