專利名稱：燈盞細辛制劑中四種有效成分含量同時檢測的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種燈盞細辛制劑中綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩?、燈盞花乙素這四種有效成分含量同時檢測的方法。
背景技術(shù)：
燈盞細辛始載于《滇南本草》，習稱燈盞花，因花似燈盞，根似細辛而得名。又名燈盞菊、細辛草、土細辛、地朝陽、雙葵花、東菊、地頂草(云南)，為菊科植物短葶飛蓬(Erigeron breviscapus)的干燥全草,主產(chǎn)于云南、四川、貴州、廣西、湖南、西藏等省區(qū)。燈盞細辛性味“甘、溫、微苦、甘辛”，具有散寒解表、祛風除濕、活血化瘀、通經(jīng)活絡、止痛的功效。它作為治療和預防心血管等疾病具有特殊療效的植物藥材，市場前景廣闊，經(jīng)濟價值很高?！吨袊幍洹?977年版曾予以收載，2005版又重新收載。自上世紀70年代起燈盞細辛制劑就已經(jīng)開始用于臨床。燈盞細辛液體制劑是以燈盞花為原料提取的含有酚酸類及黃酮類化合物等活性成分的浸膏，加入輔料配制而成的合劑、口服液、糖漿劑和滴眼劑。合劑、口·服液、糖漿劑對治療淤血證腦梗賽所致偏癱、風濕痛、冠心病心絞痛、眼底視網(wǎng)膜靜脈阻塞，血管炎性皮膚病等病癥有良好的療效。滴眼劑對治療白內(nèi)障等眼類疾病療效獨到。以燈盞細辛合劑為代表的口服液制劑現(xiàn)已證實對于治療缺血性腦血管疾病效果顯著。燈盞細辛液體制劑相比其他燈盞花口服制劑，有口感適宜，分散度大，吸收快，能較迅速的發(fā)揮療效，服用及攜帶方便等優(yōu)點，最主要的還有，其原料采用的是燈盞花的提取液，盡可能的保留燈盞細辛的兩大主要活性成分，即酚酸類和黃酮類化合物。這也是燈盞花液體制劑在療效上比單純以燈盞花素為原料的口服制劑有優(yōu)勢的地方。黃酮類以燈盞花素為代表，酚酸類包括咖啡酸、綠原酸、二咖啡?；鼘幩嵯盗械龋瑑纱箢惓煞值耐瑫r存在導致產(chǎn)品有比較顯著的抗炎保肝、抗氧化、抗凝血、擴張腦血管、降低腦血管阻力，增加腦血流量、防治微循障礙、抗心肌梗塞，增加冠動脈流量等多種生物活性。目前，燈盞細辛液體制劑系列產(chǎn)品的現(xiàn)行質(zhì)量標準擬定均比較粗糙，例如燈盞細辛合劑的現(xiàn)行標準(標準號YBZ00612004-2010Z):采用分光光度法測定總黃酮含量、液相色譜方法測定燈盞花乙素(又名野黃芩苷)含量、用燈盞細辛對照藥材和咖啡酸對照品進行薄層色譜法鑒別。該標準重點控制黃酮類物質(zhì)的質(zhì)量情況，由于薄層色譜法方法本身僅能定性檢測，無法定量檢測，因此無法清楚了解酚酸類成分的質(zhì)量情況，方法薄弱，可控性差。另外制劑中的重要活性成分如綠原酸、二咖啡酰基奎寧酸等也沒有方法進行質(zhì)量控制，因此，有必要對現(xiàn)有的質(zhì)量標準的控制方法進行進一步的改進。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種燈盞細辛液體制劑中四種有效成分含量同時檢測的方法，能進一步清楚燈盞細辛液體制劑中的酚酸類和黃酮類這兩大類重要的有效成分含量情況，利于產(chǎn)品的質(zhì)量控制，保證產(chǎn)品工藝的穩(wěn)定性，確保不同批次的產(chǎn)品臨床效果一致。本發(fā)明以綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩?、燈盞花乙素為指標成分，建立了采用高效液相色譜法同時測定燈盞細辛液體制劑中這四種化合物含量的方法。具體檢測方法如下
I)對照品溶液的制備取綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩帷舯K花乙素對照品加甲醇溶解制成每ml含綠原酸2-6(^g/ml、含咖啡酸3. l_93Pg/ml、含1，3-0- 二咖啡?？鼘幩酙. 2-36Pg/ml、含燈盞花乙素10-30(^g/ml的對照品溶液，備用。2)供試品溶液的制備取I mL或Ig燈盞細辛制劑于IOmL量瓶中，加入純化水4ml,甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液；
3)4種有效成分含量測定分別吸取對照品溶液和供試品溶液各10 -20μ ，注入液相色譜儀中，測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得；
其中液相色譜儀用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈或甲醇中的一種或幾種為流動相Α，0. 05% -I. 0%的甲酸或乙酸或磷酸中的一種或幾種的水溶液為流動相B，按以下梯度洗脫
