專利名稱：一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法
—種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAIc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法技術(shù)領(lǐng)域
本項(xiàng)發(fā)明涉及一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
目前對(duì)糖化血紅蛋白的檢測(cè)一直都存在檢測(cè)通量低，成本高或者準(zhǔn)確度低的情況。
例如免疫法的準(zhǔn)確度較差，成本也比較高；離子交換色譜方法準(zhǔn)確度很高，但是沒(méi)有辦法實(shí)現(xiàn)高通量測(cè)試，而且實(shí)驗(yàn)成本也很高，普通病人難以接受。本發(fā)明旨在建立一套高通量，高速度，能夠同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品的陣列毛細(xì)管電泳方法，以滿足糖化血紅蛋白檢測(cè)的要求。
多通道毛細(xì)管電泳技術(shù)已經(jīng)成功應(yīng)用于DNA測(cè)序系統(tǒng)，但是將多通道毛細(xì)管電泳系統(tǒng)用于糖化血紅蛋白ffiAlc指標(biāo)檢測(cè)在國(guó)內(nèi)尚無(wú)報(bào)道；目前國(guó)內(nèi)，已有將單根毛細(xì)管電泳方法用于糖化血紅蛋白ffiAlc檢測(cè)的報(bào)道，但此方法通量過(guò)低，無(wú)法滿足大量樣本檢測(cè)的要求。本方法將科研工作中使用的多通道毛細(xì)管電泳技術(shù)與單道毛細(xì)管電泳糖化血紅蛋白檢測(cè)技術(shù)結(jié)合在一起，既解決了糖化血紅蛋白ffiAlc檢測(cè)的難題，又大大提高了檢測(cè)的通量與速度，滿足了檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的要求。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明用于糖化血紅蛋白HbAlc相對(duì)含量測(cè)定高通量及快速測(cè)定。本發(fā)明使用多根毛細(xì)管的陣列作為分離通道可以同時(shí)對(duì)多個(gè)血液樣品中的糖化血紅蛋白HbAlc進(jìn)行分析和檢測(cè)，并自動(dòng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，生成報(bào)告。
本發(fā)明提供一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，使用陣列毛細(xì)管和光陣列檢測(cè)裝置同時(shí)對(duì)多個(gè)樣品進(jìn)行糖化血紅蛋白 HbAlc檢測(cè)。
優(yōu)選的，所述檢測(cè)方法包括以下步驟
I)將分離緩沖液充入陣列毛細(xì)管中的各毛細(xì)管中作為分離環(huán)境；
2)將各樣品同時(shí)加入到陣列毛細(xì)管中的各毛細(xì)管的前端；
3)當(dāng)樣品進(jìn)入毛細(xì)管陣列中的各毛細(xì)管前端后，將陣列毛細(xì)管的兩端更換為分離緩沖液；
4)在毛細(xì)管兩端施加電壓作為分離驅(qū)動(dòng)力；
5)通過(guò)檢測(cè)光源和光陣列檢測(cè)器對(duì)毛細(xì)管中的樣品進(jìn)行糖化血紅蛋白HbAlc檢測(cè)；
6)根據(jù)步驟5)所得檢測(cè)數(shù)據(jù)計(jì)算得出各樣品中的糖化血紅蛋白HbAlc的含量。
更優(yōu)選的，所述毛細(xì)管陣列中毛細(xì)管內(nèi)徑20-100微米，有效分離長(zhǎng)度10-50厘米。
更優(yōu)選的，所述毛細(xì)管陣列中毛細(xì)管的數(shù)量為4-48根，所述毛細(xì)管為無(wú)涂層石英毛細(xì)管或內(nèi)壁有涂層的中性石英毛細(xì)管。
更優(yōu)選的，所述毛細(xì)管每根的內(nèi)徑和長(zhǎng)度均保持一致。
進(jìn)一步的，所述4-48根毛細(xì)管構(gòu)成毛細(xì)管陣列作為分離通道，可以對(duì)4-48個(gè)樣品同時(shí)進(jìn)樣進(jìn)行電泳分離和檢測(cè)。
