凝集素功能化的納米金及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種凝集素功能化的納米金及其制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明還提供利用所述凝集素功能化的納米金檢測AFP-L3的方法以及包含所述凝集素功能化的納米金的試劑盒。本發(fā)明的凝集素功能化的納米金由納米金以及與所述納米金共價連接的凝集素構(gòu)成，其能夠方便、直觀、高效、靈敏、特異地檢測樣品中的AFP-L3，而其制備方法簡便、成本低廉。
【專利說明】凝集素功能化的納米金及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及復(fù)合材料領(lǐng)域。具體地說，本發(fā)明涉及凝集素功能化的納米金及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]我國是肝癌高發(fā)國家，每年約11萬患者死于肝癌，相當(dāng)于整個世界死于肝癌HCC的患者的45%，占我國惡性腫瘤的第二位。臨床肝癌發(fā)現(xiàn)時多已晚期，治療難度大，因此，肝癌防治中早期診斷尤為重要。
[0003]甲胎蛋白(AFP)是肝癌標(biāo)志物，但慢性肝病患者的AFP也會持續(xù)升高。研究表明，AFP包括AFP-L1、AFP-L2和AFP-L3等多種亞型。其中，與肝癌最相關(guān)的和最特異的是AFP-L3，而AFP-L1、AFP-L2對肝癌檢測有一定的干擾，易導(dǎo)致假陽性。
[0004]2005年FDA批準(zhǔn)AFP-L3為原發(fā)性肝癌腫瘤標(biāo)志物(Serum markersofhepatocellular carcinoma AFP—L3 in chronic liver diseases withpersistentElevation of Alpha-fetoprotein)。AFP-L3在肝癌的早期診斷中非常有效，具有相當(dāng)高的準(zhǔn)確率。而肝癌的早期發(fā)現(xiàn)可以為患者提供更多的治療機(jī)會，例如外科手術(shù)切除或介入治療等等。因此，AFP-L3可作為肝癌的診斷及療效隨訪觀察指標(biāo)。
[0005]納米金具有獨(dú)特的光、熱、電及化學(xué)方面的性能，在催化、光電器件和生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的潛在應(yīng)用引起了眾多研究人員的關(guān)注。納米金可以通過弱的相互作用與生物大分子結(jié)合，也可以通過化學(xué)鍵與生物大分子偶聯(lián)，而不改變生物大分子的生物活性，從而能廣泛應(yīng)用于臨床診斷及藥物檢測等各方面。
[0006]目前，已經(jīng)利用納米金技術(shù)開發(fā)了方便、準(zhǔn)確、靈敏地檢測一些生物樣品中的特定分子(如蛋白)的方法和試劑盒。在現(xiàn)有技術(shù)中，雖然可通過將納米金與AFP的抗體偶聯(lián)形成抗體功能化的納米金，再用該功能化的納米金檢測AFP，但目前為止，這些抗體功能化的納米金對AFP-L3不具備特異性(只能不加區(qū)分地檢測AFP-L1、AFP-L2和AFP-L3)。此夕卜，由于利用了抗體，該功能化的納米金的成本很高，制備條件非?？量?，操作難度更高、導(dǎo)致成本居高不下。更為重要的是，由于缺乏AFP-L3的特異性，無法靈敏準(zhǔn)確地用于基于AFP-L3的肝癌的早期診斷。
[0007]因此，本領(lǐng)域急需開發(fā)特異性針對AFP-L3、制法簡單、成本低、和靈敏度高的納米金檢測試劑和試劑盒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的就是提供一種特異性針對AFP-L3、制法簡單、成本低、和靈敏度高的納米金檢測試劑以及包含該試劑的試劑盒。
[0009]在第一方面，本發(fā)明提供一種凝集素功能化的納米金，所述凝集素功能化的納米金由納米金以及與所述納米金共價連接的凝集素構(gòu)成，并且所述凝集素功能化的納米金特異性結(jié)合AFP-L3，而不結(jié)合AFP-Ll和AFP-L2。[0010]在優(yōu)選的實施方式中，所述凝集素功能化的納米金與AFP-Ll或AFP-L2的結(jié)合量和與AFP-L3的結(jié)合量相比，小于10%，優(yōu)選小于5%，更優(yōu)選小于1%。
