專利名稱：一種通過檢測葉綠素含量鑒別蜂膠與楊樹膠的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蜂膠與楊樹膠鑒別技術(shù)領(lǐng)域，特別是通過葉綠素含量的含量檢測來鑒別蜂膠與楊樹膠的一種方法。
背景技術(shù)：
蜂膠具有降血脂、降血糖、提高人體免疫力、增強(qiáng)機(jī)體抵抗力、抗氧化、抗腫瘤、預(yù)防感染等多種生物學(xué)特性，被廣泛地應(yīng)用在人體保健和疾病治療之中，是近年來國內(nèi)外蜂廣品研究和開發(fā)的熱點(diǎn)。蜂膠是西方蜜蜂采集植物芽、葉或樹皮破裂處分泌的樹脂并混入蜜蜂上顎腺分泌 物和蜂蠟而成的芳香固體物，被蜜蜂涂布在蜂箱的縫隙、框耳等處，經(jīng)人工收集的具有天然屬性的蜜蜂產(chǎn)品。我國天然蜂膠年產(chǎn)量約400噸，每公斤收購價(jià)在400元。楊樹膠是人工利用楊柳科楊屬植物的嫩枝、幼芽、樹皮等進(jìn)行熬制提取的膠體，是國內(nèi)假蜂膠的主要類型，其成本價(jià)每公斤150元左右。由于楊樹膠價(jià)格便宜，受利益驅(qū)動(dòng)，目前我國蜂膠市場上有相當(dāng)數(shù)量的產(chǎn)品是以楊樹膠冒充的蜂膠產(chǎn)品，這一現(xiàn)象倍受國內(nèi)蜂業(yè)界及有關(guān)部門的關(guān)注。蜂膠和楊樹膠在感官性狀上十分相似，總黃酮類物質(zhì)化學(xué)成分相差無幾，依據(jù)目前國內(nèi)關(guān)于蜂膠的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，難以區(qū)分兩者。比如1、中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布NY5136-2002無公害食品蜂膠中，用高效液相色譜法測定蜂膠中的總黃酮含量，儀器昂貴，過程繁雜，而且八種黃酮高良姜素、蘆丁、槲皮素、楊梅酮、莰菲醇、芹菜素、松屬素、柯因標(biāo)樣價(jià)格昂貴，國內(nèi)購買不全。而且楊樹膠中也同樣含有前述八種黃酮只是各自的比例不同，無法從根本上區(qū)分蜂膠和楊樹膠。2、中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布GB/T 24283-2009蜂膠中，用紫外分光光度法，以蘆丁為對照品，測定蜂膠中的總黃酮含量，檢測儀器和和對照品成本較高，而且楊樹膠中以蘆丁為對照的總黃酮與蜂膠中總黃酮相同，同樣無法區(qū)分蜂膠和楊樹膠。3、NY5136-2002和GB/T 24283-2009中，均有測定乙醇提取物含量和氧化時(shí)間，在相同條件下楊樹膠同樣可以滿足這兩項(xiàng)檢測指標(biāo)，也無法區(qū)分蜂膠和楊樹膠。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種有效鑒別蜂膠和楊樹膠的方法。本發(fā)明的技術(shù)問題通過下述方法解決
一種檢測葉綠素含量鑒別蜂膠與楊樹膠的方法，以丙酮提取試樣中的葉綠素，用乙醚分層萃取，硫酸鈉溶液洗滌凈化，于兩處一定的波長下比色定量，進(jìn)行鑒別；具體工藝步驟如下
a、分析步驟
