專利名稱：豆粕中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，所述豆柏包括干的未發(fā)酵豆柏和/或干的已發(fā)酵豆柏，是用液相色譜法檢測(cè)豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量，屬于精細(xì)化工和發(fā)酵工程技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
棉籽糖和水蘇糖屬于寡糖，是大豆低聚糖的主要成分，都是由半乳糖、葡萄糖和果糖組成的支鏈雜低聚糖，是在蔗糖分子的葡萄糖殘基一側(cè)以c(-l，6)鍵上接一個(gè)或者2個(gè)半乳糖而形成，兩種糖都是難消化糖。不良寡糖(水蘇糖、棉籽糖)通過干擾畜禽的正常消化和代謝功能而影響動(dòng)物生產(chǎn)潛能的充分發(fā)揮，降低飼料的利用率。長(zhǎng)期以來，檢測(cè)寡糖的方法有薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法。其中，薄層色譜法是在紙色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，以薄層吸附劑為固定相，溶劑為流動(dòng)相的分離分析技術(shù)。改法成本低，速度快，展開所需時(shí)間短，但薄層色譜做糖的分離鑒定只在負(fù)荷量很小的條件下才能達(dá)到滿意效果，一般負(fù)荷量O. 5微克，最大5微克，與氣相色譜法、高效液相色譜法等近年來發(fā)展起來的分析方法相比，測(cè)量誤差較大，不易進(jìn)行定量分析。氣相色譜法是以惰性氣體為流動(dòng)相的柱色譜法。該技術(shù)具有高效、高速、高靈敏度，樣品用量小等優(yōu)點(diǎn)。但因氣相色譜用氣體流動(dòng)相被分析樣品必須有一定蒸汽壓，氣化后才能在柱上分析。糖類沒有足夠的揮發(fā)性，測(cè)定時(shí)要預(yù)先將其制備成易揮發(fā)、對(duì)熱穩(wěn)定的衍生物。進(jìn)樣口的高溫有時(shí)會(huì)使糖的衍生物分解，甚至可被留在進(jìn)樣口上的殘留物催化。因此，在檢測(cè)的應(yīng)用上，薄層色譜法和氣相色譜法在一定程度上受到了抑制。而高效液相色譜法則因?yàn)楹?jiǎn)便快速、操作方便、前處理簡(jiǎn)單、分離效果好的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用?，F(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)中對(duì)未發(fā)酵豆柏和已發(fā)酵豆柏中的棉籽糖、水蘇糖的提取存在提取條件的差異，如用不同乙醇濃度提取、不同水浴溫度提取、不同水浴提取時(shí)間、不同提取次數(shù)、不同固液質(zhì)量體積比、不同離心轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間，都對(duì)提取率有不同程度的影響。如，用80%乙醇溶液，固液質(zhì)量體積比為1:10時(shí)，70°C恒溫水浴提取，提取率仍然達(dá)不到90%，因此，需要找到一種有效提取干的未發(fā)酵豆柏和/或干的已發(fā)酵豆柏中棉籽糖、水蘇糖的提取方法，才能測(cè)準(zhǔn)干的未發(fā)酵豆柏和/或干的已發(fā)酵豆柏中棉籽糖、水蘇糖的含量。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法。豆柏為干的未發(fā)酵豆柏和/或干的已發(fā)酵豆柏，本方法操作簡(jiǎn)便，運(yùn)行人工成本低；降低了提取的能源損耗，提高了檢測(cè)準(zhǔn)確度和效率。本發(fā)明的技術(shù)方案是豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其豆柏為干的未發(fā)酵豆柏和/或干的已發(fā)酵豆柏，包括下述步驟
A、初步提取豆柏與乙醇混合物的上清液先按準(zhǔn)備豆柏，再準(zhǔn)備一定濃度的乙醇溶液，再將該兩種原料按一定比例投入水浴振蕩器中振蕩一段時(shí)間，再用離心機(jī)對(duì)經(jīng)振蕩處理的混合物進(jìn)行離心沉淀，然后首次提取上清液；
B、進(jìn)一步提取豆柏與乙醇混合物的上清液將A步驟振蕩處理后的殘余混合物固體等同于A步驟的豆柏，然后以A步驟相同操作將兩種原料按一定比例投入水浴振蕩器中振蕩一段時(shí)間，再用離心機(jī)對(duì)經(jīng)振蕩處理的混合物進(jìn)行離心沉淀，最后再次提取上清液；
C、過濾上清液將A步驟和B步驟所提取的上清液進(jìn)行混合、濃縮、定容，然后用濾膜過濾，得到過濾液；
D、檢測(cè)棉籽糖和水蘇糖含量提取一定量的C步驟的過濾液，然后將過濾液通過液相色譜儀用一定濃度的乙腈水溶液作為流動(dòng)相，以氨基柱為色譜分離柱，用棉籽糖和水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行外標(biāo)法檢測(cè)，最后得出豆柏中的棉籽糖和水蘇糖含量。進(jìn)一步的技術(shù)方案是