[0011]在優(yōu)選的實施方式中，所述的共價連接是通過-CO-NH-鍵連接。
[0012]在另一優(yōu)選的實施方式中，所述凝集素功能化的納米金中納米金與凝集素的質(zhì)量比為(0.01-500):1。
[0013]在更優(yōu)選的實施方式中，所述凝集素功能化的納米金中納米金與凝集素的質(zhì)量比為(0.1-200):1。
[0014]在最優(yōu)選的實施方式中，所述凝集素功能化的納米金中納米金與凝集素的質(zhì)量比為(1-100):1。
[0015]在優(yōu)選的實施方式中，所述凝集素選自下組中的至少一種:扁豆凝集素、刀豆素A、大豆凝集素、花生凝集素、麥胚素、豌豆凝集素、菜豆凝集素、蓖麻凝集素、荊豆凝集素、雙花扁豆凝集素、槐凝集素。
[0016]在第二方面，本發(fā)明提供一種制備凝集素功能化的納米金的方法，所述方法包括以下步驟:
[0017]a)制備納米金顆粒；和
[0018]b)將凝集素與納米金顆粒偶聯(lián)，從而制得凝集素功能化的納米金。
[0019]在優(yōu)選的實施方式中，步驟b)包括:
[0020]bl)將a)制得的納米金顆粒與巰基化合物孵育，從而將納米金表面置換成巰基化合物；和
[0021]b2)將縮合劑和凝集素與bl)所得納米金一起孵育，從而制得凝集素功能化的納米金。
[0022]在進(jìn)一步優(yōu)選的實施方式中，所述巰基化合物選自下組中的至少一種:半胱氨酸、巰基乙酸、巰基丙酸、巰基乙醇、16-烷基硫醇、二巰基丁二酸、巰基乙胺、苯硫酚。
[0023]在優(yōu)選的實施方式中，所述巰基化合物選自半胱氨酸或巰基丙酸。
[0024]在另一優(yōu)選的實施方式中，所述縮合劑選自下組中的至少一種:1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯并三唑、2- (7-偶氮苯并三氮唑)-N, N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、N，N’ -羰基二咪唑、二環(huán)己基碳化二亞胺、4-二甲氨基吡啶、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、N-羥基琥珀酰亞胺。
[0025]在進(jìn)一步優(yōu)選的實施方式中，所述縮合劑是1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽或二環(huán)己基碳化二亞胺。
[0026]在優(yōu)選的實施方式中，所述巰基化合物與納米金的質(zhì)量比為1: (0.001-20000)。
[0027]在更優(yōu)選的實施方式中，所述巰基化合物與納米金的質(zhì)量比為1: (0.05-10000)。
[0028]在最優(yōu)選的實施方式中，所述巰基化合物與納米金的質(zhì)量比為1: (0.1-5000)。
[0029]在另一優(yōu)選的實施方式中，所述巰基化合物與縮合劑的摩爾比為1: (0.001-2000)
[0030]在更優(yōu)選的實施方式中，所述巰基化合物與縮合劑的摩爾比為1: (0.01-1000)。
[0031]在最優(yōu)選的實施方式中，所述巰基化合物與縮合劑的摩爾比為1: (0.05-200)。
[0032]在另一優(yōu)選的實施方式中，所述巰基化合物與凝集素的質(zhì)量比為1:(0.001-1000)。
[0033]在更優(yōu)選的實施方式中，所述巰基化合物與凝集素的質(zhì)量比為1: (0.01-500)。[0034]在最優(yōu)選的實施方式中，所述巰基化合物與凝集素的質(zhì)量比為1: (0.05-50)。
[0035]在第三方面，本發(fā)明提供通過本發(fā)明第二方面所述的方法制備的凝集素功能化的納米金，所述凝集素功能化的納米金由納米金以及與所述納米金共價連接的凝集素構(gòu)成，并且所述凝集素功能化的納米金特異性結(jié)合于AFP-L3，而不結(jié)合于AFP-Ll和AFP-L2。
[0036]在優(yōu)選的實施方式中，所述凝集素功能化的納米金中納米金與凝集素的質(zhì)量比為(0.01-500):1。
[0037]在更優(yōu)選的實施方式中，所述凝集素功能化的納米金中納米金與凝集素的質(zhì)量比為(0.1-200):1。
[0038]在最優(yōu)選的實施方式中，所述凝集素功能化的納米金中納米金與凝集素的質(zhì)量比為(1-100):1。
[0039]在第四方面，本發(fā)明提供一種檢測試劑盒，所述檢測試劑盒裝有:
[0040]a)凝集素功能化的納米金；
[0041]b)利用a)所述的凝集素功能化的納米金檢測AFP-L3的所需試劑；和
[0042]c)使用所述檢測試劑盒的使用說明書。
[0043]在第五方面，本發(fā)明提供一種利用本發(fā)明第一方面所述的凝集素功能化的納米金檢測AFP-L3的方法，所述方法包括以下步驟:
[0044]a)將本發(fā)明第一方面所述的凝集素功能化的納米金與待測樣品混合孵育；和
[0045]b)通過觀察混合液顏色變化來判斷或者通過紫外/可見光分光光度計來測試所述待測樣品中是否含有AFP-L3。
[0046]在第六方面，本發(fā)明提供本發(fā)明第一方面所述的凝集素功能化的納米金在制備檢測AFP-L3的試劑中的應(yīng)用。
[0047]應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在
此不再一一累述。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0048]圖1為實施例1制備的凝集素功能化納米金與AFP-L3結(jié)合前后投射電鏡照片。其中A為膠體金-凝集素，B為AFP-L3/凝集素-膠體金(AFP-L3 IOOng)。
[0049]圖2為實施例1制備的凝集素修飾納米金與AFP-L3結(jié)合凝集素修飾納米金與AFP-L3結(jié)合后肉眼可觀察到的顏色變化。其中A為膠體金，B為膠體金-凝集素，C為AFP-L3/ 凝集素-膠體金(AFP-L3 IOOng)，D 為 AFP-L3/ 凝集素-膠體金(AFP-L3 200ng)。
[0050]圖3為實施例2中不同反應(yīng)步驟及AFP-L3檢測后納米金溶液紫外可見光圖譜。
[0051]圖4為對比例2制備的凝集素修飾納米金與AFP-L3結(jié)合凝集素修飾納米金與AFP-L3結(jié)合后肉眼基本觀察不到顏色變化。A為膠體金-凝集素，B為AFP-L3/凝集素-膠體金(AFP-L3 IOOng)，C 為 AFP-L3/ 凝集素-膠體金(AFP-L3 200ng)。
[0052]圖5為對比例3中凝集素修飾納米金及AFP-L3檢測后納米金溶液紫外可見光圖譜。圖中看不到SPR峰的明顯位移。
【具體實施方式】[0053]發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，出乎意料地發(fā)現(xiàn)利用縮合劑可以方便地將納米金與凝集素制成復(fù)合物，從而能高效地檢測待測樣品中AFP-L3是否存在。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
[0054]凝集素
[0055]凝集素(Lectin)是從各種植物，無脊椎動物和高等動物中提純的糖蛋白或結(jié)合糖的蛋白，因其能凝集紅血球，故稱為凝集素。其中常見的為植物凝集素(Phytoagglutin，PNA),通常以其被提取的植物命名。例如，刀豆素A(Conconvalina, ConA)、麥胚素(Wheatgerm agglutinin, WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybeanagglutinin, SBA)等，凝集素是它們的總稱。凝集素因具有某些“親合”特性，而能應(yīng)用于免疫檢測。
[0056]本發(fā)明可利用各種凝集素，包括但不限于下組中的至少一種:扁豆凝集素、刀豆素A、大豆凝集素、花生凝集素、麥胚素、豌豆凝集素、菜豆凝集素、蓖麻凝集素、荊豆凝集素、雙花扁豆凝集素、槐凝集素。在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明利用扁豆凝集素或刀豆凝集素。
[0057]納米金
[0058]本文所用的術(shù)語“納米金”具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的含義，S卩，金的微小顆粒，其直徑在I?lOOnm。納米金具有高電子密度、介電特性和催化作用，能與多種生物大分子結(jié)合，且不影響其生物活性。納米金具有的特性還有:顏色穩(wěn)定、不褪色、不變色；單體粒子的表面穩(wěn)定性；殺菌、抗菌性；親水性、滲透性；很好的分散性、均勻且穩(wěn)定；安全性好無毒副作用；納米金單體粒子具有強(qiáng)磁性。
[0059]目前，通常利用氯金酸，在還原劑作用下聚合成一定大小的金納米顆粒。