更優(yōu)選的，所述各毛細(xì)管的前部互相平行，末端集合到一處。
更優(yōu)選的，在步驟I)前，在構(gòu)成所述陣列毛細(xì)管的毛細(xì)管內(nèi)壁制備涂層。
更優(yōu)選的，所述涂層為聚陽(yáng)離子涂層和聚陰離子涂層所構(gòu)成的雙層涂層。
更優(yōu)選的，制備所述雙層涂層的方法為先用聚陽(yáng)離子溶液沖洗毛細(xì)管，再用聚陰離子溶液沖洗毛細(xì)管。
更優(yōu)選的，在制備涂層前，使用強(qiáng)酸和/或強(qiáng)堿溶液對(duì)陣列毛細(xì)管中的毛細(xì)管進(jìn)行處理。
更優(yōu)選的，所述強(qiáng)酸和/或強(qiáng)堿溶液對(duì)陣列毛細(xì)管中的毛細(xì)管進(jìn)行處理、聚陽(yáng)離子和聚陰離子溶液沖洗毛細(xì)管、分離緩沖液充入毛細(xì)管的過(guò)程均通過(guò)壓力完成，所述強(qiáng)酸和強(qiáng)堿溶液、聚陽(yáng)離子和聚陰離子溶液、分離緩沖液均從毛細(xì)管陣列的末端進(jìn)入，從前端排出到廢液池。
更優(yōu)選的，所述強(qiáng)酸溶液選自鹽酸緩沖液或硝酸緩沖液，所述強(qiáng)酸溶液的濃度為0.01—lmol/L。
更優(yōu)選的，所述強(qiáng)堿溶液選自氫氧化鈉水溶液或氫氧化鋰水溶液，所述強(qiáng)堿溶液的濃度為0. 01-lmol/L。
更優(yōu)選的，所述聚陽(yáng)離子溶液為含有聚陽(yáng)離子的水溶液，選自聚凝胺水溶液、聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液、白蛋白水溶液，其濃度為0. OOl-Iwt%。
更優(yōu)選的，所述聚陰離子溶液為含有聚陰離子的水溶液，選自聚丙烯酸水溶液、聚苯乙烯磺酸鈉水溶液、硫酸軟骨素水溶液，其濃度為0. 001-lwt%。
由于無(wú)涂層的毛細(xì)管會(huì)將樣品吸附到毛細(xì)管的內(nèi)表面，通常不能夠分離出糖化血紅蛋白HbAlc的峰，從而不會(huì)出峰。所以本發(fā)明在無(wú)涂層毛細(xì)管管壁上使用聚陰離子涂層和聚陽(yáng)離子涂層以達(dá)到控制血液樣品中的蛋白在毛細(xì)管內(nèi)壁吸附，并加快糖化血紅蛋白的出峰速度的目的。本發(fā)明所涉及的多通道毛細(xì)管電泳系統(tǒng)使用無(wú)涂層毛細(xì)管組成的毛細(xì)管陣列作為分離通道，以達(dá)到降低測(cè)試成本，同時(shí)保持毛細(xì)管的較長(zhǎng)使用壽命的目的。但本發(fā)明所涉及的多通道毛細(xì)管電泳系統(tǒng)也可以直接使用內(nèi)壁有涂層的毛細(xì)管陣列作為分離通道(例如可選用聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、聚吡咯烷酮等涂層的毛細(xì)管)，也可在內(nèi)壁有涂層的毛細(xì)管上再使用聚陰離子涂層或聚陽(yáng)離子涂層。
更優(yōu)選的，所述分離緩沖液的pH值為3-5。
更優(yōu)選的，所述步驟2)中的各樣品中含有電滲流標(biāo)記物。
更優(yōu)選的，以所述電滲流標(biāo)記物的出峰時(shí)間為基準(zhǔn)，得出糖化血紅蛋白及非糖化血紅蛋白所對(duì)應(yīng)的峰，對(duì)峰值進(jìn)行積分得到樣品中糖化血紅蛋白的含量。
更優(yōu)選的，以所述電滲流標(biāo)記物的出峰時(shí)間為基準(zhǔn)，得出糖化血紅蛋白及非糖化血紅蛋白所對(duì)應(yīng)的峰，對(duì)糖化血紅蛋白及非糖化血紅蛋白所對(duì)應(yīng)的峰的峰值進(jìn)行積分并計(jì)算后得到樣品中糖化血紅蛋白的含量。CN 102539512 A
更優(yōu)選的，所述計(jì)算的公式為糖化血紅蛋白(mol% )含量=糖化血紅蛋白峰值/ (糖化血紅蛋白峰值+非糖化血紅蛋白峰值)*100 %。
更優(yōu)選的，所述步驟3)中電滲流標(biāo)記物為二甲亞砜；所述二甲亞砜與樣品的體積比為 I : 1-30。
更優(yōu)選的，所述步驟3)中的樣品包括血樣和溶血?jiǎng)?，所述血樣與溶血?jiǎng)┑捏w積比為I : 1-3，所述溶血?jiǎng)┛梢詾槭袌?chǎng)上可買到的商品化溶血?jiǎng)?br> 更優(yōu)選的，所述步驟3)中各樣品同時(shí)加入到毛細(xì)管陣列中的各毛細(xì)管的前端的方法為電壓方式或壓力方式。
