黃柏藥材雙溶劑融合hplc指紋圖譜的建立方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，所述方法包括以下步驟：(1)制備對(duì)照品溶液：配制鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液；(2)制備供試品溶液：稱取黃柏或關(guān)黃柏藥材，用具有代表性和互補(bǔ)性的兩種溶劑提取，提取液用微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液；(3)采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定得到指紋圖譜，其中色譜條件為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：300nm檢測(cè)；(4)將兩種溶劑提取部位指紋圖譜進(jìn)行融合，建立黃柏藥材雙溶劑融合指紋圖譜。供試品指紋圖譜采用國(guó)家藥典委員會(huì)出版的中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版進(jìn)行評(píng)價(jià)。本發(fā)明建立的指紋圖譜具有豐富的指紋特征信息，方法簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確可靠等特點(diǎn)。可有效鑒別關(guān)黃柏、黃柏及其混淆品，為黃柏的鑒別和全面質(zhì)量控制提供依據(jù)。
【專利說(shuō)明】黃柏藥材雙溶劑融合HPLC指紋圖譜的建立方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，更具體的說(shuō)是黃柏藥材雙溶劑融合指紋圖譜的質(zhì)量控制方法。屬于藥物分析【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]黃柏(PHELLODENDRICHINENSIS CORTEX)為蕓香科植物黃皮樹(shù) Phellodendronchinense Schneid.的干燥樹(shù)皮,習(xí)稱“川黃柏”(國(guó)家藥典委員會(huì):中國(guó)藥典,一部.北京，化學(xué)工業(yè)出版社，2010:153, 286)，為常用中藥，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡的功能，臨床應(yīng)用十分廣泛。味苦、寒、歸腎、膀胱、大腸經(jīng)。功效清熱燥濕、瀉火解毒、退虛熱。
[0003]《中國(guó)藥典》2005和2010版將兩者分開(kāi)，以“川黃柏”作“黃柏”，“關(guān)黃柏”單列。目前市場(chǎng)上銷售的主流商品是關(guān)黃柏(顏玉貞，余瓊希.黃柏HPTLC色譜指紋圖譜研究.中獸醫(yī)學(xué)雜志，2008,增刊:304 ?307)。偽品:木蝴蝶 Oroxylum indicum(Linn.) Bentham exKurz樹(shù)皮,黃皮Clausena lansium(Lour.) Skeels樹(shù)皮(趙靜,馬驥,龐其昌，等.黃柏飲片光譜成像指紋圖譜的研究.中草藥，2010，41)。
[0004]文獻(xiàn)中有關(guān)黃柏鑒別及指紋圖譜的報(bào)道較多，多集中在黃柏藥材的鑒別，指紋圖譜的研究。采用的方法有高效液相色譜法、高效薄層色譜法、非水毛細(xì)管電泳法等分析手段。例如:王瑾采用反相高效液相色譜法，鹽酸-70%乙醇(I: 100)回流提取，甲醇-乙睛-0.lmol/L磷酸二氫鈉(磷酸調(diào)節(jié)pH為3.0)-2g/L十二烷基硫酸鈉-三乙胺(25: 25: 25: 25: 0.2，v/v)，進(jìn)樣10 μ L，柱溫室溫，230nm檢測(cè)，對(duì)收集的22個(gè)川黃柏、關(guān)黃柏樣品進(jìn)行分析，獲得化學(xué)數(shù)據(jù)；用聚類分析和逐步判別分析進(jìn)行模式識(shí)別(王瑾，黃柏的質(zhì)最評(píng)價(jià)研究.沈陽(yáng):沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文.2004)。
[0005]杜雪以1%醋酸一甲醇超聲提取，以乙腈和0.3%磷酸三乙胺水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，柱溫25 °C，流速0.8ml/min, 305nm檢測(cè)，建立了川黃柏藥材HPLC指紋圖譜(杜雪，川產(chǎn)道地藥材黃柏HPLC指紋圖譜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.四川:西南交通大學(xué)碩士學(xué)位論文.2007)。
[0006]王龍虎等以乙醇浸泡-超聲兩步提取，流動(dòng)相A:50mmol/L的磷酸二氫鉀緩沖溶液(PH 3.5)，流動(dòng)相B: (50mmol/L的磷酸二氫鉀緩沖溶液，磷酸調(diào)pH 3.5):乙腈=3: 7的混合溶液，梯度洗脫，流速lml/min，280nm檢測(cè)，對(duì)黃柏藥材、關(guān)黃柏藥材、鹽)11黃柏飲片HPLC指紋圖譜初步研究(王龍虎，黃柏藥材及中藥飲片的HPLC指紋圖譜初步研究，中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第四屆中藥炮制學(xué)術(shù)會(huì)議論文集，2004)。
