專利名稱：一種鑒別阿膠真?zhèn)蔚姆椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鑒別阿膠真?zhèn)蔚姆椒ā?br> 背景技術(shù)：
阿膠是我國傳統(tǒng)的補(bǔ)益名藥，據(jù)《圖經(jīng)本草》記載“阿膠以烏驢皮加阿井水煎之而成”，其性平、味甘，歸肺、肝、腎 經(jīng)，具有潤燥止血，補(bǔ)血潤陰的作用。在臨床上主要用于補(bǔ)血和改善微循環(huán)。近期研究表明，阿膠還具有增強(qiáng)免疫力和抗疲勞等作用。關(guān)于阿膠化學(xué)成分的研究已有大量報(bào)道，研究表明阿膠含有蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、硫酸皮膚素、透明質(zhì)酸、生物堿以及多種微量元素[1]。由于阿膠的功效顯著，市場(chǎng)供不應(yīng)求，各地均出現(xiàn)了用其它動(dòng)物皮熬制阿膠的代用品。采用骨膠、雜皮等熬制的假藥用膠不僅臨床療效較差，質(zhì)量無法保障，而且還可能出現(xiàn)中毒現(xiàn)象。因此對(duì)其進(jìn)行鑒別研究具有重要現(xiàn)實(shí)意義。目前阿膠的鑒別方法主要有肉眼觀察法[2]、近紅外光譜法[3]、熱分析法[4]及HPLC法[5]等。這些方法也存在一些不足如經(jīng)驗(yàn)依賴性較強(qiáng)(肉眼觀察法)，圖譜特征不強(qiáng)(近紅外光譜法和熱分析法)及費(fèi)時(shí)費(fèi)力(HPLC法)等。核磁共振法(NMR)是將核磁共振現(xiàn)象應(yīng)用于測(cè)定分子結(jié)構(gòu)的一種譜學(xué)技術(shù)，獲得的圖譜能夠反映測(cè)定物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息。由于核磁共振法對(duì)幾乎所有的有機(jī)化合物均有響應(yīng)且具有無偏向性[6]，因此獲得的圖譜信息豐富，基本上代表了中藥重要的整體化學(xué)組成，可以客觀、全面地反映中藥所含成分的特征。參考文獻(xiàn)[I]胡軍影，程顯隆，肖新月，等.阿膠的化學(xué)成分及質(zhì)量評(píng)價(jià)方法研究進(jìn)展[J],中國藥事，2007(03) :193-195.[2]黃瑞芹，李春瑜.阿膠的制作歷史及其真?zhèn)舞b別[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2004，(05) :284.[3]瞿海斌，楊海雷，程翼宇.近紅外漫反射光譜法快速無損鑒別阿膠真?zhèn)蝃J].光譜學(xué)與光譜分析，2006，(01) :60-62.[4]陳棟華，劉雪峰，黃艷，等.阿膠的差示掃描量熱法鑒別法研究[J].中草藥，1993，24(6) :314-315.[5]于海英，周永妍，程秀民.阿膠、龜甲膠中脂溶性成分的高效液相色譜指紋圖譜[J].色譜，2009，(04) :447-452.[6]王俊美，歐陽捷，尚倩，等.土壤有機(jī)質(zhì)研究中的核磁共振技術(shù)[J].波譜學(xué)雜志，2008，(02) :287-295.