更優(yōu)選的，所述樣品的進(jìn)樣量為l-100nL。
更優(yōu)選的，所述步驟4)中施加電壓的方式為將電極插入毛細(xì)管兩端的分離緩沖液中或直接接在毛細(xì)管兩端。
更優(yōu)選的，所述步驟4)中所施加的電壓為恒定直流電，且U = 10_30kV。
更優(yōu)選的，所述步驟5)中的光源是波長(zhǎng)為180_600nm的紫外或可見(jiàn)光源。
更優(yōu)選的，所述紫外或可見(jiàn)光源是鹵素?zé)艋騆ED光源，所述光陣列檢測(cè)器包括多個(gè)光檢測(cè)器，并且所述光檢測(cè)器與毛細(xì)管一一匹配，所述光陣列檢測(cè)器為PMT或CCD檢測(cè)器所組成的光陣列檢測(cè)器。
更有選的，所述峰值為紫外吸收峰值。
由于毛細(xì)管陣列的兩端施加了高直流電壓(10_30kV)，在高直流電壓作用下，每根毛細(xì)管中的血液蛋白會(huì)在電場(chǎng)力作用下開(kāi)始電泳，但是由于電泳速度差異，糖化血紅蛋白 HbAlc會(huì)與其他種類蛋白質(zhì)分開(kāi)。所述毛細(xì)管陣列中毛細(xì)管的平行段的尾部設(shè)有透明檢測(cè)窗口，所述有效分離長(zhǎng)度為毛細(xì)管入口到檢測(cè)窗口之間的距離。由于各毛細(xì)管的有效分離長(zhǎng)度均相等，所以各樣品的電泳條件基本相同，也就是說(shuō)各樣品中相同組分到達(dá)透明檢測(cè)窗口的時(shí)間基本相同。檢測(cè)光源發(fā)出的光信號(hào)垂直于檢測(cè)窗口，并通過(guò)檢測(cè)窗口到達(dá)與該檢測(cè)窗口對(duì)應(yīng)的光檢測(cè)器，當(dāng)電滲流標(biāo)記物、糖化血紅蛋白HbAlc和其他種類蛋白通過(guò)透明檢測(cè)窗口的時(shí)候，與該檢測(cè)窗口對(duì)應(yīng)的光陣列檢測(cè)器中的光檢測(cè)器會(huì)記錄下各組分的響應(yīng)值并將檢測(cè)數(shù)據(jù)發(fā)送至信號(hào)分析單元，信號(hào)分析單元將所得數(shù)據(jù)處理后得出各組分的吸收峰峰值。


圖I為本發(fā)明原理示意圖(以單根毛細(xì)管為例)
圖2為本發(fā)明檢測(cè)結(jié)果示意圖(以單根毛細(xì)管為例)具體實(shí)施方式
本發(fā)明所涉及的多通道毛細(xì)管電泳系統(tǒng)可使用無(wú)涂層毛細(xì)管組成的毛細(xì)管陣列作為分離通道，以達(dá)到降低測(cè)試成本，同時(shí)保持毛細(xì)管的較長(zhǎng)使用壽命的目的。所述毛細(xì)管陣列包括4-48根彈性石英毛細(xì)管(無(wú)涂層，內(nèi)徑20-100微米，長(zhǎng)度10-50cm)，各毛細(xì)管的前部互相平行，末端集合到一處。本發(fā)明還同時(shí)在毛細(xì)管內(nèi)壁形成聚陽(yáng)離子和聚陰離子涂層，以加快糖化血紅蛋白的出峰速度。所述樣品中各組分的含量通過(guò)紫外/可見(jiàn)光光陣列檢測(cè)器檢測(cè)。
本發(fā)明原理的原理如圖I所示(以單根毛細(xì)管為例)。如圖I所示本發(fā)明原理示意圖，包括進(jìn)樣單元、光學(xué)檢測(cè)單元和信號(hào)分析單元8，所述進(jìn)樣單元與所述光學(xué)檢測(cè)單元相配合，所述光學(xué)檢測(cè)單元與信號(hào)分析單元8電連接。
進(jìn)一步的，所述光學(xué)檢測(cè)單元包括檢測(cè)光源7、光陣列檢測(cè)器3和陣列毛細(xì)管束， 所述陣列毛細(xì)管束與所述進(jìn)樣單元相配合，檢測(cè)光源7和光陣列檢測(cè)器3與所述陣列毛細(xì)管束相配合。
進(jìn)一步的，構(gòu)成所述陣列毛細(xì)管束的毛細(xì)管9的內(nèi)壁上設(shè)有聚陽(yáng)離子涂層和聚陰離子涂層。
進(jìn)一步的，所述陣列毛細(xì)管束由4-48根毛細(xì)管9構(gòu)成。
進(jìn)一步的，所述構(gòu)成陣列毛細(xì)管束的毛細(xì)管9之間相互平行，毛細(xì)管9的一端為前端I、另一端為末端2 ;且末端2匯集至一處。