[0007]但是文獻(xiàn)資料中對(duì)黃柏、關(guān)黃柏及其混淆品的鑒別的都較分散，且方法較復(fù)雜，尚沒(méi)有一種方法可以直接簡(jiǎn)單地把黃柏藥材的品種區(qū)分開(kāi)來(lái)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明按照新藥研發(fā)中藥材指紋圖譜研究的技術(shù)要求，對(duì)固定品種、藥用部位、產(chǎn)地、采收期、產(chǎn)地加工方法的黃柏藥材進(jìn)行HPLC指紋圖譜的研究。
[0009]因此，本發(fā)明在于提供一種黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，以及由此方法所得到的黃柏藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。為實(shí)現(xiàn)此目的，本發(fā)明通過(guò)對(duì)黃柏藥材雙溶劑高效液相色譜指紋圖譜的研究，提出了一種更好的黃柏藥材質(zhì)量控制方法，彌補(bǔ)了現(xiàn)有質(zhì)量控制技術(shù)的不足，同時(shí)可以鑒別川黃柏、關(guān)黃柏及其混淆品，使黃柏藥材的質(zhì)量控制更加完善和科學(xué)。
[0010]因此本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種黃柏藥材雙溶劑HPLC指紋圖譜的建立方法，所述方法包括以下步驟:
[0011](I)制備對(duì)照品溶液:精密配制鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液；
[0012](2)制備供試品溶液:精密稱取黃柏或關(guān)黃柏藥材粉末，用兩種不同溶劑進(jìn)行提取，提取液用微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液；
[0013](3)采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定得到指紋圖譜，其中色譜條件為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫；紫外檢測(cè)波長(zhǎng):300nm檢測(cè)；優(yōu)選地應(yīng)用Agilent EZChrom Elite軟件將兩種溶劑提取部位指紋圖譜進(jìn)行融合，建立黃柏藥材雙溶劑融合指紋圖譜；
[0014](4)評(píng)價(jià)相似度:供試品指紋圖譜采用國(guó)家藥典委員會(huì)出版的中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版進(jìn)行評(píng)價(jià)。
[0015]根據(jù)本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，可選用具有代表性和互補(bǔ)性的兩種溶劑進(jìn)行上述步驟(b)所述的提取，如:甲醇和甲醇-鹽酸；乙腈和乙腈-鹽酸；甲醇和甲醇-醋酸，優(yōu)選所述兩種不同溶劑為甲醇和甲醇-鹽酸。根據(jù)本發(fā)明一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方式，所述甲醇-鹽酸中甲醇和鹽酸的體積比為100: 1，乙腈-鹽酸中乙腈和鹽酸的體積比為100: 1，甲醇-醋酸中甲醇和醋酸的體積比為100: I。
[0016]以下具體描述以上各步驟。
[0017](I)對(duì)照品溶液的制備:
[0018]鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液的制備:精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，用甲醇配制成每Iml含鹽酸小檗堿20?500 μ g的溶液；
[0019](2)供試品溶液的制備:精密稱取黃柏或關(guān)黃柏藥材粉末0.1?10g，甲醇和甲醇-鹽酸(體積比100: I)提取，超聲提取，提取時(shí)間為10?80min，提取時(shí)間為優(yōu)選為30min，提取液用微孔濾膜(孔徑為0.2 μ m?0.8 μ m，優(yōu)選0.45 μ m)過(guò)濾，即得供試品溶液；
[0020](3)高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣0.5?20 μ I，照高效液相色譜法測(cè)定，得到指紋圖譜，其中色譜條件為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，梯度洗脫的流動(dòng)相為甲酸-甲酸銨緩沖液(含20mmol/L甲酸銨，ρΗ3.11 + 0.02，Α)和乙腈(B)梯度洗脫；梯度洗脫時(shí)間為20?60min，流速0.3?2.0ml/min ;柱溫20?45°C;紫外檢測(cè)波長(zhǎng):200nm ?400nm ；
[0021](4)相似度評(píng)價(jià):供試品指紋圖譜在200nm?400nm檢測(cè)波長(zhǎng)下的相似度均大于
0.90。
[0022]根據(jù)本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，在步驟(3)中，所述的梯度洗脫，梯度洗脫程序以如以下濃度配制進(jìn)行:洗脫程序?yàn)?0?13min，13%?15% B ;13?22min，15%?35%B ；22 ?27min，35%?42% B ；27 ?27.lmin，42%?13% B ；27.1 ?37min，13% B。
