專利名稱：前列腺炎聯(lián)合檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生化檢測領(lǐng)域，尤其是涉及一種前列腺炎聯(lián)合檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
前列腺炎是成年男性的常見疾病，困擾著全球接近50%的人群。盡管前列腺炎患者一般不會有生命危險，但會嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，同時，其龐大的患者人群和高昂的醫(yī)療費用也會給公共衛(wèi)生事業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。從對前列腺炎的分類來說，傳統(tǒng)的Meares-Stamey “四杯法”是對前列腺炎第一個
進(jìn)行規(guī)范性分類的方法，即通過比較初始尿液(VBl)、中段尿液(VB2)、前列腺按摩液(EPS)和前列腺按摩后尿液(VB3)四杯標(biāo)本中白細(xì)胞數(shù)和細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果將前列腺炎分為急性細(xì)菌性前列腺炎(ABP)、慢性細(xì)菌性前列腺炎(CBP)、慢性非細(xì)菌性前列腺炎(CNP)和前列腺痛(PD)。該分類方法主要是基于前列腺炎是病原體感染造成的基礎(chǔ)之上。但是由于前列腺炎的病因非常復(fù)雜，到現(xiàn)在為止人們還沒有完全清楚造成前列腺炎癥的所有病因，特別是慢性非細(xì)菌性前列腺炎和前列腺痛，所以該分類方法存在很大的片面性。1995年美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)根據(jù)當(dāng)前對前列腺炎的基礎(chǔ)和臨床研究情況制定了一種顯得更科學(xué)的分類方法，即1型相當(dāng)于傳統(tǒng)方法的ABP，發(fā)病急，臨床表現(xiàn)為明顯的尿路感染癥狀，白細(xì)胞數(shù)量升高，細(xì)菌培養(yǎng)陽性；II型相當(dāng)于傳統(tǒng)方法的CBP，有反復(fù)發(fā)作的尿路感染癥狀，持續(xù)時間長，白細(xì)胞數(shù)量增多；111型慢性前列腺炎/慢性盆骨疼痛綜合癥，相當(dāng)于傳統(tǒng)方法中的CNP/PD，是前列腺疾病中最常見的類型，約占慢性前列腺炎的90%以上，該類型根據(jù)鏡檢結(jié)果又可分為III Α、ΙΙΙ B兩個亞型；IV型即無癥狀性前列腺炎，對不孕不育和血清PSA的升高患者的診斷有很大幫助。該分類方法經(jīng)過臨床實踐相對比較科學(xué)，但對發(fā)病原因和臨床治療缺乏足夠的支持。無論前列腺炎如何分類，目前所用的檢測方法都是鏡檢法，既通過顯微鏡觀察前列腺按摩液中卵磷脂小體、白細(xì)胞數(shù)量來進(jìn)行檢查，這種方法檢測的指標(biāo)較少，不能完全明確患者炎癥的類型和治療過程中的治療效果的評價。而且這種鏡檢方法人為因素對結(jié)果造成的影響較大，如長時間觀察顯微鏡引起的視覺疲勞而造成的漏檢等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種前列腺炎聯(lián)合檢測試劑盒，采用該試劑盒可以從不同角度對前列腺炎進(jìn)行較為客觀的檢測和判斷，并可以對治療效果進(jìn)行科學(xué)的評價。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明可采取下述技術(shù)方案
本發(fā)明所述的前列腺炎聯(lián)合檢測試劑盒，包括標(biāo)本稀釋液、顯色液以及設(shè)置有六個反應(yīng)孔的檢測卡體，所述檢測卡體的六個反應(yīng)孔內(nèi)分別設(shè)置有用于檢測卵磷脂小體、白細(xì)胞酯酶、檸檬酸、鋅、酸性磷酸酶和PH值的固體試劑，其中
檢測卵磷脂小體的固體試劑由硼酸鹽緩沖液、鋅試劑溶液和氯化鋅溶液反應(yīng)后涂覆于載體上，經(jīng)真空冷凍干燥而成；所述硼酸鹽緩沖液的PH為7. (Γ10. 0，其中氯化鉀O. I 100g/L，硼酸0. l 100g/L，氫氧化鈉0. 01 10g/L ;所述鋅試劑溶液中含有O. I IOOg/L的5- (2-羧基苯基)-I-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽；所述氯化鋅溶液中氯化鋅0. ri00g/L ；
