專利名稱：一種hplc波長切換技術(shù)同時測定葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑中多種 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種HPLC波長切換技術(shù)同時測定中藥及中藥制劑中多種成分的方法，特別是涉及一種HPLC同時測定葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑中1-8種成分的含量的方法。
背景技術(shù)：
同時測定葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑中1-8種成分的含量，是建立葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要組成部分，為全面評價中藥質(zhì)量提供依據(jù)。目前《中國藥典》(2010版)僅采用HPLC固定波長法對葛根中葛 根素一種含量較大的成分進(jìn)行了測定。但葛根中有效物質(zhì)并不是單一的成分，而且每種成分的最大吸收波長是不一樣的。通過測定中藥的某一個成分含量的高低對該中藥進(jìn)行質(zhì)量控制，不夠全面。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種HPLC波長切換技術(shù)同時測定葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑中1-8種成分含量的方法，該方法較其他含量檢測方法，如單一成分含量檢測、非切換波長檢測等方法，可以做到更全面，準(zhǔn)確的控制葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑質(zhì)量的效果。采用的技術(shù)方案是
一種HPLC波長切換同時測定葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑中1-8種成分含量的方法，包括下述工藝步驟
I、制備供試品溶液，分別盛裝備用，其制備方法如下取葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑，相當(dāng)于含葛根藥材O. 5-1. 5 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加50%-70%乙醇30-50倍量，回流提取2-3次，每次2-3小時，放冷，再稱定重量，用50%_70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取5-10ml，置10-25ml量瓶中，加30%_50乙醇至刻度，搖勻，即得。2、葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑中1-8種成分的含量測定，采用高效液相色譜法，應(yīng)用波長切換及梯度洗脫技術(shù)取上述制備的一份供試品溶液，上ODS色譜柱(150-250 X 4. 6-6. Omm, 2-5μπι)，梯度洗脫；洗脫液為乙腈與磷酸水混合液第一梯度洗脫米用乙腈5—9% :磷酸水95—91%的混合液,第二梯度洗脫米用乙腈9一9% :磷酸水91一91%的混合液,第二梯度洗脫米用乙腈9一12% :磷酸水91一88%的混合液，第四梯度洗脫米用乙腈12—13% :磷酸水88—87%的混合液，第五梯度洗脫米用乙腈13—16% :磷酸水87—84%的混合液，第六梯度洗脫采用乙腈16 — 22% :磷酸水84— 78%的混合液，第七梯度洗脫米用乙腈22—22% :磷酸水78一78%的混合液，第八梯度洗脫米用乙腈22—32% :磷酸水78— 68%的混合液，第九梯度洗脫采用乙腈32— 42% :磷酸水68— 58%的混合液，第十梯度洗脫采用乙腈42—60% :磷酸水58—40%的混合液；洗脫液流速為O. 8—lml/min ;檢測波長第一時間段為247nm，第二時間段為250nm，第三時間段為259鹽，第四時間段為261nm，第五時間段為248nm，第六時間段為261nm，第七時間段為248nm，第八時間段為261nm，可依次測定并計算出樣品葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑中1-8種成分的含量，在上述色譜條件下，理論塔板數(shù)以葛根素計不低于25000，分離度> I. 5。上述百分比為體積百分比。3、制備對照品儲備液，其制備方法如下分別精密稱取3'-羥基葛根素、葛根素對照品適量，加30%甲醇分別制成每Iml中含3丨-羥基葛根素、葛根素各O. 70-2. O, I. O-3. Omg的對照品儲備液；精密稱取大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、芒柄花素、鷹嘴豆芽素A對照品適量，加甲醇分別制成每I ml含大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、芒柄花素、鷹嘴豆芽素 A 各 O. 61-2. 1,0. 30-1. 2,0. 78-1. 6,0. 17-0. 35,0. 17-0. 36,0. 015-O. 038mg的對照品儲備液。4、方法學(xué)考察
