專利名稱：一種復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥合劑的質(zhì)量檢測方法，特別涉及一種復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量檢測方法。
背景技術(shù)：
上呼吸道感染為常見病、多發(fā)病。近年來，由于流動(dòng)人員頻繁，各個(gè)流動(dòng)環(huán)節(jié)方位不力，發(fā)病率有上升趨勢。上呼吸道感染四季均可發(fā)生，尤以春、冬季多見，隨著季節(jié)性的傳播，發(fā)病率集中在人群稠密的地區(qū)，且因上呼吸道感染具有一定的傳染性，在易感季節(jié)發(fā)病率最高，來試較猛，對兒童、老人及機(jī)體免疫力不強(qiáng)的人威脅很大，對人民健康和工作也往往帶來較大影響。復(fù)方魚腥草合劑由魚腥草、黃芩、板藍(lán)根、連翹、金銀花五味藥經(jīng)加工制成的復(fù)方制劑。具有清熱解毒之功效，用于外感風(fēng)熱引起的咽喉疼痛；急性咽炎、扁桃腺炎有風(fēng)熱證候者。為了嚴(yán)格控制復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量，有必要研究一套復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開一種復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量檢測方法。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明復(fù)方魚腥草合劑的指紋圖譜質(zhì)量檢測方法，該方法包括如下步驟A、供試品溶液制備取復(fù)方魚腥草合劑30 70體積份，0. IOum- 5. Oum微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；B、參照品溶液制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加0 100%甲醇、水、こ醇或こ腈制成每I體積份含千分之0. 04-0. 08重量份的溶液，作為參照品溶液；C、色譜條件色譜儀Waters2695_2996 高效液相色譜儀，色譜柱Inertsil 0DS-3150X4. 6mm, 5 u m，柱溫10 40°C，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作填充劑；以0. 02 I. 0%磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫從0分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由 80%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，從20分鐘開始至50分鐘，流動(dòng)相A由70%變?yōu)?5%，并維持5分鐘，從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由35%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度；流速為每分鐘0. 5 2. 0ml，檢測波長為220 360nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于45000 ；D、測定法分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各0. 001 0. I體積份，注入液相色譜議， 測定，記錄30 120分鐘的色譜圖；按中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)計(jì)算，除S峰外，供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度不得低于0. 90 ；復(fù)方魚腥草合劑共有色譜峰9個(gè)，I號峰相對保留時(shí)間0. 129-0. 158，占參照峰的面積比I. 75% -15. 73% ；2號峰相對保留時(shí)間0. 223-0. 273，占參照峰的面積比 5. 38% -30. 46% ；3號峰相對保留時(shí)間0. 589-0. 720，占參照峰的面積比0. 38% -7. 23% ； 4號峰相對保留時(shí)間0. 620-0. 757，占參照峰的面積比0. 21% -3. 98% ；5號峰相對保留時(shí)間0. 663-0. 810，占參照峰的面積比0. 48%-9. 07%;6號峰:相對保留時(shí)間0. 784-0. 958， 占參照峰的面積比0. 51% -9. 74% ；S峰為參照峰；7號峰相對保留時(shí)間I. 001-1. 224，占參照峰的面積比 0. 40% -I. 56% ；8號峰相對保留時(shí)間I. 017-1. 243，占參照峰的面積比0. 47% -9. 02%。本發(fā)明復(fù)方魚腥草合劑的指紋圖譜質(zhì)量檢測方法，該方法優(yōu)選如下步驟A、供試品溶液制備取復(fù)方魚腥草合劑50體積份，用0. 45um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；B、參照品溶液制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每I體積份含千分之0. 06重量份的溶液，作為參照品溶液；C、色譜條件色譜儀Waters2695_2996高效液相色譜儀，色譜柱InertsiI 0DS-3 150X4. 6mm，5 iim，柱溫35°C，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作填充劑；以0. I %磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫從0分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由 80 %變?yōu)?0 %，并維持10分鐘，從20分鐘開始至50分鐘，流動(dòng)相A由70 %變?yōu)?5 %，并維持5分鐘，從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由35%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度；流速為每分鐘I. 0ml，檢測波長為320nm;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于 45000 ；D、測定法分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各0. 