專利名稱：一種金線蓮指紋圖譜的建立方法及福建金線蓮和臺(tái)灣金線蓮指紋圖譜的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥質(zhì)量控制領(lǐng)域，特別是涉及一種金線蓮指紋圖譜的建立方法及福建金線蓮和臺(tái)灣金線蓮指紋圖譜。
背景技術(shù)：
金線蓮為蘭科開唇蘭屬植物花葉開唇蘭Anoectochilus roburghii (Wall.)Lindl)、臺(tái)灣金線蓮Anoectochilus formosanus Hay,多年生珍稀中草藥。它在民間使用范圍較廣，在港臺(tái)及東南亞地區(qū)素有“藥王”、“金草”、“神藥”和“鳥人參”等美稱。性平、味甘，歸肺、肝、腎、膀胱經(jīng)。具有清熱涼血、解毒消腫、祛風(fēng)利濕、鎮(zhèn)驚平肝、補(bǔ)腎、利尿、潤肺止咳等功效。用于治療小兒急驚風(fēng)高熱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肝炎、腎炎、膀胱炎、乳糜尿、血尿、支氣管炎、咯血、糖尿病、高血壓等；現(xiàn)代用于抗腫瘤等疑難雜癥，提高免疫力、保肝護(hù)肝、降血 月旨、輔助抗動(dòng)脈硬化及腦血栓、抗病毒、治重癥肌無力、祛除青春痘和雀斑等。金線蓮主要分布于亞洲的日本、中國、斯里蘭卡、印度和尼泊爾等國，我國南方福建、廣西、廣東、海南、貴州、四川、云南等省都有其豐富的藥材資源，福建與臺(tái)灣兩省作為藥用的主要有福建金線蓮、臺(tái)灣金線蓮和高雄金線蓮三種。金線蓮性狀特征福建金線蓮本品為干燥全草，略呈皺縮狀，莖節(jié)明顯；葉互生具柄，葉基膜質(zhì)鞘狀抱莖，葉黃綠色，呈卵形或橢圓形，葉面有光澤、葉脈為金黃色羽狀網(wǎng)脈，葉背淡紫紅色；香氣特異。臺(tái)灣金線蓮與福建金線蓮主要不同點(diǎn)為葉墨綠色，葉脈為白色羽狀網(wǎng)脈。金線蓮的化學(xué)成分與含量確切，具有重要藥理活性的物質(zhì)主要為黃酮類化合物(槲皮素、異鼠李素)，留體類化合物(24 異丙烯基膽留醇、開唇蘭留醇、麥角留醇、豆甾醇、菜油留醇、P 谷留醇等)，三萜類化合物(木栓酮、琥珀酸、香豆酸、阿魏酸、胡蘿卜苷、棕櫚酸、齊墩果酸、熊果酸)，多糖類(多糖13. 326%，低聚糖11. 243%，還原糖9. 73%)，生物堿(石杉?jí)A甲和烏頭堿)，和強(qiáng)心甙類，酯類，?；撬岬?。在金線蓮藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)方面，目前國內(nèi)外發(fā)表的文獻(xiàn)中，一般采用顯微鑒定、薄層色譜鑒定，或單一成分含量測(cè)定，如黃酮類、金線蓮苷等，并作為金線蓮藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，顯然，這種質(zhì)量評(píng)價(jià)方法不能準(zhǔn)確鑒別和評(píng)價(jià)金線蓮藥材質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種鑒別金線蓮真?zhèn)蝺?yōu)劣的指紋圖譜的建立方法。本發(fā)明的另一目的，是提供福建金線蓮的指紋圖譜。本發(fā)明的再一目的，是提供臺(tái)灣金線蓮的指紋圖譜。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種金線蓮指紋圖譜的建立方法，采用高效液相色譜法，具體包括如下步驟
(I)供試品溶液的制備精密稱取供試品細(xì)粉溶于甲醇中，進(jìn)行超聲處理后，離心取上清液，將該上清液過濾，即得供試品溶液；(2)色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；洗脫方式以磷酸和甲醇組成的梯度洗脫液為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；紫外檢測(cè)檢測(cè)波長(zhǎng)為310 320nm。(3)測(cè)定精密吸取供試品溶液，將其注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測(cè)定，得到指紋圖譜。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述步驟(I)為精密稱取供試品細(xì)粉0. I 5g置于具塞三角燒瓶中，精密加入甲醇10 IOOmL,密塞，精密稱定，超聲處理35 55分鐘后，放冷至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心7 15分鐘后取上清液，將該上清液經(jīng)濾膜過濾，即得供試品溶液。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述步驟(I)為精密稱取供試品細(xì)粉0.2g置于具塞三角燒瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，精密稱定，超聲處理45分鐘后，放冷至室溫， 用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心10分鐘后取上清液，將該上清液經(jīng)0. 25 y m濾膜過濾，即得供試品溶液。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述步驟(2)為色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；洗脫方式以0. I 0. 