時間O IOmin,比例7% 9% A ;
時間10 24min,比例8% 12% A ;
時間24 37min,比例9% 16% A ;
時間37 57min,比例10% 24% A ；
時間57 60min,比例24% 7% A ；
流速每分鐘O. 5-2mL ;檢測波長327nm ;柱溫30_40°C，綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩?、燈盞花乙素的理論塔板數(shù)不低于5000，與其他峰的分離度應大于I. 5。本發(fā)明的方法適用于燈盞細辛制劑中的燈盞細辛口服液、糖漿劑和滴眼劑這三種劑型本身及提取的原料浸膏，并且口服液和合劑的無糖和有糖兩種規(guī)格也同樣適用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較具有以下優(yōu)點燈盞細辛液體制劑的現(xiàn)行標準均比較粗糙，大多采用液相方法測定燈盞花乙素的含量，用燈盞細辛對照藥材和咖啡酸薄層色譜鑒另IJ。該標準僅控制黃酮類物質(zhì)燈盞花乙素的質(zhì)量，薄層方法卻無法清楚了解合劑中的酚酸類的質(zhì)量情況。本方法選擇了綠原酸、咖啡酸、I，3-0- 二咖啡?？鼘幩帷舯K花乙素這四個成分，采用高效液相色譜法同時進行測定。方法操作簡單，穩(wěn)定可靠，可作為企業(yè)內(nèi)部質(zhì)量控制的方法，現(xiàn)行標準的補充，保證產(chǎn)品的工藝穩(wěn)定性，確保不同批次的產(chǎn)品臨床效果一致。該方法專屬性強、精密度高、重復性好、準確度高、的耐用性好，適用于燈盞細辛液體制劑中綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩帷舯K花乙素這四個組分含量同時的測定。由于燈盞細辛合劑、口服液、糖漿劑和滴眼劑的原料的來源、提取方法均一致，雖然本文僅附上合劑的研究過程，但通過實際各個品種的方法學驗證，可以確定本發(fā)明的方法同樣適用于口服液、糖漿劑和滴眼劑這三種劑型本身及提取的原料浸膏，并且口服液和合劑的無糖和有糖兩種規(guī)格也同樣適用。


圖I為溶劑空白HPLC色譜圖。圖2為有糖型合劑陰性樣品HPLC色譜圖。圖3為無糖型合劑陰性樣品HPLC色譜圖。圖4為四組分混合對照HPLC色譜圖。
圖5為有糖型合劑樣品HPLC色譜圖。圖6為無糖型合劑樣品HPLC色譜圖。
具體實施例方式儀器與試藥島津IOA高效液相色譜儀、威瑪龍色譜工作站、BSA224S-CW型電子分析天平(塞多利斯科學儀器北京有限公司)、AS3120A超聲波清洗機；
燈盞細辛合劑有糖型、燈盞細辛合劑無糖型、燈盞細辛口服液有糖型、燈盞細辛口服液無糖型、燈盞細辛糖漿劑、燈盞細辛滴眼劑由昆明振華制藥廠有限公司提供；
綠原酸(110753-200413，純度 >98 % )、咖啡酸(110885-200102，純度 >98 % )、
1,3-0-二咖啡?？鼘幩?111717-200501，純度>98% )和燈盞花乙素(又名野黃芩苷，11842-201106，純度>98% )的對照品均購自中國藥品生物制品檢定所；
實驗用水為超純水；甲醇、乙腈為色譜純。實施例I :
1)對照品溶液的制備取綠原酸、咖啡酸、1，3-0-二咖啡?？鼘幩?、燈盞花乙素對照品加甲醇溶解制成每ml含綠原酸2(^g/ml、含咖啡酸3(^g/ml、含1，3-0- 二咖啡?？鼘幩?2Pg/ml、含燈蓋花乙素lOOPg/ml的對照品溶液,備用；
2)供試品溶液的制備取ImL燈盞細辛合劑(無糖型)于IOmL量瓶中，加入純化水4ml，甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液；
3)4種有效成分含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各ΙΟμ ，注入液相色譜儀中，測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得；其中
液相色譜儀用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相Α，O. I %甲酸水溶液為流動相B，按以下梯度洗脫
時間O IOmin,比例7% 8% A ;
時間10 24min,比例8% 9% A ;
時間24 37min,比例9% 10% A ;
時間37 57min,比例10% 24% A ；
時間57 60min,比例24% 7% A ；
