專利名稱：一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒的制作方法
一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種診斷疾病的試劑盒，具體地，涉及一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒。
背景技術(shù)：
自身免疫是機(jī)體免疫系統(tǒng)對自身抗原發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生自身抗體和自身應(yīng)答T細(xì)胞。在正常生理狀態(tài)下，自身免疫可以及時清除衰老死亡的自身細(xì)胞，維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。 在某些病理的狀態(tài)下，可能會產(chǎn)生直接和間接的破壞自身組織的自身應(yīng)答性T細(xì)胞和自身抗體，并引起相應(yīng)器官組織的病變和功能障礙，稱為自身免疫性疾病(Autoimmune disease ，AID)。常見的自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化癥、多發(fā)性皮炎/肌炎、混合性結(jié)締組織病、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、青少年糖尿病、原發(fā)性血小板紫癜、自身免疫性溶血性貧血、潰瘍性結(jié)腸炎以及許多種皮膚病、慢性肝病等。
AID的臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變，在臨床上常造成漏診和誤診；疾病常慢性遷延，進(jìn)行性加劇，最后造成不可逆的器質(zhì)性或功能損害，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，甚至危及生命。而 AID的早期診斷和治療將顯著的控制病情發(fā)展，使病人的生活質(zhì)量顯著提高，可像正常人一樣生活。
自身抗體檢測對與自身免疫疾病的診斷和治療監(jiān)測都有重要意義，很多自身抗體已經(jīng)被寫入了 AID診斷的國際標(biāo)準(zhǔn),其中最重要的是抗核抗體(antinuclear antibodies, AM)。ANA是抗細(xì)胞核抗原成分的自身抗體的總稱，本專利包含了常見抗核抗體的靶成分共 17 種:dsDNA、核小體、SmD I、核糖體 PO 蛋白、組蛋白、UI snRNP、Ro/SS-A (52KD)、Ro/SS-A (60 KD)、La/SS-B、Sc I-70、CENP-B, Jo_l、ΑΜΑ-Μ2、PM-Sc I, PCNA, Mi-2 和 Ku。這些自身抗體均是常見的有明確臨床意義的。目前國內(nèi)外還沒有同時檢測17種抗核抗體的診斷試劑。
對于自身免疫疾病診斷方法多采用間接免疫熒光分析法(IFA)、酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)和免疫印跡，但各有其不足。間接免疫熒光分析法是檢測自身抗體的常用技術(shù)。其實(shí)驗(yàn)基質(zhì)為Hep-2細(xì)胞或不同靈長類肝臟組織冰凍切片，含有完整的抗原譜，適合篩查試驗(yàn)。但是有如下缺點(diǎn)不能作為確診依據(jù)；結(jié)果的判斷需要有豐富的經(jīng)驗(yàn)；滴度的意義大于核型，但滴度的判定主觀性強(qiáng)；靈敏度較低，特異性也不高。
酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)具有靈敏度高，可作為篩選實(shí)驗(yàn)，也可作為確診依據(jù)，還可定量測定，檢測病情和治療效果。但一次試驗(yàn)只能檢測單一指標(biāo)，通量低，檢測成本較高， 在自身免疫疾病的診斷應(yīng)用推廣方面存在著極大的局限性。Western blot(WB)是在凝膠電泳和免疫分析技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種免疫檢測技術(shù)，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性的優(yōu)點(diǎn)，比較適合發(fā)現(xiàn)未知的抗體。