專利名稱：一種藏藥組合物二十九味能消散及其制劑的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藏藥組合物及其制劑的質(zhì)量檢測方法，特別涉及一種藏藥組合物二十九味能消散及其制劑的質(zhì)量檢測方法。
背景技術(shù)：
二十九味能消散記載于《藏醫(yī)臨床札記》中，作者云丹嘉措是十三世紀的著名藏醫(yī)，他經(jīng)多年臨床實踐總結(jié)，在前人方劑的基礎(chǔ)上炮制出二十九味能消散。因其對婦女子宮肌瘤和卵巢囊腫的良好療效，被歷代藏醫(yī)學(xué)家所推崇。二十九味能消散由藏木香、寒水石(煅)、訶子、小米辣、堿花、肉豆蘧、蓽茇、大黃、鐵棒錘、紅花、木香馬兜鈴、黃葵子等29味藥組成的，具有祛寒化痞、消食、調(diào)肝益腎的作用。主要用于食積不化，胃腸肝區(qū)疼痛，腎病，腸病，中毒，肝病，子宮病，黃水散人脈道，胃腸痞病，膽痞病，風(fēng)寒引起的痞瘤等?！?br> 二十九味能消散收載于國家藥品標準，標準編號WS3-BC-0140-95。方中鐵棒錘含有烏頭堿，具有較高的藥理活性和藥用價值，但同時也具有較強的毒性，雖然經(jīng)過炮制后毒性成分明顯減少，并不能保證藥用的安全性；方中木香馬兜鈴含馬兜鈴酸，馬兜鈴酸可引起腎臟損害等不良反應(yīng)。原質(zhì)量標準中沒有鑒別及含量測定項，未對鐵棒錘含有的烏頭堿、木香馬兜鈴含有的馬兜鈴酸進行限度檢查，使該制劑存在安全隱患。同時，該制劑也未對其有效成分進行鑒別及含量測定，從而不能確保該制劑的有效使用。文獻及專利也未見有關(guān)二十九味能消散質(zhì)量檢測方面的報道。因此，為了保證患者用藥安全有效，原質(zhì)量標準亟待需要進行提高。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種藏藥組合物二十九味能消散及其制劑的質(zhì)量檢測方法。發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種藏藥組合物二十九味能消散及其制劑中烏頭堿的限度檢查方法，馬兜鈴酸A的限度檢查方法，同時提供了乳香、胡椒堿、肉豆蘧的薄層色譜鑒別方法，蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚、羥基紅花黃色素A的高效液相色譜含量測定方法，使得該制劑質(zhì)量檢測更加準確、可靠，使該制劑在治療疾病的同時，保證了用藥的安全有效。術(shù)語說明二十九味能消散，是國家中成藥標準匯編(中成藥地方標準上升國家標準部分)記載的藥品名稱。二十九味能消散及其制劑，包括二十九味能消散藏藥組合物及用二十九味能消散原料藥配方制備的制劑。寒水石(煅)、蘿卜(炭)、貝齒(炭)、石灰(制)、鷲糞(炒)是中藥(藏藥)的常規(guī)技術(shù)用語，括號中的“煅”、“炭”、“制”、“炒”等均按照《青海省藏藥炮制規(guī)范》(青海省食品藥品監(jiān)督管理局編，青海人民出版社出版的2010年版)里的方法炮制。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種原料藥組成為藏木香25重量份、寒水石(煅)125重量份、訶子75重量份、小米辣25重量份、堿花125重量份、肉豆蘧25重量份、蓽茇25重量份、決明子25重量份、白豆蘧25重量份、骨碎補25重量份、胡椒25重量份、蘿卜(炭)2重量份，草果25重量份、光明鹽25重量份、阿魏2重量份、硇砂25重量份、山奈25重量份、貝齒(炭)25重量份、大黃100重量份、寬筋藤13重量份、紅花25重量份、鐵棒錘15重量份、石灰(制)25重量份、鷲糞(炒)40重量份、木香馬兜鈴25重量份、黃葵子25重量份、紫硇砂25重量份、乳香25重量份、渣馴膏25重量份的藏藥組合物二十九味能消散及其制劑的質(zhì)量檢測方法，該方法包括如下鑒別和/或檢查和/或含量測定方法中的一種或幾種 鑒別A.乳香的鑒別取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末2 4g，加乙醚2(T30ml，超聲處理15min,濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；取乳香對照藥材O. 5g，加乙醚30ml，超聲處理15min，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數(shù)比為8: Γ2的二甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干；噴以質(zhì)量體積份數(shù)比1%香草醛硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B.胡椒堿的鑒別取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末2 4g，加醋酸乙酯2(T30ml，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液；取胡椒堿適量，加甲醇制成每Iml含
0.5mg的對照品溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數(shù)比為3: f 3的環(huán)己烷-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干；置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C.肉豆蘧的鑒別取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末4 6g，置250ml圓底燒瓶中，加水100ml，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油，揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及Iml醋酸乙酷， Η煮完成后，收集醋Ife乙酷部分，作為供試品溶液；取肉 蓮lg 直IOOml圓底燒瓶中，加水50ml，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油，揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及Iml醋酸乙酯，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數(shù)比為20:0. f O. 5的二甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴體積份數(shù)比為1%香草醛硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；檢查A.烏頭堿的限度檢查照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比65 75:25 35:0. 