專(zhuān)利名稱(chēng)：一種快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒。
背景技術(shù)：
齒蘭環(huán)斑病毒(Odontoglossum ringspot virus, 0RSV),煙草花葉病毒屬，是危害蘭科植物的兩種主要病毒之一，分布世界各地，主要危害齒蘭、建蘭等。蘭花一旦感染0RSV，其葉片廠產(chǎn)生黃化條紋或不規(guī)則的褪綠色斑塊，病株花部甚至出現(xiàn)畸形或退色斑，紅色系花朵退色斑尤為明顯，對(duì)蘭花的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值造成嚴(yán)重影響。研究表明，該病毒對(duì)于各種蘭花相當(dāng)普遍。目前，齒蘭環(huán)斑病毒的檢測(cè)方法常用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)方法，酶免疫分析是將抗原抗體結(jié)合的特異性與酶的高效催化性相結(jié)合的技術(shù)，具有靈敏度高，特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，但操作步驟多，檢測(cè)前、后都需要做必要的儀器清洗及保養(yǎng)工作，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，并且要求本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員來(lái)操作。免疫膠體金技術(shù)(Immunogold labelling techique)是上世紀(jì)80年代繼突光素、放射性同位素和酶三大標(biāo)記技術(shù)后發(fā)展起來(lái)的固相標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。該技術(shù)主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，形成肉眼可見(jiàn)的紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測(cè)方法中?？焖僭\斷試紙條是20世紀(jì)90年代以來(lái)在單克隆抗體技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)和新型層析材料基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新型體外診斷技術(shù)，近年來(lái)發(fā)展迅速，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域特別是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用。該技術(shù)主要是將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在硝酸纖維膜上，膠體金標(biāo)記試劑吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待測(cè)樣品加到試紙條一端的樣品墊上后，通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動(dòng)至固定的抗原或抗體區(qū)域時(shí)，待測(cè)物金標(biāo)試劑復(fù)合物與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，膠體金標(biāo)記聚集在檢測(cè)帶上，可通過(guò)目測(cè)得到直觀的顯色結(jié)果。而游離的標(biāo)記物則越過(guò)檢測(cè)帶，從而達(dá)到與檢測(cè)物自動(dòng)分離的目的。目前，將雙抗夾心法與膠體金檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合來(lái)對(duì)齒蘭環(huán)斑病毒進(jìn)行快速檢測(cè)，且具有高效、靈敏、特異、便捷，經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)的膠體金試劑盒鮮有報(bào)道。