所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其水浴振蕩器中的豆柏與一定濃度的乙醇溶液比為按重量克計(jì)的豆柏按毫升計(jì)的一定濃度的乙醇溶液=1:15 25 ;所述乙醇溶液濃度為75 85%。所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其水浴振蕩器中溫度為恒溫，選值范圍為65 75°C ;振蕩時(shí)間為25 40分鐘。所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為4000 6000轉(zhuǎn)/分鐘，離心沉淀時(shí)間為5 20分鐘。所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其濾膜過濾是用O. 40 O. 50微米濾膜過濾。所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其A步驟所取的上清液的量與B步驟所取的上清液的量相同，均為10 50微升。所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其D步驟中，過濾液是通過液相色譜儀用60 75%的乙腈水溶液作為流動(dòng)相，工作溫度為恒溫。所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其D步驟中用于液相色譜檢測(cè)的所述過濾液的量為8 50微升。所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其流動(dòng)相流速為O. 5 2毫升/分鐘，工作溫度為恒溫，選值范圍為30 40°C。本發(fā)明的技術(shù)效果顯著提高了提取棉籽糖、水蘇糖提取率，能達(dá)到90%及以上；降低了提取的能源損耗，提高了豆柏和發(fā)酵豆柏中棉籽糖和水蘇糖的檢測(cè)準(zhǔn)確度和效率。使用本發(fā)明的方法，用Hypersil—氨基柱(150X4. 6mm, 5 μ m)分離柱檢測(cè),最后得出豆柏中的棉籽糖和水蘇糖含量回收率可達(dá)98%以上，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1%以下。
具體實(shí)施例方式結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明如下
實(shí)施例1:為本發(fā)明的基本實(shí)施例。豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其豆柏為干的未發(fā)酵豆柏和/或干的已發(fā)酵豆柏，包括下述步驟A、初步提取豆柏與乙醇混合物的上清液先按準(zhǔn)備豆柏，再準(zhǔn)備一定濃度的乙醇溶液，再將該兩種原料按一定比例投入水浴振蕩器中振蕩一段時(shí)間，再用離心機(jī)對(duì)經(jīng)振蕩處理的混合物進(jìn)行離心沉淀，然后首次提取上清液、進(jìn)一步提取豆柏與乙醇混合物的上清液將A步驟振蕩處理后的殘余混合物固體等同于A步驟的豆柏，然后以A步驟相同操作將兩種原料按一定比例投入水浴振蕩器中 振蕩一段時(shí)間，再用離心機(jī)對(duì)經(jīng)振蕩處理的混合物進(jìn)行離心沉淀，最后再次提取上清液； C、過濾上清液將A步驟和B步驟所提取的上清液進(jìn)行混合、濃縮、定容，然后用濾膜過濾， 得到過濾液；D、檢測(cè)棉籽糖和水蘇糖含量提取一定量的C步驟的過濾液，然后將過濾液通 過液相色譜儀用一定濃度的乙腈水溶液作為流動(dòng)相，以氨基柱為色譜分離柱，用棉籽糖和 水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行外標(biāo)法檢測(cè)，最后得出豆柏中的棉籽糖和水蘇糖含量。
實(shí)施例2 :為優(yōu)選的實(shí)施例，與實(shí)施例I不同的是所述水浴振蕩器中的豆柏與一 定濃度的乙醇溶液比為按重量克計(jì)的豆柏按毫升計(jì)的一定濃度的乙醇溶液=I 15 25 ;所述乙醇溶液濃度為75 85%。所述水浴振蕩器中溫度為恒溫，選值范圍為65 75°C; 振蕩時(shí)間為25 40分鐘。
實(shí)施例3 :為優(yōu)選的實(shí)施例，與實(shí)施例2不同的是所述濾膜過濾是用O. 40 O. 50 微米濾膜過濾。所述A步驟所取的上清液的量與B步驟所取的上清液的量相同，均為10 50微升。所述D步驟中，過濾液是通過液相色譜儀用60 75%的乙腈水溶液作為流動(dòng)相， 工作溫度為恒溫。D步驟中用于液相色譜檢測(cè)的所述過濾液的量為8 50微升。所述流 動(dòng)相流速為O. 5 2毫升/分鐘，工作溫度為恒溫，選值范圍為30 40°C。
實(shí)施例4 :為優(yōu)選的實(shí)施例，與實(shí)施例3不同的是所述離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為4000 6000轉(zhuǎn)/分鐘，離心沉淀時(shí)間為5 20分鐘。