2:5的甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷為流動相；檢測波長為235nm，理論板數(shù)按烏頭堿峰計算應(yīng)不低于2000 ；對照品溶液的制備取烏頭堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含10μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末l(Tl5g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，加氨試液10ml，精密加入無水乙醇80 120ml，密塞，稱定重量，冷浸Ih后加熱回流lh，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液50ml，25°C 40°C減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入稀鹽酸溶液20ml溶解，冰浴中放置30min,濾過；用氨水調(diào)pH至10,將濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加乙酸乙酯萃取5次,每次20ml，合并乙酸乙酯液，25°C 40°C減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入甲醇2ml溶解，濾過，取續(xù)濾液，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1(Γ20μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明二十九味能消散或其制劑含鐵棒錘以烏頭堿(C34H47NO11)計，不得高于17 μ g/goB.馬兜鈴酸A的限度檢查照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比60 70:30 40的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計算應(yīng)不低于3000 ；對照品溶液的制備取馬兜鈴酸A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含20 μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末6 10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇4(T60ml，密塞，稱定重量，超聲2(Γ40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25ml，低溫濃縮至干，殘渣加體積份數(shù)比為O. 5%氫氧化鈉溶液20ml使其完全溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,用乙醚萃取2次,每次20ml，萃取后堿液使用質(zhì)量分數(shù)3%鹽酸調(diào)節(jié)pH至2_3，用乙醚萃取5次，每次20ml，合并乙醚萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液和供試品溶液各1(Γ20μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明二十九味能消散或其制劑含木香馬兜鈴以馬兜鈴酸A (C17HnNO7)計，不得高于 30 μ g/go含量測定A.蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比為8(Γ90:1(Γ20的甲醇-體積份數(shù)比為O. 1%的磷酸水溶液為流動相；檢測波長為430nm。理論板數(shù)按大黃素峰計算應(yīng)不低于3000 ；對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品適量，加甲醇分別制成每Iml含蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品各80 μ g，大黃素甲醚40 μ g的溶液，分別精密量取上述對照品溶液各2ml，混勻，即得；即每Iml中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各
16μ g，含大黃素甲醚8 μ g ;供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末l 3g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇2(T30ml，密塞，稱定重量，超聲2(T40min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取取續(xù)濾液5ml，置燒瓶中，揮去溶劑，加體積百分比為8%鹽酸水溶液10ml，超聲2分鐘，再加三氯甲烷10ml，加熱回流I小時，放冷，置分液漏 斗內(nèi)，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次IOml，合并三氯甲烷液，減壓回收溶液至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明二十九味能消散或其制劑含大黃以蘆薈大黃素(C15H1(i05)、大黃酸(C15H8O6 )、大黃素(C15HltlO5 )、大黃酚(C15H10O4)、大黃素甲醚(C16H12O5)總含量計，不得少于I. 20mg/g。B.羥基紅花黃色素A的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比20 30:70 80的甲醇-體積份數(shù)比為1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為403nm ;理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計算應(yīng)不低于3000 ；對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，置棕色瓶中，力口體積份數(shù)比為25%甲醇水溶液制成每Iml含50 μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末3飛g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積份數(shù)比為25%甲醇水溶液2(T30ml，密塞，稱定重量，超聲3(Γ50分鐘，放冷，用體積份數(shù)比為25%甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液和供試品溶液各5 10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明二十九味能消散或其制劑中羥基紅花黃色素A (C27H30O15)含量不得少于