進(jìn)一步的，所述構(gòu)成陣列毛細(xì)管束的毛細(xì)管9上設(shè)有透明檢測(cè)窗口 10，透明檢測(cè)窗口 10位于毛細(xì)管9的平行部分，透明窗口 10的位置與檢測(cè)光源7相配合。
進(jìn)一步的，所述構(gòu)成陣列毛細(xì)管束的毛細(xì)管9為內(nèi)徑20-100微米。
下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例I :
選用10根彈性石英毛細(xì)管(內(nèi)徑20微米，長(zhǎng)30cm)和金屬電極構(gòu)成毛細(xì)管陣列。 在毛細(xì)管陣列后部設(shè)有透明檢測(cè)窗口，使用紫外光對(duì)毛細(xì)管中分離得到的蛋白質(zhì)組分進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。
彈性石英毛細(xì)管0. lmol/L NaOH水溶液處理后，再先后用聚陽(yáng)離子(聚二烯丙基二甲基氯化銨，0. 5wt% )和聚陰離子(硫酸軟骨素，0. 5wt% )水溶液沖洗毛細(xì)管，得到雙層涂層。隨后將PH = 4的檸檬酸溶液充入毛細(xì)管作為分離環(huán)境。以上毛細(xì)管的各個(gè)沖洗、 涂層過(guò)程均通過(guò)壓力完成，并從毛細(xì)管陣列的末端進(jìn)入(出口端，相對(duì)于進(jìn)樣口的一端)， 從前端排出到廢液池，所述NaOH水溶液、聚陽(yáng)離子水溶液、聚陰離子水溶液和檸檬酸溶液的溶液槽由連有控制元件的機(jī)械臂自動(dòng)控制，也可通過(guò)手動(dòng)控制。
將毛細(xì)管陣列的毛細(xì)管的入口端一一對(duì)應(yīng)的插入陣列樣品槽中，將50nL樣品以電壓或壓力方式同時(shí)進(jìn)入毛細(xì)管陣列中毛細(xì)管的前端，所述樣品的調(diào)配體積比為血樣 溶血?jiǎng)┒讈嗧?1:3:3。
將毛細(xì)管兩端接通為分離緩沖液系統(tǒng)并在毛細(xì)管上加10_30kV的恒定直流電壓作為分離驅(qū)動(dòng)力，以驅(qū)動(dòng)樣品中的各種蛋白以不同速度通過(guò)檢測(cè)窗口位置。所述陣列樣品槽和分離緩沖液系統(tǒng)由連有控制元件的機(jī)械臂自動(dòng)控制，也可通過(guò)手動(dòng)控制。
毛細(xì)管中流過(guò)的各蛋白組分通過(guò)紫外光陣列檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，形成檢測(cè)圖譜，并記錄于軟件中。
將二甲亞砜作為電滲流的標(biāo)記物，其他的各個(gè)峰的出峰時(shí)間與二甲亞砜作為參考，來(lái)確認(rèn)各峰所代表的蛋白質(zhì)組分，其檢測(cè)結(jié)果如圖2所示(以單根毛細(xì)管為例)。將糖化血紅蛋白HbAlc及非糖化血紅蛋白HbAO的峰值進(jìn)行積分,得到糖化血紅蛋白HbAlc的百分比例。
實(shí)施例2
選用4根彈性石英毛細(xì)管(內(nèi)徑50微米，長(zhǎng)50cm)和金屬電極構(gòu)成毛細(xì)管陣列。 在毛細(xì)管陣列后部設(shè)有透明檢測(cè)窗口，使用紫外光對(duì)毛細(xì)管中分離得到的蛋白質(zhì)組分進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。
彈性石英毛細(xì)管lmol/L KOH水溶液處理后，再先后用聚陽(yáng)離子(聚凝胺水溶液， Iwt% )和聚陰離子(聚丙烯酸水溶液，0. 001wt% )水溶液沖洗毛細(xì)管，得到雙層涂層。隨后將PH = 5的檸檬酸溶液充入毛細(xì)管作為分離環(huán)境。以上毛細(xì)管的各個(gè)沖洗、涂層過(guò)程均通過(guò)壓力完成，并從毛細(xì)管陣列的末端進(jìn)入(出口端，相對(duì)于進(jìn)樣口的一端)，從前端排出到廢液池，所述NaOH水溶液、聚陽(yáng)離子水溶液、聚陰離子水溶液和檸檬酸溶液的溶液槽由連有控制元件的機(jī)械臂自動(dòng)控制，也可通過(guò)手動(dòng)控制。
