專利名稱：一種用于孜然揮發(fā)油成分的gc/ms指紋圖譜的分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種孜然揮發(fā)油成分的分析方法，具體地，本發(fā)明涉及一種用于孜然揮發(fā)油成分的GC/MS指紋圖譜的分析方法。
背景技術(shù)：
指紋圖譜是隨著現(xiàn)代分析技術(shù)發(fā)展而誕生的一種從整體上研究復(fù)雜物質(zhì)體系的技術(shù)，是以各種光譜、波譜、色譜等技 術(shù)為依托的又一種質(zhì)量控制模式。色譜指紋圖譜具有整體性和模糊性，是一種從整體上研究復(fù)雜物質(zhì)體系的技術(shù)，具有指紋特征分析、宏觀推斷分析等特點，適合于考察復(fù)雜成分重要內(nèi)在質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性。孜然揮發(fā)油是香精生產(chǎn)中的常用原料之一，其質(zhì)量控制是香精產(chǎn)品穩(wěn)定性的指標(biāo)之一。指紋圖譜能夠比較全面地反映孜然揮發(fā)油成分的種類、數(shù)量及相互之間的比例等信息，進(jìn)而有效地表征其內(nèi)在質(zhì)量。本專利申請旨在建立一套基于GC/MS數(shù)據(jù)的孜然揮發(fā)油成分的指紋圖譜分析檢測方法，為孜然揮發(fā)油成分的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)和指導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種孜然揮發(fā)油成分的GC/MS指紋圖譜的構(gòu)建方法以及由此方法所得到的孜然揮發(fā)油成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，通過該標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜為孜然揮發(fā)油的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)和指導(dǎo)。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種孜然揮發(fā)油成分的GC/MS指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括如下步驟I)、供試品溶液的制備將孜然樣品粉碎至24目后，稱取樣品20g，精確至O.Olg，置于揮發(fā)油提取器中，力口A 10倍樣品質(zhì)量的二次蒸餾水與數(shù)粒玻璃珠浸泡12h，振搖均勻，回流提取5h (至餾出液無明顯油珠為止)，將餾出液轉(zhuǎn)入分液漏斗中，用60mL乙醚分兩次進(jìn)行萃取，合并萃取液，用無水硫酸鈉干燥，然后在50°C水浴下?lián)]發(fā)去除乙醚，即得孜然揮發(fā)油，即供試品溶液。2)、孜然揮發(fā)油的GC-MS分析將步驟I)所得孜然揮發(fā)油溶于IOmL乙醚中供GC / MS分析使用；GC /MS分析條件氣相色譜條件色譜柱HP-5MS石英毛細(xì)管色譜柱(30mX0. 25mmX0. 25 u m)；進(jìn)樣口溫度250°C;載氣高純(彡99. 999%)氮氣，載氣流速lmL/min ；程序升溫起始溫度40°C,保持2min,以4°C /min的速度升至100°C,保持Imin,然后以2V /min的速度升至150°C，保持2min，再以4°C /min的速度升至250°C保持IOmin ；進(jìn)樣量1ill;進(jìn)樣方式手動進(jìn)樣，分流比20 :1 ;
質(zhì)譜條件電子轟擊(EI)源分析，電子能量70eV，電子倍增器電壓1381V，離子源溫度230°C，四級桿溫度150°C，接口溫度260°C，選用全掃描(SCAN)模式，質(zhì)量掃描范圍40 450AMU。在此條件下分析孜然揮發(fā)油(即供試品溶液)，得孜然揮發(fā)油成分的指紋圖譜。本發(fā)明還提供了一種由上述構(gòu)建方法得到的孜然揮發(fā)油成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，該標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜通過對10批次孜然采用上述方法建立的指紋圖譜的分析比較，確定了 6個共有特征峰，其保留時間分別為 10. 