[0060]眾所周知，納米金在特定波長顯示表面等離子體激元共振(SPR)吸收帶。SPR的吸收頻率和寬度依賴于金屬納米粒子的粒徑和形狀，以及在電介質(zhì)金屬本身和它周圍的介電常數(shù)。誘導(dǎo)偶極相互作用依賴于粒子間距和團(tuán)聚粒子大小，所以當(dāng)納米金粒子聚集時，最大吸收峰轉(zhuǎn)移到更長的波長導(dǎo)致顏色由紅色變?yōu)樗{(lán)色。此特性可用于直觀快速檢測蛋白含量。
[0061]納米金的應(yīng)用
[0062]納米金可應(yīng)用于各種領(lǐng)域:做食品、玻璃以及生物體的著色劑；制作液體及固體的不變色的著色材料；利用納米金粒子解析DNA ;用于遺傳基因的測定；添加到化妝品中可起到美白、抗衰老、潤膚、抗菌作用；與氧化鈦等混合使用可制作環(huán)境凈化產(chǎn)品，特別是清除CO等有害物質(zhì)效果極佳。
[0063]納米金可作為免疫標(biāo)記物應(yīng)用于檢測技術(shù)，例如，作為顯微鏡示蹤物，應(yīng)用于均相溶膠顆粒免疫測定技術(shù)，應(yīng)用于流式細(xì)胞儀，應(yīng)用于斑點(diǎn)免疫金銀染色技術(shù)，應(yīng)用于免疫印跡技術(shù)，應(yīng)用于斑點(diǎn)金免疫滲濾測定技術(shù)，應(yīng)用于免疫層析技術(shù)，應(yīng)用于生物傳感器，應(yīng)用于生物芯片；
[0064]納米金還可應(yīng)用于食品安全快速檢測，例如檢測獸藥殘留、動物傳染病、農(nóng)藥殘留、以及檢測致病微生物或真菌毒素。
[0065]凝集素功能化的納米金
[0066]本發(fā)明的“凝集素功能化的納米金”是將凝集素與納米金偶聯(lián)后得到的納米金顆粒。本領(lǐng)域技術(shù)人員明白，凝集素與納米金偶聯(lián)后得到的功能化納米金既具備納米金的檢測便利性，又具備凝集素結(jié)合AFP-L3的特異性。
[0067]本發(fā)明的凝集素功能化的納米金由納米金以及與所述納米金共價連接的凝集素構(gòu)成。
[0068]在具體的實施方式中，所述的共價連接是通過-CO-NH-鍵連接。
[0069]在具體的實施方式中，本發(fā)明的凝集素功能化的納米金中納米金與凝集素的質(zhì)量比為(0.01-500):1。
[0070]在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的凝集素功能化的納米金中納米金與凝集素的質(zhì)量比為(0.1-200):1。
[0071]在更優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的凝集素功能化的納米金中納米金與凝集素的質(zhì)量比為(1-100):1。
[0072]本發(fā)明的凝集素功能化的納米金能特異性地結(jié)合AFP-L3，而不結(jié)合AFP-Ll和AFP-L2。換言之，本發(fā)明的凝集素功能化的納米金能在AFP-L1、AFP-L2和AFP-L3之間作出辨別，與AFP-L3之間有必然的對應(yīng)選擇關(guān)系。
[0073]在具體的實施方式中，所述凝集素功能化的納米金與AFP-Ll或AFP-L2的結(jié)合量和與AFP-L3的結(jié)合量相比，小于10%，優(yōu)選小于5%，更優(yōu)選小于1%。
[0074]巰基化合物
[0075]本文所用的術(shù)語“巰基化合物”表示具有巰基的化合物。在具體的實施方式中，本發(fā)明所用的巰基化合物包括但不限于以下的一種或多種:半胱氨酸、巰基乙酸、巰基丙酸、巰基乙醇、16-烷基硫醇、二巰基丁二酸、巰基乙胺、苯硫酚。在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明所用的巰基化合物包括巰基丙酸和/或半胱氨酸。
[0076]本發(fā)明方法
[0077]本發(fā)明提供一種制備凝集素功能化的納米金的方法，所述方法包括以下步驟:
[0078]a)制備納米金顆粒；和
[0079]b)將凝集素與納米金顆粒偶聯(lián)，從而制得凝集素功能化的納米金。
[0080]在具體的實施方式中，本發(fā)明方法的步驟b)包括:
[0081]bl)將a)制得的納米金顆粒與巰基化合物孵育，從而將納米金表面置換成巰基化合物；和
[0082]b2)將縮合劑和凝集素與bl)所得納米金一起孵育，從而制得凝集素功能化的納米金。
[0083]在具體的實施方式中，本發(fā)明方法中使用的所述巰基化合物選自下組中的至少一種:半胱氨酸、巰基乙酸、巰基丙酸、巰基乙醇、16-烷基硫醇、二巰基丁二酸、巰基乙胺、苯硫酚。
