檢測(cè)莫能菌素的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及檢測(cè)莫能菌素的磁顆粒化學(xué)發(fā)光試劑盒，包括的試劑有：發(fā)光標(biāo)記物、熒光素標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、分離試劑。發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的莫能菌素半抗原，熒光標(biāo)記物是指熒光素或其衍生物標(biāo)記的莫能菌素單克隆抗體，分離試劑是指包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。本發(fā)明還涉及一種采用所述的試劑盒檢測(cè)動(dòng)物源性食品中莫能菌素的方法，本方法對(duì)莫能菌素檢測(cè)具備較高的靈敏度、特異性和較快的檢測(cè)速度。
【專利說(shuō)明】檢測(cè)莫能菌素的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種直接化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。特別是檢測(cè)動(dòng)物組織、飼料等樣本中莫能菌素藥物殘留的磁顆粒競(jìng)爭(zhēng)直接化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]莫能菌素(Monensin)是聚醚類(lèi)抗生素，被廣泛用于動(dòng)物疾病的治療，其主要作用機(jī)理是干擾球蟲(chóng)細(xì)胞內(nèi)鈉鉀離子的正常交換，是大量的鈉離子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，造成鈉離子在胞內(nèi)濃度高，滲透壓上升，跟多的水分進(jìn)圖球蟲(chóng)內(nèi)，為了排除細(xì)胞內(nèi)多余的鈉，球蟲(chóng)必須動(dòng)用能量將多余的鈉外泵排除，最終造成有限的能量被用完；而后鈉鉀離子交換中斷停止，細(xì)胞膨脹、變形、破裂、崩解。莫能菌素還可以影響反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)能量代謝，改善瘤胃發(fā)酵，提高丙酸與乙酸的產(chǎn)出比例，降低揮發(fā)性脂肪酸，減少甲烷生成，提高蛋白質(zhì)利用效率。因此能夠顯著提高反芻動(dòng)物的飼料利用率和促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。但是莫能菌素在動(dòng)物食品中的殘留會(huì)影響人類(lèi)健康，因此，歐美國(guó)家及我國(guó)均規(guī)定了莫能菌素在動(dòng)物組織中的最大殘留量。
[0003]目前，莫能菌素藥物的殘留檢測(cè)主要采用高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法和酶聯(lián)免疫吸附法等方法。
[0004]1、高效液相色譜法(HPLC)具有檢測(cè)精度高、假陽(yáng)性率低的特點(diǎn)。HPLC法的主要缺點(diǎn)是儀器價(jià)格昂貴，操作比較繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，檢測(cè)費(fèi)用昂貴，對(duì)檢測(cè)人員專業(yè)要求較高，樣本前處理較復(fù)雜。
[0005]2、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)靈敏度很高，假陽(yáng)性率低。該方法的主要缺點(diǎn)是樣品需要衍生化這樣復(fù)雜的前期處理。雖然經(jīng)過(guò)衍生化處理的樣品能在質(zhì)譜中給出更多的結(jié)構(gòu)信息，但是衍生化會(huì)產(chǎn)生多個(gè)不同的產(chǎn)物并導(dǎo)致樣品的部分丟失，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差。
[0006]3、酶聯(lián)免疫法(ELISA)是20世紀(jì)70年代出現(xiàn)，用于微量物質(zhì)的檢測(cè)，最早應(yīng)用于傳染病、腫瘤標(biāo)志物、激素水平等臨床檢測(cè)，90年代開(kāi)始在我國(guó)食品安全檢測(cè)領(lǐng)域推廣應(yīng)用，目前依托ELISA技術(shù)的試劑盒、試紙條已經(jīng)成為食品安全快速檢測(cè)領(lǐng)域的主導(dǎo)產(chǎn)品，同時(shí)也是我公司研發(fā)和銷(xiāo)售的主要產(chǎn)品類(lèi)型。酶聯(lián)免疫檢測(cè)法基于抗原-抗體的特異性反應(yīng)，檢測(cè)靈敏度較高、特異性較好，技術(shù)操作簡(jiǎn)易，容易掌握，確實(shí)解決了大量的以前難以解決的許多微量小分子物質(zhì)如抗生素、激素、農(nóng)藥殘留等的定性、定量分析工作，對(duì)食品安全快速檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展起到了積極的促進(jìn)作用。但是，ELISA方法存在許多自身無(wú)法克服的缺陷，主要表現(xiàn)在:
[0007]I)非均相反應(yīng):檢測(cè)過(guò)程中為分離游離物與結(jié)合物，需要多步洗板過(guò)程，耗時(shí)費(fèi)力，難以提高操作的自動(dòng)化程度。
