專利名稱：一種定量檢測(cè)黃漿水中香味成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)分析方法，具體地說(shuō)是一種定量檢測(cè)黃漿水中香味成分的方法，屬于酒類副產(chǎn)物分析技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
黃漿水是白酒釀造發(fā)酵過(guò)程中的伴生物，顏色為棕黃色，黃漿水中含有豐富的酸、酯、醇、醛等香味物質(zhì)，還含有淀粉、糖分、固形物及經(jīng)長(zhǎng)期馴化的己酸菌、丁酸菌、酵母菌等有益微生物。黃漿水中含有很多有益風(fēng)味成分，提取其中的香味成分用于白酒勾調(diào)是未來(lái)
白酒行業(yè)的發(fā)展方向。由于黃漿水中含有淀粉、糖分、微生物等物質(zhì)，所以測(cè)定黃漿水的香味成分必須通過(guò)適宜的樣品前處理，這樣不僅能保證分析的準(zhǔn)確性，而且對(duì)于保證氣相色譜的使用安全具有重要意義。張巖、郭藝山等報(bào)道的“直接進(jìn)樣氣相色譜法測(cè)定黃水的主要組分”(釀酒，2009第I期，P45-47)中，實(shí)驗(yàn)選取四個(gè)不同轉(zhuǎn)速的梯度，以15000r/min及20000r/min離心樣品較澄清，以10000r/min離心樣品澄清度次之，以5000r/min離心樣品較混濁，氣相圖譜各主要組分的峰面積相差不大。結(jié)果檢測(cè)出黃水主要有機(jī)組分22種。該方法樣品前處理采用離心后直接進(jìn)樣的方式，由于黃漿水的酒精度較低，且有些糖類物質(zhì)會(huì)依然溶解在上清液中，容易導(dǎo)致氣相色譜柱的污染，降低氣相色譜柱的使用壽命。張巖、陳茂斌等報(bào)道的“預(yù)處理方法對(duì)黃水氣相色譜分析的影響”(釀酒科技，2009第4期，P105-107)中，對(duì)黃水的前處理方法進(jìn)行了比較研究，結(jié)果表明膜過(guò)濾、離心處理及酒精沉降的方法在氣相色譜分析時(shí)出峰最多，所測(cè)含量較為接近，以離心法最好。但離心法仍存在色譜柱污染的問題；黃水直接用于膜過(guò)濾，由于黃水粘度較大，過(guò)濾困難，極易導(dǎo)致膜片損環(huán)；其中的酒精沉降法是先以1:1的黃水與75% (v/v)酒精混合，沉淀24h，將上清液抽出，再以1:1的比例加入酒精，再沉淀24h后用0. 45um濾膜過(guò)濾，取清液IOml后加內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣。該酒精沉淀法步驟較繁瑣，耗時(shí)太長(zhǎng)、容易導(dǎo)致?lián)]發(fā)性組分的損失從而影響定量的準(zhǔn)確。張曉磊、史潛玉等報(bào)道“白酒釀造副產(chǎn)物黃水中揮發(fā)性化合物的研究”(釀酒，2010第2期，P41-44)中，采用同時(shí)蒸餾萃取(SDE)和頂空固相微萃取(HS-ME)結(jié)合質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC/MS)對(duì)黃水中揮發(fā)性組分進(jìn)行了分析研究，分別獲得了 37種和41種化合物的確切定性結(jié)果。其中同時(shí)蒸餾萃取方法為取150mL黃水于樣品瓶中，溶劑瓶中加入50mL二氯甲烷，兩邊同時(shí)加熱，調(diào)整加熱套，使溶劑瓶保持50°C左右，樣品瓶保持120°C左右，保持樣品的沸騰進(jìn)行提取，蒸餾結(jié)束后冷卻15min，收集裝置中二氯甲烷提取產(chǎn)物，用無(wú)水硫酸鈉干燥過(guò)夜，40°C水浴氮吹至lmL，供GC/MS鑒定；頂空-固相微萃取方法為取ImL黃水于15mL頂空瓶中，加入4mL蒸餾水，用I. 5g NaCl飽和，旋緊瓶蓋，渦旋5min后于50°C水浴中超聲30min，將固相微萃取裝置插入頂空瓶，在50°C水浴中保溫萃取40min，隨后將萃取頭取出，直接供GC/MS分析。由上述可知，采用SDE法萃取時(shí)間較長(zhǎng)，操作相對(duì)繁瑣；SPME法相對(duì)簡(jiǎn)便快速、樣品不會(huì)被破壞，但SPME對(duì)多組分分析存在顯著的競(jìng)爭(zhēng)吸附效應(yīng)，因此定量存在困難。由上述已報(bào)道的文獻(xiàn)所知，黃漿水中揮發(fā)性香味成分的檢測(cè)方法均采用氣相色譜測(cè)定，但其前處理方法各異，大都存在操作繁瑣、易污染氣相色譜柱或定量不準(zhǔn)確等問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種方法簡(jiǎn)單、快速定量的檢測(cè)黃漿水中香味成分的方法，并且在檢測(cè)的過(guò)程中避免氣相色譜柱的污染。