一種綜合判定啤酒酵母自溶情況的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種綜合判定啤酒酵母自溶情況的方法，屬于酵母質(zhì)量評價領域。本發(fā)明采用(A260/A280)/死亡率作為判定酵母自溶情況的指標，基于基本的紫外分光光度法和細胞計數(shù)法，簡便、準確、可重復性好。相較于以往報道的酵母自溶判定方法，該方法能在極短的時間內(nèi)得出實驗結果，大大減少工作量和工作時間，實驗結果也更加全面和真實。A260/A280反映了自溶液中蛋白類物質(zhì)和核酸類物質(zhì)的比例及相對含量，是很綜合的判定指標，克服了以往單一指標的局限性，而且人為操作誤差較小。同時最終判定指標(A260/A280)/死亡率排除了不同死亡率對結果的影響，客觀、真實。該發(fā)明可用于評價同種酵母自溶程度及比較不同酵母的自溶性能。
【專利說明】一種綜合判定啤酒酵母自溶情況的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種判定啤酒酵母自溶情況的方法，特別是一種基于紫外分光光度法的測定方法。
【背景技術】
[0002]啤酒酵母是啤酒釀造的靈魂，活性高的強壯酵母在適當?shù)臈l件下能夠釀造出優(yōu)質(zhì)的啤酒。如果使用衰老、活性低的酵母生產(chǎn)啤酒，酵母在發(fā)酵過程中容易發(fā)生自溶，并在自溶過程中釋放出對啤酒質(zhì)量有較大負面影響的物質(zhì)，嚴重影響啤酒品質(zhì)。啤酒釀造過程中如果有5%的酵母發(fā)生自溶，將對啤酒質(zhì)量造成難以挽回的影響。因此，通過對釀酒酵母自溶情況的研究，建立酵母自溶程度的判定指標，就能及早測定酵母的優(yōu)劣，進而選育自溶性能良好的啤酒酵母用于工業(yè)生產(chǎn)，預防酵母自溶給酒液帶來不良影響，改善啤酒風味，并可以通過該標準對發(fā)酵后酵母泥中的酵母進行活性判定，回收活性較好的酵母泥，節(jié)約酵母用量。
[0003]目前對啤酒酵母自溶判定的研究很多，但現(xiàn)有分析方法可操作性差，不能及時地反映酵母的自溶程度。此外，不同酵母菌種自溶時釋放的物質(zhì)種類及含量也不同，用某一種或某幾種物質(zhì)的變化作為判定酵母自溶依據(jù)不夠全面和準確。目前報道尚沒有精確、高效的判定酵母自溶情況的方法。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明要解決的技術問題是建立一種綜合判定啤酒酵母自溶情況的方法，以精確、高效的判定酵母自溶能力與自溶程度。
[0005]為解決上述技術問題，本發(fā)明的技術方案為:酵母經(jīng)活化后，懸浮于低pH緩沖液中，使用紫外分光光度計測定A26tl與A28tl的數(shù)值，通過計算A2JA280比值判斷酵母自溶率。
[0006]本發(fā)明的具體檢測步驟如下:
[0007](I)從斜面上刮取一環(huán)酵母菌接種至lOmLYEH)培養(yǎng)基中，28°C、150-200rpm培養(yǎng)12-24h后接種至200mL YEPD培養(yǎng)基，28°C搖床培養(yǎng)24_36h。
[0008](2)菌液靜置，待酵母沉降后棄去上清液。酵母泥6000-8000r/min離心5-10min，
生理鹽水洗滌后重新懸浮離心,重復2-3次。
[0009](3)2g酵母泥加到IOOmL pH4.0的檸檬酸鹽緩沖液中于28°C放置，定時取樣測定。
[0010](4)分別測定酵母自溶液中A26tl與A28tl的比值，以pH4.0的檸檬酸鹽緩沖液作為空白對照，每組數(shù)據(jù)設三個平行。
[0011](5)計算(A26tZA28tl) /死亡率的值，其比值越小，表明酵母自溶程度越高，同時，該方法可用于比較不同菌株的自溶性能。
[0012]其中，使用血球計數(shù)法測定自溶液中死亡細胞數(shù)和細胞總數(shù)，計算酵母死亡率，每個樣品測定三次，用于和本方法進行比較。
[0013]本發(fā)明提供了一種簡單有效判定啤酒酵母自溶情況的方法，其特征是基于基本的紫外分光光度法和細胞計數(shù)法，簡便、準確、可重復性好。相較于以往報道的酵母自溶判定方法，該發(fā)明能在極短的時間內(nèi)得出實驗結果，大大減少工作量和工作時間，實驗結果也更加全面和真實。A26tZA28tl反映了自溶液中蛋白類物質(zhì)和核酸類物質(zhì)的比例及相對含量，是很綜合的判定指標，克服了以往單一指標的局限性，而且人為操作誤差較小。同時最終判定指標(A26tZA28tl)/死亡率排除了不同死亡率對結果的影響，客觀、真實。