[0008]2)酶催化反應(yīng):借助酶催化底物顯色，測(cè)定反應(yīng)液吸光度值。反應(yīng)的時(shí)間與溫度對(duì)酶活力存在較大影響，試劑穩(wěn)定性差。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0009]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種檢測(cè)莫能菌素的化學(xué)發(fā)光試劑盒，采用該試劑盒進(jìn)行莫能菌素的檢測(cè)時(shí)不僅具備較高的靈敏度，特異性，而且具有較高的反應(yīng)速度。
[0010]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種莫能菌素的測(cè)試方法，該方法操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，特異性好。
[0011]實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種莫能菌素檢測(cè)試劑盒，其包含的主要試劑有:發(fā)光標(biāo)記物、突光素標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、分離試劑。
[0012]所述的分離試劑是包被有羊抗FITC抗體的順磁性納米微珠。
[0013]所述的順磁性納米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH2活性基團(tuán)的微珠，用于包被羊抗FITC單克隆抗體，其內(nèi)芯是Fe3O4或Y -Fe2O3,使得微珠具有順磁性。
[0014]所述的發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾衍生物標(biāo)記的莫能菌素半抗原。所述的異魯米諾衍生物是 ABE1、AHEI 或 ABEN。
[0015]所述的試劑盒還包括標(biāo)準(zhǔn)品,質(zhì)控品和濃縮洗液。
[0016]所述的熒光素標(biāo)記物是FITC標(biāo)記莫能菌素單克隆抗體。
[0017]本發(fā)明還提供一種利用試劑盒檢測(cè)莫能菌素的方法，包括下列步驟:
[0018]I)分別吸取20μ1_100μ1標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，然后加入20μ1_100μ1發(fā)光標(biāo)記物，再加20μ1-100μ1熒光素標(biāo)記物，充分混勻后，37°C溫育15min ；
[0019]2)加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80_150μ1，混勻后在37°C溫育5min ；
[0020]3)用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300_500μ1沖洗復(fù)合物沉淀；
[0021]4)上述清洗步驟重復(fù)2-4次；
[0022]5)所得分離好的復(fù)合物直接放入測(cè)量暗箱，加入激發(fā)底物I和激發(fā)底物2，延遲3-5s后檢測(cè)發(fā)出的相對(duì)光強(qiáng)度(RLU)，樣本中的含量與RLU成一定比例關(guān)系，可以通過(guò)RLU集合標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算莫能菌素的濃度。
[0023]所述的發(fā)光底物的主要成分是NaOH和Η202。
[0024]本發(fā)明中分析測(cè)試方法所用的分析儀是:包括電源電路、自動(dòng)注射泵I和2、測(cè)量室、發(fā)光室、光電倍增管計(jì)數(shù)器和輸出系統(tǒng)，同時(shí)還配置有計(jì)算機(jī)與中文界面的Windows控制軟件，可進(jìn)行資料錄入、結(jié)果匯總、質(zhì)量控制、結(jié)果儲(chǔ)存和結(jié)果查詢等功能，可完成多種分析模式的編程，定量或定性報(bào)告結(jié)果，自動(dòng)生成并儲(chǔ)存、更新功能，兩點(diǎn)自動(dòng)修正標(biāo)準(zhǔn)曲線，所采用的系統(tǒng)是C1-2008系統(tǒng)。
[0025]本發(fā)明所述的分離試劑是包被羊抗FITC單克隆抗體，其表面基團(tuán)的含量是
0.1-0.3eqm/g,其保存于含有 8-10% 卵清蛋白，0.05-0.10%Tween_20,0.02-0.04%NaN3,pH7.2的PBS緩沖液中。所述的FITC是異硫氰酸熒光素。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。
[0026]所述的發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾衍生物ABE1、AHEI或ABEN標(biāo)記的莫能菌素半抗原，其保存于含PH7.2,0.1-0.3%Tween-20,0.01%NaN3的PBS緩沖液中。所述百分含量是質(zhì)量百分含量。
[0027]所述的熒光素標(biāo)記物是FITC標(biāo)記的莫能菌素單克隆抗體，其保存于PH7.2，含5-8%牛血清白蛋白，0.02-0.04%NaN3的PBS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。
