專利名稱：一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒?br> 技術領域：
本發(fā)明涉及一種分離抗?jié)兯幬锏姆椒?，特別是涉及一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒ā?br> 背景技術：
毛細管電泳(capillary electrophoresis, CE)因其具有高效、快速、簡便等優(yōu)點又稱為高效毛細管電泳(high-performance capillary electrophoresis, HPCE)。它是以高壓直流電場為驅(qū)動力，以荷電粒子按其分配系數(shù)的不同在毛細管內(nèi)進行分離的一種電泳新技術，具有它具有分離模式多、分離柱效高、分析速度快、操作簡便、樣品和試劑消耗量少、環(huán)境污染小等優(yōu)點，因而在手性分離研究中備受青睞。該方法手性選擇劑種類多，常見的選擇劑有環(huán)糊精、手性冠醚、大環(huán)糖肽類抗生素、線性多糖、蛋白質(zhì)、手性表面活性劑及配體交換復合物等，還可以同時使用多個手性選擇劑，利用其協(xié)同作用加強分離效果，而且方法簡單、快速，成本低。目前，國內(nèi)外沒有采用雙手性選擇劑毛細管電泳法分離含亞砜基團手性化合物的報道。質(zhì)子泵抑制劑(PPIs)包括泮托拉唑，奧美拉唑，蘭索拉唑和泰妥拉唑。PPIs主要用于治療十二指腸潰瘍、胃潰，瘍、反流性食管炎等與胃酸分泌相關的疾病。PPIs具有相似的分子結(jié)構(gòu)，分子中具有一個手性硫原子中心，存在R，S兩個對映異構(gòu)體，由于兩個對映體具有相似的理化性質(zhì)，常規(guī)的方法很難分離，故臨床多以外消旋體的形式使用。然而，諸多臨床試驗證明，消旋體給藥是不合理的，開發(fā)單一對映體抗?jié)兯幬飫菰诒匦?。目前對此類藥物手性分離分析方法已經(jīng)報道的有手性固定相高效液相色譜法、流動相添加劑高效液相色譜法、配體交換毛細管電泳法、手性添加劑毛細管電泳法，鮮有用雙手性選擇劑毛細管電泳法來實現(xiàn)分離
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒?。以Cu (II )和L-組氨酸配合物及HP- ^ -⑶為手性選擇劑，分離分析泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑和泰妥拉唑?qū)τ丑w。用于此類抗?jié)兪中运幬锏捏w內(nèi)分析和產(chǎn)品光學純度檢測，為此類手性藥品的研究開發(fā)和單一對映體給藥提供技術支持和保障。本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)的
一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒ǎ瑸橐环N分離泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑和泰妥拉唑消旋體的方法，該方法運用雙手性選擇劑毛細管電泳法分離拉唑藥物對映體，其所用的手性選擇劑有兩種一種是Cu (II)和L-組氨酸；另一種是羥丙基-P -環(huán)糊精，所述方法包括以下步驟
a.樣品和運行緩沖液的配置配制樣品儲備溶液稱為取泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑和泰妥拉唑消旋體樣品粉末10 mg，置10 mL棕色容量瓶中，以過濾后的甲醇溶解并定容至刻度，搖勻；得樣品濃度均為I mg/mL的儲備液，-20 °G冰箱保存；樣品供試溶液取樣品儲備液I mL分別至10 mL棕色容量瓶中，以甲醇定容至刻度，搖勻，得100 Ug/mL供試液，
4°4水箱保存；運行緩沖液依次稱取磷酸二氫鈉、HP-3 -⑶、醋酸銅和L-組氨酸0. 0195 g、
0.05 g、0. 050 g、0. 0582 g置于50 mL燒杯，加25 mL 二次蒸餾水溶解，用0.1 M氫氧化鈉溶液和10%磷酸調(diào)至pH 5. 0，即得運行緩沖液，經(jīng)0. 45 um微孔濾膜過濾后備用；
b.準備分離儀器分離過程在石英毛細管中進行，選取內(nèi)徑50y m的毛細管，截取一段長度53 cm，在距端口 8 cm處除去毛細管的聚酰亞胺層得到檢測窗口，新的毛細管在使用前需沖洗和活化，連續(xù)分析時，每次分析前依次用依次10%HC1、lMNaOH、二次蒸餾水和運行緩沖液各沖洗10 min ；