01體積份，注入液相色譜議，測定， 記錄66分鐘的色譜圖；按中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)計(jì)算，除S峰外，供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度不得低于0. 90 ；復(fù)方魚腥草合劑共有色譜峰9個(gè)，I號峰相對保留時(shí)間0. 129-0. 158，占參照峰的面積比I. 75% -15. 73% ；2號峰相對保留時(shí)間0. 223-0. 273，占參照峰的面積比 5. 38% -30. 46% ；3號峰相對保留時(shí)間0. 589-0. 720，占參照峰的面積比0. 38% -I. 23% ； 4號峰相對保留時(shí)間0. 620-0. 757，占參照峰的面積比0. 21% -3. 98% ；5號峰相對保留時(shí)間0. 663-0. 810，占參照峰的面積比0. 48%-9. 07%;6號峰:相對保留時(shí)間0. 784-0. 958， 占參照峰的面積比0. 51% -9. 74% ；S峰為參照峰；7號峰相對保留時(shí)間I. 001-1. 224，占參照峰的面積比 0. 40% -I. 56% ；8號峰相對保留時(shí)間I. 017-1. 243，占參照峰的面積比0. 47% -9. 02%。本發(fā)明復(fù)方魚腥草合劑的指紋圖譜質(zhì)量檢測方法，該方法優(yōu)選如下步驟A、供試品溶液制備
取復(fù)方魚腥草合劑60體積份，用0. 45um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；B、參照品溶液制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加こ醇制成每I體積份含千分之0. 05重量份的溶液，作為參照品溶液；C、色譜條件色譜儀Waters2695_2996高效液相色譜儀，色譜柱InertsiI 0DS-3 150X4. 6mm，5iim，柱溫40°C，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作填充劑；以0. 05%磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫從0分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由 80%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，從20分鐘開始至50分鐘，流動(dòng)相A由70%變?yōu)?5%，并維持5分鐘，從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由35%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度；流速為每分鐘I. 5ml，檢測波長為250nm;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于 45000 ；D、測定法分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各0. 08體積份，注入液相色譜議，測定， 記錄65分鐘的色譜圖；按中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)計(jì)算，除S峰外，供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度不得低于0. 90 ；復(fù)方魚腥草合劑共有色譜峰9個(gè)，I號峰相對保留時(shí)間0. 129-0. 158，占參照峰的面積比I. 75% -15. 73% ；2號峰相對保留時(shí)間0. 223-0. 273，占參照峰的面積比 5. 38% -30. 46% ；3號峰相對保留時(shí)間0. 589-0. 720，占參照峰的面積比0. 38% -7. 23% ； 4號峰相對保留時(shí)間0. 620-0. 757，占參照峰的面積比0. 21% -3. 98% ；5號峰相對保留時(shí)間0. 663-0. 810，占參照峰的面積比0. 48%-9. 07%;6號峰:相對保留時(shí)間0. 784-0. 958， 占參照峰的面積比0. 51% -9. 74% ；S峰為參照峰；7號峰相對保留時(shí)間I. 001-1. 224，占參照峰的面積比 0. 40% -I. 56% ；8號峰相對保留時(shí)間I. 017-1. 243，占參照峰的面積比0. 47% -9. 02%。本發(fā)明復(fù)方魚腥草合劑的指紋圖譜質(zhì)量檢測方法，該方法優(yōu)選如下步驟A、供試品溶液制備取復(fù)方魚腥草合劑40體積份，用3um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；B、參照品溶液制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加こ腈制成每I體積份含千分之0. 04重量份的溶液，作為參照品溶液；C、色譜條件色譜儀Waters2695_2996高效液相色譜儀，色譜柱InertsiI 0DS-3 150X4. 6mm，5iim，柱溫20°C，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作填充劑；以0. 3%磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫從0分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由 80%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，從20分鐘開始至50分鐘，流動(dòng)相A由70%變?yōu)?5%，并維持5分鐘，從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由35%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度；