O.20mg/g。所述的制劑是指取藏藥組合物二十九味能消散原料藥藏木香25重量份、寒水石(煅)125重量份、訶子75重量份、小米辣25重量份、堿花125重量份、肉丑蘧25重量份、蓽茇25重量份、決明子25重量份、白豆蘧25重量份、骨碎補25重量份、胡椒25重量份、蘿卜(炭)2重量份，草果25重量份、光明鹽25重量份、阿魏2重量份、硇砂25重量份、山奈25重量份、貝齒(炭)25重量份、大黃100重量份、寬筋藤13重量份、紅花25重量份、鐵棒錘15重量份、石灰(制)25重量份、鷲糞(炒)40重量份、木香馬兜鈴25重量份、黃葵子25重量份、紫硇砂25重量份、乳香25重量份、渣馴膏25重量份，按常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料制備成臨床可接受的任何一種劑型，包括微丸、滴丸、片劑、膠囊、顆?；蚍稚⑵?。優(yōu)選的一種原料藥組成為藏木香25g、寒水石(煅)125g、訶子75g、小米辣25g、堿花125g、肉豆蘧25g、蓽發(fā)25g、決明子25g、白豆蘧25g、骨碎補25g、胡椒25g、蘿卜(炭)2g,草果25g、光明鹽25g、阿魏2g、硇砂25g、山奈25g、貝齒(炭)25g、大黃100g、寬筋藤13g、紅花25g、鐵棒錘15g、石灰(制)25g、鷲糞(炒)40g、木香馬兜鈴25g、黃葵子25g、紫硇砂25g、乳香25g、渣馴膏25g的藏藥組合物二十九味能消散及其制劑的質(zhì)量檢測方法，該方法包括如下鑒別和/或檢查和/或含量測定方法中的一種或幾種鑒別A.乳香的鑒別取藏藥組合物二十九味能消散粉末3g,加乙醚25ml,超聲處理15min,濾過,濾液揮干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；取乳香對照藥材O. 5g，加乙醚30ml，超聲處 理15min，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數(shù)比為8:1. 5的二甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干；噴以1%香草醛硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。B.胡椒堿的鑒別取藏藥組合物二十九味能消散粉末3g，加醋酸乙酯25ml，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液；取胡椒堿適量，加甲醇制成每Iml含O. 5mg的對照品溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數(shù)比為3:2的環(huán)己烷-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干；置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。C.肉豆蘧的鑒別取藏藥組合物二十九味能消散粉末5g，置250ml圓底燒瓶中，加水IOOml，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油，揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及Iml醋酸乙酯，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；取肉豆蘧lg，置IOOml圓底燒瓶中，加水50ml，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油，揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及Iml醋酸乙酯，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數(shù)比為20:0. 3的二甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴體積份數(shù)比為1%香草醛硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。檢查A.烏頭堿的限度檢查照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比68:32:0.2:5的甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷為流動相；檢測波長為235nm，理論板數(shù)按烏頭堿峰計算應(yīng)不低于2000 ；對照品溶液的制備取烏頭堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含10μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散粉末12g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，加氨試液10ml，精密加入無水乙醇100ml，密塞，稱定重量，冷浸Ih后加熱回流lh，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液50ml，25 40°C減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入稀鹽酸溶液20ml溶解，冰浴中放置30min，濾過；用氨水調(diào)pH至10,將濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加乙酸乙酯萃取5次,每次20ml,合并乙酸乙酯液，25 40°C減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入甲醇2ml溶解，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明二十九味能消散或其制劑含鐵棒錘以烏頭堿(C34H47NO11)計，不得高于