456min、ll. 183min、12. 427min、14. 395min、15. 186min 和15. 787min，這些共有特征峰構(gòu)成了 孜然揮發(fā)油成分的指紋特征，可作為孜然揮發(fā)油成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。本發(fā)明還提供了一種孜然揮發(fā)油成分的GC/MS指紋圖譜的分析檢測方法，包括如下步驟I)、孜然揮發(fā)油的提取將孜然樣品粉碎至24目后，稱取樣品20g，精確至O.Olg，置于揮發(fā)油提取器中，力口A 10倍樣品質(zhì)量的二次蒸餾水與數(shù)粒玻璃珠浸泡12h，振搖均勻，回流提取5h (至餾出液無明顯油珠為止)，將餾出液轉(zhuǎn)入分液漏斗中，用60mL乙醚分兩次進(jìn)行萃取，合并萃取液，用無水硫酸鈉干燥，然后在50°C水浴下?lián)]發(fā)去除乙醚，即得孜然揮發(fā)油；2)、孜然揮發(fā)油的GC-MS分析將步驟I)所得孜然揮發(fā)油溶于IOmL乙醚中供GC / MS分析使用；GC / MS分析條件氣相色譜條件色譜柱HP-5MS石英毛細(xì)管色譜柱(30mX0. 25mmX0. 25 u m)；進(jìn)樣口溫度250°C;載氣高純(彡99. 999%)氮氣，載氣流速lmL/min ；程序升溫起始溫度40°C,保持2min,以4°C /min的速度升至100°C,保持Imin,然后以2V /min的速度升至150°C，保持2min，再以4°C /min的速度升至250°C保持IOmin ；進(jìn)樣量Iill ;進(jìn)樣方式手動進(jìn)樣，分流比20 :1 ;質(zhì)譜條件電子轟擊(EI)源分析，電子能量70eV，電子倍增器電壓1381V，離子源溫度230°C，四級桿溫度150°C，接口溫度260°C，選用全掃描(SCAN)模式，質(zhì)量掃描范圍40 450AMU。在此條件下分析孜然揮發(fā)油，得孜然揮發(fā)油成分的指紋圖譜，并與上述得到的孜然揮發(fā)油成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行分析比較。本發(fā)明所具有的有益效果本發(fā)明將指紋圖譜技術(shù)用于孜然原料質(zhì)量控制，可反映其主要揮發(fā)性組分的化學(xué)成分及其比例，有效地表征孜然質(zhì)量。且本發(fā)明分析方法有很好的重現(xiàn)性和可靠性?？捎糜谧稳粨]發(fā)油的質(zhì)量評價，這將為孜然揮發(fā)油的質(zhì)量控制提供新的途徑。


圖I為某一孜然樣品處理后得到孜然揮發(fā)油，再進(jìn)行GC / MS分析后的總離子流圖。圖2為本發(fā)明得到的孜然揮發(fā)油成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，共有6個特征峰，從左往右依次為I號、2號、3號、4號、5號、6號。圖3為枯銘醛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(純度99%)色譜圖，通過對比可知圖2中6號峰為枯銘醛。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但不限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實施例I一種孜然揮發(fā)油成分的GC/MS指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括如下步驟I)、供試品溶液的制備將孜然樣品粉碎至24目后，稱取樣品20g，精確至O.Olg，置于揮發(fā)油提取器中，力口A 10倍樣品質(zhì)量的二次蒸餾水與數(shù)粒玻璃珠浸泡12h，振搖均勻，回流提取5h (至餾出液無明顯油珠為止)，將餾出液轉(zhuǎn)入分液漏斗中，用60mL乙醚分兩次進(jìn)行萃取，合并萃取液，用無水硫酸鈉干燥，然后在50°C水浴下?lián)]發(fā)去除乙醚，即得孜然揮發(fā)油，即供試品溶液。 2)、孜然揮發(fā)油的GC-MS分析將步驟I)所得孜然揮發(fā)油溶于IOmL乙醚中供GC / MS分析使用；GC / MS分析條件氣相色譜條件色譜柱HP-5MS石英毛細(xì)管色譜柱(30mX0. 