a.I、蜂膠的炮制及提取取毛蜂膠樣品，先在-5 一 10°C以下冷凍24 48小時(shí)，然后搗碎精密稱定；置于玻璃研缽中，加與樣品等量的碳酸鈣及石英砂，研磨，加相當(dāng)兩倍樣品量的乙醇繼續(xù)研磨成糊狀；將研磨物全部轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中，用乙醇洗滌研缽至無色，使乙醇量達(dá)到樣品量的二十倍，密塞、冷浸、振搖混勻、靜置24 48小時(shí)，用63玻璃漏斗抽濾，用丙酮水溶液洗滌抽干；將漏斗內(nèi)殘?jiān)够匮欣徶屑颖芤貉心ィ俎D(zhuǎn)移至漏斗中，抽濾，繼續(xù)用丙酮水溶液洗滌研缽及漏斗中的殘?jiān)翞V液無色，使用丙酮水溶液量達(dá)到樣品量的二十倍；精密吸取總抽濾液的四分之一，置于干燥恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，在90°C 110°C溫度下干燥3小時(shí)并冷卻至室溫，迅速精密稱定重量，以干燥品計(jì)算出毛蜂膠中浸出物的含量(％);
a.2、試樣的溶解取上述干燥蜂膠提取物，精密稱定，置燒杯中，加丙酮水溶液使供試品全部溶解，備用；
a.3、分離凈化將上述試樣溶解液全部轉(zhuǎn)入內(nèi)盛硫酸鈉溶液的分液漏斗中，用乙醚分次洗滌燒杯，并入分液漏斗中，振搖，使分層，水層放入另一分液漏斗中，加試樣溶解液五分之三的乙醚萃取，棄去水層；有機(jī)層并入第一個(gè)分液漏斗中，用水洗滌，棄去水層；將乙醚層通過一裝有無水硫酸鈉的小漏斗濾入棕色容量瓶中，用試樣溶解液五分之一的乙醚洗滌分液漏斗，并洗去無水硫酸鈉層中的色素，定容，搖勻，待用；
a.4、測定取上述溶液到棕色容量瓶中，用乙醚定容，搖勻，立即于分光光度計(jì)上測定642nm及660nm波長處的吸光值,用乙醚作空白。a. 5通過一定的公式計(jì)算出試樣中葉綠素的含量。所述試劑為化學(xué)純或分析純，水為蒸餾水。所述試劑包括乙醇、碳酸鈣、石英砂試劑級、丙酮、無水硫酸鈉、乙醚、丙酮水溶液及硫酸鈉水溶液中的一種。所述的試劑無水硫酸鈉為在650°C灼燒4h的無水硫酸鈉。所述的試劑丙酮水溶液的質(zhì)量體積比為85+15，V/V。所述的試劑硫酸鈉水溶液為2%，m/V。上述試樣及加入物為固體時(shí)以g為計(jì)量單位，試樣及加入物為液體時(shí)以ml為計(jì)量單位，在倍數(shù)換算時(shí)Ig相當(dāng)于1ml。本發(fā)明采用極性較低的有機(jī)溶劑萃取和分離蜂膠或以楊樹皮或芽為材料制成的楊樹膠中的葉綠素，以分光光度法對其含量進(jìn)行定量檢測，分別求出蜂膠和楊樹膠各自葉綠素含量的最高值和平均值，設(shè)定蜂膠葉綠素含量安全限值為15mg/100g，通過對比檢測葉綠素含量可準(zhǔn)確鑒別蜂膠和楊樹膠。如果被檢測樣品葉綠素含量值<15mg/100g，可判定樣品是真蜂膠；如果被檢測樣品葉綠素含量值> 15mg/100g，可判定樣品是假蜂膠，或是在蜂膠中摻入了楊樹膠，檢測樣品葉綠素含量值越高說明楊樹膠摻入量越大。本發(fā)明的檢測方法簡便，檢測樣品及設(shè)備簡單易得，檢測準(zhǔn)確率高。具體實(shí)施方法 實(shí)施例I
方法原理以丙酮提取試樣中的葉綠素，用乙醚分層萃取，硫酸鈉溶液洗滌凈化，于642nm及660nm波長下比色定量。試劑乙醇。儀器設(shè)備
多孔電子恒溫水浴鍋，分光光度計(jì)，具塞錐形瓶、250ml，瓷蒸發(fā)皿，玻璃研缽、150ml, G3玻璃砂芯漏斗，分液漏斗、250ml，棕色容量瓶、50ml，移液管、IOml、20ml。I、分析步驟
