專利名稱：C反應(yīng)蛋白膠體金定量檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及免疫膠體金檢測(cè)試劑盒，具體涉及一種C反應(yīng)蛋白膠體金定量檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein, CRP)是由肝臟合成的一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量為I. 15X103的五環(huán)結(jié)構(gòu)，在它的每一邊都有親鈣性結(jié)合位點(diǎn)，且其分子代謝周期的半衰期僅為5-7小時(shí)，因此在補(bǔ)體系統(tǒng)的免疫調(diào)節(jié)中扮演了一個(gè)重要的生物學(xué)角色。CRP是公認(rèn)的最有價(jià)值的典型急性時(shí)相蛋白，正常血漿水平小于5mg/L，機(jī)體受到感染、外傷、腫瘤及理化因素刺激后5-8小時(shí)迅速升高，24小時(shí)內(nèi)峰值可為正常值的數(shù)百倍。若感染得到控制CRP可在24-48小時(shí)內(nèi)迅速下降，I周內(nèi)恢復(fù)正常。CRP可與凋亡細(xì)胞、壞死細(xì)胞膜磷脂或細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)的細(xì)胞壁磷酸膽堿結(jié)合，激活補(bǔ)體，調(diào)理吞噬功能，促使內(nèi)源性或外源性配體物質(zhì)的清除。 目前，CRP的測(cè)定廣泛地應(yīng)用于臨床疾病的早期診斷及鑒別診斷，特別是快速定量CRP檢測(cè)在兒科疾病的診斷中得到較好的應(yīng)用。在細(xì)菌感染急性期CRP水平顯著升高，而在病毒感染時(shí)CRP水平正?；蜉p微升高，因此CRP水平可作為細(xì)菌感染或病毒感染首選鑒別診斷指標(biāo)；在鑒別呼吸道感染時(shí)，細(xì)菌性肺炎常導(dǎo)致CRP水平升高到60mg/L以上，而急性支氣管炎很少導(dǎo)致CRP水平的顯著升高，所以測(cè)定CRP水平有助于鑒別肺炎和支氣管炎，減少對(duì)非細(xì)菌性急性支氣管炎患者予抗生素治療；外科手術(shù)后若病人繼發(fā)細(xì)菌感染特別是化膿性感染時(shí)，CRP明顯升高(大于50mg/L)，手術(shù)第2天達(dá)到高峰，72小時(shí)后開(kāi)始逐步下降，恢復(fù)時(shí)間因手術(shù)部位和組織損傷程度而異，故CRP還可以作為診斷感染和手術(shù)后并發(fā)癥的一項(xiàng)指標(biāo)；此外，研究還表明CRP還可能與風(fēng)濕性疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、外科學(xué)、婦產(chǎn)科學(xué)、胃腸病學(xué)、血液學(xué)和腫瘤學(xué)等密切相關(guān)，應(yīng)用范圍還將不斷擴(kuò)大。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是從提高檢測(cè)準(zhǔn)確度出發(fā)，提供一種與金標(biāo)讀數(shù)儀配套使用的C反應(yīng)蛋白(CRP)膠體金定量檢測(cè)試劑盒。本實(shí)用新型一方面公開(kāi)了一種C反應(yīng)蛋白膠體金定量檢測(cè)試劑盒，包括盒座、盒蓋和試劑條，所述試劑條固定于所述盒座中部且位于所述盒座與盒蓋之間，所述盒蓋與盒座卡接，所述盒蓋上設(shè)有加樣口與觀察口 ；所述試劑條包括塑料薄片以及固定于所述塑料薄片上頭尾依次銜接的濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙；所述免疫膠體金紙片上包被有膠體金標(biāo)記的抗CRP單克隆抗體I，所述免疫硝酸纖維素膜上設(shè)有兩條分別包被有抗CRP單克隆抗體II的檢測(cè)線(!\、T2線)和一條包被有羊抗鼠IgG的質(zhì)控線(C 線)。進(jìn)一步的，所述兩條檢測(cè)線靠近所述免疫膠體金紙片，所述質(zhì)控線靠近所述吸水紙，所述兩條檢測(cè)線與所述質(zhì)控線之間相互平行。[0007]進(jìn)一步的，所述濾樣紙對(duì)應(yīng)所述盒蓋上的加樣口，所述免疫硝酸纖維素膜對(duì)應(yīng)所述盒蓋上的觀察口，并且所述免疫硝酸纖維素膜上的兩條檢測(cè)線和一條質(zhì)控線裸露于所述觀察口。進(jìn)一步的，所述加樣口和所述觀察口為方形開(kāi)口。更進(jìn)一步的，所述加樣口和觀察口的方形開(kāi)口為漏斗狀，開(kāi)口的上口大，下口小。