流速為每分鐘0. 8ml,檢測波長為350nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于 45000 ；D、測定法分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各0. 04體積份，注入液相色譜議，測定， 記錄90分鐘的色譜圖；按中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)計(jì)算，除S峰外，供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度不得低于0. 90 ；復(fù)方魚腥草合劑共有色譜峰9個(gè)，I號峰相對保留時(shí)間0. 129-0. 158，占參照峰的面積比I. 75% -15. 73% ；2號峰相對保留時(shí)間0. 223-0. 273，占參照峰的面積比 5. 38% -30. 46% ；3號峰相對保留時(shí)間0. 589-0. 720，占參照峰的面積比0. 38% -7. 23% ； 4號峰相對保留時(shí)間0. 620-0. 757，占參照峰的面積比0. 21% -3. 98% ；5號峰相對保留時(shí)間0. 663-0. 810，占參照峰的面積比0. 48%-9. 07%;6號峰:相對保留時(shí)間0. 784-0. 958， 占參照峰的面積比0. 51% -9. 74% ；S峰為參照峰；7號峰相對保留時(shí)間I. 001-1. 224，占參照峰的面積比 0. 40% -I. 56% ；8號峰相對保留時(shí)間I. 017-1. 243，占參照峰的面積比0. 47% -9. 02%。魚腥草合劑的原料及制備方法如下原料藥組成魚腥草80-120重量份黃芩15-30重量份板藍(lán)根15_30重量份連翹7-12重量份金銀花7-12重量份制法以上五味藥材，加水煎煮1-3次，毎次1-2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為I. 18-1.20(60-80°C)的清膏，加こ醇至含醇量為65-80%，攪勻，靜置，濾過，濾液減壓回收こ醇并濃縮至適量；另取蔗糖50-70重量份，制成單糖漿，加入上述藥液，加入蜂蜜、苯甲酸鈉、羥苯こ酷，混勻，調(diào)整總量至規(guī)定量，攪勻，濾過，灌裝，滅菌，即得。魚腥草合劑的原料及制備方法優(yōu)選如下原料藥組成魚渥草100重量份黃岑25重量份板藍(lán)根25重量份連翹10重量份金銀花10重量份制法以上五味藥材，加水煎煮二次，毎次2小吋，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為I. 18-1.20(60-80°C)的清膏，加こ醇至含醇量為70%，攪勻，靜置24小吋，濾過， 濾液減壓回收こ醇并濃縮至適量。另取蔗糖60重量份，制成單糖漿，加入上述藥液，加入蜂蜜、苯甲酸鈉、羥苯こ酷，混勻，調(diào)整總量至規(guī)定量，攪勻，濾過，灌裝，滅菌，即得。上述發(fā)明重量份與體積份的關(guān)系為g/ml的關(guān)系。


圖I、參照品圖譜
圖2、對照指紋圖譜
圖3、樣品I圖譜
圖4、樣品2圖譜
圖5、樣品3圖譜
圖6、樣品4圖譜
圖7、樣品5圖譜圖8、樣品6圖譜圖9、樣品7圖譜圖10、樣品8圖譜圖11、樣品9圖譜圖12、樣品10圖譜圖13、樣品11圖譜圖14、樣品12圖譜圖15、魚腥草圖譜圖16、黃芩圖譜圖17、連翹圖譜圖18、金銀花圖譜圖19、板藍(lán)根圖譜復(fù)方魚腥草合劑由魚腥草、黃芩、板藍(lán)根、連翹、金銀花五味中藥制備而成，從圖 15-圖19與對照指紋圖譜比較可知，其中四味中藥魚腥草、黃芩、連翹和金銀花的相關(guān)特征成分在指紋圖譜中均有體現(xiàn)。所以本方法對復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量控制意義重大。下面實(shí)驗(yàn)和實(shí)施例用于進(jìn)ー步說明但不限于本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)例一流動(dòng)相的篩選試驗(yàn)A、供試品溶液制備取復(fù)方魚腥草合劑(實(shí)施例I制備)50ml，用0. 45um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；B、參照品溶液制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每I體積份含千分之0. 06重量份的溶液，作為參照品溶液；C、流動(dòng)相的篩選條件I :以0. 1%磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫 從0分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由80%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，從20分鐘開始至50 分鐘，流動(dòng)相A由60 %變?yōu)?5 %，并維持5分鐘，從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由25 % 變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度。條件2 :以0. 1%磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫 從0分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由80%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，從20分鐘開始至50 分鐘，流動(dòng)相A由70 %變?yōu)?5 %，并維持5分鐘，從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由35 % 變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度。條件3 :以0. 1%磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫 從0分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由90%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，從20分鐘開始至50 分鐘，流動(dòng)相A由80 %變?yōu)?5 %，并維持5分鐘，從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由45 % 變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度。色譜儀Waters2695_2996 高效液相色譜儀，色譜柱Inertsil 0DS-3150X4. 6mm, 5iim，柱溫25°C。
