專利名稱：樣品中羥乙磷酸及其鹽類的分析測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測方法，尤其是涉及ー種羥こ磷酸及其鹽類的檢測方法。
背景技術(shù)：
隨著當今社會經(jīng)濟的快速發(fā)展和人民生活水平的快速提高，人民對于美的追求也不斷提高，化妝品成為人們豐富多彩的現(xiàn)代生活的重要組成部分?；瘖y品作為必不可少的日常用品，由于可長時間駐留在皮膚、毛發(fā)等部位，其安全性也越來越受到社會大眾的高度關(guān)注。羥こ磷酸(HEDP)及其鹽類在化工和制藥方面應(yīng)用廣泛，羥こ磷酸ニ鈉是治療和預 防骨質(zhì)疏松的有效藥物[1]。羥こ磷酸及其鹽類作為護發(fā)產(chǎn)品和皂類產(chǎn)品的生產(chǎn)原料，用來抑制自由基生成，控制乳化劑的穩(wěn)定性和粘稠度，廣泛用于護發(fā)產(chǎn)品和皂類產(chǎn)品的生產(chǎn)和制造，但其用量水平受到嚴格控制。我國《化妝品衛(wèi)生標準》[2]、《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》[3]，歐盟化妝品新法規(guī)(EC) 1223/2009[4]均將羥こ磷酸及其鹽類列為化妝品組分中限用物質(zhì)，規(guī)定在護發(fā)產(chǎn)品中最大允許使用濃度為1.5% (以羥こ磷酸計)，在肥皂、香皂中最大允許使用濃度為2% (以羥こ磷酸計)。目前國內(nèi)外對于羥こ磷酸的色譜檢測方法報道很少，已見報道的含量測定方法有柱后衍生HPLC方法[5]，條件苛刻；DB Land等[6]詳細研究了磷酸對鋁-桑色素(Aluminium-morin)絡(luò)合劑的突光淬滅作用；或經(jīng)硝化后按測磷的方法進行，操作冗長繁雜；熊婧等m運用離子色譜法測定片劑中的羥こ磷酸；張曉青等M采用反相離子對高效液相色譜法，蒸發(fā)光散射檢測器檢測依替膦酸鈉藥物中的羥こ磷酸，但對于護發(fā)產(chǎn)品和皂類產(chǎn)品中羥こ磷酸的檢測方法研究很少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供ー種采用離子色譜-抑制電導檢測法分析測定護發(fā)產(chǎn)品和皂類產(chǎn)品中的羥こ磷酸及其鹽類的方法，避免了美國藥典[9]用滴定法測定羥こ磷酸含量方法的終點不明顯，不易掌握的缺陷，方法簡單、靈敏度高、選擇性好、樣品前處理和流動相都主要用水做溶液、環(huán)保經(jīng)濟，具有較好的實際運用價值。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是—種樣品中羥こ磷酸及其鹽類的分析測定方法，包括以下步驟(I)樣品前處理將樣品分散于3. OmM鹽酸溶液中，振搖至完全溶解，用6M鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至I. O后，將樣品溶液搖勻，吸取樣品溶液5mL，依次通過尼龍濾膜和OnGuard-II RP固相萃取柱，濾液供測定分析；(2)離子色譜-抑制電導檢測法分析先采用IonPacASll-HC陰離子交換色譜柱分離，再采用40mmol ·じ1KOH溶液為淋洗液等度洗脫，最后采用ASRS400陰離子型抑制電導，檢測羥こ磷酸及其鹽類的含量；(3)外標法定量。
本發(fā)明的方法，其中所述步驟(I)的前處理方法簡單易行，試驗結(jié)果顯示用鹽酸溶液分散待測樣品的檢測效果最優(yōu)；由于待測樣品成分較復雜，檢測時背景干擾較大，還需要進ー步采用純化方法，即將溶解后的溶液依次通過尼龍濾膜和OnGuard II RP固相萃取柱提取純化，其中OnGuard II RP固相萃取柱優(yōu)選先用IOmL甲醇活化，再用15mL水活化，靜置30min后使用。經(jīng)過上述處理后的樣品溶液的檢測色譜圖更清晰。本發(fā)明的方法，其中所述步驟(2)中檢測條件優(yōu)選為=IonPac ASll-HC陰離子交換色譜柱為250_X4mm ； IonPacAG 11-HC保護柱為50_X·4mm ;柱溫30° C ;檢測池溫度30。C ;淋洗液流速I. OmL · rnin—1 ;進樣體積25 μし本發(fā)明的方法，所述步驟(3)的具體步驟為取羥こ磷酸標準儲備液適量用鹽酸水溶液稀釋成質(zhì)量濃度為O. 2,0. 5、I. 0,2. 0,5. 0,8. Omg/L的系列標準溶液，按照步驟(I)和(2)的方法進行離子色譜-抑制電導檢測法分析測定，以色譜峰的峰面積(Y)為縱坐標，與其對應(yīng)的質(zhì)量濃度(P，mg/L)為橫坐標作圖，繪制標準工作曲線。