一種強極性堿性化合物的分離分析或分離制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種強極性堿性化合物的分離分析及分離制備方法，該方法適用于所有強極性堿性化合物的分離分析和分離制備，尤其是在反相上保留較弱或者沒有保留的堿性化合物的制備，LC-UV分析、LC-MS分析等。主要為以硅膠基質(zhì)的陽離子交換材料為固定相，以各種有機酸、無機酸以及質(zhì)譜兼容的揮發(fā)性鹽為洗脫劑，使得反相上難以保留或保留較弱的堿性化合物具有很好的保留，并得到較好的分離、純化等。本發(fā)明為強極性堿性化合物的定量、定性以及新型強極性堿性化合物的發(fā)現(xiàn)提供了新的途徑。該方法運行過程重復性高和可操作性強，易于實現(xiàn)標準化和產(chǎn)業(yè)化，對高效、選擇性的分離強極性堿性化合物具有一定的指導意義。
【專利說明】一種強極性堿性化合物的分離分析或分離制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及強極性堿性化合物的分離分析和分離制備，具體的說是用陽離子交換材料作為固定相，以質(zhì)譜兼容的溶劑作為流動相，實現(xiàn)離子交換與MS的聯(lián)用對強極性堿性化合物進行分離檢測，解決這類化合物分離難和檢測難的問題。另外，強極性堿性化合物用傳統(tǒng)的離子交換或者親水分離得到的產(chǎn)品通常含有鹽，不利于后續(xù)工作的開展，如NMR，MS檢測等，本發(fā)明可用于強極性堿性化合物的無鹽制備。
技術背景
[0002]堿性化合物在各個領域都有廣泛的應用。比如，在醫(yī)藥行業(yè)，堿性藥物占據(jù)了已有藥物的70%，同時，堿性化合物還是眾多藥物的中間體或者先導物，在維護人類健康的過程中有著不可代替的作用(David V.McCalley, Journal of ChromatographyA, 1217(2010)858)。
[0003]在眾多的堿性化合物中，強極性堿性化合物在生命科學領域以及醫(yī)藥領域都扮演著重要的角色。如，五羥色胺，一種神經(jīng)遞質(zhì)。作為神經(jīng)遞質(zhì)的五羥色胺，在腦內(nèi)可參與多種生理功能及病理狀態(tài)的調(diào)節(jié)，如睡眠、攝食、體溫、精神情感性疾病的調(diào)節(jié)(穆朝娟等，國外醫(yī)學精神病學分冊)。近年來的一些研究又表明，五羥色胺在腦中含量的變化，可以影響血腦屏障通透性的改變。因此，檢測組織和血液中五羥色胺的含量對各種疾病的診斷有著重要的意義。此外，一些強極性堿性化合物還是藥物合成的中間體，如胞嘧啶。在有機合成的過程中，往往存在大量的副產(chǎn)物，不經(jīng)提純的藥物中間體混合物直接參與反應，勢必會對藥物質(zhì)量產(chǎn)生較大的影響。除了作為神經(jīng)遞質(zhì)，藥物中間體以外，強極性堿性化合物還在其它領域有著重要的作用，如作為藥物原料的吡啶，食品安全中引人關注的瘦肉精一一萊克多巴胺等等。