I.I、蜂膠的炮制及提取取毛蜂膠樣品5g，先在-5°C下冷凍24h，然后搗碎精密稱定；置于玻璃研缽中，加碳酸鈣5g及石英砂5g，緩緩研磨成極細(xì)粉，加乙醇IOml繼續(xù)研磨成糊狀；將研磨物全部轉(zhuǎn)移至250ml具塞錐形瓶中，用乙醇洗滌研缽近無色，使乙醇的總體積至100ml，密塞，冷浸，前6h內(nèi)時(shí)時(shí)振搖，再靜置18h，全部用G3玻璃漏斗抽濾，用丙酮水溶液(85%)反復(fù)洗漆錐形瓶至漏斗內(nèi)抽干；將漏斗內(nèi)殘洛倒回研缽中用丙酮水溶液研磨5min,再轉(zhuǎn)移至漏斗中，抽濾，繼續(xù)用丙酮水溶液反復(fù)洗滌研缽及漏斗中的殘?jiān)?，至濾液近無色，使用丙酮水溶液的總體積為IOOml。精密吸取抽濾液50ml，置于干燥恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，在110°C干燥3h，置干燥器中冷卻30min至室溫，迅速精密稱定重量，以干燥品計(jì)算出毛蜂膠中浸出物的含量(％)。I. 2、試樣的溶解取上述干燥蜂膠提取物約0. 2g，精密稱定，置50ml燒杯中，加丙酮水溶液(85%) 50ml使供試品全部溶解，得50ml試樣溶液，備用。I. 3、分離凈化將上述試樣溶解液全部轉(zhuǎn)入內(nèi)盛50mL 2%硫酸鈉溶液的250ml分液漏斗中，用20ml乙醚分次洗滌燒杯，并入分液漏斗中，振搖lmin，使分層，水層放入另一分液漏斗中，加20ml乙醚萃取，棄去水層；有機(jī)層并入第一個(gè)分液漏斗中，用水洗滌兩次，每次20ml，棄去水層。將乙醚層通過一裝有5g無水硫酸鈉的小漏斗濾入50ml棕色容量瓶中，用乙醚洗滌分液漏斗，并洗去無水硫酸鈉層中的色素，定容，搖勻，待用。I. 4、測定取上述溶液IOml到50ml棕色容量瓶中，用乙醚定容，搖勻，立即于分光光度計(jì)上測定642nm及660nm處的吸光值，I cm比色皿，用乙醚作空白。I. 5結(jié)果計(jì)算
按下式(I)、( 2 )計(jì)算試樣中的總?cè)~綠素質(zhì)量分?jǐn)?shù)含量。X1= . 12A660+16 . 8A642 ....................................... (I)
X2= [(X1XVXF) (mX 1000)] XlOO ............... (2)
式中A1 —樣液中總?cè)~綠素的含量，單位為毫克每升(mg/L)；
A 一相應(yīng)波長處(660nm，642nm)測得吸光值；
X2 一試樣中總?cè)~綠素的質(zhì)量分?jǐn)?shù),單位為毫克每100克(mg/100g)
V一提取液的總體積，單位為暈升(ml)；
F一試樣的稀釋倍數(shù)； m 一試樣的質(zhì)量,單位為克(g)；
測定結(jié)果取平行試驗(yàn)結(jié)果的算術(shù)平均數(shù)，保留小數(shù)點(diǎn)后第一位。平行試驗(yàn)允許誤差(相對)不大于3%。a.楊樹(芽)膠的檢測結(jié)果見下表I :表I吸光值吸光值I相對誤差I(lǐng)葉綠素含量 樣口口編 5 取樣里(匕)A642A660(%)(n g./100g)
楊樹膠 I0.2026CL 1300. 125L 375, I
楊樹膠 II0. 20010, 2130, 1951,5124. 4
楊樹膠III0.20390, 1910. 180I. 3HO. I
權(quán)利要求
1.一種檢測葉綠素含量鑒別蜂膠與楊樹膠的方法，以丙酮提取試樣中的葉綠素，用乙醚分層萃取，硫酸鈉溶液洗滌凈化，于兩處波長下比色定量，進(jìn)行鑒別；具體工藝步驟如下 a、分析步驟 a. I、蜂膠的炮制及提取取毛蜂膠樣品，先在_5°C 一 10°C下冷凍24 48小時(shí)，然后搗碎精密稱定；置于玻璃研缽中，加與樣品等量的碳酸鈣及石英砂，研磨，加相當(dāng)兩倍樣品量的乙醇繼續(xù)研磨成糊狀；將研磨物全部轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中，用乙醇洗滌研缽至無色，使乙醇量達(dá)到樣品量的二十倍，密塞、冷浸、振搖混勻、靜置24 48小時(shí)，用G3玻璃漏斗抽濾，用丙酮水溶液洗滌抽干；將漏斗內(nèi)殘?jiān)够匮欣徶屑颖芤貉心?