專利名稱：氣流吹掃微注射器萃取技術(shù)與gc-ms聯(lián)用檢測北細辛藥材的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于ー種中藥材的檢測方法，具體是指ー種氣流吹掃微注射器萃取技術(shù)與GC-MS聯(lián)用檢測北細辛藥材的方法。
背景技術(shù)：
北細辛藥材來源于馬5 鈴科植物北細辛Asarum heterotropoides Fr. Schmidtval. Mandshuricum (Maxim.) Kitag.的干燥根和根莖，收載于中國藥典。北細辛全草含揮發(fā)油1% 3%，含量較高的有黃樟醚、3，5-ニ甲氧基甲苯、欖香素、優(yōu)香芹酮、肛菔烯、仿菔烯、細辛醚等多種成分。中國藥典中采用揮發(fā)油測定的方法和高效液相法測定細辛脂素含量的方法對其進行定量分析，然而其他植物中也會含有細辛脂素類化合物，這就對北細辛藥材真?zhèn)舞b定帶來不利。因此，僅僅測定細辛脂素的含量不能完整的反應北細辛藥材的全貌。指紋圖譜分析技術(shù)可以有效地量化檢測出中藥材的宏觀質(zhì)量信息，與單一指標成分或活性成分鑒定相比，其所含的信息是綜合的多層次的，因此更為科學和合理，更為符合中藥材的檢測。氣流吹掃微注射器萃取技術(shù)是頂空萃取技術(shù)發(fā)展中的一次革命，利用開放式頂空萃取體系克服了封閉式頂空萃取技術(shù)中不完全萃取的問題，并且實現(xiàn)了揮發(fā)性和半揮發(fā)性有機物的同時、快速(幾分鐘)、完全富集與分析。本方法運用了目標物的運動既受熱力學作用又受氣流動力學作用的原理以及結(jié)合理想氣體理論，使目標物與萃取溶劑的接觸幾率大大增加，進而達到了提高目標物富集率的目的。為植物真?zhèn)舞b別、植物信息傳遞機理、植物質(zhì)量評價等研究提供了萃取、濃縮、浄化為一體的快速、準確的樣品前處理方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是建立一種用氣流吹掃微注射器萃取技術(shù)與GC-MS聯(lián)用檢測北細辛藥材的方法，利用計算機輔助獲得北細辛藥材指紋圖譜共有模式圖譜，并將該方法應用于北細辛藥材真?zhèn)舞b別中。本發(fā)明技術(shù)方案如下
一種氣流吹掃微注射器萃取技術(shù)與GC-MS聯(lián)用檢測北細辛藥材的方法，包括下列步
驟
(1)北細辛供試品溶液的制備
精密稱取經(jīng)鑒定的北細辛藥材的粉末5 20 mg，置于樣品槽中，將250 μ 微型注射器中加入20 μ 正己烷進行萃取，萃取溫度為250°C，萃取時間為2 min，冷凝溫度為ー4°C，氮氣流速為2 mL/min,萃取結(jié)束后用正己燒定容至100 PL,備用；
(2)色譜條件
色譜柱DB-5MS，石英毛細管柱30 m X O. 25 mm X O. 25 Mm,
進樣ロ溫度280°C，MS檢測器溫度200°C，
進樣量2 μ ,
升溫程序起始溫度為45°C，保持I min，以4°C /min升高至250°C，再以6V /min升高至280°C,保持5 min ；
載氣為He，流速為O. 98 mL/min，恒流方式，不分流；
質(zhì)譜分析條件質(zhì)量掃描范圍50-600 aum，掃描速度1250 aum/s ；
(3)建立北細辛藥材指紋圖譜共有模式圖譜
對所收集并經(jīng)鑒定為北細辛藥材的10批樣品，按照供試品制備方法制備供試品溶液，并逐一按上述相同方法檢測，分別得到各批北細辛藥材相應的指紋圖譜，經(jīng)計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算，既可得出北細辛藥材共有模式圖譜；
(4)指紋圖譜質(zhì)量控制
