專利名稱：一種提高膠體金免疫層析試紙條檢測靈敏度的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于膠體金檢測領域，具體涉及ー種提高膠體金免疫層析試紙條檢測靈敏度的方法。
背景技術：
食品是人類賴以生存和發(fā)展的物質基礎，食品安全則直接關系到人類健康。然而，近年來惡性食品安全事故接連不斷出現(xiàn)，如病原微生物超標、三聚氰胺牛奶、瘦肉精豬肉、黃曲霉毒素奶等。針對食品中微生物、真菌毒素、藥物殘留、重金屬等污染問題，目前，免疫層析試紙條技術已廣泛應用到食品，農產(chǎn)品等領域。其中最為常見的免疫層析試紙條為膠 體金免疫層析試紙條。膠體金免疫層析試紙條適用于現(xiàn)場快速檢測，最初主要用于蛋白質、微生物及多種化合物的定性檢測，僅需肉眼即可完成判斷。隨著食品安全學科領域發(fā)展，各國對于食品中的污染物都有明確的限量要求，單純的膠體金免疫層析試紙條定性檢測對于很多種污染物檢測已經(jīng)難以滿足消費者對污染物的定量要求。膠體金免疫層析試紙條讀條儀的出現(xiàn)使得膠體金試紙條由定性檢測逐漸轉變到定量檢測水平。然而，膠體金免疫層析試紙條讀條儀雖然能提高檢測靈敏度，但是檢測靈敏度有限，且這種結合光學的檢測技術容易受試紙條本身背景的干擾。為進ー步提高讀條儀的讀數(shù)靈敏度，研究者分別從信號增強、數(shù)據(jù)處理等方面進行優(yōu)化。現(xiàn)有技術中，主要采用增敏試劑對檢測試紙條進行增敏處理，來提高檢測的靈敏度，但氯金酸和抗壞血酸作為常用的增敏試劑，成本較高，不適于廣泛應用。因此在這些研究基礎上，研究一種能降低試紙條自身背景值的處理方法，對于進一歩改善膠體金免疫層析試紙條的讀數(shù)靈敏度具有重要意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是針對上述現(xiàn)有技術存在的不足而提供一種提高膠體金免疫層析試紙條檢測靈敏度的方法。其可提高膠體金免疫層析試紙條的檢測靈敏度，増大檢測線性范圍，操作簡單方便。本發(fā)明為解決上述提出的問題所采用的技術方案為
一種提高膠體金免疫層析試紙條檢測靈敏度的方法，具體步驟如下
(1)透明化試劑的配制選取苯甲醇與甲醇作為配方組分，將兩者以體積為9:1 10:1充分混勻，制得透明化試劑，避光密封保存；
(2)試紙條處理取膠體金免疫層析試紙條對待測樣品進行檢測，檢測完成后在膠體金免疫層析試紙條的檢測區(qū)滴加步驟(I)配制得到的透明化試劑，放置待試紙條檢測區(qū)由白色變成透明后，讀條儀即可進行讀數(shù)。按上述方案，所述步驟(2)中就是透明化試劑的使用量為5(Tl00iiし按上述方案，所述步驟(2)的放置時間為3 5min。按上述方案，所述的膠體金免疫層析試紙條為真菌毒素膠體金免疫層析試紙條或病毒膠體金免疫層析試紙條。本發(fā)明在檢測前通過對膠體金試紙條進行預處理，可使膠體金試紙條上檢測區(qū)的硝酸纖維素膜由白色非透明的易碎結構轉變成透明且具備一定韌性的薄膜結構(見圖1)，而降低光反射作用造成的背景干擾；同時還可防止因膠體金自身氧化而使顯色區(qū)域逐漸變色，而通過對膠體金試紙條顯色區(qū)域的顔色固定，達到避免因膠體金氧化而對試紙條的讀數(shù)檢測造成不良影響的作用，預處理完畢后再進行讀條儀讀數(shù)，可達到降低背景值影響，提高膠體金免疫層析試紙條檢測靈敏度的目的。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果在于
(1)提高檢測靈敏度，増大檢測線性范圍；采用本發(fā)明方法對膠體金免疫層析試紙條進行處理后可使讀條儀進行檢測時的最小有效讀數(shù)減小，從而可提高膠體金免疫層析試紙條的檢測靈敏度，増大其檢測線性范圍；
(2)操作簡單方便，無需專業(yè)人員；
(3)處理時間短，檢測完成后3飛分鐘即可完成。