實(shí)用新型內(nèi)容為解決上述領(lǐng)域的需求和空白，本實(shí)用新型旨在提供一種快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒，用于蘭花類(lèi)齒蘭環(huán)斑病毒的檢測(cè)，本實(shí)用新型試劑盒采用雙抗體夾心法原理和免疫膠體金技術(shù)相結(jié)合快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒。一種快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒，包括盒體、盒蓋構(gòu)成的盒封閉體和置于盒體內(nèi)的膠體金試紙條，所述盒蓋上具有加樣孔、測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)和結(jié)果觀察孔；其特征在于所述測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)設(shè)在所述加樣孔和所述結(jié)果觀察孔之間，所述盒封閉體上下表面的一對(duì)對(duì)角為弧形，所述盒封閉體上還設(shè)有透氣孔，所述膠體金試紙條的金標(biāo)纖維墊包被有膠體金標(biāo)記的齒蘭環(huán)斑病毒單抗，所述膠體金試紙條的纖維素藥膜上的檢測(cè)線T線和對(duì)照線C線上分別包被有齒蘭環(huán)斑病毒單抗和兔抗小鼠IgG多抗。所述透氣孔設(shè)在所述盒封閉體盒蓋一面。所述透氣孔為多個(gè)，呈扇形排列。所述盒體內(nèi)設(shè)有安裝膠體金試紙條的定位槽，當(dāng)所述膠體金試紙條放置于盒體內(nèi)的定位槽時(shí)，對(duì)應(yīng)于盒蓋加樣孔處為樣品纖維墊；對(duì)應(yīng)于測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)處為金標(biāo)纖維墊，對(duì)應(yīng)于所述結(jié)果觀察孔處為纖維素藥膜。所述盒體設(shè)有連接裝置，所述盒蓋和盒體通過(guò)連接裝置可拆卸式連接。所述盒蓋上對(duì)應(yīng)于盒體的一面設(shè)有多個(gè)小孔，所述盒體對(duì)應(yīng)于盒蓋的一面設(shè)有與所述盒體一體的凸起，所述凸起與所述盒蓋上的小孔數(shù)量大小相適配。 所述盒體上設(shè)有樣品編號(hào)。所述樣品編號(hào)設(shè)在所述盒封閉體盒蓋一面，并且靠近所述結(jié)果觀察孔的一側(cè)。技術(shù)效果本實(shí)用新型的快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒，包括盒體、盒蓋構(gòu)成的盒封閉體和置于盒體內(nèi)的膠體金試紙條，所述盒蓋上具有加樣孔、測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)和結(jié)果觀察孔；其特征在于所述測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)設(shè)在所述加樣孔和所述結(jié)果觀察孔之間，便于觀察和使用，便于識(shí)別具體檢測(cè)項(xiàng)目，所述盒封閉體上下表面的一對(duì)對(duì)角為弧形，節(jié)省材料空間，并且美觀大方，所述盒封閉體上還設(shè)有透氣孔，使得盒體內(nèi)能夠與外界保持氣流相通，在檢測(cè)時(shí)，保證反應(yīng)膜正常發(fā)揮毛吸作用，使檢測(cè)物能夠完全地快速地定向移動(dòng)至透氣孔端，避免了阻滯或者不完全泳動(dòng)等現(xiàn)象，保證了檢測(cè)的靈敏性、準(zhǔn)確性和高效率。所述膠體金試紙條的金標(biāo)纖維墊包被有膠體金標(biāo)記的齒蘭環(huán)斑病毒單抗用于結(jié)合齒蘭環(huán)斑病毒，所述膠體金試紙條的纖維素藥膜上所設(shè)的檢測(cè)線T線和對(duì)照線C線上分別包被有齒蘭環(huán)斑病毒單抗和兔抗小鼠IgG多抗，用于具體的特異性反應(yīng)的顯色。本實(shí)用新型優(yōu)選將透氣孔開(kāi)在所述盒蓋上。防止檢測(cè)液從透氣孔滴漏出來(lái)染到操作人員的皮膚上。本實(shí)用新型進(jìn)一步優(yōu)選透氣孔為多個(gè)小孔，呈扇形排列。多個(gè)小孔的設(shè)計(jì)使通氣孔既起到通氣的作用，又不會(huì)讓反應(yīng)膜暴露出來(lái)，從而避免污染到人的皮膚。扇形排列較為美觀。本實(shí)用新型所述盒體內(nèi)設(shè)有安裝膠體金試紙條的定位槽，當(dāng)所述膠體金試紙條放置于盒體內(nèi)的定位槽時(shí)，對(duì)應(yīng)于盒蓋加樣孔處為樣品纖維墊，對(duì)應(yīng)于測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)處為金標(biāo)纖維墊，對(duì)應(yīng)于所述結(jié)果觀察孔處為纖維素藥膜。