[0023]根據(jù)本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，本發(fā)明所述黃柏藥材產(chǎn)自四川，記為HB。
[0024]根據(jù)本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式,本發(fā)明所述關(guān)黃柏產(chǎn)自遼寧,記為HB-L。
[0025]根據(jù)本發(fā)明一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方式，本發(fā)明檢測(cè)方法可以通過(guò)下述步驟實(shí)施:
(I)取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每ImL含103 μ g的溶液，用0.45μπι微孔濾膜過(guò)濾即得。(2)供試品溶液的制備:分別以甲醇和甲醇-鹽酸(100: I)作為提取溶劑。取本品粉末0.15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入提取溶劑15ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用提取溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，0.45 μ m微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，用等體積0.22 μ m微孔濾膜過(guò)濾的超純水稀釋，超聲混勻即得。
[0026](3)色譜條件:Welch Ultimate? C18 色譜柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m),流動(dòng)相為甲酸-甲酸銨緩沖液(含20mmol/L甲酸銨，pH3.11 ±0.02，A)-乙腈(B)梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?0 ?13min，13%?15% B ；13 ?22min，15%?35% B ；22 ?27min，35%?42% B ；27 ?27.lmin，42%?13% B ；27.1 ?37min，13% B。流速 1.0ml/min 進(jìn)樣量 20 μ L，柱溫30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)300nm，檢測(cè)時(shí)間35min。
[0027]本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供按照本發(fā)明HPLC指紋圖譜的建立方法所得到的黃柏藥材雙溶劑融合的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，指紋圖譜中有8個(gè)共有峰，編號(hào)依次為I?8。所述8個(gè)共有峰中，單峰面積占總峰面積大于5%，而小于10%的共有峰為峰5 ;單峰面積占總峰面積大于10%的共有峰為峰3、峰7、峰8 ;其余色譜峰峰面積均小于5%。這些共有特征峰構(gòu)成了黃柏藥材的指紋圖譜，可作為黃柏藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。非共有峰面積占總色譜峰積面積比值< 10%。共有峰的峰號(hào)(相對(duì)保留時(shí)間)=1(0.263)，2 (0.305)，3 (0.515),4(0.694),5 (0.718)，6 (0.793)，7 (0.847)，8 (1.000)。共有峰的歸屬為:峰8為鹽酸小檗堿。
[0028]本發(fā)明將藥材用不同溶劑提取，得到的不同提取部位在同一指紋圖譜條件下分別建立指紋圖譜，然后將這些指紋圖譜進(jìn)行融合，達(dá)到不同提取部位成分信息互補(bǔ)，增加指紋圖譜的信息量，從而提高其指紋鑒定能力，以實(shí)現(xiàn)指紋圖譜的全面和整體評(píng)價(jià)。本發(fā)明為以黃柏為例，建立其雙溶劑融合指紋圖譜，該方法可有效鑒別關(guān)黃柏、黃柏及其混淆品，為黃柏的鑒別和全面質(zhì)量控制提供依據(jù)。
[0029]本發(fā)明方法具有如下顯著的優(yōu)點(diǎn)和用途:
[0030](a)將藥材用不同溶劑提取，得到的不同提取部位在同一指紋圖譜條件下分別建立指紋圖譜，然后將這些指紋圖譜進(jìn)行融合，達(dá)到不同提取部位成分信息互補(bǔ)，增加指紋圖譜的信息量，從而提高其指紋鑒定能力，以實(shí)現(xiàn)指紋圖譜的全面和整體評(píng)價(jià)；
[0031](b)供試品制作簡(jiǎn)便，分析時(shí)間較短，色譜條件容易實(shí)現(xiàn)；
[0032](C)方法穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好；
[0033](d)有效表征了黃柏藥材的質(zhì)量，適于對(duì)黃柏藥材真?zhèn)?、產(chǎn)地和品質(zhì)的鑒別與控制。
[0034]下面通過(guò)實(shí)施例及其附圖詳細(xì)闡述本發(fā)明的技術(shù)方案，所例舉的實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明沒(méi)有限制。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0035]圖1為黃柏藥材HPLC對(duì)照?qǐng)D譜及共有色譜峰的標(biāo)定，其由中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)A版生成，記為HB-R。