檢測白細(xì)胞酯酶的固體試劑由Tris-HCl緩沖液，糖和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液配制后涂覆于載體上，除濕干燥而成；所述Tris-HCl緩沖液的濃度為0. 0Γ2 mol/L, pH·7. (ΓΙΟ. 0，所述糖為蔗糖、葡萄糖、海藻糖或乳糖，濃度為3(T60g/L，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液的濃度為0. 00rimol/L ；
檢測檸檬酸的固體試劑由硫酸鐵銨溶液和磺基水楊酸溶液按1:15的比例配制后涂覆于載體上，除濕干燥而成；其中的硫酸鐵銨溶液為0. OOflmol/L，磺基水楊酸溶液為0.001 lmol/L ；
檢測鋅的固體試劑由硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按10:1的比例反應(yīng)、稀釋后涂覆于載體上，經(jīng)真空冷凍干燥而成；所述硼酸鹽緩沖液包括以下組份氯化鉀0. f 100g/L，硼酸0. f 100g/L，氫氧化鈉0. Of 10g/L，pH值7. (TlO. O ;所述鋅試劑溶液中含有0. f IOOg/L的5- (2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽；
檢測酸性磷酸酶的固體試劑由配制的底物液涂覆于載體上，除濕干燥而成；所述的底物液包括以下組分檸檬酸0. r75g/L,磷酸苯二鈉0. l 90g/L，4-氨基安替比林0. I 65g/L,氫氧化鈉0. I 88g/L ；
檢測PH值的固體試劑由溴百里酚藍(lán)鈉鹽0. 5 100g/L和純化水配制的溶液涂覆于載體上，除濕干燥而成。所述的標(biāo)本稀釋液為生理鹽水，即質(zhì)量百分比濃度為8. 5^9. 0%的氯化鈉水溶液。所述的顯色劑中包括以下組分鐵氰化鉀0. f 100g/L，碳酸氫鈉0. f 100g/L、氫氧化鈉 0. 0ri0g/Lo所述的載體為濾紙、玻璃纖維膜或?qū)游黾?。本發(fā)明的優(yōu)點在于針對前列腺炎具有代表性的六個指標(biāo)聯(lián)合起來在臨床上進(jìn)行檢測，不需要鏡檢，僅根據(jù)標(biāo)本在這六個反應(yīng)孔內(nèi)的顏色變化即可判斷出這六個指標(biāo)的正常與否，為前列腺炎的輔助診斷和初步分型提供了有效幫助，避免了因為檢測人員的視覺疲勞造成的漏檢，易于在臨床上推廣。
具體實施例方式本發(fā)明所述的前列腺炎聯(lián)合檢測試劑盒，包括標(biāo)本稀釋液、顯色液以及設(shè)置有六個反應(yīng)孔的檢測卡體，在檢測卡體的六個反應(yīng)孔內(nèi)分別設(shè)置有用于檢測卵磷脂小體、白細(xì)胞酯酶、檸檬酸、鋅、酸性磷酸酶和pH值的固體試劑，該固體試劑為含有檢測試劑的由濾紙、玻璃纖維膜或?qū)游黾埖容d體制作的試劑墊。六個反應(yīng)孔中試劑墊的具體制作方法如下
I、檢測卵磷脂小體的固體試劑墊由硼酸鹽緩沖液、鋅試劑溶液和氯化鋅溶液反應(yīng)后涂覆于載體上，經(jīng)真空冷凍干燥而成；硼酸鹽緩沖液的PH為7. (Γ10. 0，其中氯化鉀O. I 100g/L，硼酸:0. l 100g/L，氫氧化鈉0. 01 10g/L ;鋅試劑溶液中含有O. I 100g/L的
5-(2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽；氯化鋅溶液中氯化鋅0. ri00g/L ；首先將硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按1:1比例進(jìn)行反應(yīng)，得到的產(chǎn)物記為A，取氯化鋅溶液500 μ L，加入20 μ L生理鹽水，得到的溶液記為B，將A和B按1:5的比例進(jìn)行反應(yīng)，得到的產(chǎn)物記為C，取10 μ L的產(chǎn)物C置于直徑5. 5mm的試劑墊載體上，經(jīng)真空冷凍干燥即可。2、檢測白細(xì)胞酯酶的固體試劑墊由Tris-HCl緩沖液，糖和5_溴_4_氯_3_吲哚乙酸酯溶液配制后涂覆于載體上，除濕干燥(溫度18 25°C，濕度< 30%)而成；其中Tris-HCl緩沖液的濃度為O. Of 2 mol/L, pH 7. (TlO. 0，糖為蔗糖、葡萄糖、海藻糖或乳糖，濃度為3(T60g/L，5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液的濃度為O. 001 lmol/L ；
