專利名稱：：一種高效液相色譜檢測(cè)油脂中氯丙醇酯的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種氯丙醇酯檢測(cè)方法，尤其涉及一種高效液相色譜檢測(cè)油脂中氯丙醇酯的方法。
背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及的氯丙醇酯的檢測(cè)方法是用于油脂中氯丙醇酯的檢測(cè)。氯丙醇酯是油脂及含油脂食品在熱加工過(guò)程中形成的副產(chǎn)物，目前被認(rèn)為是潛在的食品安全危害因子之一。目前文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)油脂中氯丙醇酯的方法主要有GC-MS、LC-MS,LC-MS/MS等。這些方法的檢測(cè)靈敏度都比較高，但是其所需儀器價(jià)格昂貴，要求專業(yè)人員操作，維護(hù)和使用成本高，因此僅適合大型實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。Moravcova報(bào)道了一種檢測(cè)油脂中氯丙醇酯的方法(Moravcova,E.andL.Vaclavik,etal.Novelapproachestoanalysisof3-chloropropane-l,2-diolestersinvegetableoils.AnalyticalandBioanalyticalChemistry.2012.),其具體操作是將添加了氘代內(nèi)標(biāo)物的油脂樣品上樣到硅膠柱(填充所需硅膠用正己烷/二乙醚(964，v/v)混合物溶脹)，用30毫升正己烷/二乙醚(964，v/v)混合物等度洗脫，洗脫速度為O.8毫升/分鐘，棄去O5毫升的部分，收集525毫升的部分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑后，殘余物用甲醇溶解，準(zhǔn)備進(jìn)行U-HPLC-MS分析。不足之處是整個(gè)硅膠柱層析的操作周期在I小時(shí)以上，這對(duì)于進(jìn)行批量的油脂樣品處理是不適宜的；同時(shí)，U-HPLC-MS系統(tǒng)對(duì)流動(dòng)相的要求較高，據(jù)了解，目前國(guó)產(chǎn)的色譜純?cè)噭┏思状?、乙腈外，其余不適用于該套系統(tǒng)，油脂樣品檢測(cè)的成本較高。本發(fā)明方法以有機(jī)溶劑除去油脂中的甘油三酯和極性組分，然后采用高效液相色譜檢測(cè)，其中，色譜條件為使用正相硅膠色譜柱，分別以正己烷和異丙醇為流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，以流速O.5mL/min等度洗脫，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比為9:1。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺點(diǎn)，提供了一種油脂樣品前處理簡(jiǎn)單、檢測(cè)靈敏度高和方法應(yīng)用性好的氯丙醇酯檢測(cè)方法，在食品、醫(yī)藥、環(huán)境等許多分析領(lǐng)域有著較高的應(yīng)用價(jià)值。為了解決上述技術(shù)的問(wèn)題，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種高效液相色譜檢測(cè)油脂中氯丙醇酯的方法，其特征在于，具體步驟為第一步將油脂加熱到液體狀態(tài)，預(yù)處理去除甘油三酯；第二步將第一步所得的去除甘油三酯的樣品進(jìn)行處理，去除極性組分，用乙腈溶解，得到樣品溶液；第三步測(cè)定當(dāng)日用乙腈稀釋配制氯丙醇酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，其濃度為Cs，用O.2μm孔徑過(guò)濾膜過(guò)濾得到標(biāo)準(zhǔn)溶液，高效液相色譜檢測(cè)得到氯丙醇酯的流出時(shí)間及其峰面積As，色譜條件為使用正相硅膠色譜柱，分別以正己烷和異丙醇為流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，以流速0.5mL/min等度洗脫，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比為9:1;第四步將第二步所得的樣品溶液用0.2孔徑過(guò)濾膜過(guò)濾得到樣品溶液，采用與第三步相同的色譜條件檢測(cè)樣品溶液，得到與氯丙醇酯的流出時(shí)間對(duì)應(yīng)的峰面積Ai，按下式計(jì)算油脂中氯丙醇酯的濃度CiCi=Cs(AiAs)。所述第一步中將油脂預(yù)處理除去甘三酯的具體步驟為在油脂樣本中加入2倍體積的乙腈，鏇潤(rùn)振蕩30s,以轉(zhuǎn)速10000r/min離心IOmin,取上清，于50°C旋轉(zhuǎn)蒸干。所述第二步中將第一步所得的去除甘油三酯的樣品進(jìn)行處理除去極性組分的具體步驟為在第一步所得的去除甘油三酯的樣品中加入2倍體積的正己烷，漩渦振蕩30s，以轉(zhuǎn)速10000r/min離心IOmin,取上清,于室溫旋轉(zhuǎn)蒸干，所得干殘洛用乙腈溶解，得到樣品溶液。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于能夠通過(guò)簡(jiǎn)單的方法檢測(cè)出油脂中氯丙醇酯的含量。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例來(lái)具體說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例I一種高效液相色譜檢測(cè)油脂中氯丙醇酯的方法第一步將煎炸30h后的28度棕櫚油樣本加熱，使呈液體狀態(tài)，加入2倍體積的乙腈，鏇潤(rùn)振蕩30s,以轉(zhuǎn)速10000r/min離心IOmin,取上清，于50°C旋轉(zhuǎn)蒸干；第二步往干殘?jiān)屑尤?