c.進樣進樣前設置分離條件,分離電壓15kV,檢測波長290 nm ;泰妥拉唑306 nm,進樣高度10 cm，進樣時間10 S，正極進樣負極檢測；進樣間依次用運行緩沖液和二次蒸餾水各沖柱5 min，然后進行下一次進樣。所述的一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒?，所述樣品操作時運行緩沖液和樣品均經(jīng)0. 45 um微孔濾膜過濾，并超聲脫氣，樣品用甲醇溶解，4°C冰箱保存?zhèn)溆?。所述的一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒?，所述電泳分離泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑?qū)τ丑w運行緩沖液5 mmol/L磷酸二氫鈉含mg/Mlhp-P-⑶、15 mmol/L L-組氨酸和10 mmol/L醋酸銅,調(diào)至pH 5.0 ;分離電壓15 kV ;紫外檢測波長290 nm。所述的一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒?，所述電泳分離泰妥拉唑?qū)τ丑w運行緩沖液5 mmol/L磷酸二氫鈉含20 mg/Mlhp-0 -⑶、15 mmol/L L-組氨酸和10 mmol/L醋酸銅,調(diào)至pH 5.0 ;分離電壓15 kV ;紫外檢測波長306 nm。所述的一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒?，所述儀器準備毛細管總長53 Cm，有效長度45 cm，內(nèi)徑50 mm ;新的毛細管在使用前需沖洗和活化，連續(xù)分析時，每次分析前依次用10%HCl、lMNa0H、二次蒸餾水和運行緩沖液各沖洗10 min ;進樣間依次用運行緩沖液和二次蒸餾水各沖柱5 min，然后進行下一次進樣。所述的一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒ǎ鍪中赃x擇劑有兩種一種是Cu (II )和L-組氨酸的配合物，配位比是1:1.5 ;另一種是羥丙基-P -環(huán)糊精。本發(fā)明的優(yōu)點與效果是
本發(fā)明采用雙手性選擇劑毛細管電泳法選擇性好、分離效率高、操作簡單、成本低、對環(huán)境友好，手性選擇劑用量少且低廉易得，可以用于此類抗?jié)兪中运幬锏捏w內(nèi)分析和光學純度檢測，為研發(fā)此類手性藥品和單一對映體給藥提供技術支持與保障。


圖1是本發(fā)明雙手性選擇劑毛細管電泳法分離泮托拉唑?qū)τ丑w色譜 圖2是本發(fā)明雙手性選擇劑毛細管電泳法分離奧美拉唑?qū)τ丑w色譜 圖3是本發(fā)明雙手性選擇劑毛細管電泳法分離蘭索拉唑?qū)τ丑w色譜 圖4是本發(fā)明雙手性選擇劑毛細管電泳法分離泰妥拉唑?qū)τ丑w色譜圖。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進行詳細說明。本發(fā)明應用一種高效毛細管電泳色譜技術，手性藥物對映體的分離分析，具體為泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑和泰妥拉唑四種抗?jié)兯幬锵w的手性分離分析方法，該方法應用雙手性選擇劑毛細管電泳法對幾種拉唑類藥物對映體進行分離。本發(fā)明所述的毛細管電泳法分離分析抗?jié)冾愂中运幬锏姆椒ǎ娪緱l件為以一定比例的Cu (II)和L-組氨酸配合物、羥丙基-P -環(huán)糊精作為手性選擇劑，以磷酸二氫鈉為緩沖溶液(pH 4. (T6. 0)，分離電壓15 kV ;紫外檢測波長為290 nm(其中泰妥拉唑為306nm) o本發(fā)明手性選擇劑選自羥丙基-環(huán)糊精、P -環(huán)糊精和磺丁基醚-P -環(huán)糊精、Cu (II)和L-組氨酸。最優(yōu)選擇羥丙基-￠-環(huán)糊精、Cu (II)和L-組氨酸。手性選擇劑中心離子Cu (II)和配體L-組氨酸的比率為1: f 1:2，最優(yōu)選1:1. 5。緩沖溶液選自硼砂、醋酸銨、磷酸二氫鈉、磷酸二氫銨、磷酸氫二鈉、硼酸等以及上述溶液不同比例的混合液，優(yōu)選磷酸二氫鈉、磷酸二氫銨，最優(yōu)選磷酸二氫鈉。緩沖溶液PH值為4. (T6. 0，優(yōu)選pH值為4. 5 5. 5，最優(yōu)選pH值 為5. O。電泳條件分離電壓為5 25 kV，優(yōu)選1(T20 kV，最優(yōu)選15 kV。本發(fā)明泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑和泰妥拉唑的雙手性選擇劑毛細管電泳法分離分析方法，包括樣品配置、設置EC分離條件2個步驟