線性范圍的考察精密吸取1-8種混合對照品儲備液適量，置量瓶中，加甲醇稀釋至各對照品濃度均在O. 002-10mg/ml范圍內(nèi)，搖勻，制得混合對照品溶液。分別精密吸取混合對照品溶液適量，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣進(jìn)行測定。以進(jìn)樣量(X，μ g)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。精密度考察精密吸取供試品溶液10 μ 1，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得3 '-羥基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、芒柄花素、鷹嘴豆芽素A等1-8種成分峰面積的RSD均應(yīng)小于3%。穩(wěn)定性考察取供試品溶液，分別在12h內(nèi)進(jìn)樣 ομ ，測得3'-羥基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、芒柄花素、鷹嘴豆芽素A等1-8種成分峰面積的RSD均應(yīng)小于3%。重復(fù)性考察取葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑5份，每份含葛根藥材O. 5-1. 5 g，精密稱定，按步驟一方法平行制備5份供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μ I進(jìn)行測定。結(jié)果3'-羥基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、芒柄花素、鷹嘴豆芽素A等1-8種成分的RSD均應(yīng)小于3%。加樣回收率考察取已知含量的葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑5份，每份含葛根藥材O. 5-1. 5 g，精密稱定，分別置圓底燒瓶中，精密加入3 '-羥基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、芒柄花素、鷹嘴豆芽素A等1-8種對照品儲備液適量。按“步驟3的方法操作，在上述色譜條件下進(jìn)行測定后計算回收率，上述1-8種成分的加樣回收率均應(yīng)在95%-105%。
本發(fā)明的優(yōu)點在于
同時測定葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑中1-8種成分的含量，并且 利用同一種檢測條件和波長切換的方法，這樣既可以達(dá)到增加質(zhì)量覆蓋面的目的，又可以保證每種成分在最大吸收波長處被檢測，提高檢測靈敏度。
具體實施例方式實施例一一種HPLC波長切換技術(shù)同時測定葛根中8種成分含量的方法，其特征在于采用波長切換和梯度洗脫同時測定8種成分，包括下述工藝步驟
(I)、制備供試品溶液，分別盛裝備用，其制備方法如下取葛根lg，精密稱定，置圓底燒瓶中，加70%乙醇30倍量，回流提取2次，每次3小時，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取5ml，置IOml量瓶中，加30%乙醇至刻度，搖勻，即得。(2)、取上述制備的供試品溶液，上ODS色譜柱(150 X 4. 6mm，3 μ m)，梯度洗脫；洗 脫液為乙腈與O. 05%磷酸水混合液；第一梯度洗脫采用乙腈5 — 9% :磷酸水95 — 91%的混合液，第二梯度洗脫米用乙腈9一9% :磷酸水91一91%的混合液,第二梯度洗脫米用乙腈9—12% :憐酸水91—88%的混合液，第四梯度洗脫米用乙臆12—13% :憐酸水88—87%的混合液，第五梯度洗脫米用乙腈13—16% :磷酸水87—84%的混合液，第六梯度洗脫米用乙腈16—22% :磷酸水84—78%的混合液，第七梯度洗脫采用乙腈22—22% :磷酸水78—78%的混合液，第八梯度洗脫米用乙腈22—32% :磷酸水78一68%的混合液，第九梯度洗脫米用乙腈32—42% :磷酸水68— 58%的混合液，第十梯度洗脫采用乙腈42— 60% :磷酸水58— 40%的混合液；洗脫液流速為lml/min ;檢測波長第一時間段為247nm，第二時間段為250nm，第三時間段為259nm，第四時間段為261nm，第五時間段為248nm，第六時間段為261nm，第七時間段為248nm，第八時間段為261nm，可依次測定并計算出葛根中8種成分的含量，在上述色譜條件下，理論塔板數(shù)以葛根素計不低于25000，分離度> I. 5，上述百分比為體積百分比。實施例二
一種HPLC波長切換技術(shù)同時測定升麻、葛根藥對中8種成分含量的方法，其特征在于采用波長切換和梯度洗脫同時測定8種成分，包括下述工藝步驟
(I)、制備供試品溶液，分別盛裝備用，其制備方法如下取升麻、葛根藥對lg，精密稱定，置圓底燒瓶中，加50%乙醇40倍量，回流提取3次，每次2小時，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取5ml，置IOml量瓶中，加40%乙醇至刻度，搖勻，即得。(2)、取上述制備的供試品溶液，上ODS色譜柱(200X5. 0mm，4 μ m)，梯度洗脫；洗脫液為乙腈與O. 1%磷酸水混合液；第一梯度洗脫采用乙腈5 — 9% :磷酸水95 — 91%的混合液，第二梯度洗脫米用乙腈9一9% :磷酸水91一91%的混合液，第二梯度洗脫米用乙腈9一12% :磷酸水91 一88%的混合液，第四梯度洗脫采用乙腈12 —13% :磷酸水88— 87%的混合液，第五梯度洗脫米用乙腈13—16% :磷酸水87—84%的混合液,第六梯度洗脫米用乙腈16—22% :磷酸水84—78%的混合液，第七梯度洗脫采用乙腈22—22% :磷酸水78—78%的混合液，第八梯度洗脫米用乙腈22—32% :磷酸水78一68%的混合液，第九梯度洗脫米用乙腈32—42% :磷酸水68— 58%的混合液，第十梯度洗脫采用乙腈42— 60% :磷酸水58— 40%的混合液；洗脫液流速為O. 8ml/min ;檢測波長第一時間段為247nm，第二時間段為250nm，第三時間段為259nm，第四時間段為261nm，第五時間段為248nm，第六時間段為261nm，第七時間段為248nm，第八時間段為261nm，可依次測定并計算出升麻、葛根藥對中8種成分的含量，在上述色譜條件下，理論塔板數(shù)以葛根素計不低于25000，分離度> I. 5，上述百分比為體積百分比。實施例三
一種HPLC波長切換技術(shù)同時測定含升麻、葛根藥對的制劑中8種成分含量的方法，其特征在于采用波長切換和梯度洗脫同時測定8種成分，包括下述工藝步驟