D、測定方法與結(jié)果分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各0. 08ml，注入液相色譜議，測定，記錄 65分鐘的色譜圖，觀察色譜峰的分離情況，結(jié)果顯示條件2分離最佳。即為以0. I %磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫 從0分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由80%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，從20分鐘開始至50 分鐘，流動(dòng)相A由70 %變?yōu)?5 %，并維持5分鐘，從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由35 % 變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度。實(shí)驗(yàn)例ニ 色譜柱的篩選試驗(yàn)A、供試品溶液制備取復(fù)方魚腥草合劑(實(shí)施例I制備)50ml，用0. 45um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；B、參照品溶液制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每I體積份含千分之0. 06重量份的溶液，作為參照品溶液；C、色譜柱的篩選條件I :色譜柱Alltech C18 150 X 4. 6mm, 5 U m條件2 :色譜柱Inertsi I 0DS-3 150 X 4. 6mm, 5 u m條件3 :色譜柱Waters C18 150 X 4. 6mm, 5 u m色譜儀Waters2695-2996高效液相色譜儀，柱溫25°C，以0. I %磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫從0分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由80% 變?yōu)?0%，并維持10分鐘，從20分鐘開始至50分鐘，流動(dòng)相A由70%變?yōu)?5%，并維持5 分鐘，從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由35%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度。D、測定方法與結(jié)果分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各0. 08ml，注入液相色譜議，測定，記錄 65分鐘的色譜圖，觀察色譜峰的分離情況，結(jié)果顯示條件2分離最佳。即為色譜柱Inertsil0DS-3 150 X 4. 6mm, 5 u m。實(shí)驗(yàn)例三12批樣品的測定和對照指紋圖譜的確定取復(fù)方魚腥草合劑(實(shí)施例I制備，共有12個(gè)批號樣品)，依照本發(fā)明實(shí)施例I所述的方法測定，12批樣品中均有共有的色譜峰9個(gè)；由樣品I 12的指紋圖譜，擬定生成對照指紋圖譜，見附圖2。將其他樣品的指紋圖譜與對照指紋圖譜進(jìn)行比較，在供試品色譜圖中，均有9個(gè)與對照指紋圖譜對應(yīng)的特征峰，按中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)計(jì)算， 除S峰外，供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度均大于0. 90。見表ー和附圖3 附圖 14。表一 12個(gè)批號樣品的相似度數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟A、供試品溶液制備取復(fù)方魚腥草合劑30 70體積份，用O. 10 μ m 5. O μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；B、參照品溶液制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加O 100%甲醇、水、乙醇或乙腈制成每I體積份含千分之O. 04-0. 08重量份的溶液，作為參照品溶液；C、色譜條件色譜儀 Waters2695_2996 高效液相色譜儀，色譜柱Inertsil 0DS-3 150X4. 6mm, 5 μ m,柱溫10 40°C，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作填充劑；以O(shè). 02 I. O %磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫從O分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由 80%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，從20分鐘開始至50分鐘，流動(dòng)相A由70%變?yōu)?5%，并維持5分鐘，從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由35%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度；流速為每分鐘O. 5 2. 0ml，檢測波長為220 360nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于45000 ；D、測定法分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各O. 001 O. I體積份，注入液相色譜議，測定，記錄30 120分鐘的色譜圖；按中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)計(jì)算，除S峰外，供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度不得低于O. 90 ；復(fù)方魚腥草合劑共有色譜峰9個(gè)，I號峰相對保留時(shí)間O. 129-0. 158，占參照峰的面積比I. 75 % -15. 73 % ;2號峰相對保留時(shí)間O. 223-0. 273，占參照峰的面積比 5. 38% -30. 46% ；3號峰相對保留時(shí)間O. 589-0. 720，占參照峰的面積比O. 38% -7. 23% ； 4號峰相對保留時(shí)間O. 620-0. 757，占參照峰的面積比O. 21% -3. 98% ；5號峰相對保留時(shí)間O. 663-0. 810，占參照峰的面積比O. 48%-9. 