所述盒封閉體設(shè)有連接裝置，所述盒蓋和盒體通過(guò)連接裝置可拆卸式連接，一方面方便使用，另一方面盒體和盒蓋可重復(fù)使用，節(jié)省資源。所述盒蓋上對(duì)應(yīng)于盒體的一面設(shè)有多個(gè)小孔，所述盒體對(duì)應(yīng)于盒蓋的一面設(shè)有與所述盒體一體的凸起，所述凸起與所述盒蓋上的小孔數(shù)量大小相適配，加工制作簡(jiǎn)單，方便拆卸，不易污染。所述盒封閉體上還設(shè)有樣品編號(hào)，便于查找、區(qū)分，便于識(shí)別產(chǎn)品類(lèi)別及測(cè)試項(xiàng)目。[0023]本實(shí)用新型優(yōu)選所述樣品編號(hào)設(shè)在所述盒封閉體盒蓋一面，并且靠近所述結(jié)果觀察孔的一側(cè)，便于使用及觀察。本實(shí)用新型操作簡(jiǎn)單，使用方便，拿來(lái)即用，不需要本領(lǐng)域的專(zhuān)業(yè)人員，不需要任何儀器，適用于各類(lèi)蘭花中齒蘭環(huán)斑病毒快速檢測(cè)的需要，能夠滿(mǎn)足不同層次人員的需要，容易普及，以符號(hào)顯示結(jié)果，擺脫了對(duì)設(shè)備、儀器、人員及貯存和運(yùn)輸環(huán)境的特殊要求，并且具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、特異的特點(diǎn)。

圖I本實(shí)用新型試劑盒盒蓋示意圖圖2本實(shí)用新型試劑盒優(yōu)選方案盒蓋示意圖圖3本實(shí)用新型試劑盒示意圖·[0028]圖4本實(shí)用新型試劑盒優(yōu)選方案示意圖圖5本實(shí)用新型試劑盒盒體示意圖圖6本實(shí)用新型膠體金試紙條示意圖其中I-盒蓋，2-盒體，3-加樣孔，4-測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)，5-結(jié)果觀察孔，6_盒封閉體，7樣品編號(hào)，8-膠體金試紙條，9-凸起，10-樣品纖維墊，11-金標(biāo)纖維墊，12-纖維素藥膜，13-吸水材料墊，14-透氣孔。
具體實(shí)施方式
提供下述實(shí)施例是為了更好地進(jìn)一步理解本實(shí)用新型，并不局限于所述最佳實(shí)施方式，不對(duì)本實(shí)用新型的內(nèi)容和保護(hù)范圍構(gòu)成限制，任何人在本實(shí)用新型的啟示下或是將本實(shí)用新型與其他現(xiàn)有技術(shù)的特征進(jìn)行組合而得出的任何與本實(shí)用新型相同或相近似的產(chǎn)品，均落在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。本實(shí)用新型操作簡(jiǎn)單、使用方便，美觀大方、成本低廉，具有快捷、準(zhǔn)確、方便、價(jià)廉的特點(diǎn)。說(shuō)明書(shū)附圖中的ORSV是指齒蘭環(huán)斑病毒測(cè)試標(biāo)示項(xiàng)。實(shí)施例I.本實(shí)用新型的快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒，包括盒體2、盒蓋I構(gòu)成的盒封閉體6和置于盒體2內(nèi)的膠體金試紙條8，所述盒蓋I上具有加樣孔3、測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)4和結(jié)果觀察孔5 ;其特征在于所述測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)4設(shè)在所述加樣孔3和所述結(jié)果觀察孔5之間，便于觀察和使用，便于識(shí)別具體檢測(cè)項(xiàng)目，所述盒封閉體6上下表面的一對(duì)對(duì)角為弧形，節(jié)省材料空間，并且美觀大方，所述盒封閉體6上還設(shè)有透氣孔14，使得盒體2內(nèi)能夠與外界保持氣流相通，在檢測(cè)時(shí)，保證反應(yīng)膜正常發(fā)揮毛吸作用，使檢測(cè)物能夠完全地快速地定向移動(dòng)至透氣孔14端，避免了阻滯或者不完全泳動(dòng)等現(xiàn)象，保證了檢測(cè)的靈敏性、準(zhǔn)確性和高效率。所述膠體金試紙條8的金標(biāo)纖維墊11包被有膠體金標(biāo)記的齒蘭環(huán)斑病毒單抗用于結(jié)合齒蘭環(huán)斑病毒，所述膠體金試紙條8的纖維素藥膜12上所設(shè)的檢測(cè)線T線和對(duì)照線C線上分別包被有齒蘭環(huán)斑病毒單抗和兔抗小鼠IgG多抗，用于具體特異性反應(yīng)的顯色。