[0004]分離強極性堿性化合物是一件很難的事。在普通的反相材料上，強極性堿性化合物往往保留時間較短，有的甚至在死時間出峰，難以將其與干擾物質(zhì)進行分離(Hao Luo等，journal of chromatography A, 1202 (2008) 8)。有研究者，通過極性共聚或者極性包埋等方法，將極性基團引入反相固定相中，增強其耐受高濃度水溶液甚至是耐受純水流動相體系的能力，已達到增強強極性堿性化合物保留的作用(Z.M，Guo等，，journal ofchromatography A, 1217 (2010) 4555)。但，目前大多數(shù)商品化的極性反相柱耐受純水(低有機相濃度流動相體系)的能力以及在該條件下的穩(wěn)定性較差。另外，即使是使用純水作為流動相，為強極性化合物提供的保留時間的可調(diào)空間仍然較小，很多時候并不能滿足目標化合物與干擾物質(zhì)的分離。親水作用色譜作為反相作用色譜的一個補充，可以很好的實現(xiàn)強極性化合物的分離。但親水作用色譜在使用的過程中，往往需要用到緩沖鹽，緩沖鹽的使用不利于化合物的后續(xù)表征工作的開展，如NMR，活性篩選等等。此外，親水作用色譜還具有難平衡，用初始流動相溶解樣品難等問題(Y.Yang等，Journal ChromatographyA1216 (2009) 5518)。保留好，質(zhì)譜兼容，無需鹽作為流動相添加劑就能分離的色譜模式，對強極性堿性化合物的使用及新型強極性堿性化合物的發(fā)現(xiàn)具有重要的價值，同時也是目前色譜領域內(nèi)急需解決的一個問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供強極性堿性化合物的分離方法，主要涉及強極性堿性化合物的質(zhì)譜兼容的分離分析方法開發(fā)和無鹽的分離制備方法開發(fā)。
[0006]其利用硅膠基質(zhì)的陽離子交換固定相高對強極性堿性化合物進行較好的保留和分離，該方法可廣泛用于強極性堿性化合物的分離分析和分離制備。
[0007]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案為:
[0008]一種強極性堿性化合物的分離方法，
[0009]I)固定相:一種陽離子交換色譜材料作為強極性堿性化合物分離的固定相。其結
構式如下:
[0010]
【權利要求】
1.一種強極性堿性化合物的分離分析或分離制備方法， 采用色譜柱分離，分離過程中使用的固定相為陽離子交換色譜固定相，其結構式如下
2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于: 從固定相表面洗脫下的強極性堿性化合物可用于LC-UV、LC-PDA, LC-ELSD或LC-MS分析檢測。
3.按照權利要求1所述的方法，其特征在于: 有機溶劑為與水相溶的有機溶劑，包括甲醇、乙腈、乙醇、異丙醇、四氫呋喃、丙酮中的一種或二種以上； 離子交換劑為質(zhì)譜兼容的酸或鹽，鹽有甲酸銨、乙酸銨中的一種或二種以上，酸為甲酸、乙酸、鹽酸、三氟乙酸、草酸、乙二酸中的一種或二種以上。
4.按照權利要求1或3所述的方法，其特征在于: 當以非水體系分離時，洗脫劑為有機溶劑和離子交換劑，有機溶劑的體積分數(shù)為0%-100% ;此時，離子交換劑為甲酸、乙酸、三氟乙酸、草酸、乙二酸、甲酸銨和乙酸銨； 當以含水體系分離時，以有機溶劑和離子交換劑的水溶液作為流動相時，有機溶劑的濃度從0%-100%，離子交換劑的濃度從0-2摩爾每升，且二者不同時為零。