圖1為本發(fā)明實施例1處理前后的黃曲霉毒素總量膠體金免疫層析試紙條的縱切面剖視圖，圖中T檢測線，C質控線。
具體實施例方式為了更好地理解本發(fā)明，下面結合實例進ー步闡明本發(fā)明的內容，但本發(fā)明不僅僅局限于下面的實施例。實施例1 :
實驗組
(1)透明化試劑的配制選取苯甲醇與甲醇作為配方組分，按照ImL甲醇加入IlOiiL苯甲醇比例充分混勻，避光密封保存；
(2)試紙條處理配制系列濃度黃曲霉毒素(AFT)標準溶液(0ng/mL、0. 01 ng/mL、0. 03 ng/mL、0. 06 ng/mL、0. 125 ng/mL、0. 25 ng/mL、0. 5 ng/mL、Ing/mL),分別取 100 u L上述各濃度的標準溶液滴加到黃曲霉毒素總量的膠體金檢測試紙條的樣品墊上，進行檢測，10分鐘檢測完成后，在膠體金免疫層析試紙條的檢測區(qū)滴加2滴(約IOOy L)透明化試齊U，放置3分鐘后，試紙條檢測區(qū)由白色變成透明(見圖1)，立即進行讀條儀讀數(shù)，記錄測試值。對照組對照組與實驗組的不同之處在于檢測完成后直接讀數(shù)不進行透明化試劑處理。結果分析
對照組有效檢測范圍為0. 03ng/mL、. 5ng/mL,即待測體系中黃曲霉毒素總量濃度達0. 03ng/mL時，讀條儀達到其最高測試閾值，高于0. 5ng/mL時,讀條儀達到其最低測試閾值。實驗組有效檢測'泡圍為0. 01ng/mL Ing/mL，即待測體系中黃曲霉韋素總量濃度達到0. 0Ing/mL時,讀條儀達到其最高測試閾值,高于Ing/mL時,讀條儀達到其最低測試閾值。由此對比結果可以看出采用本發(fā)明方法對黃曲霉毒素總量膠體金免疫層析試紙條進行處理后提高了黃曲霉毒素總量膠體金免疫層析試紙條的檢測靈敏度，增大了其檢測線性范圍。實施例2:
實驗組
(1)透明化試劑的配制選取苯甲醇與甲醇作為配方組分，按照ImL甲醇加入IOOiiL苯甲醇比例充分混勻，避光密封保存；
(2)試紙條處理配制系列濃度黃曲霉毒素M1(AFM1)標準溶液(0 ng/mL、0.05 ng/mL、0.1 ng/mL >0. 25 ng/mL、0. 50 ng/mL、l ng/mL、2 ng/mL、3 ng/mL、4ng/mL)，分別取 100 u L上述各濃度的標準溶液滴加到黃曲霉毒素M1 (AFM1)膠體金檢測試紙條的樣品墊上，10分鐘檢測完成后，在試紙條的檢測區(qū)滴加2滴(約100 u L)透明化試劑，放置待試紙條檢測區(qū)由白色變成透明，立即進行讀條儀讀數(shù)，記錄測試值。對照組對照組與實施組的不同之處在于檢測完成后直接讀數(shù)不進行透明化試劑處理。結果分析
對照組有效檢測范圍為0. lng/mL^3ng/mL,即待測體系中黃曲霉毒素Ml濃度低于
0.03ng/mL時,讀條儀達到其最高測試閾值,高于3ng/mL測試值時,讀條儀達到其最低測試閾值。實驗組有效檢測范圍為0. 05ng/mL 4ng/mL，即待測體系中黃曲霉毒素Ml濃度達
0.05ng/mL時,讀條儀達到其最高測試閾值,高于4ng/mL測試值時,讀條儀達到其最低測試閾值。由此對比結果可以看出采用本發(fā)明方法對黃曲霉毒素Ml膠體金免疫層析試紙條進行處理后提高了黃曲霉毒素Ml膠體金免疫層析試紙條的檢測靈敏度，增大了其檢測線性范圍。實施例3
實驗組
(1)透明化試劑的配制選取苯甲醇與甲醇作為配方組分，按照ImL甲醇加入105yL苯甲醇比例充分混勻，避光密封保存；
(2)試紙條處理及檢測配制系列濃度玉米赤霉烯酮標準溶液(0ng/mL、0. 05 ng/mL、0.1 ng/mL >0. 25 ng/mL、0. 50 ng/mL>I ng/mL>2 ng/mL>3 ng/mL、4ng/mL)，分別取100 u L上述各濃度的標準溶液滴加到玉米赤霉烯酮膠體金檢測試紙條的樣品墊上，10分鐘檢測完成后，在試紙條檢測區(qū)滴加透明化試劑，4分鐘后試紙條檢測區(qū)由白色變成透明，立即進行讀條儀讀數(shù)，記錄測試值。對照組對照組與實施組的不同之處在于檢測完成后直接讀數(shù)不進行透明化試劑處理。結果分析