先制備Tris-HCl緩沖液,再加入海藻糖(或其他糖類)，最后加入5-溴-4-氯-3- Π引哚乙酸酯溶液，得到液體試劑，取10 μ L液體試劑置于直徑5. 5mm的試劑墊載體上，除濕干燥即可。3、檢測檸檬酸的固體試劑墊由硫酸鐵銨溶液(O. 00rimol/L)和磺基水楊酸溶 液(0. OOf lmol/L)按1:15的比例配制后取10 μ L置于直徑5. 5mm的試劑墊載體上，除濕干燥(溫度18 25°C，濕度< 30%)即可。4、檢測鋅的固體試劑墊由硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按10:1的比例反應(yīng)、稀釋后置于直徑5. 5mm的試劑墊載體上，經(jīng)真空冷凍干燥而成；其中的硼酸鹽緩沖液包括以下組份氯化鉀0. I 100g/L，硼酸0. f 100g/L，氫氧化鈉0. 01 10g/L，pH值7. (TlO. O ;鋅試劑溶液中含有0. ri00g/L的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽；
首先制備硼酸鹽緩沖液，將硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按10:1的比例反應(yīng)后，再加入6倍的硼酸鹽緩沖液進(jìn)行稀釋，然后取稀釋后的液體試劑10 μ L置于直徑5. 5_的試劑墊載體上，經(jīng)真空冷凍干燥即可。5、檢測酸性磷酸酶的固體試劑墊將包含有檸檬酸0. r75g/L,磷酸苯二鈉0. l 90g/L，4-氨基安替比林0. l 65g/L，氫氧化鈉0. f 88g/L組分的底物液倍比稀釋2次后取得到的稀釋液10 μ L置于直徑5. 5mm的試劑墊載體上，除濕干燥(溫度18 25°C，濕度(30%)即可。6、檢測pH值的固體試劑墊將0. 5 100g/L溴百里酚藍(lán)鈉鹽和20倍的純化水配制的溶液取 ο μ L置于直徑5. 5mm的試劑墊載體上，除濕干燥(溫度18 25°C，濕度彡30%)即可。本發(fā)明試劑盒所用的標(biāo)本稀釋液為生理鹽水，即質(zhì)量百分比濃度為8. 5^9. 0%的氯化鈉水溶液。所用的顯色劑中包括以下組分鐵氰化鉀0. f 100g/L，碳酸氫鈉0. f 100g/L、氫氧化鈉 0. 0ri0g/Lo本試劑盒的檢測方法如下
(I )、標(biāo)本預(yù)處理將EPS (前列腺按摩液)使用標(biāo)本稀釋液稀釋(1:4)，記為A，再用生理鹽水稀釋(1:20)，記為B。(2)、加樣第1、2、3、4、6孔中加六液，25口 I/孔；第5孔(酸性磷酸酶檢測孔)中加B 液 25 μ I0(3)、溫育37°C，15min。(4)、加顯色液在第五孔(酸性磷酸酶檢測孔)中加顯色液25 μ I。
(5)、記錄結(jié)果觀察顏色變化，和試劑盒提供的比色卡進(jìn)行比對，判讀結(jié)果 第I孔，卵磷脂小體指標(biāo)陰性顯粉紅色，陽性顯藍(lán)色；
第2孔，白細(xì)胞指標(biāo)陰性顯無色，弱陽性顯綠色，強陽性顯藍(lán)色； 第3孔，檸檬酸指標(biāo)陰性顯米黃色，陽性顯橙紅色；
第4孔，鋅指標(biāo)陰性顯藍(lán)色，陽性顯桔紅色；
第5孔，酸性磷酸酶指標(biāo)陰性顯紅色，弱陽性顯橙紅色，強陽性顯黃色；
第6孔，pH指標(biāo)陰性顯黃色，弱陽性顯綠色，強陽性顯藍(lán)色。
權(quán)利要求