6%磷酸和甲醇組成的梯度洗脫液為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；柱溫25 300C ;紫外檢測(cè)檢測(cè)波長(zhǎng)為313 318nm ;流速:0. 8 I. 2mL/min。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述步驟(2)為色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；洗脫方式以0. 4%磷酸和甲醇組成的梯度洗脫液為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；柱溫30°C ;紫外檢測(cè)檢測(cè)波長(zhǎng)為316nm ;流速1. OmL/min。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述步驟(2)中的梯度洗脫的程序按以下體積濃度配置進(jìn)行 0分鐘時(shí)，流動(dòng)相為25%的甲醇和75%的0. 4%磷酸溶液；30分鐘時(shí)，流動(dòng)相為50%的甲醇和50%的0. 4%磷酸溶液；45分鐘時(shí)，流動(dòng)相為75%的甲醇和25%的0. 4%磷酸溶液；55分鐘時(shí)，流動(dòng)相為75%的甲醇和25%的0. 4%磷酸溶液；60分鐘時(shí)，流動(dòng)相為25%的甲醇和75%的0. 4%磷酸溶液；65分鐘時(shí)，流動(dòng)相為25%的甲醇和75%的0. 4%磷酸溶液。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述步驟(3)為精密吸取供試品溶液5 UL，將其注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測(cè)定，得到指紋圖譜。一種用上述指紋圖譜的建立方法所得的福建金線蓮的指紋圖譜，所述指紋圖譜長(zhǎng)度為65分鐘，共有10個(gè)特征峰，其中5號(hào)特征峰為阿魏酸內(nèi)參照峰，以5號(hào)特征峰分別計(jì)算各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積得所述指紋圖譜，具體如下I號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間0. 16,相對(duì)峰面積0. 27 2. 08 ;2號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間0. 59 0. 60，相對(duì)峰面積0. 44 0. 69 ;3號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間0. 91 0. 92，相對(duì)峰面積0. 60 2. 21 ;4號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間0. 96,相對(duì)峰面積0. 27 0. 88 ;5號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間1. 00，相對(duì)峰面積1.00;6號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間I. 12,相對(duì)峰面積0. 52 10. 18 ；
7號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間I. 20，相對(duì)峰面積0. 74 2. 22 ;8號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間I. 35,相對(duì)峰面積0. 36 2. 13 ;9號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間I. 74，相對(duì)峰面積2. 56 5. 53 ;10號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間2. 13 2. 14,相對(duì)峰面積0. 47 I. 00 ;上述特征峰的保留時(shí)間重現(xiàn)性RSD小于2%，峰面積重現(xiàn)性RSD小于3%。一種用上述指紋圖譜的建立方法所得的臺(tái)灣金線蓮的指紋圖譜，所述指紋圖譜長(zhǎng)度為65分鐘，共有11個(gè)特征峰，其中4’號(hào)特征峰為阿魏酸內(nèi)參照峰，以4’號(hào)特征峰分別計(jì)算各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積得所述指紋圖譜，具體如下I，號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間0. 16,相對(duì)峰面積0. 48 I. 34 ; 2，號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間0. 91 0. 92，相對(duì)峰面積I. 25 2. 86 ;3，號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間0. 