17μ g/goB.馬兜鈴酸A的限度檢查照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比66:34的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計算應(yīng)不低于3000 ；對照品溶液的制備取馬兜鈴酸A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含20 μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散粉末8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25ml，低溫濃縮至干，殘渣加體積份數(shù)比為O. 5%氫氧化鈉溶液20ml使其完全溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙醚萃取2次,每次20ml,萃取后堿液使用質(zhì)量分數(shù)3%鹽酸調(diào)節(jié)pH至2-3，用乙醚萃取5次，每次20ml合并乙醚萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得;本發(fā)明二十九味能消散或其制劑含木香馬兜鈴以馬兜鈴酸A (C17HnNO7)計，不得高于 30 μ g/go含量測定A.蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比為86:14的甲醇-體積份數(shù)比為O. 1%的磷酸水溶液為流動相；檢測波長為430nm。理論板數(shù)按大黃素峰計算應(yīng)不低于3000 ；對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品適量，加甲醇分別制成每Iml含蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品各80 μ g，大黃素甲醚40 μ g的溶液，分別精密量取上述對照品溶液各2ml，混勻，即得，每Iml中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各16 μ g，含大黃素甲醚8 μ g ;供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散粉末2g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取取續(xù)濾液5ml，置燒瓶中，揮去溶劑，加體積百分比為8%鹽酸水溶液10ml，超聲2分鐘，再加三氯甲烷10ml，加熱回流I小時，放冷，置分液漏斗內(nèi)，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次IOml，合并三氯甲烷液，減壓回收溶液至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明二十九味能消散或其制劑中蘆薈大黃素(C15H1Q05)、大黃酸(C15H8O6X大黃素(C15H1Q05)、大黃酚(C15HltlO4)、大黃素甲醚(C16H12O5)總含量不得少于I. 20mg/g。
B.羥基紅花黃色素A的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比24:76的甲醇-體積份數(shù)比為1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為403nm ;理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計算應(yīng)不低于3000 ；對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，置棕色瓶中，力口體積份數(shù)比為25%甲醇水溶液制成每Iml含50 μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散粉末4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積份數(shù)比為25%甲醇水溶液25ml，密塞，稱定重量，超聲40分鐘，放冷，用體積份數(shù)比為25%甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明二十九味能消散或其制劑中羥基紅花黃色素A (C27H30O15)含量不得少于
O.20mg/g。本說明書中所述的重量份與體積份的單位對應(yīng)關(guān)系為g/ml或kg/1。本發(fā)明公開了一種藏藥組合物二十九味能消散及其制劑的質(zhì)量檢測方法，使用薄層色譜法對二十九味能消散中乳香、胡椒堿、肉豆蘧進行了定性鑒別，使用高效液相色譜法(HPLC法)對二十九味能消散中烏頭堿、木香馬兜鈴酸進行了限度檢查，同時采用高效液相色譜法(HPLC^i)對二十九味能消散中蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚、羥基紅花黃色素A進行了定量檢測。本發(fā)明方法建立了乳香、胡椒堿、肉豆蘧的薄層鑒別方法,烏頭堿、木香馬兜鈴酸的限度檢查方法，蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚、羥基紅花黃色素A的含量測定方法，提高了產(chǎn)品質(zhì)量標準，使該制劑在治療疾病的同時，保證了用藥的安全有效。同時本法還可用于藏藥組合物二十九味能消散的其他制劑，如二十九味能消顆粒、二十九味能消丸、二十九味能消片等。下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。實驗例I :薄層鑒別實驗藏藥組合物二十九味能消散由青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司提供。
A.乳香的鑒別取藏藥組合物二十九味能消散粉末3g,加乙醚25ml,超聲處理15min,濾過,濾液揮干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；取乳香對照藥材O. 5g，加乙醚30ml，超聲處理15min，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為對照藥材溶液；取按處方比例配制缺乳香的陰性對照樣品，照供試品溶液制備方法同法制備陰性對照樣品溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，分別以體積份數(shù)比為(8:1)、(8:1. 5)、(8:2)的二甲苯-醋酸乙酯為展開齊U，展開，取出，晾干。噴以1%香草醛硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。在體積份數(shù)比為8: f 2的二甲苯-醋酸乙酯展開劑條件下，均有較好的展開效果。其中，體積份數(shù)比為8:1.5的二甲苯-醋酸乙酯展開劑展開效果最好。結(jié)果表明，該鑒別方法專屬性強，可作為二十九味能消散中乳香的薄層鑒別方法。