本實(shí)用新型試劑盒的盒蓋與盒座卡接是指，盒蓋與盒座的邊緣相匹配，可以通過(guò)盒蓋與盒座上設(shè)有的對(duì)應(yīng)的卡合或扣合連接部件，通過(guò)卡合或扣合連接。所述膠體金標(biāo)記的抗CRP單克隆抗體I (免疫膠體金)可采用現(xiàn)有技術(shù)，用膠體金來(lái)標(biāo)記抗CRP單克隆抗體I，獲得免疫膠體金。C反應(yīng)蛋白(CRP)膠體金定量檢測(cè)試劑盒中試劑條的主要生產(chǎn)工藝過(guò)程包括 I)膠體金標(biāo)記的抗CRP單克隆抗體I的制備用檸檬酸鈉還原法制備膠體金，并用制備好的膠體金標(biāo)記抗CRP單克隆抗體I ;2)免疫膠體金紙片的制備利用上一步制備的膠體金標(biāo)記的抗CRP單克隆抗體I包被玻璃纖維素紙片，獲得免疫膠體金紙片；3)免疫硝酸纖維素膜的制備將抗CRP單克隆抗體II溶液通過(guò)微機(jī)自動(dòng)點(diǎn)膜到硝酸纖維素膜上制備Ti、T2線；將羊抗鼠IgG溶液通過(guò)微機(jī)自動(dòng)點(diǎn)膜到硝酸纖維素膜上制備C線；4)試劑條的組裝順次將濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜、吸水紙貼在塑料薄片上，組成CRP檢測(cè)試劑卡，將卡片分切成試劑條，干燥后即得。將制備好的試劑條與盒座、盒蓋組裝，獲得本實(shí)用新型的C反應(yīng)蛋白膠體金定量檢測(cè)試劑盒。上述CRP膠體金檢測(cè)試劑盒的工作原理為利用高度特異的抗體-抗原結(jié)合反應(yīng)及免疫膜層析技術(shù),通過(guò)雙抗體夾心法來(lái)定量檢測(cè)人全血、血清、血漿中出現(xiàn)的CRP水平。在試劑盒的硝酸纖維素膜兩條檢測(cè)線(1\、T2線)上分別包被有抗CRP單克隆抗體II,免疫膠體金紙片上包被有免疫膠體金(膠體金標(biāo)記的抗CRP單克隆抗體I)。檢測(cè)時(shí)，被檢樣品首先與膠體金標(biāo)記的抗CRP單克隆抗I混合，并沿纖維膜向上層析依次通過(guò)T1線、T2線。如果樣品中有CRP存在，CRP首先和膠體金標(biāo)記的抗CRP單克隆抗體I結(jié)合，形成“CRP-抗CRP單克隆抗體I-膠體金復(fù)合物”;在層析至檢測(cè)線時(shí)，免疫膠體金會(huì)被抗CRP單克隆抗體II捕獲，而在檢測(cè)線處形成一條紅色線條。檢測(cè)線顏色的深淺與樣品中CRP濃度成正比。如果樣品中沒(méi)有CRP，則不會(huì)在T線處形成線條。在試劑條上的質(zhì)控線(C線)包被有羊抗鼠IgG，以指示試劑盒反應(yīng)系統(tǒng)工作是否正常。質(zhì)控線的出現(xiàn)與CRP的存在無(wú)關(guān)。質(zhì)控線色帶的出現(xiàn)表明①樣品加入量充足；②樣品在紙條上運(yùn)行正常。本實(shí)用新型試劑盒的使用方法為I.將試劑盒放置在水平臺(tái)面上。2.用加樣吸管吸取樣品，滴3滴(約120ul)樣品到試劑盒的加樣口中。每檢測(cè)一份不同的樣品注意要使用不同的吸管。3.觀察結(jié)果在滴加樣品后3-8分鐘判讀結(jié)果，顯色穩(wěn)定后插入金標(biāo)讀數(shù)儀插槽內(nèi)進(jìn)行定量檢測(cè)。[0025]檢測(cè)結(jié)果的定性判斷方法陰性僅在質(zhì)控線(C線)位置出現(xiàn)一條紅色線條，表示樣品中無(wú)CRP存在。陽(yáng)性1.質(zhì)控線(C線)位置出現(xiàn)一條紅色線條，T1線位置處有一條紅色線條；2.質(zhì)控線(C線)位置出現(xiàn)一條紅色線條，T1和T2線位置處均出現(xiàn)紅色線條；表示樣品有CRP存在。無(wú)效質(zhì)控線(C線)不出現(xiàn)。任何情況下，C線均應(yīng)形成，表示加樣和操作正確。C線未出現(xiàn)表明測(cè)試結(jié)果是不確定的，應(yīng)重做。本實(shí)用新型提供的C反應(yīng)蛋白膠體金定量檢測(cè)試劑盒敏感性高、特異性強(qiáng)、操作 簡(jiǎn)便省時(shí)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定，適合定性及定量檢測(cè)樣本中的C反應(yīng)蛋白。

圖I :CRP膠體金定量檢測(cè)試劑盒外觀示意圖(I.盒座2.盒蓋3.試劑條9. T1線川-^線11.質(zhì)控線12.加樣口 13.觀察口)圖2 :去盒蓋的CRP膠體金定量檢測(cè)試劑盒示意圖(I.盒座3.試劑條5.濾樣紙6.免疫膠體金紙片7.免疫硝酸纖維素膜8.吸水紙9.1\線^.!^線11.質(zhì)控線)圖3 :CRP膠體金定量檢測(cè)試劑盒的試劑條側(cè)視示意圖(4.塑料薄片5.濾樣紙6.免疫膠體金紙片7.免疫硝酸纖維素膜8.吸水紙9.1\線^.!^線11.質(zhì)控線)