a.樣品配置樣品儲備溶液的配置分別精密稱取泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑和泰妥拉唑樣品粉末10 mg，置10 mL棕色容量瓶中，以過濾后的甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。得各樣品濃度均為I mg/mL的儲備液，-20 °e冰箱保存。樣品供試溶液的配制精密量取各樣品儲備液I mL分別至10 mL棕色容量瓶中，以甲醇定容至刻度，搖勻，得100 ug/mL供試液，4 °e冰箱保存。b. CLEC分離條件運行緩沖液5 mmol/L磷酸二氫鈉、20 mg/mL輕丙基-￠-環(huán)糊精、15 mmol/L L-組氨酸、10 mmol/L醋酸銅、pH 5.0,然后經(jīng)0.45 U m的濾膜過濾后超
聲脫氣。毛細管柱總長53 cm，有效長度45 cm，內(nèi)徑50 U m ;洗柱方式毛細管柱依次用
0.1 mol/L氫氧化鈉溶液、二次蒸餾水、運行緩沖液各沖洗10 min后進樣；進樣間用二次蒸餾水、運行緩沖液各沖洗5 min后進行下次進樣。進樣方式虹吸進樣，正極進樣負極檢測；進樣高度差10 cm ;進樣時間10 s ;柱溫室溫。檢測波長290 nm (泰妥拉唑306 nm)；分尚電壓15kV。圖1為雙手性選擇劑毛細管電泳法分離泮托拉唑?qū)τ丑w色譜圖，兩對映體分析時間在19分鐘內(nèi)，分離度大于4. 2。圖2為雙手性選擇劑毛細管電泳法分離奧美拉唑?qū)τ丑w色譜圖，兩對映體分析時間在17分鐘內(nèi)，分離度大于5. O。圖3為雙手性選擇劑毛細管電泳法分離蘭索拉唑?qū)τ丑w色譜圖，兩對映體分析時間在20分鐘內(nèi)，分離度達到6. 2。圖4為雙手性選擇劑毛細管電泳法分離蘭索拉唑?qū)τ丑w色譜圖，兩對映體分析時間在18分鐘內(nèi)，分離度達到3. 9。
實施例一1、精密稱取泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑消旋體各10 mg，分別置10 mL棕色容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。得各樣品濃度均為I mg/mL的儲備液，-20 °e冰箱保存。精密量取各樣品儲備液I mL分別至10 mL棕色容量瓶中，以甲醇定容至刻度，搖勻，得100 V- g/mL供試液,經(jīng)0. 45 u m微孔濾膜過濾后備用。2、配制5 HiMNaH2PO4含20 mg/mL羥丙基-P -環(huán)糊精、10 mM醋酸銅和15 mML-組氨酸作運行緩沖液，用10%H3P04和0.1 MNaOH調(diào)至pH 5.0,經(jīng)0. 45 Um微孔濾膜過濾，并超聲脫氣備用。毛細管柱依次用0.1 MNaOH、二次蒸餾水和上述運行緩沖液各沖洗10 min后走基線，待基線平穩(wěn)后(2 min左右)采用虹吸進樣，進樣高度10 cm，進樣時間10 S，正極進樣負極檢測，記錄電泳圖。進樣間依次用二次蒸餾水和運行緩沖液各沖柱5 min，走基線2 min左右，然后進下一個樣品。分離電壓15 kV，紫外檢測波長290 nm。分離電泳圖如圖2、圖3、圖4，泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑各達基線分離。實施例二 1、精密稱取泰妥拉唑消旋體各10 mg，分別置10 mL棕色容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。得各樣品濃度均為I mg/mL的儲備液，-20 °G冰箱保存。精密量取各樣品儲備液I mL分別至10 mL棕色容量瓶中，以甲醇定容至刻度，搖勻，得IOOy g/mL供試液，經(jīng)
0.45 u m微孔濾膜過濾后備用。2、配制5 mM似％ 04含20 mg/mL羥丙基-P-環(huán)糊精、10 mM醋酸銅和15 mM L-組氨酸作運行緩沖液，用10%H3P04和0.1 M NaOH調(diào)至pH 5. 0，經(jīng)0. 45 Um微孔濾膜過濾，并超聲脫氣備用。毛細管柱依次用0.1 M NaOH、二次蒸餾水和上述運行緩沖液各沖洗10 min后走基線，待基線平穩(wěn)后(2 min左右)采用虹吸進樣，進樣高度10 cm，進樣時間10 S，正極進樣負極檢測，記錄電泳圖。進樣間依次用二次蒸餾水和運行緩沖液各沖柱5 min，走基線2 min左右，然后進下一 個樣品。分離電壓15 kV，紫外檢測波長306 nm。
權利要求