B.胡椒堿的鑒別取藏藥組合物二十九味能消散粉末3g，加醋酸乙酯25ml，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液；取胡椒堿適量，加甲醇制成每Iml含O. 5mg的對照品溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，分別以體積份數(shù)比為(3:1)、(3:2)、(I: I)的環(huán)己烷-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。在體積份數(shù)比為3:廣3的環(huán)己烷-醋酸乙酯展開劑條件下，均有較好的展開效果。其中，體積份數(shù)比為3:2的環(huán)己烷-醋酸乙酯展開劑展開效果最好。結(jié)果表明，該鑒別方法色譜斑點顯色清晰，分離度好，可作為二十九味能消散中胡椒堿的薄層鑒別方法。C.肉豆蘧的鑒別取藏藥組合物二十九味能消散粉末5g，置250ml圓底燒瓶中，加水100ml，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及Iml醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為供試品溶液；取肉豆蘧lg，置IOOml圓底燒瓶中，加水50ml，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油(揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及Iml醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作為對照藥材溶液；取按處方比例配制缺肉豆蘧的陰性對照樣品，照供試品溶液制備方法同法制備陰性對照樣品溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，分別以體積份數(shù)比為(20:0. 1)、(20:0.3)、(20:0.5)的二甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴體積份數(shù)比為1%香草醛硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。結(jié)果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。在體積份數(shù)比為20:0. Γ0. 5的二甲苯-醋酸乙酯展開劑條件下，均有較好的展開效果。其中，體積份數(shù)比為20:0. 3的二甲苯-醋酸乙酯展開劑展開效果最好。結(jié)果表明，該鑒別方法專屬性強，可作為二十九味能消散中肉豆蘧的薄層鑒別方法。實驗例2 :烏頭堿的限度檢查實驗I.儀器、試藥和供試樣品
儀器L_2100型日立高效液相色譜儀；AuW220D島津電子分析天平。對照品烏頭堿對照品(中國藥品生物制品檢定所)批號MUST-11031101。樣品二十九味能消散(青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司提供)，批號分別為20110815、20110816、20110817。2.檢測波長的選擇取烏頭堿對照品溶液，于19(T400nm波長范圍內(nèi)進行掃描，烏頭堿在235nm波長處有最大吸收，故根據(jù)紫外吸收圖譜選定235nm為檢測波長。3.流動相選擇研究發(fā)現(xiàn)，以體積份數(shù)比65 75:25 35:0. 2:5的甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷體系為流動相，烏頭堿均能達到很好的色譜分離效果。其中，以甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷的體積份數(shù)比為68:32:0. 2:5為流動相最優(yōu)。4.系統(tǒng)適用性試驗在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各20μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，供試品色譜中烏頭堿與其相鄰色譜峰的分離度均大于I. 5，分離效果好。5.對照品溶液制備取烏頭堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含10μ g的溶液，即得。6.供試品溶液制備6. I提取時間的考察按檢查項下方法對供試品溶液進行檢測。按供試品溶液的制備項下的方法制備3份，分別加熱回流O. 5小時、I小時、I. 5小時。以每克藥品中烏頭堿的含量為指標確定提取時間。結(jié)果見表I。表I提取時間考察試驗結(jié)果
權(quán)利要求
1.ー種原料藥組成為藏木香25重量份、寒水石(煅)125重量份、訶子75重量份、小米辣25重量份、堿花125重量份、肉豆蘧25重量份、蓽茇25重量份、決明子25重量份、白豆蘧25重量份、骨碎補25重量份、胡椒25重量份、蘿卜(炭)2重量份，草果25重量份、光明鹽25重量份、阿魏2重量份、硇砂25重量份、山奈25重量份、貝齒(炭)25重量份、大黃100重量份、寬筋藤13重量份、紅花25重量份、鉄棒錘15重量份、石灰(制)25重量份、鷲糞(妙)40重量份、木香馬兜鈴25重量份、黃葵子25重量份、紫硇砂25重量份、乳香25重量份、渣馴膏25重量份的藏藥組合物二十九味能消散及其制劑的質(zhì)量檢測方法，該方法包括如下鑒別和/或檢查和/或含量測定方法中的ー種或幾種 鑒別 A.乳香的鑒別 取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末2 4g，加こ醚2(T30ml，超聲處理15min，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；取乳香對照藥材0. 5g，加こ醚30ml，超聲處理15min，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數(shù)比為8: r2的ニ甲苯-醋酸こ酯為展開劑，展開，取出，晾干；噴以質(zhì)量體積份數(shù)比1%香草醛硫酸こ醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顔色的斑點； B.胡椒堿的鑒別 取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末2 4g，加醋酸こ酷2(T30ml，超聲處理30min,濾過,濾液濃縮至2ml,作為供試品溶液；取胡椒堿適量,加甲醇制成姆Iml含0. 5mg的對照品溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數(shù)比為3: f 3的環(huán)己烷-醋酸こ酯為展開劑，展開，取出，晾干；置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顔色的斑點； C.