[0028]莫能菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0ng/ml,0.02ng/ml, 0.06ng/ml, 0.18ng/ml, 0.54ng/ml,1.6ng/ml)，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為pH7.2,0.03%NaN3,0.lmol/L PBS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)
量百分含量。
[0029]莫能菌素質(zhì)控品溶液濃度分別為0.05ng/ml, 1.0ng/ml,質(zhì)控品稀釋液ρΗ7.2，
0.03%NaN3,0.lmol/L PBS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。
[0030]所述的濃縮洗液為pH7.2,0.2-0.4%Tween_20,0.02-0.04% NaN3,0.1-0.2mol/LPBS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。
[0031]本發(fā)明的有益效果如下:
[0032]I)本發(fā)明試劑盒可特異性檢測(cè)莫能菌素。
[0033]2)本發(fā)明試劑盒的靈敏度較高，對(duì)莫能菌素的檢測(cè)靈敏度可達(dá)0.02g/ml。
[0034]3)本發(fā)明試劑盒的檢測(cè)快捷，檢測(cè)時(shí)間低于20min。
【具體實(shí)施方式】
[0035]實(shí)施例一試劑盒具體組分的制備
[0036]I)莫能菌素人工抗原的制備
[0037]將莫能菌素與牛血清白蛋白(BSA)采用活化酯法(NHS-DCC)進(jìn)行偶聯(lián)得到免疫原。
[0038]3)單克隆抗體的制備
[0039]動(dòng)物免疫:以免疫原對(duì)Balb/c小鼠進(jìn)行免疫，免疫劑量為100 μ g/只，使其產(chǎn)生抗血清。
[0040]細(xì)胞融合和克隆化:取免疫Balb/c小鼠脾細(xì)胞，按9:1比例與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，得到單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。
[0041]細(xì)胞凍存和復(fù)蘇:將雜交瘤細(xì)胞用凍存液制成IX IO9個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，在液氮中長(zhǎng)期保存。復(fù)蘇時(shí)取出凍存管，立即放入37°C水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)。
[0042]單克隆抗體的制備與純化:將Balb/c小鼠腹腔注入滅菌石蠟油0.5ml/只，7天后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞5X IO7個(gè)/只，7天后采集腹水。用辛酸-飽和硫酸銨法進(jìn)行純化，得到單克隆抗體。
[0043]4)發(fā)光標(biāo)記物的制備
[0044]取4.5mmol/L ABEI,溶于4ml蒸懼水中，5.0mmol/L N-輕基琥拍酰亞胺溶于
0.5ml N，N-二甲基甲酰胺中，二者充分混勻后室溫反應(yīng)3-4h。取上述制備的莫能菌素半抗原15mg，用pH7.4 PBS調(diào)節(jié)體積到1.5ml，然后加入上述活化的ABEI溶液，充分混勻后室溫反應(yīng)過(guò)夜，過(guò)G-25凝膠柱純化。
[0045]5)熒光標(biāo)記物制備
[0046]用0.025mol/L, pH9.0的碳酸鹽緩沖液將莫能菌素單克隆抗體稀釋成1.0%質(zhì)量百分比濃度；根據(jù)欲標(biāo)記的蛋白質(zhì)總量，按每毫克免疫球蛋白加0.0lmg FITC，用分析天平準(zhǔn)確稱取所需的FITC粉末。用同一緩沖液將FITC配成0.lmg/ml的溶液，按上述抗體溶液體積的3-5倍，混入FITC稀釋液；在4~C避光條件下電磁攪拌、標(biāo)記30-48h ;將標(biāo)記溶液3000r/min，室溫離心20min，除去其中少量的沉淀物，裝入透析袋中，再pH7.4的PBS緩沖液透析2-3天，期間至少更換透析液3次；取透析過(guò)夜的標(biāo)記物,通過(guò)SephadexG-25或G_50柱，分離游離熒光素，收集標(biāo)記的熒光標(biāo)記物進(jìn)行鑒定，分裝，貯存于4°C冰箱中。
[0047]6)分離試劑制備
[0048]a)磁珠活化
[0049]表面-COOH基團(tuán)的磁珠(購(gòu)于DYNAL，粒徑為2.8 μ m)，其含量是0.15eq/g;取100 μ I磁珠，用 100 μ I 25mmol/L, pH5.0, 0.05%Tween_20 MES溶液洗滌兩次，磁分離后移除上清；使用前，用4°C貯存的25mmol/L MES溶液分別配置50mmol/L的EDC、NHS溶液；分別加入50 μ I新配置的EDC和NHS溶液到裝有磁珠的離心管中，渦旋混勻，室溫活化30min ；離心管置于磁分離架上磁分離4min，移除上清，加入100μ l,25mmol/L, pH5.0, MES清洗2-3次后即可得表面羧基活化的磁珠。
[0050]b)磁珠偶聯(lián)羊抗FITC單克隆抗體
[0051]將50-100μ g羊抗FITC單克隆抗體溶解到60μ l，25mmol/L，pH5.0 MES中，用所述MES溶液調(diào)節(jié)總體積至100 μ 1，輕柔混勻磁珠與抗體；室溫條件下至少偶聯(lián)30min或4V偶聯(lián)2h，該期間可利用渦旋儀使磁珠保持混勻狀態(tài)；離心管置于磁分離架上磁分離3-5min，移除上清；為了淬滅未反應(yīng)的-C00H，可加入100 μ 1，ρΗ7.4，TRIS反應(yīng)15min或100μ 1，ρΗ8.0，含有 50mmol/L 乙醇胺的 PBS 封閉磁珠；用 100 μ 1,0.1-0.3%BSA, 0.l%Tween_20的PBS或TRIS清洗封閉好的磁珠3-5次；最后將磁珠復(fù)溶于含0.1-0.5%BSA,
