專(zhuān)利名稱(chēng)：利用微量熱法測(cè)定小麥條銹病菌生長(zhǎng)周期的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物病害監(jiān)測(cè)研究技術(shù)領(lǐng)域，涉及ー種利用微量熱法測(cè)定小麥條銹病菌生長(zhǎng)周期的方法。
背景技術(shù)：
小麥條鎊病是由小麥條鎊菌(Pucciniastriiformis West. f. sp. tritici)引起的世界性小麥重要病害，主要在我國(guó)西北、西南、華北和淮北等地冬麥區(qū)和西北春麥區(qū)發(fā)生。該病害具有分布廣、傳播快、危害面積大等特點(diǎn)，一般流行年份可使小麥減產(chǎn)20% 30%，大流行年份則可使小麥減產(chǎn)60% 90%，甚至絕收，為此對(duì)小麥條銹病菌的生長(zhǎng)問(wèn)題研究也是ー個(gè)關(guān)系到國(guó)家民生的重大課題。目前本領(lǐng)域?qū)τ谛←湕l銹病菌生長(zhǎng)周期的測(cè)定主要采用計(jì)數(shù)法或光電比濁法計(jì)數(shù)法包括稀釋平板計(jì)數(shù)法以及顯微鏡直接計(jì)數(shù)法，是將少量純種單細(xì)胞小麥條銹病菌接種到定量的液體培養(yǎng)基中，定時(shí)取樣測(cè)定細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)而繪制曲線(xiàn)，該方法雖然原理簡(jiǎn)單，但操作復(fù)雜繁瑣，精確度不高；光電比濁法是利用在可見(jiàn)光的450 650nm波段內(nèi)微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比的原理而采用的一種自動(dòng)控制的方法，但該法只能檢測(cè)含有大量細(xì)菌的懸浮液，對(duì)顏色太深的樣品具有一定的局限性，致使其測(cè)定對(duì)培養(yǎng)液的選擇性較大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題加以解決，提供ー種操作簡(jiǎn)便、自主和可靠性高的利用微量熱法測(cè)定小麥條銹病菌生長(zhǎng)周期的方法，通過(guò)該方法可以清晰地確定出小麥條銹病菌生長(zhǎng)速率最快的時(shí)間段和條件，從而為小麥條銹病的防治提供有カ的參考。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的而提供的測(cè)定小麥條銹病菌生長(zhǎng)周期的方法包括下述的測(cè)定步驟I、根據(jù)田間采集的典型的小麥條銹病葉片，通過(guò)震蕩法獲取小麥條銹病菌的菌種，配制菌種濃度為O. 05g/l O. 10g/l ；2、取重量百分比為2% 5%的滅菌水或蔗糖液或葡萄糖液或麥芽糖液與重量百分比為95% 98%的蒸餾水配制成小麥條銹病菌萌發(fā)培養(yǎng)液，培養(yǎng)液的pH為6 7 ;3、分別在兩個(gè)試管A、B中加入等量的配適溫度為10°C 30°C的培養(yǎng)液，然后在試管A中添加小麥條銹病菌的菌種，添加比例為每IOml培養(yǎng)液中添加O. 6 Img菌種，將試管A、B置于搖床中震蕩24小時(shí)；4、在常壓以及選定的溫度28°C下，從試管A、B中移取溶液3ml分別加入C8tl微量熱儀的樣品池和參比池(參比池主要用來(lái)消除培養(yǎng)液引起的誤差，例如溶解熱)中，用Cm微量熱儀姆間隔40秒時(shí)間自動(dòng)記錄樣品池在該時(shí)段的熱流(Heatflow)值Pt并存儲(chǔ)于計(jì)算機(jī)中，通過(guò)公式InPt = lnP0+kt
進(jìn)行指數(shù)增長(zhǎng)期微生物的生長(zhǎng)速率常數(shù)k的定量計(jì)算，式中Pt、匕、k和t分別是時(shí)間t時(shí)的熱流、初始熱流、對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)速率常數(shù)和生長(zhǎng)時(shí)間，以時(shí)間t為橫坐標(biāo)，用InPt對(duì)t作圖就可得到對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)速率常數(shù)k的曲線(xiàn)圖，即小麥條銹病菌生長(zhǎng)周期曲線(xiàn)，由此獲得小麥條銹病菌處于各個(gè)生長(zhǎng)階段的時(shí)間以及熱量變化的具體數(shù)值，進(jìn)而確定出小麥條銹病菌生長(zhǎng)速率最快的時(shí)間段和條件，為小麥條銹病的防治提供了有力的參考。具體實(shí)施過(guò)程中，小麥條銹病菌萌發(fā)的適宜培養(yǎng)液的適溫范圍因基質(zhì)不同而略有差異，由滅菌水與蒸餾水配置的培養(yǎng)液的適溫范圍為10°c 20°C，在蒸餾水與蔗糖液、葡萄糖液或麥芽糖液配置的培養(yǎng)液的適溫范圍為10°C 15°C。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述的測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便、實(shí)時(shí)、定量、可靠性高，它利用C8tl微量熱即時(shí)記錄小麥條銹病菌生長(zhǎng)期間的熱流變化的方法獲得小麥條銹病菌的生長(zhǎng)周期曲線(xiàn)，通過(guò)該生長(zhǎng)周期曲線(xiàn)可以清晰地辨別小麥條銹病生長(zhǎng)周期中的各個(gè)生長(zhǎng)階段以及各個(gè)生長(zhǎng)階段的時(shí)間長(zhǎng)短、熱量變化的快慢以及具體數(shù)值，從而為小麥條銹病菌的研究和防治提供了有力的參考。