25mmX0. 25 u m)；進(jìn)樣口溫度250°C;載氣高純(彡99. 999%)氮氣,載氣流速lmL/min ；程序升溫起始溫度40°C,保持2min,以4°C /min的速度升至100°C,保持Imin,然后以2V /min的速度升至150°C，保持2min，再以4°C /min的速度升至250°C保持IOmin ；進(jìn)樣量Iii I ;進(jìn)樣方式手動進(jìn)樣，分流比20 :1 ;質(zhì)譜條件電子轟擊(EI)源分析，電子能量70eV，電子倍增器電壓1381V，離子源溫度230°C，四級桿溫度150°C，接口溫度260°C，選用全掃描(SCAN)模式，質(zhì)量掃描范圍40 450AMU。在此條件下分析孜然揮發(fā)油(即供試品溶液)，得孜然揮發(fā)油成分的指紋圖譜。在此條件下，分析某一孜然樣品，得總離子流圖，如圖I所示；按照上述方法對10批次孜然采用上述方法建立的指紋圖譜的分析比較，確定了 6個共有特征峰，從左往右分別為I號、2號、3號、4號、5號、6號，其保留時間依次為10. 456min、ll. 183min、12. 427min、14. 395min、15. 186min 和 15. 787min,這些共有特征峰構(gòu)成了孜然揮發(fā)油成分的指紋特征，可作為孜然揮發(fā)油成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，如圖2所示，并通過與枯銘醛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(純度99%)色譜圖對比分析可知，6號峰為枯銘醛。其中以6號峰的色譜峰分離度好、強度高，并且為所有批次圖的共有峰，因此選擇為參照物峰，且在進(jìn)行穩(wěn)定性和精密度考察試驗時選用2號峰的數(shù)據(jù)進(jìn)行計算。方法學(xué)考察
穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別在0、3、6、9、12、15、18、21、24h不同時間點
檢測指紋圖譜，再用夾角余弦相似度計算樣品與Oh樣品相似度的RSD值。以評價樣品和儀器的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示相似度RSD值〈3. 1%。說明供試品溶液與測試儀器在24h內(nèi)基本穩(wěn)定，沒有明顯變化，符合指紋圖譜檢測的要求。精密度試驗取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，利用夾角余弦相似度計算，將后5次進(jìn)樣的圖譜分別與第I次進(jìn)樣圖譜進(jìn)行相似度計算，得出后5個樣品相似度的RSD值，用以評價該方法的精密度。結(jié)果顯示其相似度RSD值〈2.8%。說明實驗的總體精密度良好，符合指紋圖譜檢測的要求。夾角余弦法是一種相似度的評價方法
權(quán)利要求
1.一種孜然揮發(fā)油成分的GC/MS指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于包括如下步驟 1)、供試品溶液的制備 將孜然樣品粉碎至24目后，稱取樣品20g，精確至O. Olg,置于揮發(fā)油提取器中，加入10倍樣品質(zhì)量的二次蒸餾水與數(shù)粒玻璃珠浸泡12h，振搖均勻，回流提取5h，將餾出液轉(zhuǎn)入分液漏斗中，用60mL乙醚分兩次進(jìn)行萃取，合并萃取液，用無水硫酸鈉干燥，然后在50°C水浴下?lián)]發(fā)去除乙醚，即得孜然揮發(fā)油，即供試品溶液。
2)、孜然揮發(fā)油的GC-MS分析 將步驟I)所得孜然揮發(fā)油溶于IOmL乙醚中供GC / MS分析使用； GC / MS分析條件 氣相色譜條件 色譜柱HP-5MS石英毛細(xì)管色譜柱(30mX0. 25_Χ0. 25μπι)； 進(jìn)樣口溫度250°C ； 載氣高純(彡99. 999%)氮氣，載氣流速lmL/min ； 程序升溫起始溫度40°C，保持2min，以4°C /min的速度升至100°C，保持lmin，然后以2V /min的速度升至150°C，保持2min，再以4°C /min的速度升至250°C保持IOmin ；進(jìn)樣量1μ1 ; 進(jìn)樣方式手動進(jìn)樣，分流比20 1 ； 質(zhì)譜條件 電子轟擊(EI)源分析，電子能量70eV，電子倍增器電壓1381V，離子源溫度230°C，四級桿溫度150°C，接口溫度260°C，選用全掃描(SCAN)模式，質(zhì)量掃描范圍40 450AMU。在此條件下分析孜然揮發(fā)油，得孜然揮發(fā)油成分的指紋圖譜。