流速每分鐘I. OmL ;檢測波長327nm ;柱溫30°C，綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩?、燈盞花乙素的理論塔板數(shù)不低于5000，與其他峰的分離度應大于I. 5。結(jié)果測得燈盞細辛合劑(無糖型)中綠原酸157. 9μδ · πι Λ咖啡酸225. 95μg · πι Λ I, 3-0- 二咖啡酰奎寧酸 73. 10μδ · mL—1，燈盞花乙素 1287. 22μ§ · mL'實施例2:
O對照品溶液的制備取綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩帷舯K花乙素對照品加甲醇溶解制成每ml含綠原酸2(^g/ml、含咖啡酸18Pg/ml、含1，3-0- 二咖啡?？鼘幩?0Pg/ml、含燈蓋花乙素lOOPg/ml的對照品溶液,備用；
2)供試品溶液的制備取ImL燈盞細辛合劑(有糖型)于IOmL量瓶中，加入純化水4ml，甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液；
3)4種有效成分含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各ΙΟμ ，注入液相色譜儀中，測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得；其中液相色譜儀用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-甲醇(1:1)為流動相A，0. 1%甲酸水溶液為流動相B，按以下梯度洗脫
時間O IOmin,比例8% 8% A ;
時間10 24min,比例8% 10% A ;
時間24 37min，比例10% 10% A ;
時間37 57min,比例10% 24% A ；
時間57 60min,比例24% 12% A ；
流速每分鐘I. OmL ;檢測波長327nm ;柱溫30°C，綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩帷舯K花乙素的理論塔板數(shù)不低于5000，與其他峰的分離度應大于I. 5。 結(jié)果測得燈盞細辛合劑(有糖型)中綠原酸14(^g · mL—1，咖啡酸177. 6μg · mL—1，I, 3-0- 二咖啡?？鼘幩?6. 36μδ · πι Λ燈盞花乙素1003. 6μδ · mL'實施例3
O對照品溶液的制備取綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩?、燈盞花乙素對照品加甲醇溶解制成每ml含綠原酸12Pg/ml、含咖啡酸15Pg/ml、含1，3-0- 二咖啡?？鼘幩?br> 6.OPg/ml、含燈蓋花乙素50Pg/ml的對照品溶液,備用；
2)供試品溶液的制備取ImL燈盞細辛口服液(無糖型)于IOmL量瓶中，加入純化水4ml,甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液；
3)4種有效成分含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各ΙΟμ ，注入液相色譜儀中，測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得；其中
液相色譜儀用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇為流動相Α，I. 0%乙酸水溶液為流動相B，按以下梯度洗脫
時間O IOmin,比例7% 8% A ;
時間10 24min,比例8% 11% A ;
時間24 36min,比例11 % 16% A ;
時間36 57min,比例16% 24% A ；
時間57 60min,比例24% 7% A ；
流速每分鐘2. OmL ;檢測波長327nm ;柱溫30°C，綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩?、燈盞花乙素的理論塔板數(shù)不低于5000，與其他峰的分離度應大于I. 5。結(jié)果測得燈盞細辛口服液(無糖型)中綠原酸140. 2μβ · mL—1，咖啡酸177. θμδ · ι ΙΛ I, 3-0- 二咖啡?？鼘幩?66. 30μδ · mL—1，燈盞花乙素 1003. 5μδ · mL'實施例4
O對照品溶液的制備取綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩帷舯K花乙素對照品加甲醇溶解制成每ml含綠原酸25Pg/ml、含咖啡酸3(^g/ml、含1，3-0- 二咖啡?？鼘幩?2Pg/ml、含燈蓋花乙素120Pg/ml的對照品溶液,備用；
2)供試品溶液的制備取ImL燈盞細辛口服液(有糖型)于IOmL量瓶中，加入純化水4ml,甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液；