對照組有效檢測范圍為0. lng/mL^ng/mL,即體系中玉米赤霉烯酮濃度達0.1ng/mL時，讀條儀達到其最高測試閾值，高于2ng/mL時，讀條儀達到其最低測試閾值。
實驗組有效檢測范圍為O. 05ng/mL 3ng/mL,即體系中玉米赤霉烯酮濃度達到O.05ng/mL時,讀條儀達到其最高測試閾值,高于3ng/mL時,讀條儀達到其最低測試閾值。
由此對比結果可以看出采用本發(fā)明方法對玉米赤霉烯酮膠體金免疫層析試紙條進行處理后提高了玉米赤霉烯酮膠體金免疫層析試紙條的檢測靈敏度，增大了其檢測線性范圍。
實施例4實驗組(1)透明化試劑的配制選取苯甲醇與甲醇作為配方組分，按照ImL甲醇加入110μ L苯甲醇比例充分混勻，避光密封保存；(2)試紙條處理取滅活Η5型禽流感病毒陽性尿囊液，用O.OlM PBS 1:2倍比稀釋，然后分別取不同稀釋度樣品溶液(1:2 1:214)滴加到Η5型禽流感檢測試紙條的樣品墊上進行 Η5型禽流感檢測，10分鐘檢測完成后，在試紙條的檢測區(qū)滴加100 μ L透明化試劑，3分鐘后試紙條檢測區(qū)由白色變成透明，立即進行讀條儀讀數(shù)，記錄測試值。
對照組對照組與實施組的不同之處在于檢測完成后直接讀數(shù)不進行透明化試劑處理。
結果分析對照組最低檢測稀釋度為21(1，即稀釋倍數(shù)高于21°時，讀條儀達到其最低測試閾值，不能檢測到陽性。
實驗組最低檢測稀釋度為212，即稀釋倍數(shù)高于212時，讀條儀達到其最低測試閾值，不能檢測到陽性。
權利要求
1.一種提高膠體金免疫層析試紙條檢測靈敏度的方法，其特征在于具體步驟如下 (1)透明化試劑的配制選取苯甲醇與甲醇作為配方組分，將兩者以體積為9:1 10:1充分混勻，制得透明化試劑，避光密封保存； (2)試紙條處理取膠體金免疫層析試紙條對待測樣品進行檢測，檢測完成后在膠體金免疫層析試紙條的檢測區(qū)滴加步驟(I)配制得到的透明化試劑，放置待試紙條檢測區(qū)由白色變成透明后，讀條儀即可進行讀數(shù)。
2.根據(jù)權利要求1所述的提高膠體金免疫層析試紙條檢測靈敏度的方法，其特征在于所述步驟(2)中就是透明化試劑的使用量為50 ΙΟΟμ L。
3.根據(jù)權利要求1所述的提高膠體金免疫層析試紙條檢測靈敏度的方法，其特征在于所述步驟(2)的放置時間為3-5min。
4.根據(jù)權利要求1所述的提高膠體金免疫層析試紙條檢測靈敏度的方法，其特征在于所述的膠體金免疫層析試紙條為真菌毒素膠體金免疫層析試紙條或病毒膠體金免疫層析試紙條。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提高膠體金免疫層析試紙條檢測靈敏度的方法。其特征在于具體步驟如下(1)透明化試劑的配制選取苯甲醇與甲醇作為配方組分，將兩者以體積為9:1～10:1充分混勻，制得透明化試劑，避光密封保存；(2)試紙條處理取膠體金免疫層析試紙條對待測樣品進行檢測，檢測完成后在膠體金免疫層析試紙條的檢測區(qū)滴加步驟(1)配制得到的透明化試劑，放置待試紙條檢測區(qū)由白色變成透明后，讀條儀即可進行讀數(shù)。采用本發(fā)明方法對膠體金免疫層析試紙條進行處理可提高其檢測靈敏度，增大其檢測線性范圍；操作簡單方便，無需專業(yè)人員；處理時間短，檢測完成后3~5分鐘即可完成。
文檔編號G01N33/558GK103018439SQ20121050738
公開日2013年4月3日 申請日期2012年11月30日 優(yōu)先權日2012年11月30日
發(fā)明者李培武, 李冉, 張奇, 丁小霞, 張文, 張兆威 申請人:中國農業(yè)科學院油料作物研究所