將毛細(xì)管陣列的毛細(xì)管的入口端一一對(duì)應(yīng)的插入陣列樣品槽中，將IOOnL樣品以電壓或壓力方式同時(shí)進(jìn)入毛細(xì)管陣列中毛細(xì)管的前端，所述樣品的調(diào)配體積比為血樣 溶血?jiǎng)┒讈嗧?I : 9 : 21。
將毛細(xì)管兩端接通為分離緩沖液系統(tǒng)并在毛細(xì)管上加10_30kV的恒定直流電壓作為分離驅(qū)動(dòng)力，以驅(qū)動(dòng)樣品中的各種蛋白以不同速度通過(guò)檢測(cè)窗口位置。所述陣列樣品槽和分離緩沖液系統(tǒng)由連有控制元件的機(jī)械臂自動(dòng)控制，也可通過(guò)手動(dòng)控制。
毛細(xì)管中流過(guò)的各蛋白組分通過(guò)紫外光陣列檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，形成檢測(cè)圖譜，并記錄于軟件中。
將二甲亞砜作為電滲流的標(biāo)記物，其他的各個(gè)峰的出峰時(shí)間與二甲亞砜作為參考，來(lái)確認(rèn)各峰所代表的蛋白質(zhì)組分。將糖化血紅蛋白ffiAlc及非糖化血紅蛋白HbAO的峰值進(jìn)行積分，得到糖化血紅蛋白ffiAlc的百分比例與實(shí)施例I基本相同。
實(shí)施例3
選用30根彈性石英毛細(xì)管(內(nèi)徑75微米，長(zhǎng)IOcm)和金屬電極構(gòu)成毛細(xì)管陣列。 在毛細(xì)管陣列后部設(shè)有透明檢測(cè)窗口，使用可見(jiàn)光對(duì)毛細(xì)管中分離得到的蛋白質(zhì)組分進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。
彈性石英毛細(xì)管0. lmol/L KOH水溶液處理后，再先后用聚陽(yáng)離子(白蛋白水溶液，0. Iwt% )和聚陰離子(硫酸軟骨素，0. 05wt% )水溶液沖洗毛細(xì)管，得到雙層涂層。隨后將PH = 3的檸檬酸溶液充入毛細(xì)管作為分離環(huán)境。以上毛細(xì)管的各個(gè)沖洗、涂層過(guò)程均通過(guò)壓力完成，并從毛細(xì)管陣列的末端進(jìn)入(出口端，相對(duì)于進(jìn)樣口的一端)，從前端排出到廢液池，所述NaOH水溶液、聚陽(yáng)離子水溶液、聚陰離子水溶液和檸檬酸溶液的溶液槽由連有控制元件的機(jī)械臂自動(dòng)控制，也可通過(guò)手動(dòng)控制。
將毛細(xì)管陣列的毛細(xì)管的入口端一一對(duì)應(yīng)的插入陣列樣品槽中，將IOnL樣品以電壓或壓力方式同時(shí)進(jìn)入毛細(xì)管陣列中毛細(xì)管的前端，所述樣品的調(diào)配體積比為血樣 溶血?jiǎng)┒讈嗧?I 10 10。
將毛細(xì)管兩端接通為分離緩沖液系統(tǒng)并在毛細(xì)管上加10_30kV的恒定直流電壓作為分離驅(qū)動(dòng)力，以驅(qū)動(dòng)樣品中的各種蛋白以不同速度通過(guò)檢測(cè)窗口位置。所述陣列樣品槽和分離緩沖液系統(tǒng)由連有控制元件的機(jī)械臂自動(dòng)控制，也可通過(guò)手動(dòng)控制。
毛細(xì)管中流過(guò)的各蛋白組分通過(guò)可見(jiàn)光光陣列檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，形成檢測(cè)圖譜， 并記錄于軟件中。
將二甲亞砜作為電滲流的標(biāo)記物，其他的各個(gè)峰的出峰時(shí)間與二甲亞砜作為參考，來(lái)確認(rèn)各峰所代表的蛋白質(zhì)組分。將糖化血紅蛋白ffiAlc及非糖化血紅蛋白HbAO的峰值進(jìn)行積分，得到糖化血紅蛋白ffiAlc的百分比例與實(shí)施例I基本相同。
實(shí)施例4
選用48根彈性石英毛細(xì)管(內(nèi)徑100微米，長(zhǎng)40cm)和金屬電極構(gòu)成毛細(xì)管陣列。 在毛細(xì)管陣列后部設(shè)有透明檢測(cè)窗口，使用紫外光對(duì)毛細(xì)管中分離得到的蛋白質(zhì)組分進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。