0.01-0.l%Tween-20,0.02%NaN3 的 PBS 或 TRIS 緩沖液中，2_8°C保藏。
[0052]實(shí)施例二試劑盒的組建
[0053]組建檢測(cè)莫能菌素的磁顆粒直接競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，使其含有下列組分:
[0054]FITC標(biāo)記的莫能菌素單克隆抗體的熒光標(biāo)記物
[0055]ABEI標(biāo)記的莫能菌素半抗原的發(fā)光標(biāo)記物
[0056]表面包被羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠的分離試劑
[0057]莫能菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液(Ong/ml,0.02ng/ml, 0.06ng/ml, 0.18ng/ml, 0.54ng/ml,1.6叩/1111)，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為？!17.2，0.03%似乂，0.lmol/L PBS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。
[0058]莫能菌素質(zhì)控品溶液濃度分別為0.05ng/ml，1.0ng/ml，質(zhì)控品稀釋液ρΗ7.2，
0.03%NaN3,0.lmol/L PBS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。
[0059]濃縮洗液為pH7.2,0.2-0.4%Tween_20,0.02-0.04% NaN3,0.1-0.2mol/L PBS 緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。
[0060]實(shí)施例三實(shí)際樣品中莫能菌素的檢測(cè)
[0061]1、樣本前處理
[0062](一)豬肉/肝前處理方法
[0063]用均質(zhì)器均質(zhì)樣本；稱取3.0±0.05g均質(zhì)物至50ml聚苯乙烯離心管中，加入5ml甲醇，再加入Iml去離子水，振蕩5min,3000g以上，室溫(20_25°C )離心5min ;取2ml上清液至50ml塑料離心管中，加入2ml IM氫氧化鈉溶液混勻，再加入6ml正己烷，渦動(dòng)3min，3000g以上，室溫(20-25°C)離心5min ;取3ml上清液至IOml玻璃試管中，于50~60°C氮?dú)饬飨麓蹈?，加入Iml復(fù)溶工作液渦動(dòng)2~3min ;取50μ1用于分析，樣本稀釋倍數(shù):2。
[0064](二)雞肉/肝前處理方法
[0065]用均質(zhì)器均質(zhì)樣本；稱取3.0±0.05g均質(zhì)物至50ml聚苯乙烯離心管中，加入5ml甲醇，再加入Iml去離子水，振蕩5min,3000g以上，室溫(20_25°C )離心5min ;取2ml上清液至50ml塑料離心管中，加入Iml 2M氫氧化鈉溶液混勻，再加入6ml正己烷，渦動(dòng)3min，3000g以上，室溫(20-25°C)離心5min ;取3ml上清液至IOml玻璃試管中，于50?60°C氮?dú)饬飨麓蹈?，加入Iml復(fù)溶工作液渦動(dòng)2?3min ;取50μ1用于分析，樣本稀釋倍數(shù):2。
[0066]2、用試劑盒檢測(cè)與結(jié)果分析
[0067]分別吸取20μ1_100μ1標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，然后加入20μ1_100μ1發(fā)光標(biāo)記物，再加20μ1-100μ1熒光素標(biāo)記物，充分混勻后，37°C溫育15min ;加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150μ1，混勻后在37°C溫育5min ;用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300-500μ1沖洗復(fù)合物沉淀；所得分離好的復(fù)合物直接放入測(cè)量暗箱，加入激發(fā)底物I和激發(fā)底物2，延遲3-5s后檢測(cè)發(fā)出的相對(duì)光強(qiáng)度(RLU)，樣本中莫能菌素的含量與RLU成一定比例關(guān)系，可以通過(guò)RLU結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算莫能菌素的濃度。
[0068]激發(fā)底物I是NaOH，激發(fā)底物2是H2O2。底物裝載前，用蒸餾水清洗底物泵10-20遍，排空管道內(nèi)殘存的水跡后，再將相應(yīng)的底物直接放入儀器內(nèi)，將泵管插入底物瓶中；用底物沖洗管道5次，并測(cè)定底物的RLU值，正常情況下，底物的RLU值不應(yīng)超過(guò)1200。若超過(guò)1200，需重新用蒸餾水對(duì)管道和底物泵進(jìn)行更多次清洗，直至空白值降至合理范圍內(nèi)。若超過(guò)三天不做實(shí)驗(yàn)，需卸載底物瓶，并蓋上蓋子，以防蒸發(fā)。隨后用蒸餾水清洗管道，并排空，以免強(qiáng)堿溶液腐蝕底物泵。