而對于檢測已知的抗體，由于使用了天然的混合抗原，實(shí)驗(yàn)過程中經(jīng)常出現(xiàn)找不到目標(biāo)條帶和條帶偏移的問題， 給結(jié)果的判讀造成了不少困難，極易誤判和漏判。同時WB使用時間長，也不適合在臨床檢驗(yàn)中推廣。有人將WB改進(jìn)，直接將純化抗原包被于硝酸纖維素膜上，然后進(jìn)行免疫反應(yīng)檢測抗體，形成了改良的免疫印跡方法。目前已有同時檢測15個自身抗體的膜條，通過將純化抗原平行包被到硝酸纖維膜，封閉非特異性反應(yīng)區(qū)。在第一次溫育時，已稀釋的血清與檢測膜條反應(yīng)，不同的樣本或質(zhì)控在不同的孵育槽間進(jìn)行。如果樣本陽性，特異性的IgG (也包括IgA和IgM)與相應(yīng)抗原結(jié)合。為檢測已結(jié)合的抗體，加入酶標(biāo)抗人IgG (酶結(jié)合物)進(jìn)行第二次溫育，然后加入酶底物，孵育顯色，加入終止液，結(jié)果判讀。優(yōu)點(diǎn)是可實(shí)現(xiàn)高通量的檢測，由于使用了純化抗原，特異性和靈敏度比傳統(tǒng)的Western blot高了不少。
對于現(xiàn)有的試劑盒，存在下述缺點(diǎn)I、所檢測的抗體僅有15個，并且某些抗原為早期研究的成果，目前已有新的更有意義的靶抗原。
2、所使用的純化抗原多為從天然組織中提取，純度的不足O 90%)依然影響了檢測的靈敏度和特異性。
3、膜條背景深，有時比陽性條帶還要深，影響了結(jié)果的可靠性。
4、不同的抗原條帶寬度不一，條帶間隔不一，影響了結(jié)果的準(zhǔn)確判讀。
5、同類產(chǎn)品如CN200810132304. 8公開的試劑盒，沒有臨界質(zhì)控帶，結(jié)果的判讀需要另做一個對照膜條，增加了實(shí)驗(yàn)的成本，同時由于槽與槽之間反應(yīng)環(huán)境存在一定的差異， 可能造成假陽性或假陰性。目前有的相關(guān)產(chǎn)品也有臨界質(zhì)控帶，但一條質(zhì)控帶只能對一個檢測條帶或項(xiàng)目的結(jié)果進(jìn)行判讀，目前尚沒有用一個臨界質(zhì)控帶同時對兩個乃至更多的條帶進(jìn)行判讀的應(yīng)用。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒，該試劑盒的質(zhì)控帶可以同時對兩個乃至更多的檢測條帶起到判讀的作用。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒，包括膜條、酶標(biāo)液、底物和濃縮洗滌孵育液，膜條由載片和依次固定在載片上的抗原條帶、臨界質(zhì)控帶、功能質(zhì)控線構(gòu)成，抗原條帶由dsDNA、核小體、SmDl、核糖體 PO 蛋白、組蛋白、Ul snRNP、Ro/SS-A(52KD)、Ro/SS-A(60 KD)、La/SS-B, Scl-70、CENP-B, Jo-l、AMA-M2、PM-Scl、PCNA、Mi-2和Ku中的至少兩個彼此獨(dú)立的劃線到硝酸纖維素膜或尼龍膜上形成。
該方法中，功能質(zhì)控線屬于現(xiàn)有技術(shù)，其目的是用于判斷該膜條的一次反應(yīng)是否有效，步驟I)的陰性和步驟4)的陽性是相對抗原條帶中的抗原而言的，具有這些抗原所能檢測的抗體為陽性，不具有這些抗原所能檢測的抗體為陰性。本方案的抗原條帶中都每個抗原都彼此獨(dú)立的劃線到硝酸纖維素膜或尼龍膜上形成一個獨(dú)立的抗原檢測線，這些所有的抗原檢測線統(tǒng)稱為抗原條帶，步驟I中的“取膜條對每一個樣本進(jìn)行檢測，掃描得到膜條中每一個抗原所檢測抗體的灰度值”，這里的灰度值為每一個抗原檢測線檢測樣品后掃描得到的灰度值。本方案的發(fā)明點(diǎn)在于臨界質(zhì)控帶同時為抗原條帶中的至少兩個抗原的對照條帶；通過設(shè)置了一個可以同時對兩個乃至更多的檢測條帶(抗原條帶)起到判讀的臨界質(zhì)控帶，隨著檢測條帶的增多，每增加一條被檢測條帶，都要對重新進(jìn)行完整的臨界質(zhì)控值確定實(shí)驗(yàn)，同時實(shí)驗(yàn)難度顯著加大。通常，確定一個臨界質(zhì)控值需要許多次實(shí)驗(yàn)，才能最終確定。
