專利名稱：一種油菜花粉及其制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種油菜花粉及其制劑的質(zhì)量控制方法，更具體的說(shuō)是測(cè)定油菜花粉及其制劑中總留醇含量的方法。背景技術(shù)：
油菜花粉為蜜蜂科昆蟲(chóng)中華蜂蜜Apis cerana Fabricius等工蜂所采集的十字花科植物油菜Brassica campestis Linn.的干燥花粉，目前國(guó)內(nèi)的普樂(lè)安片與普樂(lè)安膠囊是采用油菜花粉為主要原料制備而成的?；ǚ凼潜蛔又参镄廴锘ㄋ幒玩咦又参镄℃呷~上的小孢子囊內(nèi)的小顆粒狀物，是植物的雄性生殖細(xì)胞?；ǚ蹆?nèi)含各種豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有多種的生物學(xué)活性，在治療前列腺疾病方面有獨(dú)到的效果。目前市場(chǎng)上已經(jīng)有“前列康”、“舍尼通”等花粉制品，表現(xiàn)出良好的療效。這些藥物在臨床長(zhǎng)期使用，已被證明能有效地改善良性前列腺增生癥狀及并發(fā)癥，長(zhǎng)期使用無(wú)毒副作用，同時(shí)花粉促進(jìn)機(jī)體代謝及造血、免疫功能，因此適合老年人長(zhǎng)期使用。前列康牌普樂(lè)安制劑由浙江康恩貝公司生產(chǎn)，是純油菜花粉制劑，臨床用于腎氣不固，腰膝酸軟，尿后余浙或失禁，及慢性前列腺炎、前列腺增生具有上述癥候者。浙江醫(yī)院謝海寶等用前列康治療前列腺增生100例的觀察結(jié)果，減輕癥狀有效率93. 0%，用藥后51例經(jīng)B超測(cè)定前列腺體積有明顯縮小，總有效率95. 0%。浙江蘭溪市中醫(yī)院俞大毛用前列康治療40例前列腺增生患者，總有效率90%。油菜花粉中含多種留體化合物，其中留醇類物質(zhì)已被證實(shí)與抗前列腺增生活性藥效有相關(guān)性，留醇類物質(zhì)的含量直接影響到產(chǎn)品的治療效果。但在目前國(guó)內(nèi)油菜花粉及其制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中均無(wú)總留醇的含量測(cè)定，無(wú)法有效的評(píng)判產(chǎn)品的質(zhì)量，保證產(chǎn)品的療效。從國(guó)內(nèi)外研究看，總留醇的含量測(cè)定一般紫外-可見(jiàn)分光光度法，通過(guò)顯色反應(yīng)測(cè)定總留醇的含量，常用Liebennann-Burchard比色法或改進(jìn)的Liebennann-Burchard比色法，根據(jù)留醇類化合物能與醋酐、濃硫酸發(fā)生特征顏色反應(yīng)(Lieberman反應(yīng))的性質(zhì)測(cè)定甾醇含量。但由于花粉中并非單一成份，其它成份會(huì)影響其檢測(cè)，用常規(guī)的檢測(cè)方法存在缺陷，不能保證方法的專一性，同時(shí)檢測(cè)準(zhǔn)確性差。任玉翠等在《十二種蜂花粉的黃酮甙及甾醇類成分的含量測(cè)定》的研究中(中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，1990，10 (4) :147-148)),采用薄層色譜展開(kāi)后，顯色確定薄層上留醇色斑，然后吸取留醇色斑再處理后用Liebennann-Burchard顯色反應(yīng)進(jìn)行含量測(cè)定，處理過(guò)程復(fù)雜，操作繁瑣，而且采用薄層色譜測(cè)量非常不準(zhǔn)確，誤差很大；同時(shí)我們對(duì)正對(duì)油菜花粉中總留醇含量測(cè)定采用Liebennann-Burchard顯色反應(yīng)及采用改進(jìn)的Liebennann-Burchard顯色反應(yīng)時(shí)發(fā)現(xiàn),樣品吸光度變化快,幾分鐘內(nèi)吸光度達(dá)到最大值，然后迅速下降，顯色極不穩(wěn)定，造成了測(cè)定準(zhǔn)確率下降，。由于無(wú)穩(wěn)定的顯色時(shí)間段，故油菜花粉及其制劑的總留醇含量測(cè)定不宜簡(jiǎn)單的采用Liebennann-Burchard顯色反應(yīng)或改進(jìn)的Liebennann-Burchard顯色反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定；董素哲等在《松花粉質(zhì)量的初步研究》(第九屆全國(guó)藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會(huì)，297-298)中，用濃硫酸直接顯色測(cè)定總甾醇含量，采用本法顯色不完全，顯色反應(yīng)同樣會(huì)隨時(shí)間長(zhǎng)短有所變化，同時(shí)由于濃硫酸本身會(huì)對(duì)檢測(cè)有影響，由此含量測(cè)定值不夠準(zhǔn)確，含量檢測(cè)值偏高。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種油菜花粉及其制劑中總留醇含量的檢測(cè)方法，通過(guò)對(duì)總留醇含量的檢定，可用于控制油菜花粉及其制劑的內(nèi)在質(zhì)量。、