肉豆蘧的鑒別 取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末4 6g，置250ml圓底燒瓶中，加水100ml，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油，揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及Iml醋酸こ酷，煎煮完成后，收集醋Ifeこ酷部分，作為供試品溶液；取肉ii蓮lg，直IOOml圓底燒瓶中，加水50ml，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油，揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及Iml醋酸こ酷，煎煮完成后，收集醋酸こ酷部分，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 u 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數(shù)比為20:0. f 0.5的ニ甲苯-醋酸こ酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴體積份數(shù)比為1%香草醛硫酸こ醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顔色的斑點； 檢查 A.烏頭堿的限度檢查 照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比65 75:25 35:0. 2:5的甲醇-水-三こ胺-ニ氯甲烷為流動相；檢測波長為235nm，理論板數(shù)按烏頭堿峰計算應(yīng)不低于2000 ； 對照品溶液的制備取烏頭堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含IOy g的溶液，即得； 供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末l(Tl5g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，加氨試液10ml，精密加入無水こ醇80 120ml，密塞，稱定重量，冷浸Ih后加熱回流lh，放冷，再稱定重量，用無水こ醇補足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液50ml，25°C 40°C減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入稀鹽酸溶液20ml溶解，冰浴中放置30min,濾過；用氨水調(diào)pH至10,將濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加こ酸こ酯萃取5次,姆次20ml，合并こ酸こ酯液，25°C 40°C減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入甲醇2ml溶解，濾過，取續(xù)濾液，即得；· 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各l(T20ia，注入液相色譜儀，測定，·即得； 本發(fā)明二十九味能消散或其制劑含鐵棒錘以烏頭堿(C34H47NO11)計，不得高于17y g/g ； B.馬兜鈴酸A的限度檢查 照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比60 70:30 40的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計算應(yīng)不低于3000 ； 對照品溶液的制備取馬兜鈴酸A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含20y g的溶液，即得； 供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末6 10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇4(T60ml，密塞，稱定重量，超聲2(T40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25ml，低溫濃縮至干，殘渣加體積份數(shù)比為0. 5%氫氧化鈉溶液20ml使其完全溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用こ醚萃取2次,姆次20ml，萃取后堿液使用質(zhì)量分數(shù)3%鹽酸調(diào)節(jié)pH至2-3，用こ醚萃取5次，每次20ml合并こ醚萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別吸取對照品溶液和供試品溶液各l(T20ia，注入液相色譜儀，測定，即得; 本發(fā)明二十九味能消散或其制劑含木香馬兜鈴以馬兜鈴酸A (C17HnNO7)計，不得高于30 u g/g ； 含量測定 A.蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚的含量測定 照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比為80^90:10^20的甲醇-體積份數(shù)比為0. 1%的磷酸水溶液為流動相；檢測波長為430nm ;理論板數(shù)按大黃素峰計算應(yīng)不低于3000 ； 對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品適量，加甲醇分別制成每Iml含蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品各80i! g，大黃素甲醚40 i! g的溶液，分別精密量取上述對照品溶液各2ml，混勻，即得；S卩每Iml中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各16 ii g，含大黃素甲醚g ； 供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末Hg，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇2(T30ml，密塞，稱定重量，超聲2(T40min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取取續(xù)濾液5ml，置燒瓶中，揮去溶剤，加體積百分比為8%鹽酸水溶液10ml，超聲2分鐘，再加三氯甲烷10ml，加熱回流I小時，放冷，置分液漏斗內(nèi)，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，毎次IOml，合并三氯甲烷液，減壓回收溶液至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得; 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 i0ia，注入液相色譜儀，測定，即得； 本發(fā)明二十九味能消散或其制劑中蘆薈大黃素(C15HltlO5)、大黃酸(C15H806)、大黃素(C15HltlO5),大黃酚(C15HltlO4),大黃素甲醚(C16H12O5)總含量不得少于I. 