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，為了解決現(xiàn)有鑒別阿膠真品與其偽品的方法經(jīng)驗(yàn)性強(qiáng)、圖譜特征不強(qiáng)、操作費(fèi)時(shí)費(fèi)力的問題，本發(fā)明提供了一種能夠快速、簡(jiǎn)單鑒別阿膠真品和其偽品的方法，本發(fā)明的方法簡(jiǎn)便、易行、快速、無損，能有效鑒別阿膠的真品與偽品。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種鑒別阿膠真?zhèn)蔚姆椒?，步驟如下在25°C的室溫下，采用核磁共振波譜儀測(cè)定得到待測(cè)真?zhèn)蔚陌⒛z樣品水溶性成分的原始核磁共振氫譜，然后與數(shù)學(xué)模型進(jìn)行對(duì)比分析，得出其真?zhèn)危凰鰯?shù)學(xué)模型是通過以下步驟建立的(I)擇取不同品牌不同批次的阿膠真品及其偽品；(2)采用核磁共振波譜儀采集上述不同品牌不同批次的阿膠真品及其偽品水溶性成分的原始核磁共振氫譜；
(3)將上述所得的核磁共振氫譜按照化學(xué)位移數(shù)據(jù)對(duì)樣品的水溶性成分核磁共振氫譜進(jìn)行匹配；(4)將匹配后的核磁共振氫譜中的殘余水核磁共振吸收峰去除，以消除其對(duì)樣品水溶性成分核磁共振氫譜的干擾；(5)將去除殘余水核磁共振吸收峰樣品水溶性成分的核磁共振氫譜進(jìn)行正規(guī)化處理，即所得核磁共振氫譜中核磁共振吸收峰強(qiáng)度最大值為1，最小值為0 ;(6)將上述正規(guī)化處理后所得的核磁共振氫譜與阿膠樣品的真?zhèn)芜M(jìn)行關(guān)聯(lián)建立數(shù)學(xué)模型；(7)比較不同的光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)和光譜區(qū)域?qū)５挠绊懀?8)選擇優(yōu)化的光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)，確定特征光譜區(qū)域；(9)將所得核磁共振氫譜的特征光譜區(qū)域的圖譜數(shù)據(jù)與阿膠樣品的真?zhèn)芜M(jìn)行關(guān)聯(lián)建立數(shù)學(xué)模型，形成鑒別阿膠真?zhèn)蔚暮舜殴舱癫ㄗV分析數(shù)學(xué)模型；(10)對(duì)上述建立的數(shù)學(xué)模型的預(yù)測(cè)能力進(jìn)行驗(yàn)證。優(yōu)選的，所述步驟(9)中，所述核磁共振氫譜的特征光譜區(qū)域?yàn)镮. 36 2. 03ppm。優(yōu)選的，所述數(shù)學(xué)模型是通過以下步驟建立的(I)擇取不同批次的阿膠真品和其偽品；(2)在25°C的室溫下，采用核磁共振波譜儀取得上述不同批次的阿膠真品和其偽品水溶性成分的原始核磁共振氫譜；(3)將上述所得的核磁共振氫譜按化學(xué)位移數(shù)據(jù)進(jìn)行匹配，去除殘余水核磁共振吸收峰及正規(guī)化處理；(4)將上述預(yù)處理后的核磁共振氫譜在0 IOppm的光譜范圍內(nèi)與阿膠真品和其偽品的實(shí)際類別進(jìn)行關(guān)聯(lián)建立數(shù)學(xué)模型；(5)通過比較不同光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)和光譜區(qū)域?qū)５挠绊?，確定最佳光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)和特征光譜區(qū)域；(6)將上述所得核磁共振氫譜特征光譜區(qū)域的圖譜數(shù)據(jù)與阿膠真品和其偽品的實(shí)際類別進(jìn)行關(guān)聯(lián)建立數(shù)學(xué)模型，形成鑒別阿膠真品與其偽品的核磁共振氫譜分析數(shù)學(xué)模型；(7)對(duì)上述建立的數(shù)學(xué)模型的預(yù)測(cè)能力進(jìn)行驗(yàn)證。本發(fā)明的方法簡(jiǎn)便、易行，適于對(duì)阿膠真品及其偽品進(jìn)行快速、無損、無污染的鑒另IJ，為阿膠的質(zhì)量控制提供技術(shù)數(shù)據(jù)支持。