07%;6號峰:相對保留時(shí)間O. 784-0. 958， 占參照峰的面積比O. 51%-9. 74%；S峰為參照峰；7號峰相對保留時(shí)間I. 001-1. 224，占參照峰的面積比O. 40% -7. 56% ；8號峰相對保留時(shí)間I. 017-1. 243，占參照峰的面積比 O. 47% -9. 02% ；復(fù)方魚腥草合劑由如下方法制成魚腥草80-120重量份黃芩15-30重量份板藍(lán)根15-30重量份連翹7-12重量份金銀花7-12重量份制法以上五味藥材,加水煎煮1-3次，每次1-2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為60-80°C I. 18-1. 20的清膏，加乙醇至含醇量為65-80%，攪勻，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至適量；另取蔗糖50-70重量份，制成單糖漿，加入上述藥液，加入蜂蜜、苯甲酸鈉、羥苯乙酯，混勻，調(diào)整總量至規(guī)定量，攪勻，濾過，灌裝，滅菌，即得。
2.如權(quán)利要求I所述的復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟A、供試品溶液制備取復(fù)方魚腥草合劑50體積份，用O. 45um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；B、參照品溶液制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每I體積份含千分之O. 06重量份的溶液， 作為參照品溶液；C、色譜條件色譜儀 Waters2695_2996 高效液相色譜儀，色譜柱Inertsil 0DS-3 150X4. 6mm, 5μπι，柱溫35 °C，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作填充劑；以O(shè). I %磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫從O分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由80%變?yōu)?70%,并維持10分鐘，從20分鐘開始至50分鐘，流動(dòng)相A由70%變?yōu)?5%，并維持5分鐘， 從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由35%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度；流速為每分鐘I. 0ml，檢測波長為320nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于45000 ；D、測定法分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各O. 01體積份，注入液相色譜議，測定，記錄 66分鐘的色譜圖；按中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)計(jì)算，除S峰外，供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度不得低于O. 90 ；復(fù)方魚腥草合劑共有色譜峰9個(gè)，I號峰相對保留時(shí)間O. 129-0. 158，占參照峰的面積比I. 75 % -15. 73 % ;2號峰相對保留時(shí)間O. 223-0. 273，占參照峰的面積比 5. 38% -30. 46% ；3號峰相對保留時(shí)間O. 589-0. 720，占參照峰的面積比O. 38% -7. 23% ； 4號峰相對保留時(shí)間O. 620-0. 757，占參照峰的面積比O. 21% -3. 98% ；5號峰相對保留時(shí)間O. 663-0. 810，占參照峰的面積比O. 48%-9. 07%;6號峰:相對保留時(shí)間O. 784-0. 958， 占參照峰的面積比O. 51%-9. 74%；S峰為參照峰；7號峰相對保留時(shí)間I. 001-1. 224，占參照峰的面積比O. 40% -7. 56% ；8號峰相對保留時(shí)間I. 017-1. 243，占參照峰的面積比O.47% -9. 02%。
3.如權(quán)利要求I所述的復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟A、供試品溶液制備取復(fù)方魚腥草合劑60體積份，用O. 45um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；B、參照品溶液制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每I體積份含千分之O. 05重量份的溶液， 作為參照品溶液；C、色譜條件色譜儀 Waters2695_2996 高效液相色譜儀，色譜柱Inertsil 0DS-3 150X4. 6mm, 5μπι，柱溫40°C，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作填充劑；以O(shè). 05%磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫從O分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由80%變?yōu)?70%,并維持10分鐘，從20分鐘開始至50分鐘，流動(dòng)相A由70%變?yōu)?5%，并維持5分鐘， 從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由35%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度；流速為每分鐘I. 5ml，檢測波長為250nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于45000 ；D、測定法分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各O. 08體積份，注入液相色譜議，測定，記錄 65分鐘的色譜圖；按中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)計(jì)算，除S峰外，供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度不得低于O. 90 ；復(fù)方魚腥草合劑共有色譜峰9個(gè)，I號峰相對保留時(shí)間O. 129-0. 158，占參照峰的面積比I. 75 % -15. 73 % ;2號峰相對保留時(shí)間O. 223-0. 273，占參照峰的面積比 5. 38% -30. 46% ；3號峰相對保留時(shí)間O. 589-0. 720，占參照峰的面積比O. 38% -7. 23% ； 4號峰相對保留時(shí)間O. 620-0. 757，占參照峰的面積比O. 21% -3. 98% ；5號峰相對保留時(shí)間O. 663-0. 810，占參照峰的面積比O. 48%-9. 07%;6號峰:相對保留時(shí)間O. 784-0. 958， 占參照峰的面積比O. 51%-9. 74%；S峰為參照峰；7號峰相對保留時(shí)間I. 001-1. 224，占參照峰的面積比O. 40% -7. 56% ；8號峰相對保留時(shí)間I. 017-1. 243，占參照峰的面積比O.47% -9. 02%。