96,相對(duì)峰面積0. 24 0. 33 ;4 ’號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間1. 00，相對(duì)峰面積1.00;5’號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間I. 12，相對(duì)峰面積0. 61 I. 94 ;6，號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間I. 20,相對(duì)峰面積0. 65 2. 58 ;V號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間I. 35 I. 36，相對(duì)峰面積0. 19 0. 39 ;8，號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間I. 70 I. 72,相對(duì)峰面積0. 14 0. 40 ;9，號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間2. 48 2. 49,相對(duì)峰面積0. 61 I. 15 ;10，號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間2. 53 2. 54，相對(duì)峰面積I. 27 4. 64 ;11，號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間2. 55 2. 57，相對(duì)峰面積0. 25 0. 62 ;上述特征峰的保留時(shí)間重現(xiàn)性RSD小于2%，峰面積重現(xiàn)性RSD小于3%。本發(fā)明的有益效果是I本發(fā)明的方法運(yùn)用高效液相色譜建立金線蓮的指紋圖譜，提高金線蓮質(zhì)量控制的水平。2本發(fā)明的方法將常規(guī)的單一指標(biāo)成分或活性成分為質(zhì)量控制的指標(biāo)提升到一個(gè)新的階段，用色譜的指紋特征，和通過指紋圖譜得到的量化參數(shù)，更有效地鑒別真?zhèn)危刂瀑|(zhì)量。3本發(fā)明提出一種內(nèi)參照峰的指紋圖譜鑒別方法，解決了目前缺乏金線蓮有關(guān)成分對(duì)照品的難題。采用內(nèi)參照峰作為參照，得到的各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積更穩(wěn)定，方法精密度更好。4本發(fā)明的供試品溶液的穩(wěn)定性好，在室溫下，48小時(shí)之內(nèi)，供試品溶液均能夠保持穩(wěn)定。


圖I為本發(fā)明福建金線蓮(尖葉)組培品的HPLC指紋圖譜；圖2為本發(fā)明福建金線蓮(圓葉)組培品的HPLC指紋圖譜；圖3為本發(fā)明福建金線蓮(大葉)野生品的HPLC指紋圖譜；圖4為本發(fā)明福建金線蓮(小葉)野生品的HPLC指紋圖譜；圖5為本發(fā)明臺(tái)灣金線蓮(一等)組培品的HPLC指紋圖譜；圖6為本發(fā)明臺(tái)灣金線蓮(二等)組培品的HPLC指紋圖譜；
圖7為本發(fā)明臺(tái)灣金線蓮(三等)組培品的HPLC指紋圖譜；圖8為本發(fā)明臺(tái)灣金線蓮(純香茶)組培品的HPLC指紋圖譜；圖9為市售金線蓮偽品I的HPLC指紋圖譜；圖10為市售金線蓮偽品2的HPLC指紋圖譜；圖11為市售金線蓮偽品3的HPLC指紋圖譜；圖12為市售金線蓮偽品4的HPLC指紋圖譜；圖13為市售斑葉蘭的HPLC指紋圖譜；
具體實(shí)施方式

以下通過具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步的說明和描述。實(shí)施例I建立福建金線蓮指紋圖譜(I)分別取正品福建金線蓮組培品4個(gè)批次進(jìn)行供試品溶液的制備，具體為分別精密稱取上述供試品的細(xì)粉0. 2g置于具塞三角燒瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，精密稱定，超聲處理45分鐘后，放冷至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心10分鐘后取上清液，將該上清液經(jīng)0. 25 y m濾膜過濾，即得供試品溶液；(2)色譜條件色譜柱為 Aglient Extend C18 (4. 6 X 250mm, 5 ii m);洗脫方式以0. 4%磷酸和甲醇組成的梯度洗脫液為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；柱溫30°C ;紫外檢測(cè)檢測(cè)波長(zhǎng)為316nm ;流速1. OmL/min ;其中梯度洗脫的程序按以下體積濃度配置進(jìn)行O分鐘時(shí)，流動(dòng)相為25%的甲醇和75%的0. 4%磷酸溶液；30分鐘時(shí)，流動(dòng)相為50%的甲醇和50%的0. 4%磷酸溶液；45分鐘時(shí)，流動(dòng)相為75%的甲醇和25%的0. 4%磷酸溶液；55分鐘時(shí)，流動(dòng)相為75%的甲醇和25%的0. 4%磷酸溶液；60分鐘時(shí)，流動(dòng)相為25%的甲醇和75%的0. 4%磷酸溶液； 65分鐘時(shí)，流動(dòng)相為25%的甲醇和75%的0. 4%磷酸溶液。