圖I為25°C的室溫下，采用瑞士 Bruker AVANCE 600型超導(dǎo)傅立葉變換核磁共振波譜儀取得阿膠真品及其偽品水溶性成分的原始核磁共振氫譜，其中，Ca)阿膠真品；(b)阿膠偽品。圖2為采用SpecAlign (I. 2. I)軟件對(duì)各樣品原始核磁共振氫譜按化學(xué)位移數(shù)據(jù)進(jìn)行匹配，使用Matlab軟件去除殘余水核磁共振吸收峰(5 4. 6Ippm- 8 5. 17ppm區(qū)域的核磁共振吸收峰)，并進(jìn)行數(shù)據(jù)正規(guī)化處理(圖譜中核磁共振吸收峰的強(qiáng)度最大值為1，最小值為0)后得到的核磁共振氫譜，其中，Ca)阿膠真品；(b)阿膠偽品。圖3為本發(fā)明比較不同光譜區(qū)域計(jì)算的交叉驗(yàn)證均方根誤差(RMSECV)圖，圖中，虛線是在0 IOppm全光譜區(qū)域計(jì)算得到的RMSECV，光譜為所有樣品水溶性成分經(jīng)匹配，去除殘余水核磁共振吸收峰及正規(guī)化處理后所得的核磁共振氫譜的平均圖譜。 圖4為本發(fā)明采用核磁共振氫譜特征光譜區(qū)域(即圖3中光譜區(qū)域3)數(shù)據(jù)建立數(shù)學(xué)模型對(duì)阿膠真品和偽品的鑒別結(jié)果圖，圖中I和2分別代表校正集中阿膠真品和偽品，3和4分別代表驗(yàn)證集中阿膠的真品和偽品。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例I建立數(shù)學(xué)模型首先取適量不同批次的阿膠真品和其偽品樣品進(jìn)行研磨，精密稱取研磨好的樣品細(xì)粉IOOmg,加蒸懼水5mL,超聲提取25min, 3000r/min離心lOmin。然后精密吸取2mL上清液置于平行蒸發(fā)儀中揮干水分，殘?jiān)苡?. 5mL D2O后轉(zhuǎn)入核磁管中，即得待測(cè)樣品溶液。將樣品待測(cè)溶液在25°C室溫下，采用核磁共振波譜分析儀測(cè)得不同批次阿膠真品及其偽品水溶性成分的原始核磁共振氫譜，如圖I所示。使用SpecAlign (I. 2. I)軟件將各樣品的原始核磁共振氫譜按照化學(xué)位移數(shù)據(jù)進(jìn)行匹配，使用Matlab軟件去除殘余水核磁共振吸收峰(5 4. 6Ippm- 8 5. 17ppm區(qū)域的核磁共振吸收峰)，并進(jìn)行數(shù)據(jù)正規(guī)化處理(圖譜中核磁共振吸收峰的強(qiáng)度最大值為1，最小值為0)，如圖2所示。將阿膠真品和偽品的實(shí)際類別與上述預(yù)處理后的核磁共振氫譜在O IOppm的光譜范圍內(nèi)進(jìn)行關(guān)聯(lián)建立數(shù)學(xué)模型。在全光譜區(qū)域考察不同光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)及光譜區(qū)域?qū)﹂g隔偏最小二乘(i-PLS)法建模的影響。i-PLS法的建模參數(shù)為光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)及光譜區(qū)域；首先考察光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)5 20，計(jì)算每個(gè)光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)對(duì)應(yīng)的交叉驗(yàn)證均方根誤差(RMSECV)。該值越小表明交叉驗(yàn)證預(yù)測(cè)性能越好。當(dāng)光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)為14時(shí)，RMSECV達(dá)到最小，因此選擇光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)為14 (如表I所示)。由圖3可見，當(dāng)光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)為14時(shí)，光譜區(qū)域?yàn)?時(shí)，RMSECV達(dá)到最小，故選擇光譜區(qū)域3為特征光譜區(qū)域。表I不同光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)計(jì)算的RMSECV的比較
權(quán)利要求