倍體積的正己烷，漩渦振蕩30s，以轉(zhuǎn)速10000r/min離心lOmin，取上清，于室溫旋轉(zhuǎn)蒸干，所得干殘?jiān)靡译嫒芙?，得到樣品溶液；第三步用乙腈稀釋配制氯丙醇酯?biāo)準(zhǔn)溶液，其濃度Cs為0.156mg/mL，用0.2pm孔徑過(guò)濾膜過(guò)濾得到標(biāo)準(zhǔn)溶液，高效液相色譜檢測(cè)得到氯丙醇酯的流出時(shí)間為5.26min和峰面積As為1962690mVs,色譜條件為使用HederaSi色譜柱，(C>4.6X200mm,3um,HanbonSci.&Tech.)，進(jìn)樣量5uL，分別以正己烷和異丙醇為流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，以流速0.5mL/min等度洗脫，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比為9:1;第四步將第二步所得的樣品溶液用0.2孔徑過(guò)濾膜過(guò)濾得到樣品溶液，采用與第三步相同的色譜條件檢測(cè)樣品溶液，得到與氯丙醇酯的流出時(shí)間對(duì)應(yīng)的峰面積AiS10749041mVs，按下式計(jì)算油脂中氯丙醇酯的濃度CiCi=Cs(AiAs)=0.85mg/mL。實(shí)施例2另一種高效液相色譜檢測(cè)油脂中氯丙醇酯的方法第一步于添加3%氯化鈉、5%水于240°C加熱3h后的玉米油樣本中加入2倍體積的乙腈，鏇潤(rùn)振蕩30s,以轉(zhuǎn)速10000r/min離心IOmin,取上清，于50°C旋轉(zhuǎn)蒸干；第二步往干殘?jiān)屑尤?倍體積的正己烷，漩渦振蕩30s，以轉(zhuǎn)速10000r/min離心lOmin，取上清，于室溫旋轉(zhuǎn)蒸干，所得干殘?jiān)靡译嫒芙猓玫綐悠啡芤?；第三步用乙腈稀釋配制氯丙醇酯?biāo)準(zhǔn)溶液，其濃度Cs為0.208mg/mL,用0.2ym孔徑過(guò)濾膜過(guò)濾得到標(biāo)準(zhǔn)溶液，高效液相色譜檢測(cè)得到氯丙醇酯的流出時(shí)間為5.26min和峰面積As為3504038mVs,色譜條件為使用HederaSi色譜柱，(C>4.6X200mm,3um,HanbonSci.&Tech.)，進(jìn)樣量5uL，分別以正己烷和異丙醇為流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，以流速0.5mL/min等度洗脫，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比為9:1;第四步將第二步所得的樣品溶液用0.2孔徑過(guò)濾膜過(guò)濾得到樣品溶液，采用與第三步相同的色譜條件檢測(cè)樣品溶液，得到與氯丙醇酯的流出時(shí)間對(duì)應(yīng)的峰面積AiS1008579mVs，按下式計(jì)算油脂中氯丙醇酯的濃度CiCi=Cs(AiAs)=0.06mg/mL。權(quán)利要求1.一種高效液相色譜檢測(cè)油脂中氯丙醇酯的方法，其特征在于，具體步驟為第一步將油脂加熱到液體狀態(tài)，預(yù)處理去除甘油三酯；第二步將第一步所得的去除甘油三酯的樣品進(jìn)行處理，去除極性組分，用乙腈溶解，得到樣品溶液；第三步測(cè)定當(dāng)日用乙腈稀釋配制氯丙醇酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，其濃度為Cs，用O.2μm孔徑過(guò)濾膜過(guò)濾得到標(biāo)準(zhǔn)溶液，高效液相色譜檢測(cè)得到氯丙醇酯的流出時(shí)間及其峰面積As，色譜條件為使用正相硅膠色譜柱，分別以正己烷和異丙醇為流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，以流速O.5mL/min等度洗脫，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比為9:1;第四步將第二步所得的樣品溶液用O.2μπι孔徑過(guò)濾膜過(guò)濾得到樣品溶液，采用與第三步相同的色譜條件檢測(cè)樣品溶液，得到與氯丙醇酯的流出時(shí)間對(duì)應(yīng)的峰面積Ai,按下式計(jì)算油脂中氯丙醇酯的濃度CiCi=Cs·(AiAs)。2.如權(quán)利要求I所述的檢測(cè)油脂中氯丙醇酯的方法，其特征在于，所述第一步中將油脂預(yù)處理除去甘三酯的具體步驟為在油脂樣本中加入2倍體積的乙腈，漩渦振蕩30s，以轉(zhuǎn)速10000r/min離心IOmin,取上清，于50°C旋轉(zhuǎn)蒸干。3.如權(quán)利要求I所述的檢測(cè)油脂中氯丙醇酯的方法，其特征在于，所述第二步中將第一步所得的去除甘油三酯的樣品進(jìn)行處理除去極性組分的具體步驟為在第一步所得的去除甘油三酯的樣品中加入2倍體積的正己烷，漩渦振蕩30s，以轉(zhuǎn)速10000r/min離心lOmin，取上清，于室溫旋轉(zhuǎn)蒸干，所得干殘?jiān)靡译嫒芙猓玫綐悠啡芤?。全文摘要本發(fā)明提供了一種高效液相色譜檢測(cè)油脂中氯丙醇酯的方法，其特征在于，具體步驟為取油脂除去甘油三酯和極性組分后采用高效液相色譜檢測(cè)，其中，色譜條件為使用正相硅膠色譜柱，分別以正己烷和異丙醇為流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，以流速0.5mL/min等度洗脫，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比為9∶1。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于能夠通過(guò)簡(jiǎn)單的方法檢測(cè)出油脂中氯丙醇酯的含量。文檔編號(hào)G01N30/14GK102721763SQ20121022220公開(kāi)日2012年10月10日申請(qǐng)日期2012年7月2日優(yōu)先權(quán)日2012年7月2日發(fā)明者周克茹,周紅茹,孫雪梅,楊嬌,王興國(guó),金青哲申請(qǐng)人:江南大學(xué)