彈性石英毛細(xì)管0. 01mol/L NaOH水溶液處理后，再先后用聚陽(yáng)離子(聚二烯丙基二甲基氯化銨，0. 001wt% )和聚陰離子(聚苯乙烯磺酸鈉水溶液，Iwt% )水溶液沖洗毛細(xì)管，得到雙層涂層。隨后將PH =5的檸檬酸溶液充入毛細(xì)管作為分離環(huán)境。以上毛細(xì)管的各個(gè)沖洗、涂層過(guò)程均通過(guò)壓力完成，并從毛細(xì)管陣列的末端進(jìn)入(出口端，相對(duì)于進(jìn)樣口的一端)，從前端排出到廢液池，所述NaOH水溶液、聚陽(yáng)離子水溶液、聚陰離子水溶液和檸檬酸溶液的溶液槽由連有控制元件的機(jī)械臂自動(dòng)控制，也可通過(guò)手動(dòng)控制。
將毛細(xì)管陣列的毛細(xì)管的入口端一一對(duì)應(yīng)的插入陣列樣品槽中，將2nL樣品以電壓或壓力方式同時(shí)進(jìn)入毛細(xì)管陣列中毛細(xì)管的前端，所述樣品的調(diào)配體積比為血樣溶血?jiǎng)┒讈嗧?1:3:7。
將毛細(xì)管兩端接通為分離緩沖液系統(tǒng)并在毛細(xì)管上加10_30kV的恒定直流電壓作為分離驅(qū)動(dòng)力，以驅(qū)動(dòng)樣品中的各種蛋白以不同速度通過(guò)檢測(cè)窗口位置。所述陣列樣品槽和分離緩沖液系統(tǒng)由連有控制元件的機(jī)械臂自動(dòng)控制，也可通過(guò)手動(dòng)控制。
毛細(xì)管中流過(guò)的各蛋白組分通過(guò)紫外光陣列檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，形成檢測(cè)圖譜，并記錄于軟件中。
將二甲亞砜作為電滲流的標(biāo)記物，其他的各個(gè)峰的出峰時(shí)間與二甲亞砜作為參考，來(lái)確認(rèn)各峰所代表的蛋白質(zhì)組分。將糖化血紅蛋白ffiAlc及非糖化血紅蛋白HbAO的峰值進(jìn)行積分，得到糖化血紅蛋白ffiAlc的百分比例與實(shí)施例I基本相同。
實(shí)施例5
選用10根內(nèi)壁有聚丙烯酰胺涂層的彈性石英毛細(xì)管(內(nèi)徑20微米，長(zhǎng)30cm)和金屬電極構(gòu)成毛細(xì)管陣列。在毛細(xì)管陣列后部設(shè)有透明檢測(cè)窗口，使用紫外/可見(jiàn)光對(duì)毛細(xì)管中分離得到的蛋白質(zhì)組分進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。
將毛細(xì)管陣列的毛細(xì)管的入口端一一對(duì)應(yīng)的插入陣列樣品槽中，將50nL樣品以電壓或壓力方式同時(shí)進(jìn)入毛細(xì)管陣列中毛細(xì)管的前端，所述樣品的調(diào)配體積比為血樣 溶血?jiǎng)┒讈嗧?1:3:3。
將毛細(xì)管兩端接通為分離緩沖液系統(tǒng)并在毛細(xì)管上加10_30kV的恒定直流電壓作為分離驅(qū)動(dòng)力，以驅(qū)動(dòng)樣品中的各種蛋白以不同速度通過(guò)檢測(cè)窗口位置。所述陣列樣品槽和分離緩沖液系統(tǒng)由連有控制元件的機(jī)械臂自動(dòng)控制，也可通過(guò)手動(dòng)控制。
毛細(xì)管中流過(guò)的各蛋白組分通過(guò)光陣列檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，形成檢測(cè)圖譜，并記錄于軟件中。
將二甲亞砜作為電滲流的標(biāo)記物，其他的各個(gè)峰的出峰時(shí)間與二甲亞砜作為參考，來(lái)確認(rèn)各峰所代表的蛋白質(zhì)組分。將糖化血紅蛋白ffiAlc及非糖化血紅蛋白HbAO的峰值進(jìn)行積分，得到糖化血紅蛋白ffiAlc的百分比例與實(shí)施例I基本相同。
如實(shí)施例I與實(shí)施例5所示，將本發(fā)明所提供的無(wú)涂層毛細(xì)管組成的毛細(xì)管陣列作為分離通道，在使用聚陰離子涂層和聚陽(yáng)離子涂層后，其檢測(cè)結(jié)果與直接使用內(nèi)壁有涂層的毛細(xì)管陣列作為分離通道的檢測(cè)結(jié)果基本相同。
權(quán)利要求
1.一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法， 其特征在于，使用陣列毛細(xì)管和光陣列檢測(cè)裝置同時(shí)對(duì)多個(gè)樣品進(jìn)行糖化血紅蛋白HbAlc 檢測(cè)。