3)4種有效成分含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μ ，注入液相色譜儀中，測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得；其中
液相色譜儀用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相Α，0. 05%甲酸水溶液為流動相B，按以下梯度洗脫
時間O IOmin,比例9% 9% A ;
時間10 24min,比例9% 12% A ;
時間24 37min,比例12% 16% A ;
時間37 57min,比例16% 24% A ；
時間57 60min,比例24% 7% A ；
流速每分鐘O. 5mL ;檢測波長327nm ;柱溫40°C，綠原酸、咖啡酸、I, 3-0- 二咖啡?？鼘幩?、燈盞花乙素的理論塔板數(shù)不低于5000，與其他峰的分離度應大于I. 5。
結(jié)果測得燈盞細辛口服液(有糖型)中綠原酸164. 3μδ · mL—1，咖啡酸239. 0μδ · mL-1，I, 3-0- 二咖啡?？鼘幩?78. μδ · ι Γ1，燈盞花乙素 1319. 0μδ · mL'實施例5
O對照品溶液的制備取綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩帷舯K花乙素對照品加甲醇溶解制成每ml含綠原酸6(^g/ml、含咖啡酸93Pg/ml、含1，3-0- 二咖啡酰奎寧酸36Pg/ml、含燈蓋花乙素300Pg/ml的對照品溶液,備用；
2)供試品溶液的制備取ImL燈盞細辛糖漿劑于IOmL量瓶中，加入純化水4ml，甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液；
3)4種有效成分含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各ΙΟμ ，注入液相色譜儀中，測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得；其中
液相色譜儀用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相Α，O. I %甲酸水溶液為流動相B，按以下梯度洗脫
時間O IOmin,比例8% 9% A ;
時間10 24min,比例9% 10% A ;
時間24 37min,比例10% 14% A ；
時間37 57min,比例14% 24% A ；
時間57 60min,比例24% 10% A ；
流速每分鐘I. 5mL ;檢測波長327nm ;柱溫35°C，綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡酰奎寧酸、燈盞花乙素的理論塔板數(shù)不低于5000，與其他峰的分離度應大于I. 5。結(jié)果測得燈盞細辛糖漿劑中綠原酸164. 4μδ · ml/1，咖啡酸237. 8μδ · ml/1，I, 3-0- 二咖啡?？鼘幩?7. 85μδ · mL—1，燈盞花乙素1327. 0μδ · mL'實施例6
O對照品溶液的制備取綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡酰奎寧酸、燈盞花乙素對照品加甲醇溶解制成每ml含綠原酸2Pg/ml、含咖啡酸3. lPg/ml、含1，3-0- 二咖啡?？鼘幩酙. 2Pg/ml、含燈蓋花乙素lOPg/ml的對照品溶液,備用；
2)供試品溶液的制備取ImL燈盞細辛滴眼劑于IOmL量瓶中，加入純化水4ml，甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液；
3)4種有效成分含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各ΙΟμ ，注入液相色譜儀中，測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得；其中
液相色譜儀用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相Α，0. 1%磷酸水溶液為流動相B，按以下梯度洗脫時間O IOmin,比例7% 9% A ;
時間10 24min,比例9% 12% A ;
時間24 37min,比例12% 16% A ;
時間37 57min,比例16% 24% A ；
時間57 60min,比例24% 8% A ；