所述臨界質(zhì)控帶的成分為20ng 20y g/mL的人IgG?，F(xiàn)有技術(shù)中有選用抗羊IgG作為對照線的記載，如CN200810132304. 8中，但是該專利中的每一個抗原條帶上都需要劃一個抗羊IgG的對照線，這樣制作工藝比較比較繁瑣，而且成本較高，在CN200810132304. 8 中，沒有關(guān)于同一對照線可以用于2個或者2個以上的抗原條帶判讀的記載。本發(fā)明通過創(chuàng)造性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，選擇一定濃度范圍的人IgG作為臨界質(zhì)控帶，可以清楚、準(zhǔn)確的對2個或者2個以上的抗原條帶進(jìn)行判讀。
作為優(yōu)選,所述臨界質(zhì)控帶的成分為200ng 2y g/mL的人IgG。
所述臨界質(zhì)控帶的臨界質(zhì)控值確定方法包括下述步驟1)選擇m個確診為陰性的新鮮血液標(biāo)本作為樣本，膜條的抗原條帶中具有η個抗原，取膜條對每一個樣本進(jìn)行檢測， 掃描得到膜條中每一個抗原所檢測抗體的灰度值，將m個樣本中相同的抗原所檢測抗體的灰度值作為一組數(shù)值得到η組數(shù)值，分別計(jì)算這η組數(shù)值的平均值Mp、標(biāo)準(zhǔn)差SDp和各個抗原所檢測抗體的臨界質(zhì)控值COp，其中COp= (MP+2XSDP)，m、η、ρ均為自然數(shù)且m彡120， n^2,n^p^l ;2)將各個抗原所檢測抗體的臨界質(zhì)控值COp進(jìn)行處理，計(jì)算其平均值M、標(biāo)準(zhǔn)差SD、變異系數(shù)CV ;3)如CV ( 10%，則可得到膜條的臨界質(zhì)控值CO，其中C0=(M+2XSD); 如CV > 10%，調(diào)整印跡抗原量重復(fù)步驟I)、步驟2)重新測定，直至CV ( 10% ；4)選擇確診為陽性的新鮮血液標(biāo)本作為樣本，取膜條對每一個樣本進(jìn)行檢測，掃描得到膜條中每一個抗原所檢測抗體的灰度值，將其與膜條的臨界質(zhì)控值CO比較，如所有的樣本灰度值均不小于CO，則CO有效；如有一個或以上的樣本灰度值小于CO，需再次測定驗(yàn)證；如仍有一個或以上的樣本灰度值小于CO，則調(diào)整印跡抗原量重復(fù)步驟I)、步驟2)、步驟3)重新確定膜條的臨界質(zhì)控值CO。在確定臨界質(zhì)控值的方法中，樣本數(shù)量和抗原個數(shù)可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行選擇。
根據(jù)已經(jīng)確定的膜條的臨界質(zhì)控值，來調(diào)節(jié)臨界質(zhì)控帶包被人IgG的濃度。具體確定方法為將一定濃度的人IgG溶于Tris或H印es緩沖液中，然后劃線于硝酸纖維素膜上制備成成品膜條，且膜條上僅包被臨界質(zhì)控帶；隨機(jī)選取30個膜條用本試劑盒進(jìn)行檢測，并掃描灰度，計(jì)算30次測定的均值Ms、標(biāo)準(zhǔn)差SDs和變異系數(shù)CVS，其中CVs=Ms/SDs。臨界質(zhì)控帶合格的標(biāo)準(zhǔn)為1)0. 97XC0 ^ Ms ^ I. 03XCO ；2)CVs < 5%;如果不符合其中的任意一個，則需重新調(diào)整濃度進(jìn)行本步驟所述的所有實(shí)驗(yàn)，直至得到合格的臨界質(zhì)控帶，此時的人IgG包被濃度即為臨界質(zhì)控帶的包被濃度。最終確定臨界質(zhì)控帶的包被濃度和包被工藝。根據(jù)確定的膜條的臨界質(zhì)控值，技術(shù)人員通過本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)手段，可以換算出合適的人IgG的濃度，采用現(xiàn)有的包被工藝，即可制備臨界質(zhì)控帶。
所述酶標(biāo)液為辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊/鼠/兔抗人IgG抗體。
所述底物為質(zhì)量百分比濃度為O. 02%-2%的魯米諾或質(zhì)量百分比濃度為O.002%-0. 2%的過氧化氫構(gòu)成的單一試劑。
所述抗原條帶相互平行并且每個抗原條帶寬度均一，各相鄰抗原條帶之間間隔等寬。
所述抗原條帶寬度為O.相鄰抗原條帶之間間隔為2mm-20mm。
所述自身免疫性疾病包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡、混合性結(jié)締組織病、干燥綜合癥、系統(tǒng)性硬皮病、多發(fā)性肌炎/皮肌炎、重疊綜合征。