2.一種由權(quán)利要求I的構(gòu)建方法得到的孜然揮發(fā)油成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其特征在于該標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜通過對10批次孜然采用上述方法建立的指紋圖譜的分析比較，確定了 6個共有特征峰，其保留時間分別為10. 456min、ll. 183min、12. 427min、14. 395min、15. 186min和15. 787min，這些共有特征峰構(gòu)成了孜然揮發(fā)油成分的指紋特征，可作為孜然揮發(fā)油成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
3.一種孜然揮發(fā)油成分的GC/MS指紋圖譜的分析檢測方法，其特征在于包括如下步驟 1)、孜然揮發(fā)油的提取 將孜然樣品粉碎至24目后，稱取樣品20g，精確至O. Olg,置于揮發(fā)油提取器中，加入10倍樣品質(zhì)量的二次蒸餾水與數(shù)粒玻璃珠浸泡12h，振搖均勻，回流提取5h，將餾出液轉(zhuǎn)入分液漏斗中，用60mL乙醚分兩次進(jìn)行萃取，合并萃取液，用無水硫酸鈉干燥，然后在50°C水浴下?lián)]發(fā)去除乙醚，即得孜然揮發(fā)油； 2)、孜然揮發(fā)油的GC-MS分析 將步驟I)所得孜然揮發(fā)油溶于IOmL乙醚中供GC / MS分析使用； GC / MS分析條件 氣相色譜條件 色譜柱HP-5MS石英毛細(xì)管色譜柱(30mX0. 25_Χ0. 25μπι)； 進(jìn)樣口溫度250°C ；載氣高純(≥99. 999%)氮氣，載氣流速lmL/min ； 程序升溫起始溫度40°C，保持2min，以4°C /min的速度升至100°C，保持lmin，然后以2V /min的速度升至150°C，保持2min，再以4°C /min的速度升至250°C保持IOmin ；進(jìn)樣量1μ1; 進(jìn)樣方式手動進(jìn)樣，分流比20 1 ； 質(zhì)譜條件 電子轟擊(EI)源分析，電子能量70eV，電子倍增器電壓1381V，離子源溫度230°C，四級桿溫度150°C，接口溫度260°C，選用全掃描(SCAN)模式，質(zhì)量掃描范圍40 450AMU。
在此條件下分析孜然揮發(fā)油，得孜然揮發(fā)油成分的指紋圖譜，并與權(quán)利要求2得到的孜然揮發(fā)油成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行分析比較。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于孜然揮發(fā)油成分的GC/MS指紋圖譜的分析方法，包括如下步驟1)、將孜然樣品粉碎至24目后，稱取樣品20g，精確至0.01g，置于揮發(fā)油提取器中，加入10倍樣品質(zhì)量的二次蒸餾水與數(shù)粒玻璃珠浸泡12h，振搖均勻，回流提取5h，將餾出液轉(zhuǎn)入分液漏斗中，用60mL乙醚分兩次進(jìn)行萃取，合并萃取液，用無水硫酸鈉干燥，然后在50℃水浴下?lián)]發(fā)去除乙醚，即得孜然揮發(fā)油；2)、孜然揮發(fā)油的GC-MS分析，得孜然揮發(fā)油成分的指紋圖譜，并與得到的孜然揮發(fā)油成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行分析比較。本發(fā)明分析方法有很好的重現(xiàn)性和可靠性?？捎糜谧稳粨]發(fā)油的質(zhì)量評價。
文檔編號G01N30/02GK102768252SQ201210289238
公開日2012年11月7日 申請日期2012年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月14日
發(fā)明者劉娜 申請人:天津春發(fā)生物科技集團(tuán)有限公司