羥こ磷酸的線性方程為 Y=O. 0207 P 2+0. 0004，相關(guān)系數(shù) r2 為 O. 9999。方法的定量限(S/N=10)為 O. 05%。本發(fā)明的方法，經(jīng)試驗結(jié)果表明，該法對羥こ磷酸及其鹽類的定量下限為O. 05%,線性范圍為O. 2mg/L 8. Omg/L，相關(guān)系數(shù)(r2)為O. 9999。護發(fā)產(chǎn)品在低、中、高3種加標水平的回收率為92. 369Γ102. 92%，相對標準偏差為2. 22% 2. 85% ;皂類產(chǎn)品在低、中、高3種加標水平的回收率為87. 159Γ102. 20%，相對標準偏差為I. 579Γ4. 14%。本發(fā)明的方法，可以應(yīng)用于所有護發(fā)產(chǎn)品和皂類產(chǎn)品樣品的檢測中，也可以用于相關(guān)類產(chǎn)品的檢測。由于其他的合格化妝品中都不允許含羥こ磷酸，只有護發(fā)產(chǎn)品和皂類產(chǎn)品中允許含少量，故而本發(fā)明的方法最優(yōu)用于護發(fā)產(chǎn)品和皂類產(chǎn)品中羥こ磷酸的檢測。本發(fā)明的方法，運用離子色譜ー抑制電導檢測法測定護發(fā)產(chǎn)品和皂類產(chǎn)品中羥こ磷酸及其鹽類含量，樣品前處理操作簡便、方法線性范圍寬、精密度好、準確度高、快速靈敏，樣品前處理和流動相都主要用水做溶液、環(huán)保經(jīng)濟，具有較好的實際運用價值，適用于護發(fā)產(chǎn)品和皂類產(chǎn)品的日常檢測。


圖I為羥こ磷酸的標準離子色譜圖；圖2為實施例中實際護發(fā)樣品的離子色譜圖；圖3為實施例中實際皂類樣品的離子色譜圖。
具體實施例方式為進ー步說明本發(fā)明，結(jié)合以下實施例具體說明I.實驗過程I. I儀器與試劑DIONEX ICS-3000離子色譜儀(美國Dionex公司)，配有抑制型電導檢測器，EGC II KOH淋洗液自動發(fā)生裝置和ASRS-400陰離子自動再生電解抑制器；Milli-Q超純水器(美國Milli-Q公司)；電子天平(瑞士 MettlerToledo公司);pH計(德國Sartorius公司)；振蕩器(日本Tokyo Rikakikai公司)；0nGuard II RP固相萃取柱(2. 5mL,美國Dionex公司)；0. 22 μ m尼龍濾膜。
羥こ磷酸標準品(美國Sigma公司，CAS號25211_86_3)純度不低于95% ；3. OmM鹽酸水溶液；6. OM鹽酸水溶液；實驗用水為去離子水(18. 2ΜΩ · cm)。I. 2定量標準曲線的繪制準確稱取羥こ磷酸標準品IOOmg置于IOOmL容量瓶中，用超純水溶解并定容，配成質(zhì)量濃度為1000mg/L的標準儲備液。將儲備液用O. IM鹽酸水溶液稀釋成質(zhì)量濃度為O. 2、
O.5、I. 0,2. 0,5. 0,8. Omg/L 的系列標準溶液。I. 3樣品前處理稱取約O. 2g樣品(精確至O. OOlg)至IOOmL三角瓶中，放入數(shù)粒玻璃珠，加鹽酸水 溶液50mL左右，將樣品溶液放在振蕩器上振搖約f 2h直至完全分散，然后用鹽酸水溶液定容至100mL。分別放入數(shù)粒玻璃珠子，置于振蕩器上振搖廣2h使之充溶解。提取液用6M鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至I. O后，將樣品搖勻，用一次性注射器吸取樣品溶液5mL，依次通過尼龍濾膜和OnGuard II RP固相萃取柱(OnGuard RP柱先用IOmL甲醇活化，再用15mL水活化，靜置30min，使其活化完全)，棄去前5mL流出液，取濾液供測定分析。I. 4色譜條件IonPac AS11-HC 陰離子交換色譜柱(250_X4mm), IonPac AG11-HC 保護柱(50mm X 4mm)；以淋洗液發(fā)生器產(chǎn)生的40mmol ·じ1KOH溶液作流動相等度洗脫；柱溫30。C ;檢測池溫度:30。C ;流速I. OmL · min—1 ;進樣體積25 μ L ；陰離子抑制型電導檢測fhiOmeleon色譜工作站用于數(shù)據(jù)采集和處理。羥こ磷酸的離子色譜圖見圖I。2結(jié)果與討論2. I前處理條件的選擇2. I. I酸的選擇考察不同的酸對于實驗條件的影響，分別用硝酸、硫酸、磷酸和鹽酸調(diào)節(jié)水溶液的PH，但硝酸和硫酸在柱子上的保留很強，峰展寬，出峰時間晚，影響目標峰的測定，磷酸和目標物質(zhì)結(jié)構(gòu)很接近，在目標峰附近出峰，而鹽酸在2min左右就出峰，出峰時間較早，對于目標峰無干擾。