所述核糖體PO 蛋白、Ul snRNP、Ro/SS-A(52KD)、La/SS-B、Scl-70、CENP-B、Jo-1、 PM-Scl、PCNA、Mi-2和Ku由昆蟲細(xì)胞sf9表達(dá)并純化制得；dsDNA、核小體、組蛋白、Ro/SS-A(60 KD)和AMA-M2是從天然組織中提取制得；SmDl是人工合成的多肽。
與現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明的有益效果是I、本發(fā)明具有獨(dú)創(chuàng)性的臨界質(zhì)控帶，一個臨界質(zhì)控帶可以同時對兩個乃至更多的檢測條帶(抗原條帶)起到判讀的作用，將顯色條帶與臨界質(zhì)控帶的顏色的深淺比較即可判斷結(jié)果陽性顏色比臨界質(zhì)控帶相同或深；陰性顏色比臨界質(zhì)控帶淺。
2、本發(fā)明還改良了單試劑底物，加入底物后不需終止。
3、每個抗原條帶寬度均一，條帶間隔等寬，膜條背景干凈，使結(jié)果判定更加簡單可O


圖I是現(xiàn)有膜條的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是本發(fā)明膜條的結(jié)構(gòu)示意圖；圖3是臨界質(zhì)控值確定流程圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不僅限于下述實(shí)施例。
實(shí)施例I :參見圖I至圖3所示，圖2中的CO質(zhì)控線即為臨界質(zhì)控帶；本實(shí)施例的檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒包括膜條、酶標(biāo)液、底物和濃縮洗滌孵育液，其中酶標(biāo)液、底物和濃縮洗滌孵育液的選擇和范圍都屬于現(xiàn)有技術(shù)，對于酶標(biāo)液、底物和濃縮洗滌孵育液而言，選用現(xiàn)有技術(shù)的產(chǎn)品也可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案。
膜條由載片和依次固定在載片上的抗原條帶、臨界質(zhì)控帶、功能質(zhì)控線構(gòu)成，抗原條帶由 dsDNA、核小體、SmDI、核糖體 PO 蛋白、組蛋白、Ul snRNP、Ro/SS-A (52KD)、Ro/SS-A (60 KD)、La/SS-B、Scl-70、CENP-B、Jo-l、AMA-M2、PM-Scl、PCNA、Mi-2 和 Ku 中的至少兩個彼此獨(dú)立的劃線到硝酸纖維素膜或尼龍膜上形成，本實(shí)施例的臨界質(zhì)控帶的成分為20ng 20y g/ mL的人IgG0
本試劑盒創(chuàng)造性的加入了能同時最多對17個被檢抗體(抗原條帶)進(jìn)行陰陽性判定的臨界質(zhì)控帶。具體的流程見圖3的流程圖所示。臨界質(zhì)控帶的臨界質(zhì)控值確定方法包括下述步驟1)選擇m個確診為陰性的新鮮血液標(biāo)本作為樣本，膜條的抗原條帶中具有η個抗原，取膜條對每一個樣本進(jìn)行檢測，掃描得到膜條中每一個抗原所檢測抗體的灰度值，將m個樣本中相同的抗原所檢測抗體的灰度值作為一組數(shù)值得到η組數(shù)值，分別計(jì)算這η組數(shù)值的平均值Mp、標(biāo)準(zhǔn)差SDp和各個抗原所檢測抗體的臨界質(zhì)控值COp，其中COp= (MP+2XSDP), m、 η、P均為自然數(shù)且m彡120，η彡2，η彡ρ彡I ;2)將各個抗原所檢測抗體的臨界質(zhì)控值COp進(jìn)行處理，計(jì)算其平均值Μ、標(biāo)準(zhǔn)差SD、變異系數(shù)CV ；3)如CV( 10%，則可得到膜條的臨界質(zhì)控值CO，其中CO= (M+2XSD);如CV > 10%，調(diào)整印跡抗原量重復(fù)步驟I)、步驟2)重新測定，直至CV ^ 10% ；4)選擇確診為陽性的新鮮血液標(biāo)本作為樣本，取膜條對每一個樣本進(jìn)行檢測，掃描得到膜條中每一個抗原所檢測抗體的灰度值，將其與膜條的臨界質(zhì)控值CO比較，如所有的樣本灰度值均不小于CO，則CO有效；如有一個或以上的樣本灰度值小于CO，需再次測定驗(yàn)證； 如仍有一個或以上的樣本灰度值小于CO，則調(diào)整印跡抗原量重復(fù)步驟I)、步驟2)、步驟3) 重新確定膜條的臨界質(zhì)控值CO。