附圖是本發(fā)明ー個(gè)實(shí)施例方法測(cè)得的小麥條銹病菌的生長(zhǎng)周期曲線(xiàn)圖。圖中橫軸為時(shí)間坐標(biāo)t軸，縱軸為對(duì)數(shù)熱流坐標(biāo)InPt軸。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合一個(gè)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明內(nèi)容做進(jìn)ー步說(shuō)明。I、制備菌種——根據(jù)田間采集的典型的小麥條銹病葉片，通過(guò)震蕩法獲取小麥條銹病菌的菌種，配制菌種濃度為O. 08g/l ；2、配制培養(yǎng)液——取2 %重量的葡萄糖液與98 %重量的蒸餾水配制成小麥條銹病菌萌發(fā)培養(yǎng)液500ml，培養(yǎng)液pH為6 7 ;3、分別移取IOml培養(yǎng)液至兩個(gè)試管A、B中，然后向A中添加O. 8mg的小麥條銹病菌，B中培養(yǎng)液作為參比液，培養(yǎng)液溫度為10°C 15°C，將試管A、B置于搖床中震蕩24小時(shí)；4、在常壓以及選定的溫度28°C下，從試管A、B中移取溶液3ml分別加入C8tl微量熱儀的樣品池和參比池中，用C8tl微量熱儀每間隔40s時(shí)間即時(shí)自動(dòng)記錄樣品池在該時(shí)段的熱流值Pt并存儲(chǔ)于計(jì)算機(jī)中，通過(guò)公式InPt = lnP0+kt(I)進(jìn)行指數(shù)增長(zhǎng)期微生物的生長(zhǎng)速率常數(shù)k的定量計(jì)算，以時(shí)間t為橫坐標(biāo)，用InPt對(duì)t作圖就可得到對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)速率常數(shù)k的曲線(xiàn)圖，即小麥條銹病菌生長(zhǎng)周期曲線(xiàn)。表I :小麥條銹病菌生長(zhǎng)曲線(xiàn)的部分原始數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1. ー種利用微量熱法測(cè)定小麥條銹病菌生長(zhǎng)周期的方法，其特征在于包括下述的測(cè)定步驟 1.1根據(jù)田間采集的典型的小麥條銹病葉片，通過(guò)震蕩法獲取小麥條銹病菌的菌種，配制菌種濃度為O. 05g/l O. 10g/l ； I. 2取重量百分比為2 % 5 %的滅菌水或蔗糖液或葡萄糖液或麥芽糖液與重量百分比為95% 98%的蒸餾水配制成小麥條銹病菌萌發(fā)培養(yǎng)液，培養(yǎng)液的pH為6 7 ; I. 3分別在兩個(gè)試管A、B中加入等量的配適溫度為10°C 30°C的培養(yǎng)液，然后在試管A中添加小麥條銹病菌的菌種，添加比例為每IOml培養(yǎng)液中添加O. 6 Img菌種，將試管A、B置于搖床中震蕩24小時(shí)； 1.4在常壓以及選定的溫度28°C下，從試管A、B中移取溶液3ml分別加入C8tl微量熱儀的樣品池和參比池中，用C8tl微量熱儀每間隔40秒時(shí)間即時(shí)自動(dòng)記錄樣品池在該時(shí)段的熱流值Pt并存儲(chǔ)于計(jì)算機(jī)中，通過(guò)公式InPt = lnP0+kt 進(jìn)行指數(shù)增長(zhǎng)期微生物的生長(zhǎng)速率常數(shù)k的定量計(jì)算，式中Pt、匕、k和t分別是時(shí)間t時(shí)的熱流、初始熱流、對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)速率常數(shù)和生長(zhǎng)時(shí)間，以時(shí)間t為橫坐標(biāo)，用InPt對(duì)t作圖就可得到對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)速率常數(shù)k的曲線(xiàn)圖，即小麥條銹病菌生長(zhǎng)周期曲線(xiàn)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用微量熱法測(cè)定小麥條銹病菌生長(zhǎng)周期的方法，其特征是在兩個(gè)試管A、B中加入的培養(yǎng)液由滅菌水與蒸餾水配置而成，其配適溫度為10°C 20°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用微量熱法測(cè)定小麥條銹病菌生長(zhǎng)周期的方法，其特征是在兩個(gè)試管A、B中加入的培養(yǎng)液由蔗糖液或葡萄糖液或麥芽糖液與蒸餾水配置而成，其配適溫度為10°C 15°C。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種利用微量熱法測(cè)定小麥條銹病菌生長(zhǎng)周期的方法，在常壓以及選定的溫度下，用C80微量熱儀即時(shí)測(cè)出小麥條銹病菌萌發(fā)培養(yǎng)液的熱流值并存儲(chǔ)于計(jì)算機(jī)中，經(jīng)計(jì)算后得到小麥條銹病菌的生長(zhǎng)周期曲線(xiàn)。本發(fā)明的操作簡(jiǎn)便、可靠性高，通過(guò)測(cè)得的生長(zhǎng)周期曲線(xiàn)可以清晰地辨別小麥條銹病生長(zhǎng)周期中的各個(gè)生長(zhǎng)階段以及各個(gè)生長(zhǎng)階段的時(shí)間長(zhǎng)短、熱量變化的快慢以及具體數(shù)值，從而為小麥條銹病菌的研究和防治提供有力的參考。
文檔編號(hào)G01N25/20GK102645448SQ201210103570
公開(kāi)日2012年8月22日 申請(qǐng)日期2012年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月10日
發(fā)明者劉向榮, 宋超超, 李侃社, 王君, 蔡會(huì)武, 趙順省 申請(qǐng)人:西安科技大學(xué)