所以選擇鹽酸來調(diào)節(jié)溶劑pH。2. I. 2pH 的選擇比較不同pH條件下羥こ磷酸的提取效率，分別在pH2. 50、pH6. 50、pH12. 00條件下處理樣品，通過方法檢測發(fā)現(xiàn)，羥こ磷酸及其鹽類在PH2. 50條件下提取效果較好，所以初步選擇pH2. 50水溶液作為樣品溶劑，但樣品的加標回收率不能穩(wěn)定的達到859Γ105%，可能因為樣品基質(zhì)的影響，特別是皂類產(chǎn)品堿性較強，中和了溶劑的ΡΗ，所以考慮在樣品完全分散于溶劑后再調(diào)節(jié)溶液的pH。采用適宜濃度的鹽酸調(diào)節(jié)pH分別至I. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. O、
6.0，再通過本方法檢測可得，羥こ磷酸及其鹽類在pH調(diào)至I. O時回收率最好，可穩(wěn)定達到909Γ105%之間。所以選擇ρΗ2. 50水溶液溶解樣品，在樣品完全分散后，再采用適宜濃度的鹽酸調(diào)節(jié)pH至I. O。2. 2色譜條件的選擇2. 2. I色譜柱的選擇相比于The IonPac ASll是ー款低容量氫氧根體系陰離子交換色譜柱。IonPacASll-HC為高容量陰離子交換分離柱，用于無機陰離子和有機酸陰離子分析，適合大體積進樣測定痕量陰離子，進樣更高濃度的樣品而不會擔心進樣量過載或色譜柱變寬，且對pH值得耐受范圍較寬，所以選擇IonPacASll-HC陰離子交換色譜柱。2. 2. 2流動相的選擇相比于以Na2C03/NaHC03混合溶液作淋洗液，用淋洗液自動發(fā)生裝置產(chǎn)生的高純度氫氧根為流動相，采用陰離子交換一抑制電導進行檢測，不僅可以得到很低的背景電導，提高測定靈敏度，而且樣品前處理簡單，只 需溶解稀釋即可進樣分析。所以選擇KOH溶液作為淋洗液。2. 3方法特異性取樣品基質(zhì)，按照“I. 4”方法進行測定，未觀察到在羥こ磷酸色譜峰周圍有干擾，且目標峰対稱性很好，說明本發(fā)明的離子色譜-抑制電導檢測法的特異性滿足一般要求，樣品中基質(zhì)信號不干擾羥こ磷酸的檢測。結(jié)果表明羥こ磷酸色譜峰附近不存在基質(zhì)的干擾信號。2. 4化學穩(wěn)定性將一定濃度的羥こ磷酸標準溶液添加到空白的樣品中，處理得到的供試品溶液室溫密閉保存，分別在1、2、3、5、7、8天進樣，考察穩(wěn)定性，目標峰面積RSD為1.2%。實驗結(jié)果表明，羥こ磷酸在樣品基質(zhì)中室溫密閉放置8天內(nèi)保持穩(wěn)定。2. 5線性范圍和定量限取羥こ磷酸標準儲備液適量用鹽酸水溶液稀釋成質(zhì)量濃度為O. 2,0. 5、I. 0,2. O、5. 0,8. Omg/L的系列標準溶液，按照“ I. 4”方法進行離子色譜_抑制電導檢測法分析測定，以色譜峰的峰面積(Y)為縱坐標，與其對應(yīng)的質(zhì)量濃度(P，mg/L)為橫坐標作圖，繪制標準工作曲線。羥こ磷酸的線性方程為Y=O. 0207 P 2+0. 0004，相關(guān)系數(shù)r2為O. 9999。方法的定量限(S/N=10)為 O. 05%。2. 6方法的回收率及精密度2. 6. I護發(fā)產(chǎn)品的方法回收率和精密度選用不含羥こ磷酸的護發(fā)素作為空白基質(zhì)，采取在樣品中加標的方法進行回收率和精密度實驗。設(shè)定高、中、低3個水平的加標濃度，按照本實驗方法進行測定，每個水平平行測定6份，結(jié)果表明在3個加標水平下的回收率為92. 369Γ102. 92%，相對標準偏差為
2.22% 2. 85%。2.6. 2皂類產(chǎn)品的方法回收率和精密度選用不含羥こ磷酸的皂作為空白基質(zhì)，采取在樣品中加標的方法進行回收率和精密度實驗。設(shè)定高、中、低3個水平的加標濃度，按照本實驗方法進行測定，每個水平平行測定6份，結(jié)果表明在3個加標水平下的回收率為87. 159Γ102. 20%,相對標準偏差為