2.如權(quán)利要求I所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，包括以下步驟a)將分離緩沖液充入陣列毛細(xì)管中的各毛細(xì)管中作為分離環(huán)境；b)將各樣品同時(shí)加入到陣列毛細(xì)管中的各毛細(xì)管的前端；c)當(dāng)樣品進(jìn)入毛細(xì)管陣列中的各毛細(xì)管前端后，將陣列毛細(xì)管的兩端更換為分離緩沖液；d)在毛細(xì)管兩端施加電壓作為分離驅(qū)動(dòng)力；e)通過(guò)檢測(cè)光源和光陣列檢測(cè)器對(duì)毛細(xì)管中的樣品進(jìn)行糖化血紅蛋白HbAlc檢測(cè)；f)根據(jù)步驟5)所得檢測(cè)數(shù)據(jù)計(jì)算得出各樣品中的糖化血紅蛋白HbAlc的含量。
3.如權(quán)利要求2所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述毛細(xì)管陣列中毛細(xì)管內(nèi)徑20-100微米，有效分離長(zhǎng)度10-50厘米。
4.如權(quán)利要求3所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述毛細(xì)管陣列中毛細(xì)管的數(shù)量為4-48根，所述毛細(xì)管為無(wú)涂層石英毛細(xì)管或內(nèi)壁有涂層的中性石英毛細(xì)管。
5.如權(quán)利要求4所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述各毛細(xì)管的前部互相平行，末端集合到一處。
6.如權(quán)利要求2-5所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，在步驟I)前，在構(gòu)成所述陣列毛細(xì)管的毛細(xì)管內(nèi)壁制備涂層。
7.如權(quán)利要求6所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述涂層為聚陽(yáng)離子涂層和聚陰離子涂層所構(gòu)成的雙層涂層。
8.如權(quán)利要求7所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，制備所述雙層涂層的方法為使用聚陽(yáng)離子溶液和聚陰離子溶液沖洗毛細(xì)管。
9.如權(quán)利要求8所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述聚陽(yáng)離子溶液為含有聚陽(yáng)離子的水溶液，選自聚凝胺水溶液、聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液、白蛋白水溶液，其濃度為0. OOl-Iwt%。
10.如權(quán)利要求8所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述聚陰離子溶液為含有聚陰離子的水溶液，選自聚丙烯酸水溶液、聚苯乙烯磺酸鈉水溶液、硫酸軟骨素水溶液，其濃度為0.001-lwt%。
11.如權(quán)利要求8所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，在制備涂層前，使用強(qiáng)酸和/或強(qiáng)堿溶液對(duì)陣列毛細(xì)管中的毛細(xì)管進(jìn)行處理。
12.如權(quán)利要求11所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述強(qiáng)酸和/或強(qiáng)堿溶液對(duì)陣列毛細(xì)管中的毛細(xì)管進(jìn)行處理、聚陽(yáng)離子和聚陰離子溶液沖洗毛細(xì)管、分離緩沖液充入毛細(xì)管的過(guò)程均通過(guò)壓力完成，所述強(qiáng)酸和強(qiáng)堿溶液、聚陽(yáng)離子和聚陰離子溶液、分離緩沖液均從毛細(xì)管陣列的末端進(jìn)入，從前端排出到廢液池。
13.如權(quán)利要求12所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述強(qiáng)酸溶液選自鹽酸緩沖液或硝酸緩沖液，所述強(qiáng)酸溶液的濃度為0. 01-lmol/L，所述強(qiáng)堿溶液選自氫氧化鈉水溶液或氫氧化鋰水溶液，所述強(qiáng)堿溶液的濃度為0. 01-lmol/L。
