專利名稱：一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測領(lǐng)域，特別涉及一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法。
背景技術(shù)：
硝基呋喃類藥物是具有5 —硝基呋喃結(jié)構(gòu)的人工合成抗生素，主要包括呋喃它酮(Furaltadone, FTD)、呋喃西林(Nitrofurazone, NFZ)、呋喃妥因(Nitrofurantoin, NFT)和呋喃唑酮(Furazolidone，F(xiàn)ZD)這四種藥物。由于這類抗生素具有良好的抑菌和殺菌效果，曾被廣泛用于水產(chǎn)動(dòng)物疾病的預(yù)防與治療中。相關(guān)研究已經(jīng)證明硝基呋喃類藥物具有致畸、致癌和致突變的毒副作用。目前，歐盟、美國、中國和日本等國家已經(jīng)禁止硝基呋喃類藥物在動(dòng)物養(yǎng)殖過程中使用，然而由于其治療效果顯著，且尚無相關(guān)替代藥物，許多養(yǎng)殖戶仍在使用硝基呋喃類藥物。因此，建立測定硝基呋喃類藥物的檢測方法具有十分重要的意義。 目前檢測硝基呋喃類藥物殘留主要采用高效液相色譜法、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和酶聯(lián)免疫法進(jìn)行測定，而檢測對象主要集中在飼料和養(yǎng)殖用水，檢測指標(biāo)主要為硝基呋喃代謝物。由于水產(chǎn)品種類繁多，基質(zhì)復(fù)雜，導(dǎo)致檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃原藥殘留檢測的方法研究還比較匱乏，現(xiàn)有的液相色譜檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃原藥殘留的方法，其需要采用固相萃取進(jìn)行凈化，在實(shí)際操作中，增加了前處理所需要的時(shí)間和費(fèi)用，同時(shí)該方法的定 量限較高，呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮的定量限分別為25、10、15、10^/1^，無法滿足日益嚴(yán)苛的檢測要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，該方法具有靈敏度高、操作簡便、檢測成本低廉、準(zhǔn)確可靠的特點(diǎn)；定量限均為5 μ g/kg,回收率大于70%，適合用于水產(chǎn)品進(jìn)出口快速檢測。本發(fā)明的一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，包括(I)取呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮溶于甲醇，配制成100μ g/mL的原藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-IO0C --20°C下保存；將混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液用甲醇稀釋，配制成I μ g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，再將混合標(biāo)準(zhǔn)中間液用流動(dòng)相配制成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；(2)將魚類樣品去鱗、去皮沿背脊取肌肉，粉碎，-IO0C -20°C下貯存，測定前室溫解凍；取樣品加入乙酸乙酯，經(jīng)渦旋混合、超聲、再次渦旋混合后離心，取上層溶液再加入乙酸乙酯重復(fù)提取一次，合并提取液；(3)將上述提取液減壓濃縮至干，加入正己烷，渦旋后加入流動(dòng)相，渦旋混合、離心，取下層溶液過水相膜后，上機(jī)色譜分析，即得硝基呋喃類原藥的濃度。所述步驟(I)中的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度分別為0. 010,0. 015,0. 020,0. 025,0. 05、
0.I 和 0. 25 μ g/mL。所述步驟(2)中的魚類樣品為草魚或大黃魚。
所述步驟(I)和(3)中的流動(dòng)相為體積比25:75的乙腈和NaH2PO4水溶液；其中，NaH2PO4 水溶液的濃度為 O. 05mol/L, pH=3. O。所述步驟(2)和(3)中的離心的速度為4000r/min,離心的時(shí)間為5min。所述步驟(3)中的減壓濃縮在30°C下進(jìn)行。所述步驟(3)中的水相膜的厚度為O. 45 μ m。所述步驟(3)中的色譜分析條件為色譜柱Z0RBAX SB-C18柱，規(guī)格為250mm*4. 6mm，粒徑為5 μ m ;柱溫25°C ;檢測波長365nm ;流動(dòng)相體積比25:75的乙腈和NaH2PO4水溶液；其中，NaH2PO4水溶液的濃度為O. 05mol/L, pH=3. O ;流速1. OmL/min ;進(jìn)樣量50 μ L ;運(yùn)行時(shí)間18. Omin ;采用梯度洗脫。有益.效果 (I)本發(fā)明具有靈敏度高、操作簡便、檢測成本低廉、準(zhǔn)確可靠的特點(diǎn)；(2)本發(fā)明簡化了樣品的前處理步驟，減少了前處理費(fèi)用，特別是將樣品的前處理時(shí)間縮短了一倍以上，方法的定量限也大幅度提高；(3)本發(fā)明檢測四種硝基呋喃原藥殘留的定量限均為5 μ g/kg，回收率大于70%，適合用于水產(chǎn)品進(jìn)出口快速檢測。


圖I為O. 025 μ g/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖；圖2為5. O μ g/kg草魚樣品加標(biāo)色譜圖；圖3為草魚空白樣本色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實(shí)施例II. O. 05mol/L NaH2PO4 (pH = 3. O)溶液配置方法稱 7. 8g NaH2PO4 · 2H20 加入IOOOmL超純水，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3. O，定容至1L。2.四種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制準(zhǔn)確稱取呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮各IOmg,用甲醇定容至IOOmL,配制成ΙΟΟμ g/mL的四種原藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液,_20°C保存。取ImL混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用甲醇定容至IOOmL,配制成I μ g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。移取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，用流動(dòng)相(體積比乙腈:0· 05M NaH2PO4 = 25:75，ρΗ3· 0)配制成濃度為O. 010、