實(shí)施例5 :為優(yōu)選的實(shí)施例，在實(shí)施例I的基礎(chǔ)上，本實(shí)施例所述水浴振蕩器中的 豆柏與一定濃度的乙醇溶液比，按重量克計(jì)的豆柏按毫升計(jì)的一定濃度的乙醇溶液=I 20 ;按所述比例操作，投入水浴振蕩器中的豆柏為10克，80%濃度的乙醇溶液為200毫升。 所述水浴振蕩器中溫度為70°C恒溫；振蕩時(shí)間為30分鐘。離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分鐘， 離心沉淀時(shí)間為10分鐘。用O. 45微米濾膜過濾。A步驟所取的上清液的量與B步驟所取 的上清液的量相同，均為15微升。D步驟中，過濾液是通過液相色譜儀用68%的乙腈水溶 液作為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速為I毫升/分鐘，工作溫度為35°C恒溫。用于液相色譜檢測(cè)的所 述過濾液的量為10微升。本實(shí)施例實(shí)測(cè)含棉籽糖1. 95%，含水蘇糖2. 48%。經(jīng)校驗(yàn)，棉籽糖 和水蘇糖提取率達(dá)95%，最后得出豆柏中的棉籽糖和水蘇糖含量回收率達(dá)99%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏 差為O. 3%。
本發(fā)明權(quán)利要求保護(hù)范圍不限于上述實(shí)施例。
權(quán)利要求
1.豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，豆柏為干的未發(fā)酵豆柏和/或干的已發(fā)酵豆柏，包括下述步驟 A、初步提取豆柏與乙醇混合物的上清液先按準(zhǔn)備豆柏，再準(zhǔn)備一定濃度的乙醇溶液，再將該兩種原料按一定比例投入水浴振蕩器中振蕩一段時(shí)間，再用離心機(jī)對(duì)經(jīng)振蕩處理的混合物進(jìn)行離心沉淀，然后首次提取上清液； B、進(jìn)一步提取豆柏與乙醇混合物的上清液將A步驟振蕩處理后的殘余混合物固體等同于A步驟的豆柏，然后以A步驟相同操作將兩種原料按一定比例投入水浴振蕩器中振蕩一段時(shí)間，再用離心機(jī)對(duì)經(jīng)振蕩處理的混合物進(jìn)行離心沉淀，最后再次提取上清液； C、過濾上清液將A步驟和B步驟所提取的上清液進(jìn)行混合、濃縮、定容，然后用濾膜過濾，得到過濾液； D、檢測(cè)棉籽糖和水蘇糖含量提取一定量的C步驟的過濾液，然后將過濾液通過液相色譜儀用一定濃度的乙腈水溶液作為流動(dòng)相，以氨基柱為色譜分離柱，用棉籽糖和水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行外標(biāo)法檢測(cè)，最后得出豆柏中的棉籽糖和水蘇糖含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，水浴振蕩器中的豆柏與一定濃度的乙醇溶液比為 按重量克計(jì)的豆柏按毫升計(jì)的一定濃度的乙醇溶液=I : 15 25 ; 所述乙醇溶液濃度為75 85%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，水浴振蕩器中溫度為恒溫，選值范圍為65 75°C ;振蕩時(shí)間為25 40分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為4000 6000轉(zhuǎn)/分鐘，離心沉淀時(shí)間為5 20分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，濾膜過濾是用0. 40 0. 50微米濾膜過濾。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，A步驟所取的上清液的量與B步驟所取的上清液的量相同，均為10 50微升。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，D步驟中，過濾液是通過液相色譜儀用60 75%的乙腈水溶液作為流動(dòng)相，工作溫度為恒溫。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，D步驟中用于液相色譜檢測(cè)的所述過濾液的量為8 50微升。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述豆柏中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，流動(dòng)相流速為0. 5 2毫升/分鐘，工作溫度為恒溫，選值范圍為30 40°C。
全文摘要
本發(fā)明涉及豆粕中棉籽糖和水蘇糖含量的檢測(cè)方法，豆粕為干的未發(fā)酵豆粕和/或干的已發(fā)酵豆粕，包括下述步驟A、初步提取豆粕與乙醇混合物的上清液；B、進(jìn)一步提取豆粕與乙醇混合物的上清液；C、過濾上清液；D、檢測(cè)棉籽糖和水蘇糖含量。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是方法操作簡(jiǎn)便，運(yùn)行人工成本低；降低了提取的能源損耗，提高了檢測(cè)準(zhǔn)確度和效率。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102980959SQ20121056654
公開日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月25日
發(fā)明者吳曉峰, 鄒菁, 張濤 申請(qǐng)人:湖北邦之德牧業(yè)科技有限公司