，再轉(zhuǎn)移至漏斗中，抽濾，繼續(xù)用丙酮水溶液洗滌研缽及漏斗中的殘?jiān)?，至濾液無色，使用丙酮水溶液量達(dá)到樣品量的二十倍；精密吸取總抽濾液的四分之一，置于干燥恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，在90°C 110°C溫度下干燥3小時(shí)并冷卻至室溫，迅速精密稱定重量，以干燥品計(jì)算出毛蜂膠中浸出物的含量(％); a. 2、試樣的溶解取上述干燥蜂膠提取物，精密稱定，置燒杯中，加丙酮水溶液使供試品全部溶解，備用； a. 3、分離凈化將上述試樣溶解液全部轉(zhuǎn)入內(nèi)盛硫酸鈉溶液的分液漏斗中，用乙醚分次洗滌燒杯，并入分液漏斗中，振搖，使分層，水層放入另一分液漏斗中，加試樣溶解液五分之二的乙醚萃取，棄去水層；有機(jī)層并入第一個(gè)分液漏斗中，用水洗滌，棄去水層；將乙醚層通過裝有四分之一乙醚量的無水硫酸鈉的小漏斗濾入棕色容量瓶中，用試樣溶解液五分之三的乙醚洗滌分液漏斗，并洗去無水硫酸鈉層中的色素，定容，搖勻，待用； a. 4、測定取上述溶液到棕色容量瓶中，用乙醚定容，搖勻，立即于分光光度計(jì)上測定642nm及660nm波長處的吸光值,用乙醚作空白； a. 5計(jì)算出試樣中葉綠素的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種蜂膠與楊樹膠的鑒別方法，其特征在于所述試劑為化學(xué)純或分析純，水為蒸懼水。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的一種蜂膠與楊樹膠的鑒別方法，其特征在于所述試劑包括乙醇、碳酸鈣、石英砂試劑級、丙酮、無水硫酸鈉、乙醚、丙酮水溶液及硫酸鈉水溶液中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種蜂膠與楊樹膠的鑒別方法，其特征在于所述的試劑無水硫酸鈉為在650°C灼燒4h的無水硫酸鈉。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種蜂膠與楊樹膠的鑒別方法，其特征在于所述的試劑丙酮水溶液的質(zhì)量體積比為85+15，V/V。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種蜂膠與楊樹膠的鑒別方法，其特征在于所述的試劑硫酸鈉水溶液為2%, m/Vo
全文摘要
本發(fā)明提供了一種檢測葉綠素含量鑒別蜂膠與楊樹膠的方法，以丙酮提取試樣中的葉綠素，用乙醚分層萃取，硫酸鈉溶液洗滌凈化，于兩處一定的波長下比色定量，進(jìn)行鑒別。本發(fā)明采用極性較低的有機(jī)溶劑萃取和分離蜂膠或以楊樹皮或芽為材料制成的楊樹膠中的葉綠素，以分光光度法對其含量進(jìn)行定量檢測，分別求出蜂膠和楊樹膠各自葉綠素含量的最高值和平均值，設(shè)定蜂膠葉綠素含量安全限值為15mg/100g，通過對比檢測葉綠素含量可準(zhǔn)確鑒別蜂膠和楊樹膠。本發(fā)明的檢測方法簡便，檢測樣品及設(shè)備簡單易得，檢測準(zhǔn)確率高。
文檔編號G01N1/34GK102778437SQ20121017585
公開日2012年11月14日 申請日期2012年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月31日
發(fā)明者劉泊, 楊茂森, 王鑫 申請人:楊茂森