【具體實施方式】
[0014]實例I
[0015]以四株自溶性能不同的啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株作為出發(fā)菌驗證本發(fā)明方法的可行性與準確性。這四株菌的保藏號分別為CCTCC N0.M93049、CCTCCN0.M207161、CGMCC N0.2448 和 ATCC N0.9763。
[0016](I)取出四株菌，從斜面上各刮取一環(huán)接種至IOmL YETO培養(yǎng)基中，28°C、150rpm培養(yǎng)24h后接種至200mL YEPD培養(yǎng)基，28°C搖床培養(yǎng)24h。
[0017](2)菌液靜置，待酵母沉降后棄去上清液。酵母泥8000r/min離心lOmin，生理鹽水洗滌后重新懸浮離心，重復2次。
[0018](3)2g酵母泥加到100mLpH4.0的檸檬酸鹽緩沖液中于28°C放置，開始時每12h取樣一次，60h (或細胞死亡率達到15%)后每48h取樣一次。
[0019](4)分別測定酵母自溶液中A26tl與A28tl的比值，以pH4.0的檸檬酸鹽緩沖液作為空白對照，每組數(shù)據(jù)設三個平行，計算a26Q/a28Q。
[0020](5)血球計數(shù)法測 定自溶液中死亡細胞數(shù)和細胞總數(shù)，計算酵母死亡率，每個樣品測定三次。
[0021](6)計算(A26tlA28tl)/死亡率的值。實驗結果如表1所示。自溶開始時，酵母釋放出的蛋白類物質(zhì)比例較大，A260A280的值較??；隨著自溶程度的增大，自溶液中的核酸類物質(zhì)所占的比例越來越大，A260A280的值逐漸增大，向2.0靠近。酵母細胞死亡率則逐漸趨近于100%。(A26tZA28tl) /死亡率起始值較大(理論上Oh時細胞死亡率為0，該值為+ ^)，之后逐漸減小，且酵母菌株自溶程度越高，該比值越小。當細胞死亡率在5%以內(nèi)時，(A26tlA28tl)/死亡率均在40以上；細胞死亡率在15%以內(nèi)時，(A26Q/A28Q)/死亡率在10以上。同時，該方法可用于比較不同菌株的自溶性能，從結果可以看出，實驗用四株菌自溶性能最好的是9763，其次為2448和M207161，M93049最差，這與實際情況相符合。因此，該方法能夠較準確反映酵母自溶情況，因而能夠作為酵母自溶情況的判定指標。
[0022]表1各菌株A26(l/A28(l、死亡率及(A26(i/A28(i) /死亡率隨時間的變化情況
[0023]
【權利要求】
1.一種綜合判定啤酒酵母自溶情況的方法，其特征是酵母經(jīng)活化后，懸浮于低PH緩沖液中，使用紫外分光光度計測定A26tl與A280的數(shù)值，通過計算A26tlA28tl比值判斷酵母自溶率。
2.權利要求1所述的方法，其特征在于測定緩沖液優(yōu)選pH4.0的檸檬酸鹽緩沖液。
3.權利要求1或2所述的方法，其特征在于具體步驟為: Cl)從斜面上刮取一環(huán)酵母菌接種至IOmL YEH)培養(yǎng)基中，28°C、150-200rpm培養(yǎng)12-24h后接種至200mL YEPD培養(yǎng)基，28°C搖床培養(yǎng)24_36h ； (2)菌液靜置，待酵母沉降后棄去上清液；酵母泥6000-8000r/min離心5_10min，生理鹽水洗滌后重新懸浮離心，重復2-3次；(3)2g酵母泥加到IOOmL pH4.0的檸檬酸鹽緩沖液中于28°C放置，定時取樣測定；(4)分別測定酵母自溶液中A26tl與A28tl的比值，以pH4.0的檸檬酸鹽緩沖液作為空白對昭.(5)計算(A26tlA28tl)/死亡率的值，其比值越小，表明酵母自溶程度越高，同時，該方法可用于比較不同菌株的自溶性能。
4.權利要求1所述的方法應用于比較不同菌株的自溶性能或判定不同菌株的自溶情況。
【文檔編號】G01N21/33GK103674871SQ201210350233
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2012年9月19日 優(yōu)先權日:2012年9月19日
【發(fā)明者】李崎, 許維娜, 王金晶, 李永仙, 劉春鳳, 鄭飛云, 朱林江 申請人:江南大學