(3)測(cè)定分別精密吸取上述供試品溶液5 u L，將其注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測(cè)定，并進(jìn)行綜合分析，建立下述福建金線蓮指紋圖譜所述指紋圖譜長(zhǎng)度為65分鐘，共有10個(gè)特征峰，5號(hào)特征峰為阿魏酸，取該峰作為內(nèi)參照峰，以5號(hào)特征峰分別計(jì)算各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積得所述指紋圖譜，具體如下I號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間0. 16,相對(duì)峰面積0. 27 2. 08 ;2號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間0. 59 0. 60，相對(duì)峰面積0. 44 0. 69 ;3號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間0. 91 0. 92，相對(duì)峰面積0. 60 2. 21 ;4號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間0. 96,相對(duì)峰面積0. 27 0. 88 ;5號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間I. OO，相對(duì)峰面積1.00;6號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間I. 12,相對(duì)峰面積0. 52 10. 18 ；7號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間I. 20，相對(duì)峰面積0. 74 2. 22 ;8號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間I. 35,相對(duì)峰面積0. 36 2. 13 ;9號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間I. 74,相對(duì)峰面積2. 56 5. 53 ;10號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間2. 13 2. 14,相對(duì)峰面積0. 47 I. OO ;
上述特征峰的保留時(shí)間重現(xiàn)性RSD小于2%，峰面積重現(xiàn)性RSD小于3%。實(shí)施例2(I)供試品指紋圖譜的建立，包括如下步驟a供試品溶液的制備分別取福建金線蓮(尖葉)組培品、福建金線蓮(圓葉)組培品、福建金線蓮(大葉)野生品、福建金線蓮(小葉)野生品、市售金線蓮偽品I、市售金線蓮偽品2、市售金線蓮偽品3、市售金線蓮偽品4和市售斑葉蘭進(jìn)行供試品溶液的制備，具體為分別精密稱取上述供試品的細(xì)粉0. 2g置于具塞三角燒瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，精密稱定，超聲處理45分鐘后，放冷至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心10分鐘后取上清液，將該上清液經(jīng)0. 25 濾膜過濾，即得供試品溶液，分別依次編號(hào)福I、福2、福3、福
4、偽I、偽2、偽3、偽4和斑葉； b 色譜條件色譜柱為 Aglient Extend C18 (4. 6 X 250mm, 5 ii m);洗脫方式以0. 4%磷酸和甲醇組成的梯度洗脫液為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；柱溫30°C ;紫外檢測(cè)檢測(cè)波長(zhǎng)為316nm ;流速1. OmL/min ;其中梯度洗脫的程序按以下體積濃度配置進(jìn)行O分鐘時(shí)，流動(dòng)相為25%的甲醇和75%的0. 4%磷酸；30分鐘時(shí)，流動(dòng)相為50%的甲醇和50%的0. 4%磷酸；45分鐘時(shí)，流動(dòng)相為75%的甲醇和25%的0. 4%磷酸；55分鐘時(shí)，流動(dòng)相為75%的甲醇和25%的0. 4%磷酸；60分鐘時(shí)，流動(dòng)相為25%的甲醇和75%的0. 4%磷酸；65分鐘時(shí)，流動(dòng)相為25%的甲醇和75%的0. 4%磷酸。c測(cè)定分別精密吸取上述供試品溶液5 U L，將其注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測(cè)定，得到各供試品的指紋圖譜，如圖I至圖4，圖9至圖13所示。(2)將上述各供試品指紋圖譜均以5號(hào)阿魏酸為內(nèi)參照峰，各供試品特征峰的相
對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積如下表所示
峰號(hào)
編號(hào) 1234 5678910
福 I 0 160.59/0.91/0.96/I OO1.12/1.20/1.35/1.74/2.13/
1.360.590.600.741.0010.182.222.135.530.52
福 2 0.16/0.59/0.92/0.96/1.00/1.121.20/1.35/1.74/2.14/
I 760.692 210 271.005.061.550.363.780 47