將樣品的GC-MS指紋圖譜與標準指紋圖譜比較；以23個共有峰計算得到的相似度應不小于O. 90。所述計算機輔助相似性評價系統(tǒng)系國家藥典委員會開發(fā)的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)研究版(2004A)》；或用23個共有峰的相關(guān)系數(shù)來表示相似度。本發(fā)明的原理是基于北細辛藥材中主要含有大量的揮發(fā)性和半揮發(fā)性成分，因此，采用氣流吹掃微注射器萃取技術(shù)與GC-MS聯(lián)用對揮發(fā)性和半揮發(fā)性物質(zhì)群進行檢測，從整體上、宏觀上對產(chǎn)品質(zhì)量進行控制。在研究過程中對提取方法、檢測方法、色譜條件等進行了考察，精密度和重現(xiàn)性實驗中23個共有峰峰面積比值的相對標準偏差均小于3%。根據(jù)采集10批樣品的指紋圖譜經(jīng)國家藥典委員會開發(fā)的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)研究版(2004A)》進行計算，建立了北細辛藥材指紋圖譜共有模式圖譜，并確定供試品指紋圖譜與相應的共有模式圖譜之間的相關(guān)系數(shù)為O. 90。本方法能方便的對北細辛藥材進行檢測。


圖I為北細辛GC-MS標準指紋圖譜。圖2為實施例I吉林產(chǎn)北細辛指紋圖譜。圖3為實施例2遼寧產(chǎn)北細辛指紋圖譜。
具體實施例方式實施例I
1、藥材來源吉林
2、樣品編號20110921
3、供試品溶液的制備與檢測 弟一步①供試品溶液的制備
準確稱取經(jīng)鑒定的北細辛藥材的粉末(過100目篩)20 mg，置于樣品槽中，將250 μ 微型注射器中加入20 μ 正己烷進行萃取，萃取溫度為250°C，萃取時間為2 min，冷凝溫度為_4°C，氮氣流速為2 mL/min。萃取結(jié)束后用正己烷定容至100 μ ，備用。②色譜條件色譜柱DB-5MS石英毛細管柱(30 m X O. 25 mm X O. 25 Mm )；
進樣ロ溫度280°C ；
MS檢測器溫度200°C，
進樣量2 μ ,
氣相與質(zhì)譜連接ロ溫度280°C ；
升溫程序起始溫度為45°C，保持I min，以4°C /min升高至250°C，再以6V /min升高至280°C,保持5 min ；
載氣為He，流速為O. 98 mL/min，恒流方式，不分流； 進樣器島津A0C-20i自動進樣器，進樣速度高速；粘度補償時間0. 2 S。③主要儀器與試藥
色譜儀GC-MS 2010 (日本島津公司)；
ME-101多功能微萃取儀延邊大學制造，經(jīng)新產(chǎn)品鑒定2009年“ME-101多功能微萃取儀”通過吉林省エ業(yè)和信息化廳新產(chǎn)品鑒定(200912002)。技術(shù)鑒定2009年“氣流式微富集技術(shù)及其應用”通過了吉林省科學技術(shù)廳技術(shù)鑒定(2009-623)。詳細技術(shù)內(nèi)容可參考延邊大學申請的專利專利申請?zhí)枮?200820072292. X, 201020165509. 9,200920093186. 4，201020165631.6,201010170882.8,201020616258.1,201020693247. 3,201020610097. 5等;
氮氣高純氮氣，純度99. 99% ；
正己燒Caledon (Georgetown, Ont. , Canada),色譜純。④檢測
取2 PL供試品溶液經(jīng)自動進樣器進樣，氣相色譜儀測定，既得氣相色譜圖。第二步，建立北細辛藥材指紋圖譜共有模式圖譜
對所收集并經(jīng)鑒定為北細辛藥材的10批樣品，按照供試品制備方法制備供試品溶液，并逐一按上述相同方法檢測，分別得到各批北細辛藥材相應的指紋圖譜，經(jīng)計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算，既可得出北細辛藥材共有模式圖譜。建立共有模式圖譜可以將所得的北細辛藥材指紋圖譜輸入計算機計算供試品與共有模式圖譜之間的相關(guān)系數(shù)，從理論上考察供試品與共有模式圖譜之間的相似度，從而使質(zhì)量的判別標準更客觀科學。4、用以上述相同的方法制備待測試品溶液和測定待測試品。5、結(jié)果判斷