I.57% 4. 14%。2. 7實際樣品測定對從市場上隨機購買的15個護發(fā)素實際樣品和15個皂類實際樣品采用本方法分別進行分析測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)羥こ磷酸在其中2個護發(fā)素樣品和10個皂類樣品中檢出，含量分別為O. 0017% 0· 0045%和O. 0150 0· 191%。樣品的液相色譜圖見圖2和圖3。以上所述的實施例僅僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進行描述，并非對本發(fā)明的范圍進行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計精神的前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)人員對本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書確定的保護范圍內(nèi)。參考文獻[I]樓永輝，李煜，李會林.衍生化紫外分光光度法測定依替膦酸ニ鈉片的溶出度[J]· 2010，27 (4) :350-352 ；[2]中華人民共和國衛(wèi)生部.化妝品衛(wèi)生標準.GB7916—1987[3]中華人民共和國衛(wèi)生部.化妝品衛(wèi)生規(guī)范.北京2007 ；[4]Regulation(EC)N01223/2009of the European Parliament and of theCouncil of30November2009on Cosmetics Products ；[5]Shon E Meek, et al. Liquid chromatography seperation of phosphorus oxo acids and other anions with postcolumn indirect fluorecsence detection byaluminum-morin. Anal Chem, 1988, 60(14):1397 ；[6] D B Land, etal. Method for determining trace quantities of phosphate.Mikrochim Acta, 1966:1013 ；[7]熊婧，吳劍敏，岳志華，胡昌勤.離子色譜法測定依替膦酸ニ鈉及其片劑的含量及有關(guān)物質(zhì)[J]·藥物分析雜志，2012，32(2) :310-313 ；[8]張曉青，蔣曄，徐智儒.依替膦酸鈉及其有關(guān)物質(zhì)的反相離子對色譜分析[J].分析測試學報，2005，24 (4) =105-107 ；[9]USP. X X II. 1990. 556。
權(quán)利要求
1.一種樣品中羥乙磷酸及其鹽類的分析測定方法，其特征在于所述方法包括以下步驟 (1)樣品前處理將樣品分散于3.OmM鹽酸溶液中，振搖至完全溶解，用6M鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至I. 0后，將樣品溶液搖勻，吸取樣品溶液5mL，依次通過尼龍濾膜和OnGuardIIRP固相萃取柱,濾液供測定分析； (2)離子色譜-抑制電導檢測法分析先采用IonPacASll-HC陰離子交換色譜柱分離，再采用40mmol ^L4KOH溶液為淋洗液等度洗脫，最后采用ASRS400陰離子型抑制電導，檢測羥乙磷酸及其鹽類的含量； (3)外標法定量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述步驟(I)中OnGuardII RP固相萃取柱先用IOmL甲醇活化,再用15mL水活化,靜置30min后使用。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中IonPacASll-HC陰離子交換色譜柱為250_X4mm ；IonPac AGll-HC保護柱為50_X4mm ;柱溫30° C ;檢測池溫度30° C ;淋洗液流速I. OmL rniiT1 ;進樣體積25 y L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于所述樣品為護發(fā)產(chǎn)品和皂類產(chǎn)品的樣品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種樣品中羥乙磷酸及其鹽類的分析測定方法，本發(fā)明的方法，運用離子色譜—抑制電導檢測法測定護發(fā)產(chǎn)品和皂類產(chǎn)品中羥乙磷酸及其鹽類含量，樣品前處理操作簡便、方法線性范圍寬、精密度好、準確度高、快速靈敏，樣品前處理和流動相都主要用水做溶液、環(huán)保經(jīng)濟，具有較好的實際運用價值，適用于護發(fā)產(chǎn)品和皂類產(chǎn)品的日常檢測。
文檔編號G01N30/88GK102735788SQ20121024079
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月11日
發(fā)明者丁嵐, 孟憲雙, 王超, 白樺, 蘇寧, 陳云霞, 馬強 申請人:中國檢驗檢疫科學研究院