權(quán)利要求
1.一種金線蓮指紋圖譜的建立方法，其特征在于采用高效液相色譜法，具體包括如下步驟 (1)供試品溶液的制備精密稱取供試品細(xì)粉溶于甲醇中，進(jìn)行超聲處理后，離心取上清液，將該上清液過濾，即得供試品溶液； (2)色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；洗脫方式以磷酸和甲醇組成的梯度洗脫液為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；紫外檢測(cè)檢測(cè)波長(zhǎng)為310 320nm ； (3)測(cè)定精密吸取供試品溶液，將其注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測(cè)定，得到指紋圖譜。
2.如權(quán)利要求I所述的一種金線蓮指紋圖譜的建立方法，其特征在于所述步驟(I)為精密稱取供試品細(xì)粉O. I 5g置于具塞三角燒瓶中，精密加入甲醇10 IOOmL,密塞，精密稱定，超聲處理35 55分鐘后，放冷至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心7 15分鐘后取上清液，將該上清液經(jīng)濾膜過濾，即得供試品溶液。
3.如權(quán)利要求2所述的一種金線蓮指紋圖譜的建立方法，其特征在于所述步驟(I)為精密稱取供試品細(xì)粉O. 2g置于具塞三角燒瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，精密稱定，超聲處理45分鐘后，放冷至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心10分鐘后取上清液，將該上清液經(jīng)O. 25 μ m濾膜過濾，即得供試品溶液。
4.如權(quán)利要求I所述的一種金線蓮指紋圖譜的建立方法，其特征在于所述步驟(2)為色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；洗脫方式以O(shè). I O. 6%磷酸和甲醇組成的梯度洗脫液為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；柱溫25 30°C ;紫外檢測(cè)檢測(cè)波長(zhǎng)為313 318nm ;流速0. 8 L 2mL/min。
5.如權(quán)利要求4所述的一種金線蓮指紋圖譜的建立方法，其特征在于所述步驟(2)為色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；洗脫方式以O(shè). 4%磷酸和甲醇組成的梯度洗脫液為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；柱溫30°C;紫外檢測(cè)檢測(cè)波長(zhǎng)為316nm ;流速1. OmL/min。
6.如權(quán)利要求5所述的一種金線蓮指紋圖譜的建立方法，其特征在于所述步驟(2)中的梯度洗脫的程序按以下體積濃度配置進(jìn)行 O分鐘時(shí)，流動(dòng)相為25%的甲醇和75%的O. 4%磷酸溶液； 30分鐘時(shí)，流動(dòng)相為50%的甲醇和50%的O. 4%磷酸溶液； 45分鐘時(shí)，流動(dòng)相為75%的甲醇和25%的O. 4%磷酸溶液； 55分鐘時(shí)，流動(dòng)相為75%的甲醇和25%的O. 4%磷酸溶液； 60分鐘時(shí)，流動(dòng)相為25%的甲醇和75%的O. 4%磷酸溶液； 65分鐘時(shí)，流動(dòng)相為25%的甲醇和75%的O. 4%磷酸溶液。
7.如權(quán)利要求I所述的一種金線蓮指紋圖譜的建立方法，其特征在于所述步驟(3)為精密吸取供試品溶液5 μ L，將其注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測(cè)定，得到指紋圖譜。
8.—種如權(quán)利要求I所述指紋圖譜的建立方法所得的福建金線蓮的指紋圖譜，其特征在于所述指紋圖譜長(zhǎng)度為65分鐘，共有10個(gè)特征峰，其中5號(hào)特征峰為阿魏酸內(nèi)參照峰，以5號(hào)特征峰分別計(jì)算各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積得所述指紋圖譜，具體如下 I號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間O. 16，相對(duì)峰面積O. 27 2. 08 ;.2號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間O. 59 O. 60，相對(duì)峰面積O. 44 O. 69 ; .3號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間O. 91 O. 92，相對(duì)峰面積O. 60 2. 21 ; .4號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間O. 96,相對(duì)峰面積O. 27 O. 88 ; .5號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間I. 00，相對(duì)峰面積1. 