[0084]在優(yōu)選的實施方式中，所述巰基化合物選自半胱氨酸或巰基丙酸。
[0085]在具體的實施方式中，本發(fā)明方法中使用的縮合劑選自下組中的至少一種:1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、1-輕基苯并二唑、2- (7-偶氮苯并二氮唑)-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、N，N’ -羰基二咪唑、二環(huán)己基碳化二亞胺、4-二甲氨基吡啶、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、N-羥基琥珀酰亞胺。
[0086]在優(yōu)選的實施方式中，所述縮合劑是1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽或二環(huán)己基碳化二亞胺。[0087]在具體的實施方式中，本發(fā)明方法中所述巰基化合物與納米金的質(zhì)量比為1: (0.001-20000);優(yōu)選 1: (0.05-10000);更優(yōu)選 1: (0.1-5000)。
[0088]在具體的實施方式中，本發(fā)明方法中所述巰基化合物與縮合劑的摩爾比為1: (0.001-2000);優(yōu)選 1: (0.01-1000);更優(yōu)選 1: (0.05-200)。
[0089]在具體的實施方式中，所述巰基化合物與凝集素的質(zhì)量比為1: (0.001-1000);優(yōu)選 1: (0.01-500);更優(yōu)選 1: (0.05-50)。
[0090]下面結(jié)合具體實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。
[0091]材料
[0092]實施例中所用的試劑均購自百靈威試劑公司
[0093]實施例中所用的待測樣品獲自Sino Biological有限公司
[0094]實施例
[0095]實施例1
[0096](I)納米金溶液的制備
[0097]將IOOmL HAuCl4在劇烈攪拌下加熱到沸騰，快速倒入5mL檸檬酸三鈉。5分鐘后顏色變紅，繼續(xù)沸騰5分鐘后冷卻20分鐘。最終產(chǎn)物過醋酸纖維素濾膜，4°C冰箱避光保存。
[0098](2)凝集素功能化的納米金的制備
[0099]將ImL檸檬酸鈉穩(wěn)定的金納米粒在HOOOrpm離心10分鐘，重新分布于磷酸鈉緩沖液。加入12 μ L 25 μ M巰基丙酸孵育I小時，將金表面的檸檬酸鈉置換成巰基丙酸。離心除去多余的巰基丙酸后重新分散于磷酸鈉緩沖液中，加入30 μ L 40 μ M的1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和5yg扁豆凝集素，孵育半個小時。獲得的凝集素-納米金中凝集素與納米金的質(zhì)量比為1:40。
[0100](3)利用凝集素功能化的納米金檢測待測樣品中的AFP-L3
[0101]將凝集素功能化的納米金與待測樣品混合孵育，觀察顏色變化。如圖1所示，凝集素功能化的納米金與待測樣品中AFP-L3結(jié)合后呈聚集態(tài)分布。如圖2所示，可目測觀察凝集素功能化的納米金與待測樣品中AFP-L3結(jié)合后溶液的顏色變化。
[0102]實施例2
[0103](I)納米金溶液的制備
[0104]將IOOmL HAuCl4在劇烈攪拌下加熱到沸騰，快速倒入7mL檸檬酸三鈉。5分鐘后顏色變紅，繼續(xù)沸騰5分鐘后冷卻20分鐘。最終產(chǎn)物過醋酸纖維素濾膜，4°C冰箱避光保存。
[0105](2)凝集素功能化的納米金的制備
[0106]將ImL檸檬酸鈉穩(wěn)定的金納米粒在HOOOrpm離心10分鐘，重新分布于磷酸鈉緩沖液。加入IOyL 30 μ M半胱氨酸孵育半小時，將金表面的檸檬酸鈉置換成半胱氨酸。離心除去多余的半胱氨酸之后重新分散于磷酸鈉緩沖液，加入20 μ L 5mM的二環(huán)己基碳化二亞胺和3 μ g刀豆凝集素，孵育I個小時。獲得的凝集素-納米金中凝集素與納米金的質(zhì)量比為1:66。
[0107](3)利用凝集素功能化的納米金檢測待測樣品中的AFP-L3[0108]將凝集素功能化的納米金與待測樣品混合孵育，紫外可見光光譜檢測SPR峰值位移，判斷樣品中是否含有AFP-L3。如圖3所示。
[0109]實施例3-6