1.一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒?，為一種分離泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑和泰妥拉唑消旋體的方法，其特征在于，該方法運用雙手性選擇劑毛細管電泳法分離拉唑藥物對映體，其所用的手性選擇劑有兩種一種是Cu (II)和L-組氨酸；另一種是羥丙基-環(huán)糊精，所述方法包括以下步驟 a.樣品和運行緩沖液的配置配制樣品儲備溶液稱為取泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑和泰妥拉唑消旋體樣品粉末10 mg，置10 mL棕色容量瓶中，以過濾后的甲醇溶解并定容至刻度，搖勻；得樣品濃度均為I mg/mL的儲備液，-20 °C冰箱保存；樣品供試溶液取樣品儲備液I mL分別至10 mL棕色容量瓶中，以甲醇定容至刻度，搖勻，得100 Ug/mL供試液，4 °(冰箱保存；運行緩沖液依次稱取磷酸二氫鈉、HP-3 -⑶、醋酸銅和L-組氨酸0. 0195 g、0.05 g、0. 050 g、0. 0582 g置于50 mL燒杯，加25 mL 二次蒸餾水溶解，用0.1 M氫氧化鈉溶液和10%磷酸調(diào)至pH 5. 0，即得運行緩沖液，經(jīng)0. 45 um微孔濾膜過濾后備用； b.準備分離儀器分離過程在石英毛細管中進行，選取內(nèi)徑50m的毛細管，截取一段長度53 cm，在距端口 8 cm處除去毛細管的聚酰亞胺層得到檢測窗口，新的毛細管在使用前需沖洗和活化，連續(xù)分析時，每次分析前依次用依次10%HC1、lMNaOH、二次蒸餾水和運行緩沖液各沖洗10 min ； c.進樣進樣前設置分離條件,分離電壓15kV,檢測波長290 nm ;泰妥拉唑306 nm,進樣高度10 cm，進樣時間10 S，正極進樣負極檢測；進樣間依次用運行緩沖液和二次蒸餾水各沖柱5 min，然后進行下一次進樣。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒ǎ涮卣髟谟?，所述樣品操作時運行緩沖液和樣品均經(jīng)0.45 Pm微孔濾膜過濾，并超聲脫氣，樣品用甲醇溶解，4°C冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 3.根據(jù)權利要求1所述的一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒?，其特征在于，所述電泳分離泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑?qū)τ丑w運行緩沖液5 mmol/L磷酸二氫鈉含20 mg/Mlhp-0-⑶、15 mmol/L L-組氨酸和10 mmol/L醋酸銅,調(diào)至pH 5. 0 ；分離電壓15 kV ;紫外檢測波長290 nm。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒?，其特征在于，所述電泳分離泰妥拉唑?qū)τ丑w運行緩沖液5 mmol/L磷酸二氫鈉含20 mg/Mlhp-P-CD、15 mmol/L L-組氨酸和10 mmol/L醋酸銅，調(diào)至pH 5.0;分離電壓15 kV ;紫外檢測波長306 nm。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒ǎ涮卣髟谟?，所述儀器準備毛細管總長53 cm,有效長度45 cm,內(nèi)徑50 mm ;新的毛細管在使用前需沖洗和活化，連續(xù)分析時，每次分析前依次用10%HC1、lMNaOH、二次蒸餾水和運行緩沖液各沖洗10 min;進樣間依次用運行緩沖液和二次蒸餾水各沖柱5 min，然后進行下一次進樣。
6.根據(jù)權利要求1所述的一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒?，其特征在于，所述手性選擇劑有兩種一種是Cu (II)和L-組氨酸的配合物，配位比是1:1.5 ;另一種是輕丙基_ P _環(huán)糊精。
全文摘要
一種雙手性選擇劑毛細管電泳法分離抗?jié)兯幬锏姆椒?，涉及一種分離抗?jié)兯幬锏姆椒?，本發(fā)明提供了一種運用雙手性選擇劑毛細管電泳法分離分析四個抗?jié)兯幬?泮托拉唑、奧美拉唑、蘭索拉唑和泰妥拉唑)。用一定比例的Cu(Ⅱ)和L-組氨酸配合物、羥丙基-β-環(huán)糊精作為手性選擇劑，在合適的pH條件下，通過毛細管電泳法實現(xiàn)四個藥物對映體分離。本發(fā)明使用多個手性選擇劑，利用其協(xié)同作用得到更高的分離效果，操作簡單，手性選擇劑價廉易得且樣品和試劑用量少?？捎糜诖祟惪?jié)兯幬锏捏w內(nèi)分析和產(chǎn)品光學純度檢測，同時也為研發(fā)此類藥品和單一對映體給藥提供技術支持與保障。
文檔編號G01N30/02GK103063756SQ20121049649
公開日2013年4月24日 申請日期2012年11月29日 優(yōu)先權日2012年11月29日
發(fā)明者關瑾, 閻峰, 石爽, 王思林, 牛秋玲 申請人:沈陽化工大學