00 ； .6號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間I. 12,相對(duì)峰面積O. 52 10. 18 ； .7號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間I. 20，相對(duì)峰面積O. 74 2. 22 ; .8號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間I. 35,相對(duì)峰面積O. 36 2. 13 ; .9號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間I. 74，相對(duì)峰面積2. 56 5. 53 ; . 10號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間2. 13 2. 14，相對(duì)峰面積O. 47 1. 00 ; 上述特征峰的保留時(shí)間重現(xiàn)性RSD小于2%，峰面積重現(xiàn)性RSD小于3%。
9.一種如權(quán)利要求I所述指紋圖譜的建立方法所得的臺(tái)灣金線蓮的指紋圖譜，其特征在于所述指紋圖譜長(zhǎng)度為65分鐘，共有11個(gè)特征峰，其中4’號(hào)特征峰為阿魏酸內(nèi)參照峰，以4’號(hào)特征峰分別計(jì)算各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積得所述指紋圖譜，具體如下 . 1’號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間O. 16,相對(duì)峰面積O. 48 1. 34 ; . 2'號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間O. 91 O. 92，相對(duì)峰面積1. 25 2. 86 ; . 3’號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間O. 96,相對(duì)峰面積O. 24 O. 33 ; .4’號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間1. 00，相對(duì)峰面積1. 00 ； .5’號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間1. 12，相對(duì)峰面積O. 61 1. 94 ; .6'號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間1. 20，相對(duì)峰面積O. 65 2. 58 ; .7'號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間1. 35 1. 36，相對(duì)峰面積O. 19 O. 39 ; .8’號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間1. 70 1. 72，相對(duì)峰面積O. 14 O. 40 ; .9’號(hào)峰,相對(duì)保留時(shí)間2. 48 2. 49,相對(duì)峰面積O. 61 1. 15 ; .10’號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間2. 53 2. 54，相對(duì)峰面積1. 27 4. 64 ; .11'號(hào)峰，相對(duì)保留時(shí)間2. 55 2. 57，相對(duì)峰面積O. 25 O. 62 ; 上述特征峰的保留時(shí)間重現(xiàn)性RSD小于2%，峰面積重現(xiàn)性RSD小于3%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種金線蓮指紋圖譜的建立方法及福建金線蓮和臺(tái)灣金線蓮指紋圖譜。本發(fā)明的方法包括(1)供試品溶液的制備；(2)色譜條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；洗脫方式以磷酸和甲醇組成的梯度洗脫液為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；紫外檢測(cè)檢測(cè)波長(zhǎng)為310～320nm；(3)測(cè)定依照高效液相色譜法測(cè)定，得到指紋圖譜。本發(fā)明的方法運(yùn)用高效液相色譜建立金線蓮的指紋圖譜，提高金線蓮質(zhì)量控制的水平；本發(fā)明提出一種內(nèi)參照峰的指紋圖譜鑒別方法，解決了目前缺乏金線蓮有關(guān)成分對(duì)照品的難題。采用內(nèi)參照峰作為參照，得到的各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積更穩(wěn)定，方法精密度更好。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102768254SQ20121020378
公開日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年6月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月19日
發(fā)明者吳波, 胡珊梅, 陳詠梅 申請(qǐng)人:福建省金草生物集團(tuán)有限公司