4.如權(quán)利要求I所述的復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟A、供試品溶液制備取復(fù)方魚腥草合劑40體積份，用3um微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；B、參照品溶液制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加乙腈制成每I體積份含千分之O. 04重量份的溶液， 作為參照品溶液；C、色譜條件色譜儀 Waters2695_2996 高效液相色譜儀，色譜柱Inertsil 0DS-3 150X4. 6mm, 5μπι，柱溫20°C，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作填充劑；以O(shè). 3%磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B，按如下程序進(jìn)行梯度洗脫從O分鐘開始至10分鐘，流動(dòng)相A由80%變?yōu)?70%,并維持10分鐘，從20分鐘開始至50分鐘，流動(dòng)相A由70%變?yōu)?5%，并維持5分鐘， 從55分鐘開始至56分鐘，流動(dòng)相A由35%變?yōu)?0%，并維持10分鐘，梯度均為線性梯度；流速為每分鐘O. 8ml，檢測波長為350nm ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于45000 ；D、測定法分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各O. 04體積份，注入液相色譜議，測定，記錄 90分鐘的色譜圖；按中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)計(jì)算，除S峰外，供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度不得低于O. 90 ；復(fù)方魚腥草合劑共有色譜峰9個(gè)，I號峰相對保留時(shí)間O. 129-0. 158，占參照峰的面積比I. 75 % -15. 73 % ;2號峰相對保留時(shí)間O. 223-0. 273，占參照峰的面積比5.38% -30. 46% ；3號峰相對保留時(shí)間O. 589-0. 720，占參照峰的面積比O. 38% -7. 23% ； 4號峰相對保留時(shí)間O. 620-0. 757，占參照峰的面積比O. 21% -3. 98% ；5號峰相對保留時(shí)間O. 663-0. 810，占參照峰的面積比O. 48%-9. 07%;6號峰:相對保留時(shí)間O. 784-0. 958， 占參照峰的面積比O. 51%-9. 74%；S峰為參照峰；7號峰相對保留時(shí)間I. 001-1. 224，占參照峰的面積比O. 40% -7. 56% ；8號峰相對保留時(shí)間I. 017-1. 243，占參照峰的面積比O.47% -9. 02%。
5.如權(quán)利要求1-4任一所述的復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中的魚腥草合劑的原料組成為魚腥草100重量份黃芩25重量份板藍(lán)根25重量份連翹10重量份金銀花10重量份。
6.如權(quán)利要求1-4任一所述的復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中的魚腥草合劑由如下方法制成以上五味藥材，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液在60-80°C下濃縮至相對密度為I. 18-1. 20的清膏，加乙醇至含醇量為70%，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至適量。另取蔗糖60重量份，制成單糖漿，加入上述藥液，加入蜂蜜、苯甲酸鈉、羥苯乙酯，混勻，調(diào)整總量至規(guī)定量，攪勻，濾過，灌裝，滅菌，即得。
7.如權(quán)利要求5所述的復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中的魚腥草合劑由如下方法制成以上五味藥材，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液在60-80°C下濃縮至相對密度為I. 18-1. 20的清膏，加乙醇至含醇量為70%，攪勻，靜置24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至適量。另取蔗糖60重量份，制成單糖漿，加入上述藥液，加入蜂蜜、苯甲酸鈉、羥苯乙酯，混勻，調(diào)整總量至規(guī)定量，攪勻，濾過，灌裝，滅菌，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開一種復(fù)方魚腥草合劑指紋圖譜的質(zhì)量檢測方法。該方法用高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作填充劑；以0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫。通過本發(fā)明方法可以檢測到復(fù)方魚腥草合劑中的四味中藥魚腥草、黃芩、連翹和金銀花的相關(guān)特征成分在指紋圖譜中均有體現(xiàn)。所以本方法對復(fù)方魚腥草合劑的質(zhì)量控制意義重大。
文檔編號G01N30/88GK102590424SQ20121005638
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月6日
發(fā)明者余啟波, 張德奎, 張煜華, 梁隆, 王利春, 申志春, 程志鵬, 胡思玉 申請人:浙江國鏡藥業(yè)有限公司