本發(fā)明對(duì)供試樣品進(jìn)行前處理后，進(jìn)行顯色反應(yīng)，然后采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定油菜花粉及其制劑中的總留醇含量，以控制其質(zhì)量。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明具體步驟如下(I)供試品溶液處理取供試樣品并 進(jìn)行前處理，稱取處理后樣品，加入有機(jī)溶劑多次提取樣品中脂溶性成分，直至提取完全，過(guò)濾后將濾液蒸干，加入10%氫氧化鈉-乙醇溶液進(jìn)行皂化，直至皂化完全，用有機(jī)溶劑萃取皂化液，分離萃取液即得供試品溶液。(2)顯色反應(yīng)取上述供試品溶液，制于具塞玻璃試管中，水浴加熱揮盡其中的有機(jī)溶劑，加入香草醛-冰醋酸溶液和高氯酸溶液，混勻，密塞，60°C _80°C水浴保溫10-30分鐘，取出，冷卻至室溫，加入冰醋酸，搖勻，使得吸光度在0. 3-0. 7之間。根據(jù)￠-谷甾醇對(duì)照試驗(yàn)，其中香草醛加入量為樣品中總甾醇含量的100-1000倍，高氯酸加入量為樣品中總留醇含量的1000-10000倍。(3)測(cè)定方法隨行試劑作空白，以甾醇類物質(zhì)為對(duì)照，在542nm測(cè)定供試品和對(duì)照品的吸光度，按外標(biāo)法計(jì)算總留醇含量，即得樣品總留醇含量。本發(fā)明中對(duì)油菜花粉及其制劑的前處理方法為，取油菜花粉及其制劑，去包衣或外包裝后余純油菜花粉，用70°C減壓干燥2小時(shí)，并研磨成粉，過(guò)篩。具體如下(I)油菜花粉原料，取油菜花粉原料，用70°C減壓干燥2小時(shí)，置研缽中研磨成粉，過(guò)80目篩即得。(2)普樂(lè)安片，取普樂(lè)安片若干，用潤(rùn)濕的潔凈紗布小心擦去表面薄膜衣層，70°C減壓干燥2小時(shí)，置研缽中研磨成粉，過(guò)80目篩即得。(3)普樂(lè)安膠囊，取普樂(lè)安膠囊若干，去膠囊殼，取出膠囊內(nèi)容物，將內(nèi)容物70°C減壓干燥2小時(shí)，置研缽中研磨成粉，過(guò)80目篩即得。本發(fā)明中提取樣品中脂溶性成分的有機(jī)溶劑可采用無(wú)水乙醇、石油醚、正己烷、乙醚、氯仿中的一種或幾種等，為達(dá)到更好的脂溶性成分提取效果，可采用攪拌提取、回流提取、索氏提取、超聲提取、超臨界二氧化碳提取中的一種。為達(dá)到最好的皂化效果，加入氫氧化鈉-乙醇溶液后，可置于80_95°C水浴中加熱回流2小時(shí)。甾醇類物質(zhì)對(duì)照品可選用￠-谷甾醇、膽甾醇等。本發(fā)明中顯色反應(yīng)最佳反應(yīng)條件試驗(yàn)如下0 -谷甾醇對(duì)照品(上海中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究中心，純度彡98%)，高氯酸溶液(70%,密度I. 76g/ml)、香草醛、冰醋酸、氯仿等試劑均為分析純。I、對(duì)照品溶液的制備精密稱取￠-谷甾醇對(duì)照品10. 13mg于IOmL量瓶中，加三氯甲烷適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密移取I. OmL于IOmL量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，即得，濃度為 0. 1013mg/mL。2、測(cè)定波長(zhǎng)的選擇分別精密移取0. 5mL^-谷甾醇對(duì)照品溶液、I. OmL上述發(fā)明制備的供試品溶液于IOmL具塞玻璃管中，85°C水浴揮盡溶劑，加入0. 6mL 5%香草醛-冰醋酸溶液，0. 8mL高氯酸，混勻，密塞，70°C水浴保溫30min，取出，流水迅速冷卻至室溫，精密加入冰醋酸4. 6mL,搖勻，隨行試劑作空白，在900-190nm進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，對(duì)照品和供試品溶液均在在542nm有最大吸收峰，故選擇542nm為總甾醇含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。3、顯色條件的選擇采用四因素三水平L9 (34)正交試驗(yàn)優(yōu)選顯色條件，正交設(shè)計(jì)因素水平表設(shè)計(jì)如下表I顯色條件正交設(shè)計(jì)因素水平表
權(quán)利要求