[0036]圖2為實(shí)施例1的10批次黃柏藥材雙溶劑融合指紋圖譜疊加圖，圖中由上至下分別為 HB-10 ?HB-1。
[0037]圖3為黃柏混淆品、關(guān)黃柏雙溶劑融合指紋圖譜與HB-R的疊加圖，其中由下至上分別為 HB-1l ?HB-15、HB-L 和 HB-R。
【具體實(shí)施方式】
[0038]實(shí)施例1:四川產(chǎn)黃柏藥材HPLC指紋圖譜的檢測(cè)
[0039]I實(shí)驗(yàn)材料與儀器
[0040]1.1藥材:四川產(chǎn)黃柏共10批，分別記為(HB-1?HB-10)。
[0041]1.2儀器:D10NEX Ultimate3000高效液相色譜儀(四元梯度泵；柱溫箱；DAD檢測(cè)器；自動(dòng)進(jìn)樣器；Chromeleon色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng))；METTLER TOLEDO AL204-S電子天平；METTLERTOLEDO PH計(jì)；KQ-250DE型醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；LXJ_II B型低速大容量多管離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；
[0042]1.3試劑:鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為:批號(hào)110713-200606)，乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。
[0043]2.高效液相色譜
[0044]2.1色譜條件:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料(Welch Ultimate? C18色譜柱(4.6mmX250mm,5ym));采用梯度洗脫,流動(dòng)相為甲酸-甲酸銨緩沖液(含20mmol/L甲酸銨，ρΗ3.11 + 0.02，A)-乙腈(B)梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?0?13min，13%?15% B ；13 ?22min，15 % ?35 % B ;22 ?27min，35 % ?42 % B ;22 ?27.1min, 42 % ?13 % B ;27.1 ~ 37min,13% B。流速1.0ml/min進(jìn)樣量20 μ L，柱溫30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)300nm，檢測(cè)時(shí)間 35min。
[0045]2.2對(duì)照品溶液的制備:取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每ImL含103 μ g的溶液，用0.45 μ m微孔濾膜過(guò)濾即得。
[0046]2.3供試品溶液的制備:
[0047]分別以甲醇和甲醇-鹽酸(100: I)作為提取溶劑。取本品粉末0.15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入提取溶劑15ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用提取溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，0.45 μ m微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，用等體積
0.22 μ m微孔濾膜過(guò)濾的超純水稀釋，超聲混勻即得。
[0048]2.4測(cè)定:在相同色譜條件下，對(duì)同一樣品的不同提取物測(cè)定色譜圖，將色譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入Agilent EZChrom Elite軟件對(duì)色譜圖進(jìn)行融合,得到融合指紋圖譜見(jiàn)圖2所示,并進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，結(jié)果見(jiàn)表I，確定其特征共有峰:指紋圖譜中有8個(gè)特征共有峰，其中8號(hào)色譜峰為S色譜峰，為鹽酸小檗堿，生成的對(duì)照?qǐng)D譜見(jiàn)圖1。
【權(quán)利要求】