1.一種前列腺炎聯(lián)合檢測試劑盒，包括標(biāo)本稀釋液、顯色液以及設(shè)置有六個反應(yīng)孔的檢測卡體，其特征在于所述檢測卡體的六個反應(yīng)孔內(nèi)分別設(shè)置有用于檢測卵磷脂小體、白細(xì)胞酯酶、檸檬酸、鋅、酸性磷酸酶和PH值的固體試劑，其中 檢測卵磷脂小體的固體試劑由硼酸鹽緩沖液、鋅試劑溶液和氯化鋅溶液反應(yīng)后涂覆于載體上，經(jīng)真空冷凍干燥而成；所述硼酸鹽緩沖液的PH為7. (Γ10. 0，其中氯化鉀O.I 100g/L，硼酸:0. l 100g/L，氫氧化鈉0. 01 10g/L ;所述鋅試劑溶液中含有O. I IOOg/L的5- (2-羧基苯基)-I-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽；所述氯化鋅溶液中氯化鋅0. ri00g/L ； 檢測白細(xì)胞酯酶的固體試劑由Tris-HCl緩沖液，糖和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液配制后涂覆于載體上，除濕干燥而成；所述Tris-HCl緩沖液的濃度為0. 0Γ2 mol/L, pH7.(ΓΙΟ. 0，所述糖為蔗糖、葡萄糖、海藻糖或乳糖，濃度為3(T60g/L，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液的濃度為0. 00rimol/L ； 檢測檸檬酸的固體試劑由硫酸鐵銨溶液和磺基水楊酸溶液按1:15的比例配制后涂覆于載體上，除濕干燥而成；其中的硫酸鐵銨溶液為0. OOflmol/L，磺基水楊酸溶液為0.001 lmol/L ； 檢測鋅的固體試劑由硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按10:1的比例反應(yīng)、稀釋后涂覆于載體上，經(jīng)真空冷凍干燥而成；所述硼酸鹽緩沖液包括以下組份氯化鉀0. f 100g/L，硼酸0. f 100g/L，氫氧化鈉0. Of 10g/L，pH值7. (TlO. O ;所述鋅試劑溶液中含有0. f IOOg/L的5- (2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽； 檢測酸性磷酸酶的固體試劑由配制的底物液涂覆于載體上，除濕干燥而成；所述的底物液包括以下組分檸檬酸0. r75g/L,磷酸苯二鈉0. l 90g/L，4-氨基安替比林0.I 65g/L,氫氧化鈉0. I 88g/L ； 檢測PH值的固體試劑由溴百里酚藍(lán)鈉鹽0. 5 100g/L和純化水配制的溶液涂覆于載體上，除濕干燥而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的前列腺炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于所述的標(biāo)本稀釋液為生理鹽水。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的前列腺炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于所述的顯色劑中包括以下組分鐵氰化鉀0.廣100g/L，碳酸氫鈉0. l 100g/L、氫氧化鈉0.01 10g/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的前列腺炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于所述的載體為濾紙、玻璃纖維膜或?qū)游黾垺?br> 全文摘要
本發(fā)明公開了一種前列腺炎聯(lián)合檢測試劑盒，包括標(biāo)本稀釋液、顯色液以及設(shè)置有六個反應(yīng)孔的檢測卡體，在檢測卡體的六個反應(yīng)孔內(nèi)分別設(shè)置有用于檢測卵磷脂小體、白細(xì)胞酯酶、檸檬酸、鋅、酸性磷酸酶和pH值的固體試劑。本發(fā)明的優(yōu)點在于針對前列腺炎具有代表性的六個指標(biāo)聯(lián)合起來在臨床上進(jìn)行檢測，不需要鏡檢，僅根據(jù)標(biāo)本在這六個反應(yīng)孔內(nèi)的顏色變化即可判斷出這六個指標(biāo)的正常與否，為前列腺炎的輔助診斷和初步分型提供了有效幫助，避免了因為檢測人員的視覺疲勞造成的漏檢，易于在臨床上推廣。
文檔編號G01N21/78GK102866153SQ201210370700
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者婁斌, 張中洲, 孫運榮, 馬建軍, 付光宇, 吳學(xué)煒 申請人:鄭州安圖綠科生物工程有限公司