20mg/g ； B.羥基紅花黃色素A的含量測定 照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比20 30:70 80的甲醇-體積份數(shù)比為1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為403nm ;理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計算應(yīng)不低于3000 ； 對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，置棕色瓶中，加體積份數(shù)比為25%甲醇水溶液制成每Iml含50 y g的溶液，即得； 供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散或其制劑粉末3飛g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積份數(shù)比為25%甲醇水溶液2(T30ml，密塞，稱定重量，超聲3(T50分鐘，放冷，用體積份數(shù)比為25%甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別吸取對照品溶液和供試品溶液各5 10ia，注入液相色譜儀，測定，即得； 本發(fā)明二十九味能消散或其制劑中羥基紅花黃色素A (C27H30O15)含量不得少于0. 20mg/g。
2.如權(quán)利要求I所述的ー種藏藥組合物二十九味能消散及其制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述的制劑是指取藏藥組合物二十九味能消散原料藥，按常規(guī)エ藝，加入常規(guī)輔料制備成臨床可接受的任何ー種劑型，包括微丸、滴丸、片劑、膠囊、顆粒或分散片。
3.如權(quán)利要求I或/和2所述的ー種原料藥組成為藏木香25g、寒水石(煅)125g、訶子75g、小米辣25g、堿花125g、肉豆蘧25g、蓽發(fā)25g、決明子25g、白豆蘧25g、骨碎補25g、胡椒25g、蘿卜(炭)2g，草果25g、光明鹽25g、阿魏2g、硇砂25g、山奈25g、貝齒(炭)25g、大黃100g、寬筋藤13g、紅花25g、鐵棒錘15g、石灰(制)25g、鷲糞(炒)40g、木香馬兜鈴25g、黃葵子25g、紫硇砂25g、乳香25g、洛馴膏25g的藏藥組合物二十九味能消散及其制劑的質(zhì)量檢測方法，該方法包括如下鑒別和/或檢查和/或含量測定方法中的ー種或幾種 鑒別 A.乳香的鑒別 取藏藥組合物二十九味能消散粉末3g，加こ醚25ml，超聲處理15min，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；取乳香對照藥材0. 5g，加こ醚30ml，超聲處理15min,濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數(shù)比為8:1. 5的ニ甲苯-醋酸こ酯為展開劑，展開，取出，晾干；噴以1%香草醛硫酸こ醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顔色的斑點； B.胡椒堿的鑒別 取藏藥組合物二十九味能消散粉末3g，加醋酸こ酷25ml，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液；取胡椒堿適量，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的對照品溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數(shù)比為3:2的環(huán)己烷-醋酸こ酯為展開劑，展開，取出，晾干；置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顔色的斑點； C.肉ii蓮的鑒別 取藏藥組合物二十九味能消散粉末5g，置250ml圓底燒瓶中，加水100ml，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油，揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及Iml醋酸こ酷，煎煮完成后，收集醋酸こ酷部分，作為供試品溶液；取肉豆蘧lg，置IOOml圓底燒瓶中，加水50ml，煎煮lh，用揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油，揮發(fā)油測定器中開始加入少量水及Iml醋酸こ酷，煎煮完成后，收集醋酸こ酷部分，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 u 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積份數(shù)比為20:0.3的ニ甲苯-醋酸こ酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴體積份數(shù)比為1%香草醛硫酸こ醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顔色的斑點； 檢查 A.烏頭堿的限度檢查 照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比68:32:0. 2:5的甲醇-水-三こ胺-ニ氯甲烷為流動相；檢測波長為235nm，理論板數(shù)按烏頭堿峰計算應(yīng)不低于2000 ； 對照品溶液的制備取烏頭堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含IOy g的溶液，即得； 供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散粉末12g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，加氨試液10ml，精密加入無水こ醇100ml，密塞，稱定重量，冷浸Ih后加熱回流lh，放冷，再稱定重量，用無水こ醇補足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液50ml，25 40°C減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入稀鹽酸溶液20ml溶解，冰浴中放置30min，濾過；用氨水調(diào)pH至10，將濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加こ酸こ酯萃取5次，毎次20ml，合并こ酸こ酯液，25 4 0°C減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入甲醇2ml溶解，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 yl，注入液相色譜儀，測定，即得;本發(fā)明二十九味能消散或其制劑含鐵棒錘以烏頭堿(C34H47NO11)計，不得高于17y g/g ； B.