5.按照權利要求1或3所述的方法，其特征在于: 洗脫方法可以為梯度洗脫也可以為等度洗脫； 當采用非水體系做等度分離時，洗脫條件可以是:體積分數(shù)為100%的有機溶劑，或體積分數(shù)為100%的離子交換劑，體積分數(shù)為100%的離子交換劑為甲酸、乙酸、草酸、乙二酸、三氟乙酸中的一種或二種以上，或者溶有離子交換劑的有機溶劑，溶有離子交換劑的有機溶劑為0.0001-100毫摩爾的甲酸甲醇、甲酸乙腈、甲酸異丙醇溶液、甲酸乙醇、乙酸甲醇、乙酸乙腈、乙酸異丙醇、乙酸乙醇、甲酸銨乙腈、甲酸銨甲醇、甲酸銨異丙醇、甲酸銨乙醇、乙酸銨甲醇、乙酸銨異丙醇、乙酸銨乙腈、乙酸銨乙醇溶液中的一種或二種以上； 當采用有水體系做等度分離時，洗脫條件可以是:0.0001-2摩爾/升的離子交換劑水溶液和有機溶劑溶液混合，混合液中有機溶劑溶液體積分數(shù)為0%-100% ； 當采用非水體系梯度洗脫時，先以0-100毫摩爾/升的離子交換劑或體積分數(shù)為0%到80%的有機溶劑-離子交換劑溶液平衡色譜柱；待上樣完成后，逐步增大流動相的洗脫強度，即增大有機溶劑或離子交換劑中的一種或兩種于流動相的含量，以實現(xiàn)分離、洗脫強極性堿性化合物混合物的目的； 當以含水體系進行分析，先以0-100毫摩爾/升的離子交換劑水溶液和/或體積分數(shù)為0%-99%的有機溶劑中的O或2種平衡色譜柱，待上樣完成后，增大流動相的洗脫能力，即增大有機相或離子交換劑中的一種或兩種于流動相的含量，以達到分離、洗脫分析物的目的。
6.按照權利要求1或3所述的方法，其特征在于: 所述強極性堿性化合物為含氮的有機化合物，其Pka為4-12，在溶液體系中可以電離，并顯現(xiàn)出正電荷，其在C18柱上的保留因子(k’ )通常為-1-20 ;化合物的保留因子k’等于化合物的保留時間減去死時間所得之差除以死時間； 化合物的保留時間指，化合物從進樣開始到柱后出現(xiàn)該組分濃度極大值時的時間，也即從進樣開始到出現(xiàn)某組分色譜峰的頂點時為止所經(jīng)歷的時間；死時間指不被固定相滯留的組分，從進樣到出現(xiàn)最大峰值所需的時間； 將天然產(chǎn)物(如中草藥等)的提取物或有機合成的產(chǎn)物，以反相色譜柱如C18柱為固定相，以與水互溶的有機相或酸水或鹽溶液中的一種、二種或三種為流動相進行分離，將保留因子(k’)通常為-1-20的化合物的混合物收集，作為本發(fā)明的分離對象；與水互溶的有機相指，甲醇、乙腈、四氫呋喃、乙醇、DMSO、DMF ;酸水指濃度為0.001-2摩爾每升的甲酸，乙酸，三氟乙酸，磷酸，鹽酸，草酸，乙二酸，硝酸；鹽溶液指濃度為0.001-2摩爾每升的與水互溶的甲酸鹽，乙酸鹽，三氟乙酸鹽，磷酸鹽，高氯酸鹽，鹵化鹽，碳酸鹽，三乙胺鹽； 用于本發(fā)明的天然產(chǎn)物提取物和有機合成的產(chǎn)物是指，可以溶于權利要求1所描述的流動相且對權利要求1所 描述固定相沒有明顯破壞性的化合物的混合物。
7.按照權利要求6所述的方法，其特征在于: 用于分析的強極性堿性化合物的濃度范圍為:以權利要求1描述的固定相為固定相，以權利要求3描述的流動相為流動相，以權利要求4描述的洗脫條件為洗脫條件，以權利要求2描述的檢測器為檢測器建立的分析方法的檢測限或檢出限為濃度下限，以分析物在溶劑中的飽和濃度為濃度上限，溶解強極性堿性化合物的溶劑為水或與水互溶的有機溶劑或水溶液或有機溶液中的一種到四種。
8.按照權利要求6所述的方法，其特征在于: 所述的強極性堿性化合物，是指以含體積分數(shù)0.1%甲酸的體積分數(shù)10%乙腈水溶液為流動相，C18柱為固定相，保留因子在-1到20范圍內(nèi)的堿性化合物為強極性堿性化合物。
【文檔編號】G01N30/02GK103878036SQ201210563467
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年12月21日 優(yōu)先權日:2012年12月21日
【發(fā)明者】梁鑫淼, 龍珍, 張秀莉, 王超然, 郭志謀 申請人:中國科學院大連化學物理研究所