流速每分鐘I. 2mL ;檢測波長327nm ;柱溫35°C，綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩?、燈盞花乙素的理論塔板數(shù)不低于5000，與其他峰的分離度應大于I. 5。結(jié)果測得燈盞細辛滴眼劑中綠原酸155. 2μδ · mL'咖啡酸190. 4μδ · πι ΛI, 3-0- 二咖啡?？鼘幩?9. 6μδ · mL—1，燈盞花乙素1120. 32μδ · mL'實施例7:
O對照品溶液的制備取綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡酰奎寧酸、燈盞花乙素對照品加甲醇溶解制成每ml含綠原酸6(^g/ml、含咖啡酸93Pg/ml、含1，3-0- 二咖啡酰奎寧酸36Pg/ml、含燈蓋花乙素300Pg/ml的對照品溶液,備用；
2)供試品溶液的制備取ImL燈盞細辛浸膏(比重I. I)于IOmL量瓶中，加入純化水4ml,甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液；
3)4種有效成分含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各ΙΟμ ，注入液相色譜儀中，測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得；其中
液相色譜儀用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相Α，O. 08 %乙酸水溶液為流動相B，按以下梯度洗脫
時間O IOmin,比例8% 8% A ;
時間10 24min,比例8% 10% A ;
時間24 37min，比例10% 15% A ;
時間37 57min,比例15% 24% A ；
時間57 60min,比例24% 10% A ；
流速每分鐘I. OmL ;檢測波長327nm ;柱溫30°C，綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡酰奎寧酸、燈盞花乙素的理論塔板數(shù)不低于5000，與其他峰的分離度應大于I. 5。結(jié)果測得燈盞細辛浸膏(比重I. I)中綠原酸32(^g · ι ΙΛ咖啡酸50(^g · πι ΛI, 3-0- 二咖啡?？鼘幩?60μδ · ι ΙΛ燈盞花乙素2650. 0μδ · mL'本發(fā)明的檢測的方法由以下幾方面的方試驗進行了驗證。以燈盞細辛合劑的HPLC的方法學研究為例
I、干擾試驗按生產(chǎn)處方配制不含燈盞細辛提取浸膏的合劑，按步驟2)的方法制成陰性樣品溶液；取對照品溶液，供試品溶液及陰性樣品溶液各ΙΟμ ，進樣測定，記錄色譜圖，結(jié)果在上述色譜條件下，溶劑空白、有糖型陰性樣品和無糖型陰性樣品均對測定無干擾。2、線性關(guān)系的考察精密移取混合對照品儲備溶液適量，配制含綠原酸為2，10，20，40，60 μδ · mL—1 ;含咖啡酸為 3. I, 15. 5，31，62，93μδ · mL—1 ;含 I, 3-0- 二咖啡?？鼘幩釣?I. 2，6. O, 12，24，36μδ · mL-1 ;含燈盞花乙素為 10. O, 50. 0,100. O, 200，300. 0μδ · mL-1的混合對照品溶液，搖勻，分別吸取上述濃度梯度的混合對照品溶液10 PL注入高效液相色譜儀。分別以對照品濃度(Kgmr1)為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線并進行回歸計算，得綠原酸、咖啡酸、1，3-0-二咖啡酰奎寧酸、燈盞花乙素的標準曲線回歸方程及線性范圍，結(jié)果見表I。結(jié)果顯示在線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。表I 4種成分線性關(guān)系考察(n=6)__
化合物I回歸方程I線性范圍/PgIr
綠原酸Υ=2· 92 X10-5Χ-0. 709O. 020 O. 600O. 9990~
咖啡酸Υ=1· 65Χ10-5Χ+0.6690.031 0.9300.9999~
1，3-O-二咖啡?？鼘幩醂=I. 77X10-5Χ+0. 463 012 O. 360O. 9999~
燈盞花乙素|υ=3· 08Χ10-5Χ-0. 214|θ. 100 3. 000|θ. 9995
3、精密度試驗取燈盞細辛合劑(無糖型，批號20120901)，用上述供試品溶液，精密量·
取ΙΟμ 注入高效液相色譜儀，重復進樣6次，記錄峰面積，結(jié)果表明綠原酸RSD I. 13% ；