馬兜鈴酸A的限度檢查 照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比.66:34的甲醇-體積份數(shù)比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為315nm ;理論板數(shù)按木香馬兜鈴酸峰計算應(yīng)不低于3000 ； 對照品溶液的制備取馬兜鈴酸A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含20y g的溶液，即得； 供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散粉末Sg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25ml，低溫濃縮至干，殘渣加體積份數(shù)比為0. 5%氫氧化鈉溶液20ml使其完全溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用こ醚萃取2次,每次20ml,萃取后堿液使用質(zhì)量分數(shù)3%鹽酸調(diào)節(jié)pH至2-3，用こ醚萃取5次，毎次20ml合并こ醚萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20 yl，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明二十九味能消散或其制劑含木香馬兜鈴以馬兜鈴酸A (C17HnNO7)計，不得高于.30 u g/g ； 含量測定 A.蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚的含量測定 照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比為.86:14的甲醇-體積份數(shù)比為0. 1%的磷酸水溶液為流動相；檢測波長為430nm;理論板數(shù)按大黃素峰計算應(yīng)不低于3000 ； 對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品適量，加甲醇分別制成每Iml含蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品各80y g，大黃素甲醚40 y g的溶液，分別精密量取上述對照品溶液各2ml，混勻，即得，每Iml中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各16ii g，含大黃素甲醚g ； 供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散粉末2 g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取取續(xù)濾液5ml，置燒瓶中，揮去溶剤，加體積百分比為8%鹽酸水溶液.10ml，超聲2分鐘，再加三氯甲烷IOml，加熱回流I小吋，放冷，置分液漏斗內(nèi)，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，毎次IOml，合并三氯甲烷液，減壓回收溶液至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10U1，注入液相色譜儀，測定，即得; 本發(fā)明二十九味能消散或其制劑中蘆薈大黃素(C15HltlO5)、大黃酸(C15H806)、大黃素(C15HltlO5),大黃酚(C15HltlO4),大黃素甲醚(C16H12O5)總含量不得少于I. 20mg/g ； B.羥基紅花黃色素A的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比24:76的甲醇-體積份數(shù)比為1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為403nm ;理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計算應(yīng)不低于3000 ； 對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，置棕色瓶中，加體積份數(shù)比為25%甲醇水溶液制成每Iml含50 y g的溶液，即得； 供試品溶液的制備取藏藥組合物二十九味能消散粉末4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積份數(shù)比為25%甲醇水溶液25ml，密塞，稱定重量，超聲40分鐘，放冷，用體積份數(shù)比為25%甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別吸取對照品溶液和供試品溶液各lOul，注入液相色譜儀，測定，即得； 本發(fā)明二十九味能消散或其制劑中羥基紅花黃色素A (Ce7H30O15)含量不得少于0. 20mg/g。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種藏藥組合物二十九味能消散及其制劑的質(zhì)量檢測方法，使用薄層色譜法對二十九味能消散中乳香、胡椒堿、肉豆蔻進行了定性鑒別，使用高效液相色譜法(HPLC法)對二十九味能消散中烏頭堿、木香馬兜鈴酸進行了限度檢查，同時采用高效液相色譜法(HPLC法)對二十九味能消散中蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚、羥基紅花黃色素A進行了定量檢測。本發(fā)明方法建立了乳香、胡椒堿、肉豆蔻的薄層鑒別方法，烏頭堿、木香馬兜鈴酸的限度檢查方法，蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚、羥基紅花黃色素A的含量測定方法，提高了產(chǎn)品質(zhì)量標準，使該制劑在治療疾病的同時，保證了用藥的安全有效。
文檔編號G01N30/90GK102759598SQ20121027224
公開日2012年10月31日 申請日期2012年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月31日
發(fā)明者任松鵬, 劉玉芹, 孫泰俊, 孫緒丁, 魏永義 申請人:山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司