(I)、制備供試品溶液，分別盛裝備用，其制備方法如下取含升麻、葛根藥對的制劑適量，相當(dāng)于含葛根藥材I. 5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加60%乙醇50倍量，回流提取2次，每次3小時，放冷，再稱定重量，用60%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取10ml，置25ml量瓶中，加50%乙醇至刻度，搖勻，即得。(2)、取上述制備的供試品溶液，上ODS色譜柱(200X6. 0mm，5 μ m)，梯度洗脫；洗脫液為乙腈與O. 15%磷酸水混合液；第一梯度洗脫采用乙腈5 — 9% :磷酸水95 — 91%的混合液，第二梯度洗脫米用乙腈9一9% :磷酸水91一91%的混合液,第二梯度洗脫米用乙腈9—12% :憐酸水91—88%的混合液，第四梯度洗脫米用乙臆12—13% :憐酸水88—87%的混合液，第五梯度洗脫米用乙腈13—16% :磷酸水87—84%的混合液，第六梯度洗脫米用乙腈16—22% :磷酸水84—78%的混合液，第七梯度洗脫采用乙腈22—22% :磷酸水78—78%的混 合液，第八梯度洗脫米用乙腈22—32% :磷酸水78一68%的混合液，第九梯度洗脫米用乙腈32—42% :磷酸水68— 58%的混合液，第十梯度洗脫采用乙腈42— 60% :磷酸水58— 40%的混合液；洗脫液流速為O. 9ml/min ;檢測波長第一時間段為247nm，第二時間段為250nm，第三時間段為259nm，第四時間段為261nm，第五時間段為248nm，第六時間段為261nm，第七時間段為248nm，第八時間段為261nm，可依次測定并計算出含升麻、葛根藥對的制劑中8種成分的含量，在上述色譜條件下，理論塔板數(shù)以葛根素計不低于25000，分離度> I. 5，上述百分比為體積百分比。
權(quán)利要求
1.ー種HPLC波長切換技術(shù)同時測定葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑中1-8種成分含量的方法，其特征在于采用波長切換和梯度洗脫同時測定1-8種成分，包括下述エ藝步驟 (1)、制備供試品溶液，分別盛裝備用，其制備方法如下取葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑，相當(dāng)于含葛根藥材O. 5-1. 5 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加50%-70%こ醇30-50倍量，回流提取2-3次，每次2-3小吋，放冷，再稱定重量，用50%_70%こ醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取5-10ml，置10-25ml量瓶中，加30%_50%こ醇至刻度，搖勻，即得； (2)、葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對制劑的含量測定，采用高效液相色譜法，應(yīng)用波長切換及梯度洗脫技術(shù)取上述制備的ー份供試品溶液，上ODS色譜柱，ODS色譜柱規(guī)格為150-250 X 4. 6-6. Omm, 2-5 μ m,梯度洗脫；洗脫液為こ腈與磷酸水混合液，第一梯度洗脫米用こ腈5—9% :磷酸水95—91%的混合液,第二梯度洗脫米用こ腈9一9% :磷酸水91一91%的混合液,第二梯度洗脫米用こ腈9一12% :磷酸水91一88%的混合液，第四梯度洗脫米用こ腈12—13% :磷酸水88—87%的混合液，第五梯度洗脫米用こ腈13—16% :磷酸水87—84%的混合液，第六梯度洗脫采用こ腈16 — 22% :磷酸水84— 78%的混合液，第七梯度洗脫米用こ腈22—22% :磷酸水78一78%的混合液，第八梯度洗脫米用こ腈22—32% :磷酸水78— 68%的混合液，第九梯度洗脫采用こ腈32— 42% :磷酸水68— 58%的混合液，第十梯度洗脫采用こ腈42—60% :磷酸水58—40%的混合液；洗脫液流速為O. 8—lml/min ;檢測波長第一時間段為247nm，第二時間段為250nm，第三時間段為259鹽，第四時間段為261nm，第五時間段為248nm，第六時間段為261nm，第七時間段為248nm，第八時間段為261nm，可依次測定并計算出葛根，升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑中1-8種成分的含量，在上述色譜條件下，理論塔板數(shù)以葛根素計不低于25000，分離度> I. 5，上述百分比為體積百分比。
全文摘要
一種HPLC同時測定葛根、升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑中多種成分含量的方法，包括制備供試品溶液和葛根、升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的成分含量測定兩個步驟。供試品溶液是取葛根、升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑，相當(dāng)于葛根藥材0.5—1.5g，用乙醇回流提取方法制得。而成分含量測定采用對供試樣品上ODS色譜柱、梯度洗脫和HPC波長切換實現(xiàn)同時測定1—8種成分含量。洗脫液為乙腈與磷酸水混合液。本發(fā)明可以作到更全面、更準(zhǔn)確的控制葛根、升麻、葛根藥對及含升麻、葛根藥對的制劑質(zhì)量的效果。
文檔編號G01N30/88GK102636605SQ20121007907
公開日2012年8月15日 申請日期2012年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月23日
發(fā)明者劉威, 劉玉強(qiáng), 孫艷濤, 尤春雪, 張振秋, 李可強(qiáng), 李妍, 李峰, 王美, 王飛 申請人:遼寧中醫(yī)藥大學(xué)