本發(fā)明定量檢測(cè)黃漿水中香味成分的方法，包括前處理和檢測(cè)各單元過(guò)程所述前處理是首先將體積濃度不小于95%的乙醇溶液和黃漿水按I: I的體積比混合均勻得到混合液，將所述混合液密閉靜置20-40min，然后用定性分析濾紙粗濾收集粗濾液或者離心分離收集上清液，將所述粗濾液或上清液用0. 45 y m的微孔濾膜過(guò)濾收集濾液即為前處理液； 所述檢測(cè)是向IOmL前處理液中加入0. ImL混合內(nèi)標(biāo)，混合均勻后進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)；所述混合內(nèi)標(biāo)為叔戊醇、乙酸正戊酯和2-乙基丁酸按體積比1:1:1組成的混合物。前處理過(guò)程中離心分離的轉(zhuǎn)速為10000r/min，時(shí)間為lOmin。氣相色譜檢測(cè)的檢測(cè)條件為色譜柱美國(guó)Varian Chrompack公司CP-WAX57CB毛細(xì)管柱50m X 0. 25mm X 0. 20 u m ；柱溫二階程序升溫，初始溫度35°C，保持2min，以4°C/min升到100°C，再以IO0C /min 升到 210°C，保持 15min ；進(jìn)樣口溫度230°C;檢測(cè)器溫度240°C;載氣氮?dú)?；柱頭壓120kPa;柱流量1.OmL/min ；進(jìn)樣量IiiL。 本發(fā)明方法可檢測(cè)到約50種香味成分。本發(fā)明前處理過(guò)程中，添加95%以上的酒精使黃漿水準(zhǔn)確稀釋一倍，高濃度的酒精加入黃漿水后，一方面有利于黃漿水中的淀粉、糊精、糖、蛋白質(zhì)等物質(zhì)脫水而快速沉淀，便于后續(xù)的過(guò)濾或離心方式快速去除沉淀，從而避免了大分子物質(zhì)對(duì)色譜柱的污染；另一方面，高濃度酒精加入后提高了黃漿水的酒精度，使其酒精度達(dá)到50度以上，有利于黃漿水中高級(jí)脂肪酸、酯類等組分的有效提取，而且也有效地保護(hù)氣相色譜柱。本發(fā)明前處理過(guò)程中，采用“定性濾紙密閉粗過(guò)濾和0. 45 y m的微孔濾膜過(guò)濾”或“離心和0. 45 y m的微孔濾膜過(guò)濾”，第一步“粗過(guò)濾或離心”的方式將大顆粒沉淀物質(zhì)去除掉，更有利于后續(xù)微孔濾膜的操作，若直接采用微孔濾膜，過(guò)濾困難，極易使微孔濾膜受損，不能保證過(guò)濾效果；后續(xù)的微孔濾膜過(guò)濾進(jìn)一步保證了濾液的澄清度，避免濾液中可能的微小懸浮物或大分子物質(zhì)進(jìn)入氣相色譜柱，有效保護(hù)了色譜柱的使用安全。本發(fā)明檢測(cè)黃漿水揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)的氣相色譜法中，其內(nèi)標(biāo)物為叔戊醇、乙酸正戊酯和2-乙基丁酸這三種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的混合內(nèi)標(biāo)；由于黃漿水中酸類物質(zhì)較高,采用三種混合內(nèi)標(biāo)，可有效克服氣相色譜分流進(jìn)樣的歧視效應(yīng)，防止酸類物質(zhì)的定量失真，從而提高定量分析的準(zhǔn)確度。本發(fā)明對(duì)于粘性較大、固形物含量高的黃漿水提出了切實(shí)可行的簡(jiǎn)便快速的前處理技術(shù)方案，首先加入高濃度乙醇以沉降黃漿水中的淀粉、糊精、糖和蛋白質(zhì)等物質(zhì)，然后采用“定性濾紙密閉粗過(guò)濾和0. 45 y m的微孔濾膜過(guò)濾”或“離心和0. 45 y m的微孔濾膜過(guò)濾”的技術(shù)方案，使整個(gè)操作簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確，且能有效保護(hù)氣相色譜柱的使用安全，延長(zhǎng)氣相色譜柱的使用壽命。
四

圖I為實(shí)施例I中黃漿水I號(hào)樣品色譜圖(前處理采用粗過(guò)濾、微濾方法)。圖2為實(shí)施例I中黃漿水2號(hào)樣品色譜圖(前處理采用粗過(guò)濾、微濾方法)。圖3為實(shí)施例2中黃漿水I號(hào)樣品色譜圖(前處理采用離心、微濾方法)。圖4為實(shí)施例2中黃漿水2號(hào)樣品色譜圖(前處理采用離心、微濾方法)。