色譜圖中檢出了與北細辛藥材對照指紋圖譜相同的23個特征峰；供試品指紋圖譜與北細辛藥材指紋圖譜共有模式圖譜經(jīng)計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算，相關(guān)系數(shù)為O. 97，大于O. 900。因此，可以判定本供試品符合本發(fā)明修訂的關(guān)于北細辛藥材的質(zhì)量標準。實施例2北細辛藥材的檢測
1、藥材來源遼寧
2、樣品編號20110926
3、以上述實施例I相同方法制備供試品溶液
4、以上述實施例I相同的方法測定供試品溶液5、結(jié)果判斷
色譜圖中檢出了與北細辛藥材對照指紋圖譜相同的23個特征峰；供試品指紋圖譜與 北細辛藥材指紋圖譜共有模式圖譜經(jīng)計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算，相關(guān)系數(shù)為
O.96，大于O. 90。因此，可以判定本供試品符合本發(fā)明修訂的關(guān)于北細辛藥材的質(zhì)量標準。
權(quán)利要求
1.一種氣流吹掃微注射器萃取技術(shù)與GC-MS聯(lián)用檢測北細辛藥材的方法，包括下列步驟 (I)北細辛供試品溶液的制備 精密稱取經(jīng)鑒定的北細辛藥材的粉末5 20 mg，置于樣品槽中，將250 μ 微型注射器中加入20 μ 正己烷進行萃取，萃取溫度為250°C，萃取時間為2 min，冷凝溫度為ー4°C，氮氣流速為2 mL/min,萃取結(jié)束后用正己燒定容至100 PL,備用； (2)色譜條件 色譜柱DB-5MS，石英毛細管柱30 m X O. 25 mm X O. 25 Mm, 進樣ロ溫度280°C， MS檢測器溫度200°C， 進樣量2 μ , 升溫程序起始溫度為45°C，保持I min，以4°C /min升高至250°C，再以6V Mn升高至280°C,保持5 min ； 載氣為He，流速為O. 98 mL/min，恒流方式，不分流； 質(zhì)譜分析條件質(zhì)量掃描范圍50-600 aum，掃描速度1250 aum/s ； (3)建立北細辛藥材指紋圖譜共有模式圖譜 對所收集并經(jīng)鑒定為北細辛藥材的10批樣品，按照供試品制備方法制備供試品溶液，并逐一按上述相同方法檢測，分別得到各批北細辛藥材相應的指紋圖譜，經(jīng)計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算，既可得出北細辛藥材共有模式圖譜； (4)指紋圖譜質(zhì)量控制 將樣品的GC-MS指紋圖譜與標準指紋圖譜比較；以23個共有峰計算得到的相似度應不小于O. 90。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種氣流吹掃微注射器萃取技術(shù)與GC-MS聯(lián)用檢測北細辛藥材的方法，其特征在于所述計算機輔助相似性評價系統(tǒng)系國家藥典委員會開發(fā)的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)研究版(2004A)》;或用23個共有峰的相關(guān)系數(shù)來表示相似度。
全文摘要
本發(fā)明涉及用氣流吹掃微注射器萃取技術(shù)與GC-MS聯(lián)用檢測北細辛藥材的方法，包括以下幾個步驟，(1)北細辛供試品溶液的制備；(2)色譜條件；(3)建立北細辛藥材指紋圖譜共有模式圖譜；(4)指紋圖譜質(zhì)量控制；將所測得的供試品圖譜與對照指紋圖譜進行比較，并輸入計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行相似度計算，得出相關(guān)系數(shù)，便可作出檢測結(jié)論。本方法具有以下特點①可以從整體上、宏觀上表征北細辛藥材的質(zhì)量；②具有較好的專屬性和重現(xiàn)性；可操作性強；③可用于鑒別北細辛藥材的真?zhèn)巍?br> 文檔編號G01N30/88GK102692476SQ201210202409
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月19日
發(fā)明者張善玉, 樸相范, 李東浩, 楊翠 申請人:延邊大學