0.015,0. 020,0. 025,0. 05,0. 1,0. 25 μ g/mL 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。實(shí)施例2樣品制備草魚和大黃魚去鱗、去皮沿背脊取肌肉，經(jīng)組織粉碎機(jī)粉碎，-20°C貯存，測定前室溫解凍。樣品前處理I提取準(zhǔn)確稱取樣品(5. 00±0. 05)g于50mL離心管中，加入8mL乙酸乙酯，渦旋混合lmin,超聲5min,再次潤旋混合lmin, 4000r/min離心5min,將上層轉(zhuǎn)移至棕色雞心瓶中，再加入8mL乙酸乙酯重復(fù)提取，合并提取液。2.濃縮將提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于30°C減壓濃縮至干。3.凈化加入2mL正己燒，渦旋30s后加入ImL流動(dòng)相(體積比乙臆:O. 05MNaH2P04 = 25:75, ρΗ3· O), 混合 lmin,轉(zhuǎn)入 IOmL 離心管中，4000r/min 離心 5min,取下層過O. 45 μ m水相膜后,上機(jī)分析,結(jié)果見圖2和圖3。4.色譜條件儀器色譜為Agilent 1200，色譜柱為ZORBAX SB-C18柱(250mm*4. 6mm, 5 μ m),柱溫:25 V，檢測波長365nm,流動(dòng)相為體積比乙腈:0. 05MNaH2PO4 = 25:75,pH3. 0，流速:1. OmL/min ;進(jìn)樣量50μ L ;運(yùn)行時(shí)間為 18. Omin0 梯度洗脫程序見表I。表I流動(dòng)相及梯度洗脫程序
權(quán)利要求
1.一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，包括 (O取呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮溶于甲醇，配制成ΙΟΟμ g/mL的原藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-IO0C -20°C下保存；將混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液用甲醇稀釋，配制成I μ g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，再將混合標(biāo)準(zhǔn)中間液用流動(dòng)相配制成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； (2)將魚類樣品去鱗、去皮沿背脊取肌肉，粉碎，-10°C-20°C下貯存，測定前室溫解凍；取樣品加入乙酸乙酯，經(jīng)渦旋混合、超聲、再次渦旋混合后離心，取上層溶液再加入乙酸乙酯重復(fù)提取一次，合并提取液； (3)將上述提取液減壓濃縮至干，加入正己烷，渦旋后加入流動(dòng)相，渦旋混合、離心，取下層溶液過水相膜后，上機(jī)色譜分析，即得硝基呋喃類原藥的濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特征在于:所述步驟(I)中的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度分別為O. 010,0. 015,0. 020,0. 025,0. 05,0. I和 O.25 μ g/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特征在于 所述步驟(2)中的魚類樣品為草魚或大黃魚。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特征在于 所述步驟(I)和(3 )中的流動(dòng)相為體積比25:75的乙腈和NaH2PO4水溶液；其中，NaH2PO4水溶液的濃度為O. 05mol/L, pH=3. O。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特征在于 所述步驟(2)和(3)中的離心的速度為4000r/min,離心的時(shí)間為5min。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特征在于 所述步驟(3)中的減壓濃縮在30°C下進(jìn)行。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特征在于 所述步驟(3)中的水相膜的厚度為O. 45 μ m。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特征在于 所述步驟(3)中的色譜分析條件為色譜柱Z0RBAX SB-C18柱，規(guī)格為250mm*4. 6mm,粒徑為5 μ m ;柱溫25°C ;檢測波長365nm ;流動(dòng)相體積比25:75的乙腈和NaH2PO4水溶液；其中，NaH2POyjC溶液的濃度為O. 05mol/L，pH=3. O ;流速1. OmL/min ;進(jìn)樣量:50μ L ;運(yùn)行時(shí)間18. Omin ;采用梯度洗脫。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種同時(shí)檢測水產(chǎn)品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，包括(1)四種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制；(2)樣品制備；(3)提??；(4)濃縮；(5)凈化；(6)測定。本發(fā)明具有靈敏度高、操作簡便、檢測成本低廉、準(zhǔn)確可靠的特點(diǎn)；定量限均為5μg/kg，回收率大于70%，適合用于水產(chǎn)品進(jìn)出口快速檢測。
文檔編號G01N30/06GK102830192SQ201210277638
公開日2012年12月19日 申請日期2012年8月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月6日
發(fā)明者黃宣運(yùn), 于慧娟, 蔡友瓊, 李冰, 黃冬梅, 史永富, 沈曉盛 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所