咖啡酸RSD I. 11% ; 1,3-0-二咖啡?？鼘幩酭SD O. 42% ;燈盞花乙素RSD 0.5%。4、重復性試驗取燈盞細辛合劑(無糖型，批號20120901)，用上述供試品溶液6份，精密量取ΙΟμ 注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，利用工作曲線計算含量，測得各成分平均質(zhì)量濃度依次為綠原酸157. 9μδ · mL—1，咖啡酸226. 0μδ · mL—1，I, 3-0- 二咖啡?？鼘幩?3. μδ · ι ΙΛ燈盞花乙素 1287. 2μδ · mL-1 ；RSD 依次為 I. 07%,O. 98%, I. 71% , I. 52%。5、穩(wěn)定性試驗取燈盞細辛合劑(無糖型，批號20120901)，用上述供試品溶液，室溫放置，分別于0，I, 2，4，6，8，12h，重復進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果表明綠原酸、咖啡酸、
1,3-0-二咖啡?？鼘幩?、燈盞花乙素在12h內(nèi)穩(wěn)定，RSD分別為I. 19%,0.4%,I.01%,
I.17%。6、回收率試驗取已知含量的燈盞細辛合劑l.OmL，置于10 mL量瓶中，分別加入綠原酸、咖啡酸、1，3-0-二咖啡?？鼘幩帷舯K花乙素儲備液適量，用上述供試品溶液，平行操作6份，檢測各成分的含量，計算回收率，結(jié)果見表2。表2 4種成分的加樣回收率(n=6)
權(quán)利要求
1.一種燈盞細辛制劑中4種有效成分含量同時檢測的方法，其特征在于按以下步驟進行 1)對照品溶液的制備取綠原酸、咖啡酸、1，3-0-二咖啡?？鼘幩?、燈盞花乙素對照品加甲醇溶解制成每ml含綠原酸2-6(^g/ml、含咖啡酸3. l_93Pg/ml、含1，3-0- 二咖啡?？鼘幩酙. 2-36Pg/ml、含燈盞花乙素10-30(^g/ml的對照品溶液，備用； 2)供試品溶液的制備取ImL或Ig燈盞細辛制劑于IOmL量瓶中，加入純化水4ml，甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液； 3)4種有效成分含量測定分別吸取對照品溶液和供試品溶液各10-20μ ，注入液相色譜儀中，測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得； 其中液相色譜儀用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈或甲醇中的一種或幾種為流動相Α，0. 05% -I. 0%的甲酸或乙酸或磷酸中的一種或幾種的水溶液為流動相B，按以下梯度洗脫 時間O IOmin,比例7% 9% A ; 時間10 24min,比例8% 12% A ; 時間24 37min,比例9% 16% A ; 時間37 57min,比例10% 24% A ； 時間57 60min,比例24% 7% A ； 流速每分鐘O. 5-2mL ;檢測波長327nm ;柱溫30_40°C，綠原酸、咖啡酸、1，3-0- 二咖啡?？鼘幩?、燈盞花乙素的理論塔板數(shù)不低于5000，與其他峰的分離度應大于I. 5。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的燈盞細辛制劑中4種有效成分含量同時檢測的方法，其特征在于I)步驟中取綠原酸、咖啡酸、1，3-0-二咖啡酰奎寧酸、燈盞花乙素對照品加甲醇溶解制成每ml含綠原酸12-25Pg/ml、含咖啡酸15_3(^g/ml、含1，3_0_ 二咖啡?？鼘幩?_12Pg/ml、含燈盞花乙素50-12(^g/ml的對照品溶液，備用。
全文摘要
本發(fā)明是一種燈盞細辛制劑中4種有效成分含量同時檢測的方法。經(jīng)對照品溶液的制備和供試品溶液的制備后，進行4種有效成分含量測定注入液相色譜儀中，測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得；液相色譜儀用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈或甲醇中的一種或幾種為流動相A，0.05％-1.0%的甲酸或乙酸或磷酸中的一種或幾種的水溶液為流動相B，按以下梯度洗脫時間0～10min，比例7％～9％A；時間10～24min，比例8％～12％A；時間24～37min，比例9％～16％A；時間37～57min，比例10％～24％A；時間57～60min，比例24％～7％A。該方法專屬性強、精密度高、重復性好、準確度高、耐用性好。
文檔編號G01N30/02GK102914609SQ201210459769
公開日2013年2月6日 申請日期2012年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月15日
發(fā)明者梅艷, 馮春, 李俊, 蘇莎, 朱光花 申請人:昆明振華制藥廠有限公司