1.黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，所述方法包括以下步驟: (1)制備對(duì)照品溶液:配制鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液； (2)制備供試品溶液:稱取黃柏或關(guān)黃柏藥材用兩種不同溶劑進(jìn)行提取，提取液用微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液； (3)采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定得到指紋圖譜，其中色譜條件為:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫；紫外檢測(cè)波長(zhǎng):300nm檢測(cè)；在相同色譜條件下，對(duì)同一樣品的不同提取物測(cè)定色譜圖，對(duì)色譜圖進(jìn)行融合，得到融合指紋圖譜； (4)評(píng)價(jià)相似度:將分析所得的雙溶劑融合指紋圖譜導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版》進(jìn)行評(píng)價(jià)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:步驟(1)中所述鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液的濃度為20~500 μ g/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:步驟(2)中所述藥材的稱重量為0.1~10g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:步驟(2)中所述兩種不同溶劑為甲醇和甲醇-鹽酸、乙腈和乙腈-鹽酸、或甲醇和甲醇-醋酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:所述甲醇-鹽酸中甲醇和鹽酸的體積比為100: 1，乙腈-鹽酸中乙腈和鹽酸的體積比為100: 1，甲醇-醋酸中甲醇和醋酸的體積比為100: I。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:步驟(2)中所述提取步驟為采用甲醇和甲醇-鹽酸提取`；再采用超聲提取，提取時(shí)間為10~60min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:步驟(2)中所述黃柏藥材產(chǎn)自四川，所述關(guān)黃柏產(chǎn)自遼寧。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:步驟(3)中所述微孔濾膜孔徑為0.2 μ m~0.8 μ m。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:步驟(3)中所述梯度洗脫的流動(dòng)相為甲酸-甲酸銨緩沖液(A)和乙腈(B)梯度洗脫；梯度洗脫時(shí)間為 20 ~60min，流速 0.3 ~2.0ml/min ;柱溫 20 ~45°C。
10.如權(quán)利要求9所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:步驟(3)中所述梯度洗脫的洗脫程序以如程序進(jìn)行:乙腈O~13min，13%~15% B(體積比);13~22min, 15 % ~35 % B(體積比);22 ~27min，35% ~42 % B(體積比);27 ~27.1min,42%~13% B(體積比)；27.1 ~37min, 13% B(體積比)。
11.如權(quán)利要求9所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:所述甲酸-甲酸銨緩沖液包含20mmol/L甲酸銨，pH為3.09-3.13。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:步驟(3)所述測(cè)定中，高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣0.5~20 μ I。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:步驟(4)所述評(píng)價(jià)相似度中，供試品指紋圖譜在300nm檢測(cè)波長(zhǎng)下的相似度均大于0.90。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜的建立方法所測(cè)得的黃柏藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其特征在于:所述指紋圖譜中有8個(gè)共有峰，編號(hào)依次為I~8，非共有峰面積占總色譜峰積面積比值< 10%。共有峰的峰號(hào)(相對(duì)保留時(shí)間)為:1(0.263)，2(0.305)，3 (0.515)，4 (0.694)，5 (0.718)，6 (0.793)，7 (0.847)，8 (1.000);共有峰的歸屬為:峰8為鹽酸小檗堿。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的黃柏藥材HPLC指紋圖譜，其特征在于:所述8個(gè)共有峰中，單峰面積占總峰面積大于5%，而小于10%的共有峰為峰5 ;單峰面積占總峰面積大于10%的共有峰為峰3、峰7、峰`8 ;其余色譜峰峰面積均小于5%。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103869003SQ201210538643
【公開(kāi)日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月13日
【發(fā)明者】楊義芳, 黃春躍, 唐博雅, 羅澤淵, 李存勇, 朱緒民, 蒲琴 申請(qǐng)人:滇虹藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司, 上海醫(yī)藥工業(yè)研究院