[0110]發(fā)明人還利用表1所示參數(shù)重復(fù)實施例1或2，得到的結(jié)果與實施例1或2相似。
[0111]表1
實施例凝集素與納米巰基化合物與納巰基化合物與縮巰基化合物與凝
【權(quán)利要求】
1.一種凝集素功能化的納米金,其特征在于,所述凝集素功能化的納米金由納米金以及與所述納米金共價連接的凝集素構(gòu)成，并且所述凝集素功能化的納米金特異性結(jié)合AFP-L3,而不結(jié)合 AFP-Ll 和 AFP-L2。
2.如權(quán)利要求1所述的凝集素功能化的納米金，其特征在于，所述凝集素功能化的納米金中納米金與凝集素的質(zhì)量比為(0.01-500):1。
3.一種制備凝集素功能化的納米金的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: a)制備納米金顆粒；和 b)將凝集素與納米金顆粒偶聯(lián)，從而制得凝集素功能化的納米金。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟b)包括: bl)將a)制得的納米金顆粒與巰基化合物孵育，從而將納米金表面置換成巰基化合物；和 b2)將縮合劑和凝集素與bl)所得納米金一起孵育，從而制得凝集素功能化的納米金。
5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述巰基化合物選自下組中的至少一種:半胱氨酸、巰基乙酸、巰基丙酸、巰基乙醇、16-烷基硫醇、二巰基丁二酸、巰基乙胺、苯硫酚。
6.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述縮合劑選自下組中的至少一種:1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、1-輕基苯并二唑、2- (7-偶氮苯并二氮唑)-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、N，N’ -羰基二咪唑、二環(huán)己基碳化二亞胺、4- 二甲氨基吡啶、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、N-羥基琥珀酰亞胺。
7.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述巰基化合物與納米金的質(zhì)量比為1:(0.001-20000)。
8.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述巰基化合物與縮合劑的摩爾比為1:(0.001-2000)。
9.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述巰基化合物與凝集素的質(zhì)量比為1: (0.001-1000)。
10.通過權(quán)利要求3-9中任一項所述的方法制備的凝集素功能化的納米金，其特征在于，所述凝集素功能化的納米金由納米金以及與所述納米金共價連接的凝集素構(gòu)成，并且所述凝集素功能化的納米金特異性結(jié)合于AFP-L3，而不結(jié)合于AFP-Ll和AFP-L2。
11.一種檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒裝有: a)凝集素功能化的納米金； b)利用a)所述的凝集素功能化的納米金檢測AFP-L3的所需試劑；和 c)使用所述檢測試劑盒的使用說明書。
12.一種利用權(quán)利要求1或2所述的凝集素功能化的納米金檢測AFP-L3的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: a)將權(quán)利要求1或2所述的凝集素功能化的納米金與待測樣品混合孵育；和 b)通過觀察混合液顏色變化來判斷或者通過紫外/可見光分光光度計來測試所述待測樣品中是否含有AFP-L3。
13.權(quán)利要求1或2所述凝集素功能化的納米金在制備檢測AFP-L3的試劑中的應(yīng)用。
【文檔編號】G01N21/25GK103822878SQ201210466746
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2012年11月16日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月16日
【發(fā)明者】段友容, 孫穎, 覃劉彬 申請人:上海市腫瘤研究所