[0069]本發(fā)明米用6 個(gè)莫能菌素標(biāo)準(zhǔn)品(Ong/ml, 0.02ng/ml, 0.06ng/ml, 0.18ng/ml,
0.54ng/ml, 1.6ng/ml)進(jìn)行曲線測(cè)繪。儀器根據(jù)所述方法檢測(cè)得到一條RLU值與莫能菌素濃度相關(guān)的定標(biāo)曲線，此后測(cè)量中，每一個(gè)樣本中的莫能菌素濃度與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較得出樣本中的莫能菌素含量。
[0070]實(shí)施例四試劑盒質(zhì)量的測(cè)定
[0071]1、試劑盒的靈敏度
[0072]試劑盒靈敏度的定義為:測(cè)定20次零標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定的平均值加上3倍標(biāo)準(zhǔn)差。該試劑盒的靈敏度為0.02ng/ml。
[0073]2、樣本的準(zhǔn)確度和精密度
[0074]準(zhǔn)確度是指測(cè)定值與真值間的符合程度，試劑盒準(zhǔn)確度常用回收率表示。精密度又稱可重復(fù)性，常用變異系數(shù)表示。
[0075]按照實(shí)施例三的樣本提取方法，以0.08ng/g、0.16ng/g兩個(gè)濃度的莫能菌素分別對(duì)雞肉、豬肉樣本進(jìn)行添加回收，每種樣本每個(gè)濃度各4個(gè)平行，用三批試劑盒進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算樣本的平均回收率及精密度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表。
[0076]表I 準(zhǔn)確度和精密度測(cè)定 ng/g
[0077]
【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)莫能菌素的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒，包括的試劑有:發(fā)光標(biāo)記物、熒光素標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、分離試劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于:所述的分離試劑是包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于:所述的順磁性納米微珠是里面包覆有Fe3O4或Y -Fe2O3,表面含有_0H、-COOH或-NH2活性基團(tuán)的微珠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于:所述的發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾衍生物標(biāo)記的莫能菌素半抗原。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于:所述的異魯米諾發(fā)光標(biāo)記物是ABE1、AHEI 或 AffiN。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于:所述的試劑盒還包括標(biāo)準(zhǔn)液、質(zhì)控品和濃縮洗液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的試劑盒，其特征在于:所述的熒光素標(biāo)記物是FITC標(biāo)記的莫能菌素單克隆抗體。
8.一種利用權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的試劑盒檢測(cè)莫能菌素的方法，包括下列步驟: O分別吸取20μ1-100μ1標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，然后加入20μ1_100μ1發(fā)光標(biāo)記物，再加20μ1-100μ1熒光素標(biāo)記物，充分混勻后，37°C溫育15min ； 2)加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150μ1，混勻后在37°C溫育5min ； 3)用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300_500μ1沖洗復(fù)合物沉淀； 4)上述清洗步驟重復(fù)2-4次； 5)4)所得分離好的復(fù)合物直接放入測(cè)量暗箱，加入激發(fā)底物I和激發(fā)底物2，延遲3_5s后檢測(cè)發(fā)出的相對(duì)光強(qiáng)度(RLU)，樣本中莫能菌素的含量與RLU成一定比例關(guān)系，可以通過(guò)RLU集合標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算莫能菌素的濃度。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK103592435SQ201210290312
【公開(kāi)日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2012年8月15日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月15日
【發(fā)明者】何方洋, 周德剛, 馮靜, 岳欣榮, 韓京朋, 余厚美 申請(qǐng)人:北京勤邦生物技術(shù)有限公司