五具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :I、前處理使用25ml大肚吸管吸取25ml黃漿水，置于50ml容量瓶中，然后加入體積濃度96%的乙醇溶液定容。將黃漿水與酒精充分混勻得到混合液，使其密閉充分沉淀0. 5h。將混合液采用定性濾紙進(jìn)行密閉粗過(guò)濾，得到較澄清的粗濾液，將粗濾液用0. 45 y m的微孔濾膜過(guò)濾，得到前處理液。2、檢測(cè)吸取IOml前處理液，然后加入0. Iml混合內(nèi)標(biāo)，混勻后進(jìn)氣相色譜進(jìn)行分析。氣相色譜檢測(cè)的檢測(cè)條件為色譜柱美國(guó)Varian Chrompack公司CP-WAX57CB毛細(xì)管柱50m X 0. 25mm X 0. 20 u m ；柱溫二階程序升溫，初始溫度35°C，保持2min，以4°C /min升到100°C，再以IO0C /min 升到 210°C，保持 15min ；進(jìn)樣口溫度230°C;檢測(cè)器溫度240°C ；載氣氮?dú)?；柱頭壓120kPa;柱流量1.OmL/min ；進(jìn)樣量IiiL。黃漿水的香味成分及含量如表I所示，因檢測(cè)液體為I: I的體積稀釋后的黃漿水，所以實(shí)際黃漿水中的香味成分的含量為檢測(cè)結(jié)果的2倍。采用此粗過(guò)濾和微濾相結(jié)合的前處理方式，黃漿水I號(hào)樣品的氣相色譜圖如圖I所示，黃漿水2號(hào)樣品的氣相色譜圖如圖2所示。表I白酒釀造伴生物黃漿水中香味成分及含量(單位mg/L)
權(quán)利要求
1.ー種定量檢測(cè)黃漿水中香味成分的方法，包括前處理和檢測(cè)各單元過(guò)程，其特征在于: 所述前處理是首先將體積濃度不小于95%的こ醇溶液和黃漿水按I: I的體積比混合均勻得到混合液，將所述混合液密閉靜置20-40min，然后用定性分析濾紙粗濾收集粗濾液或者離心分離收集上清液，將所述粗濾液或上清液用O. 45 μ m的微孔濾膜過(guò)濾收集濾液即為前處理液； 所述檢測(cè)是向IOmL前處理液中加入O. ImL混合內(nèi)標(biāo)，混合均勻后進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)；所述混合內(nèi)標(biāo)為叔戊醇、こ酸正戊酯和2-こ基丁酸按體積比1:1:1組成的混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，其特征在于前處理過(guò)程中離心分離的轉(zhuǎn)速為.10000r/min,時(shí)間為 lOmin。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，其特征在于氣相色譜檢測(cè)的檢測(cè)條件為 色譜柱美國(guó) Varian Chrompack 公司 CP-WAX57CB 毛細(xì)管柱 50mX0. 25mmX0. 20 μ m ； 柱溫ニ階程序升溫，初始溫度35 °C，保持2min，以4 °C /min升到100°C，再以.100C /min 升到 210°C，保持 15min ； 進(jìn)樣ロ溫度230°C ； 檢測(cè)器溫度240°C ； 載氣氮?dú)猓? 柱頭壓120kPa ； 柱流量:1. OmL/min ； 進(jìn)樣量1μし
全文摘要
本發(fā)明公開了定量檢測(cè)黃漿水中香味成分的方法，包括前處理和檢測(cè)各單元過(guò)程，所述前處理是首先將體積濃度不小于95%的乙醇溶液和黃漿水按1:1的體積比混合均勻得到混合液，將所述混合液密閉靜置20-40min，然后用定性分析濾紙粗濾收集粗濾液或者離心分離收集上清液，將所述粗濾液或上清液用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾收集濾液即為前處理液；所述檢測(cè)是向10mL前處理液中加入0.1mL混合內(nèi)標(biāo)，混合均勻后進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)；所述混合內(nèi)標(biāo)為叔戊醇、乙酸正戊酯和2-乙基丁酸按體積比1:1:1組成的混合物。本發(fā)明的技術(shù)方案簡(jiǎn)便、快速；且能有效保護(hù)氣相色譜柱的使用安全，延長(zhǎng)氣相色譜柱的使用壽命。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102735770SQ20121021042
公開日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月25日
發(fā)明者萬(wàn)春環(huán), 劉國(guó)英, 周慶伍, 孫大春, 李安軍, 湯有宏, 王錄, 高江婧 申請(qǐng)人:安徽古井貢酒股份有限公司