1.一種油菜花粉及其制劑中的總留醇含量的檢測(cè)方法，包括以下步驟 1)供試品溶液處理 取供試樣品并進(jìn)行前處理，稱取處理后樣品，加入有機(jī)溶劑多次提取樣品中脂溶性成分，直至提取完全，過(guò)濾后將濾液蒸干，加入10%氫氧化鈉-乙醇溶液進(jìn)行皂化，直至皂化完全，用有機(jī)溶劑萃取皂化液，分離萃取液即得供試品溶液； 2)顯色反應(yīng) 取上述供試品溶液，制于具塞玻璃試管中，水浴加熱揮盡其中的有機(jī)溶劑，加入香草醛-冰醋酸溶液和高氯酸溶液，混勻，密塞，60°C _80°C水浴保溫10-30分鐘，取出，冷卻至室溫，加入冰醋酸，搖勻，使得吸光度在0. 3-0. 7之間； 3)測(cè)定方法隨行試劑作空白，以留醇類物質(zhì)為對(duì)照，在542nm測(cè)定供試品和對(duì)照品的吸光度，按外標(biāo)法計(jì)算總留醇含量，即得樣品總留醇含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，對(duì)油菜花粉及其制劑的前處理方法為，取油菜花粉及其制劑，去包衣或外包裝后余純油菜花粉，用70°C減壓干燥2小時(shí)，并研磨成粉，過(guò)篩。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，樣品脂溶性成分的提取步驟中有機(jī)溶劑可采用無(wú)水乙醇、石油醚、正己烷、乙醚、氯仿中的一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，為達(dá)到更好的脂溶性成分提取效果，可采用攪拌提取、回流提取、索氏提取、超聲提取、超臨界二氧化碳提取中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，顯色反應(yīng)中香草醛加入量為樣品中總留醇含量的100-1000倍，高氯酸加入量為樣品中總留醇含量的1000-10000倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，皂化步驟中加入氫氧化鈉-乙醇溶液后，可置于80-95°C水浴中加熱回流2小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，留醇類物質(zhì)對(duì)照品可選用￠-谷留醇、膽甾醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，本發(fā)明具體步驟如下 1)供試品溶液的制備 取油菜花粉或其制劑，進(jìn)行前處理后，70°C減壓干燥2小時(shí)，置研缽中研磨成粉，過(guò)80目篩，稱取0. 5g樣品，置具塞錐形瓶中，加入50ml有機(jī)溶劑，密塞稱定重量，超聲處理60min，搖勻，過(guò)濾，移取過(guò)濾液10. Oml于燒瓶中，減壓蒸干后加入20ml 10%氫氧化鈉-乙醇溶液，95°C水浴回流2小時(shí)，放冷，用正己烷萃取3次，每次20ml，合并正己烷萃取液，減壓濃縮正己烷液至50ml ； 2)顯色反應(yīng) 移取Iml供試品溶液于IOml具塞玻璃試管中，85°C水浴揮盡溶劑，加入0. 6ml 5%香草醛-冰醋酸溶液，0. 8ml 70%高氯酸，混勻，密塞，70°C水浴保溫30min，取出，流水迅速冷卻至室溫，用冰醋酸定容至6ml，搖勻，即得； 3)測(cè)定 用上述同樣方法對(duì)留醇對(duì)照品顯色反應(yīng)，采用紫外-可見(jiàn)分光光度法，隨行試劑作空白，于542nm測(cè)定吸光度，并制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，按外標(biāo)法計(jì)算樣品總留醇含量，即得。
全文摘要
一種油菜花粉及其制劑的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明涉及一種普樂(lè)安片質(zhì)量控制方法，屬于中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域。一種普樂(lè)安片的質(zhì)量控制方法，包括(1)普樂(lè)安片供試品溶液的制備；(2)顯色反應(yīng)；(3)采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定。經(jīng)分析方法驗(yàn)證，其精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和回收率符合中國(guó)藥典2010版一部附錄《中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》的要求。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是通過(guò)使用紫外-可見(jiàn)分光光度法，對(duì)普樂(lè)安片中所含總甾醇進(jìn)行了定量測(cè)定，測(cè)試精密度高，可靠性好。通過(guò)對(duì)普樂(lè)安片中總甾醇的監(jiān)控，可有效控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。
文檔編號(hào)G01N21/31GK102749300SQ201210254079
公開(kāi)日2012年10月24日 申請(qǐng)日期2012年7月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月18日
發(fā)明者吳健, 徐勇, 王如偉, 王建方, 盛衛(wèi)國(guó), 瞿偉, 胡江寧, 閔會(huì) 申請(qǐng)人:浙江現(xiàn)代中藥與天然藥物研究院有限公司