1.一種鑒別阿膠真?zhèn)蔚姆椒?，其特征在于，步驟如下在25°C的室溫下，采用核磁共振波譜儀測(cè)定得到待測(cè)真?zhèn)蔚陌⒛z樣品水溶性成分的原始核磁共振氫譜，然后與數(shù)學(xué)模型進(jìn)行對(duì)比分析，得出其真?zhèn)危? 所述數(shù)學(xué)模型是通過以下步驟建立的 (1)擇取不同品牌不同批次的阿膠真品及其偽品； (2)采用核磁共振波譜儀采集上述不同品牌不同批次的阿膠真品及其偽品水溶性成分的原始核磁共振氫譜； (3)將上述所得的核磁共振氫譜按照化學(xué)位移數(shù)據(jù)對(duì)樣品的水溶性成分核磁共振氫譜進(jìn)行匹配； (4)將匹配后的核磁共振氫譜中的殘余水核磁共振吸收峰去除，以消除其對(duì)樣品水溶 性成分核磁共振氫譜的干擾； (5)將去除殘余水核磁共振吸收峰樣品水溶性成分的核磁共振氫譜進(jìn)行正規(guī)化處理，即所得核磁共振氫譜中核磁共振吸收峰強(qiáng)度最大值為1，最小值為O ; (6)將上述正規(guī)化處理后所得的核磁共振氫譜與阿膠樣品的真?zhèn)芜M(jìn)行關(guān)聯(lián)建立數(shù)學(xué)模型； (7)比較不同的光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)和光譜區(qū)域?qū)５挠绊懀? (8)選擇優(yōu)化的光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)，確定特征光譜區(qū)域； (9)將所得核磁共振氫譜的特征光譜區(qū)域的圖譜數(shù)據(jù)與阿膠樣品的真?zhèn)芜M(jìn)行關(guān)聯(lián)建立數(shù)學(xué)模型，形成鑒別阿膠真?zhèn)蔚暮舜殴舱癫ㄗV分析數(shù)學(xué)模型； (10)對(duì)上述建立的數(shù)學(xué)模型的預(yù)測(cè)能力進(jìn)行驗(yàn)證。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種鑒別阿膠真?zhèn)蔚姆椒?，其特征在于所述步驟(9)中，所述核磁共振氫譜的特征光譜區(qū)域?yàn)镮. 36 2. 03ppm。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種鑒別阿膠真?zhèn)蔚姆椒ǎ涮卣髟谟谒鰯?shù)學(xué)模型是通過以下步驟建立的 (1)擇取不同批次的阿膠真品和其偽品； (2)在25°C的室溫下，采用核磁共振波譜儀取得上述不同批次的阿膠真品和其偽品水溶性成分的原始核磁共振氫譜； (3)將上述所得的核磁共振氫譜按化學(xué)位移數(shù)據(jù)進(jìn)行匹配，去除殘余水核磁共振吸收峰及正規(guī)化處理； (4)將上述預(yù)處理后的核磁共振氫譜在0 IOppm的光譜范圍內(nèi)與阿膠真品和其偽品的實(shí)際類別進(jìn)行關(guān)聯(lián)建立數(shù)學(xué)模型； (5)通過比較不同光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)和光譜區(qū)域?qū)５挠绊懀_定最佳光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)和特征光譜區(qū)域； (6)將上述所得核磁共振氫譜特征光譜區(qū)域的圖譜數(shù)據(jù)與阿膠真品和其偽品的實(shí)際類別進(jìn)行關(guān)聯(lián)建立數(shù)學(xué)模型，形成鑒別阿膠真品與其偽品的核磁共振氫譜分析數(shù)學(xué)模型； (7)對(duì)上述建立的數(shù)學(xué)模型的預(yù)測(cè)能力進(jìn)行驗(yàn)證。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鑒別阿膠真?zhèn)蔚姆椒?，步驟如下在25℃的室溫下，采用核磁共振波譜儀測(cè)定得到待測(cè)真?zhèn)蔚陌⒛z樣品水溶性成分的原始核磁共振氫譜，然后與數(shù)學(xué)模型進(jìn)行對(duì)比分析，得出其真?zhèn)?；所述?shù)學(xué)模型是通過以下步驟建立的(1)擇取不同批次的阿膠真品和其偽品；(2)采用核磁共振波譜儀取得水溶性成分的原始核磁共振氫譜；(3)按化學(xué)位移數(shù)據(jù)進(jìn)行匹配，去除殘余水核磁共振吸收峰及正規(guī)化處理；(4)進(jìn)行關(guān)聯(lián)建立數(shù)學(xué)模型；(5)確定最佳光譜區(qū)域劃分?jǐn)?shù)和特征光譜區(qū)域；(6)形成數(shù)學(xué)模型；(7)驗(yàn)證。本發(fā)明的方法簡(jiǎn)便、易行，適于對(duì)阿膠真品及其偽品進(jìn)行快速、無損、無污染的鑒別，為阿膠的質(zhì)量控制提供技術(shù)數(shù)據(jù)支持。
文檔編號(hào)G01N24/08GK102749349SQ20121020329
公開日2012年10月24日 申請(qǐng)日期2012年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月20日
發(fā)明者宋麗, 張丹潞, 段曉菊, 聶磊, 鄧書鴻 申請(qǐng)人:山東大學(xué)