總的來說，臨界質(zhì)控值的確定有兩個關(guān)鍵點(diǎn)，第一是17個條帶的灰度上限的CV不能超過10%，否則需要重新調(diào)整相應(yīng)抗原的印跡濃度后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。第二是用陽性樣本來驗(yàn)證臨界質(zhì)控帶，如果兩次實(shí)驗(yàn)?zāi)硞€樣本的灰度都小于臨界質(zhì)控值，那么需要重新做整個實(shí)驗(yàn)。并且隨著檢測條帶的增多，每增加一條被檢測條帶，都要對重新進(jìn)行完整的臨界質(zhì)控值確定實(shí)驗(yàn)，同時實(shí)驗(yàn)難度顯著加大。通常，確定一個臨界質(zhì)控值需要許多次實(shí)驗(yàn)，才能最終確定。
實(shí)施例2 本實(shí)施例是對由dsDNA、核小體、SmDU核糖體PO蛋白、組蛋白、Ul snRNP、Ro/ SS-A (52KD)、Ro/SS-A (60 KD)、La/SS-B, Scl-70、CENP-B、Jo-I、AMA-M2、PM-Scl、PCNA, Mi-2 和Ku這17個彼此獨(dú)立的劃線到硝酸纖維素膜或尼龍膜上形成的抗原條帶進(jìn)行試驗(yàn)測定。 在實(shí)施例I的基礎(chǔ)上，為了使結(jié)果判定更加簡單可靠，將每個抗原條帶寬度均一設(shè)置，條帶間隔等寬，抗原條帶寬度為O.相鄰抗原條帶之間間隔為2mm-20mm,膜條背景干凈，并且采用改良的單試劑底物，加入底物后不需終止，底物為魯米諾O. 02%-2%或過氧化氫O. 002%-0. 2%構(gòu)成的單一試劑；所有的印跡抗原都是高度純化的，且采用了國際最新的包被工藝，具體包被方法見后述。
臨界質(zhì)控值的確定I)確定各抗體的臨界質(zhì)控值隨機(jī)選取臨床確診為陰性的新鮮血清、血漿標(biāo)本125份，用本實(shí)施例的試劑盒檢測。測定其抗原條帶所檢測的相應(yīng)抗體的灰度值，計(jì)算125份標(biāo)本中各相同抗體的灰度值均值Mp 和標(biāo)準(zhǔn)差SDp，可得到每個抗體95%的置信上限(MP+2XSDP)，即為各抗體的臨界質(zhì)控值，記作C0P。結(jié)果見下表,本實(shí)施例m=125, n=p=17。
權(quán)利要求
1.一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒，包括膜條、酶標(biāo)液、底物和濃縮洗滌孵育液，其特征在于，膜條由載片和依次固定在載片上的抗原條帶、臨界質(zhì)控帶、功能質(zhì)控線構(gòu)成，抗原條帶由dsDNA、核小體、SmDl、核糖體PO蛋白、組蛋白、Ul snRNP、Ro/ SS-A (52KD)、Ro/SS-A (60 KD)、La/SS-B、Sc I-70, CENP-B, Jo-I、ΑΜΑ-Μ2、PM-Scl、PCNA, Mi-2 和Ku中的至少兩個彼此獨(dú)立的劃線到硝酸纖維素膜或尼龍膜上形成。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒，其特征在于，所述臨界質(zhì)控帶的成分為20ng 20y g/mL的人IgG。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒，其特征在于，所述臨界質(zhì)控帶的成分為200ng 2y g/mL的人IgG。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3任一項(xiàng)所述的一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒，其特征在于，所述臨界質(zhì)控帶的臨界質(zhì)控值確定方法包括下述步驟1)選擇m個確診為陰性的新鮮血液標(biāo)本作為樣本，膜條的抗原條帶中具有η個抗原，取膜條對每一個樣本進(jìn)行檢測，掃描得到膜條中每一個抗原所檢測抗體的灰度值，將m個樣本中相同的抗原所檢測抗體的灰度值作為一組數(shù)值得到η組數(shù)值，分別計(jì)算這η組數(shù)值的平均值Mp、標(biāo)準(zhǔn)差SDp和各個抗原所檢測抗體的臨界質(zhì)控值COp，其中COp= (MP+2XSDP), m、 η、P均為自然數(shù)且m彡120，η彡2，η彡ρ彡I ;2)將各個抗原所檢測抗體的臨界質(zhì)控值COp進(jìn)行處理，計(jì)算其平均值Μ、標(biāo)準(zhǔn)差SD、變異系數(shù)CV ；3)如CV( 10%，則可得到膜條的臨界質(zhì)控值CO，其中CO= (M+2XSD);如CV > 10%，調(diào)整印跡抗原量重復(fù)步驟I)、步驟2)重新測定，直至CV ^ 10% ；4)選擇確診為陽性的新鮮血液標(biāo)本作為樣本，取膜條對每一個樣本進(jìn)行檢測，掃描得到膜條中每一個抗原所檢測抗體的灰度值，將其與膜條的臨界質(zhì)控值CO比較，如所有的樣本灰度值均不小于CO，則CO有效；如有一個或以上的樣本灰度值小于CO，需再次測定驗(yàn)證； 如仍有一個或以上的樣本灰度值小于CO，則調(diào)整印跡抗原量重復(fù)步驟I)、步驟2)、步驟3) 重新確定膜條的臨界質(zhì)控值CO。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒，其特征在于，所述臨界質(zhì)控帶確定方法為根據(jù)確定的膜條的臨界質(zhì)控值調(diào)節(jié)臨界質(zhì)控帶包被人 IgG的濃度。
6.根據(jù)權(quán)利要求I至3任一項(xiàng)所述的一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒，其特征在于，所述底物為質(zhì)量百分比濃度為O. 02%-2%的魯米諾或質(zhì)量百分比濃度為O.002%-0. 2%的過氧化氫構(gòu)成的單一試劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求I至3任一項(xiàng)所述的一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒，其特征在于，所述抗原條帶相互平行并且每個抗原條帶寬度均一，各相鄰抗原條帶之間間隔等寬。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒,其特征在于，所述抗原條帶寬度為O.相鄰抗原條帶之間間隔為2mm-20mm。
9.根據(jù)權(quán)利要求I至3任一項(xiàng)所述的一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒，其特征在于，所述自身免疫性疾病包括統(tǒng)性紅斑狼瘡、混合性結(jié)締組織病、干燥綜合癥、 系統(tǒng)性硬皮病、多發(fā)性肌炎/皮肌炎、重疊綜合征。
10.根據(jù)權(quán)利要求I至3任一項(xiàng)所述的一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒，其特征在于，所述核糖體 PO 蛋白、Ul snRNP、Ro/SS-A (52KD)、La/SS-B, Sc I-70、CENP-B、 Jo-I、PM-Scl、PCNA、Mi-2和Ku由昆蟲細(xì)胞sf9表達(dá)并純化制得；所述dsDNA、核小體、組蛋白、Ro/SS-A (60 KD)和AMA-M2是從天然組織中提取制得；所述SmDl是人工合成的多肽。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測自身免疫疾病相關(guān)抗核抗體譜的試劑盒。該試劑盒包括膜條、酶標(biāo)液、底物和濃縮洗滌孵育液，膜條由載片和依次固定在載片上的抗原條帶、臨界質(zhì)控帶、功能質(zhì)控線構(gòu)成，抗原條帶由dsDNA、核小體、SmD1、核糖體P0蛋白、組蛋白、U1snRNP、Ro/SS-A(52KD)、Ro/SS-A(60KD)、La/SS-B、Scl-70、CENP-B、Jo-1、AMA-M2、PM-Scl、PCNA、Mi-2和Ku中的至少兩個彼此獨(dú)立的劃線到硝酸纖維素膜或尼龍膜上形成。本發(fā)明具有獨(dú)創(chuàng)性的臨界質(zhì)控帶，一個臨界質(zhì)控帶可以同時對兩個乃至更多的檢測條帶(抗原條帶)起到判讀的作用，結(jié)果判定更加簡單可靠。
文檔編號G01N33/558GK102937648SQ201210456019
公開日2013年2月20日 申請日期2012年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月14日
發(fā)明者李想, 周帥, 何濤濤, 陳洪, 鄭麗, 陳衛(wèi), 陳川 申請人:四川省新成生物科技有限責(zé)任公司