14.如權(quán)利要求2-5或7-13任一權(quán)利要求所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述分離緩沖液的pH值為3-5。
15.如權(quán)利要求2-5或7-13任一權(quán)利要求所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟2)中的各樣品中含有電滲流標(biāo)記物。
16.如權(quán)利要求15所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，以所述電滲流標(biāo)記物的出峰時(shí)間為基準(zhǔn)，得出糖化血紅蛋白及非糖化血紅蛋白所對(duì)應(yīng)的峰，對(duì)糖化血紅蛋白及非糖化血紅蛋白所對(duì)應(yīng)的峰的峰值進(jìn)行積分并計(jì)算后得到樣品中糖化血紅蛋白的含量。
17.如權(quán)利要求16所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述計(jì)算的公式為糖化血紅蛋白)含量=糖化血紅蛋白峰值/ (糖化血紅蛋白峰值+非糖化血紅蛋白峰值)*100 %。
18.如權(quán)利要求17所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述電滲流標(biāo)記物為二甲亞砜；所述二甲亞砜與樣品的體積比為I : 1_30。
19.如權(quán)利要求18所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述樣品包括血樣和溶血?jiǎng)鲅獦优c溶血?jiǎng)┑捏w積比為I : 1-3。
20.如權(quán)利要求19所述的種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述各樣品同時(shí)加入到毛細(xì)管陣列中的各毛細(xì)管的前端的方法為電壓方式或壓力方式。
21.如權(quán)利要求2-5或7-13任一權(quán)利要求所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟4)中的分離驅(qū)動(dòng)力為恒定直流電，其電壓為10-30kV。
22.如權(quán)利要求2-5或7-13任一權(quán)利要求所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟5)中的光源是波長(zhǎng)為 180-600nm的紫外或可見(jiàn)光源。
23.如權(quán)利要求22所述的一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法，其特征在于，所述紫外或可見(jiàn)光源是鹵素?zé)艋騆ED光源，所述光陣列檢測(cè)器為PMT或CCD檢測(cè)器所組成的光陣列檢測(cè)器。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品中糖化血紅蛋白HbAlc的多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法。所述多通道毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法使用陣列毛細(xì)管和光陣列檢測(cè)裝置同時(shí)對(duì)多個(gè)樣品進(jìn)行糖化血紅蛋白HbAlc檢測(cè)。本發(fā)明可以同時(shí)對(duì)多個(gè)血液樣品中的糖化血紅蛋白HbA1c進(jìn)行分析和檢測(cè)，并自動(dòng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，生成報(bào)告。
文檔編號(hào)G01N27/447GK102539512SQ20121003029
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2012年2月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月10日
發(fā)明者寧小檬 申請(qǐng)人:上?？涤锟萍加邢薰?br>