具體實(shí)施方式
如圖1-3所示的C反應(yīng)蛋白膠體金定量檢測(cè)試劑盒，包括盒座I、盒蓋2和試劑條3，試劑條3固定于盒座I中部且位于盒座I與盒蓋2之間，盒蓋2與盒座I卡接，盒蓋2上設(shè)有加樣口 12與觀察口 13 ;試劑條3包括塑料薄片4以及固定于塑料薄片4上頭尾依次銜接的濾樣紙5、免疫膠體金紙片6、免疫硝酸纖維素膜7和吸水紙8 ;免疫膠體金紙片6上包被有膠體金標(biāo)記的抗CRP單克隆抗體I，免疫硝酸纖維素膜7上設(shè)有兩條分別包被有抗CRP單克隆抗體II的檢測(cè)線9、10 (1\、T2線)和一條包被有羊抗鼠IgG的質(zhì)控線11((線)。兩條檢測(cè)線9、10靠近免疫膠體金紙片6，質(zhì)控線11靠近吸水紙8，兩條檢測(cè)線9、10與質(zhì)控線11之間相互平行。濾樣紙5對(duì)應(yīng)盒蓋2上的加樣口 12，免疫硝酸纖維素膜7對(duì)應(yīng)盒蓋2上的觀察口 13，并且免疫硝酸纖維素膜7上的兩條檢測(cè)線9、10和一條質(zhì)控線11裸露于觀察口 13。加樣口 12和觀察口 13為方形開(kāi)口，加樣口 12和觀察口 13的方形開(kāi)口為漏斗狀，開(kāi)口的上口大，下口小。
權(quán)利要求1.一種C反應(yīng)蛋白膠體金定量檢測(cè)試劑盒，包括盒座、盒蓋和試劑條，所述試劑條固定于所述盒座中部且位于所述盒座與盒蓋之間，所述盒蓋與盒座卡接，所述盒蓋上設(shè)有加樣口與觀察口 ；所述試劑條包括塑料薄片以及固定于所述塑料薄片上頭尾依次銜接的濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙，其特征在于，所述免疫膠體金紙片上包被有膠體金標(biāo)記的抗CRP單克隆抗體I，所述免疫硝酸纖維素膜上設(shè)有兩條分別包被有抗CRP單克隆抗體II的檢測(cè)線和一條包被有羊抗鼠IgG的質(zhì)控線。
2.如權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述兩條檢測(cè)線靠近所述免疫膠體金紙片，所述質(zhì)控線靠近所述吸水紙，所述兩條檢測(cè)線與所述質(zhì)控線之間相互平行。
3.如權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述濾樣紙對(duì)應(yīng)所述盒蓋上的加樣口；所述免疫硝酸纖維素膜對(duì)應(yīng)所述盒蓋上的觀察口，并且所述免疫硝酸纖維素膜上的兩條檢測(cè)線和一條質(zhì)控線裸露于所述觀察口。
4.如權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述加樣口和所述觀察口為方形開(kāi)口。
5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述加樣口和觀察口的方形開(kāi)口為漏斗狀，開(kāi)口的上口大，下口小。
專利摘要本實(shí)用新型涉及膠體金檢測(cè)試劑盒領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種C反應(yīng)蛋白膠體金定量檢測(cè)試劑盒，包括盒座、盒蓋和試劑條，所述試劑條固定于所述盒座中部且位于所述盒座與盒蓋之間，所述盒蓋與盒座卡接，所述盒蓋上設(shè)有加樣口與觀察口；所述試劑條包括塑料薄片以及固定于所述塑料薄片上頭尾依次銜接的濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙；所述免疫膠體金紙片上包被有膠體金標(biāo)記的抗CRP單克隆抗體I，所述免疫硝酸纖維素膜上設(shè)有兩條分別包被有抗CRP單克隆抗體II的檢測(cè)線和一條包被有羊抗鼠IgG的質(zhì)控線。本實(shí)用新型的試劑盒敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便省時(shí)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定，適合定性及定量檢測(cè)樣本中的C反應(yīng)蛋白。
文檔編號(hào)G01N33/68GK202471725SQ20122006235
公開(kāi)日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年2月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月24日
發(fā)明者張國(guó)華 申請(qǐng)人:上海凱創(chuàng)生物技術(shù)有限公司