本實(shí)用新型優(yōu)選將透氣孔14開(kāi)在所述盒蓋I上。防治檢測(cè)液從透氣孔14滴漏出來(lái)染到操作人員的皮膚上。[0038]本實(shí)用新型進(jìn)一步優(yōu)選透氣孔14為多個(gè)小孔，呈扇形排列。多個(gè)小孔的設(shè)計(jì)使通氣孔既起到通氣的作用，又不會(huì)讓反應(yīng)膜暴露出來(lái)，從而避免污染到人的皮膚。扇形排列較為美觀。本實(shí)用新型所述盒體2內(nèi)設(shè)有安裝膠體金試紙條8的定位槽，當(dāng)所述膠體金試紙條8放置于盒體2內(nèi)的定位槽時(shí)，對(duì)應(yīng)于盒蓋I加樣孔3處為樣品纖維墊，對(duì)應(yīng)于測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)4處為金標(biāo)纖維墊11，對(duì)應(yīng)于所述結(jié)果觀察孔5處為纖維素藥膜12。所述盒封閉體6設(shè)有連接裝置，所述盒蓋I和盒體2通過(guò)連接裝置可拆卸式連接，一方面方便使用，另一方面盒體2和盒蓋I可重復(fù)使用，節(jié)省資源。所述盒蓋I上對(duì)應(yīng)于盒體2的一面設(shè)有多個(gè)小孔,所述盒體2對(duì)應(yīng)于盒蓋I的一面設(shè)有與所述盒體2—體的凸起，所述凸起與所述盒蓋I上的小孔數(shù)量大小相適配，加工制作簡(jiǎn)單，方便拆卸，不易污染。所述盒封閉體6上還設(shè)有樣品編號(hào)7，便于查找、區(qū)分，便于識(shí)別產(chǎn)品類(lèi)別及測(cè)試項(xiàng)目。本實(shí)用新型優(yōu)選所述樣品編號(hào)7設(shè)在所述盒封閉體6盒蓋I 一面，并且靠近所述結(jié)果觀察孔5的一側(cè)，便于使用及觀察。實(shí)驗(yàn)例2.本實(shí)用新型試紙條的制備方法試紙條的制備程序如下步驟I.纖維素藥膜的包被I、將兔抗小鼠IgG多抗作為對(duì)照線C線，齒蘭環(huán)斑病毒單抗作為檢測(cè)線T線，兩個(gè)試劑分別按照所需的濃度(范圍I. 5-2mg/ml)，用20mM的PBS進(jìn)行稀釋。2、將配制好的上述試劑，按照C、T線位置分別包被到硝酸纖維素膜上，然后干燥6小時(shí)，溫度為30°C，濕度< 35%，從而制得纖維素藥膜。步驟2.金標(biāo)纖維層的標(biāo)記I、取40nm的膠體金溶液，按終濃度8-12 μ I/ml加入O. 2M K2CO3,加入一定濃度的齒蘭環(huán)斑病毒單抗，放置室溫反應(yīng)15-30分鐘，然后按照濃度20 μ Ι/ml加入20%BSA的溶液，用于飽和游離的膠體金。最后lOOOOrpm，離心30分鐘，去除上清液中未結(jié)合的蛋白質(zhì)。用等體積的O. 5m硼酸溶液(含l%Tween、5%蔗糖、1%水解BSA、1%水解酪蛋白、O. 1%PVA)復(fù)溶沉淀的膠體金標(biāo)記原液。2、將上述膠體金標(biāo)記原液按照10-20%濃度，用O. 5m硼酸溶液進(jìn)行稀釋?zhuān)瑥亩渲瞥蓸?biāo)記后的膠體金工作液。然后再將該工作液鋪于30*30cm玻璃纖維墊上,干燥6小時(shí),溫度為30°C，濕度彡35%，從而制得金標(biāo)墊。步驟3.試紙條的組裝I、將塑料板平放在操作臺(tái)上，貼上雙面膠帶。2、撕掉雙面膠帶襯紙，在距塑料板上端30mm處貼上已包被有齒蘭環(huán)斑病毒單抗和兔抗小鼠IgG多克隆抗體的硝酸纖維素膜。3、將粗纖維吸水紙壓硝酸纖維素膜上端2mm貼上，上端與塑料板上端取齊。4、將小無(wú)紡布?jí)合跛崂w維素膜下端O. 5mm處貼上。5、將金標(biāo)墊取齊壓于小無(wú)紡布上面。6、將玻璃纖維墊壓于金標(biāo)墊上約一半，下端距塑料板下端2mm處貼上。[0059]7、將大無(wú)紡布與金標(biāo)墊上端取齊，下端與塑料板下端取齊貼上。8、將箭頭膠帶壓硝酸纖維素膜I. 5-2mm貼上。9、將手持端膠帶壓粗纖維吸水紙貼上。本實(shí)用新型一種快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒采用雙抗夾心法原理和免疫膠體金技術(shù)相結(jié)合快速檢測(cè)各類(lèi)蘭花中的齒蘭環(huán)斑病毒。本實(shí)用新型試紙條操作簡(jiǎn)單，使用方便，拿來(lái)即用，不需要本領(lǐng)域的專(zhuān)業(yè)人員，能夠滿(mǎn)足不同層次人員的需要，容易普及，本實(shí)用新型以符號(hào)顯示結(jié)果，擺脫了對(duì)設(shè)備、儀器、人員及貯存和運(yùn)輸環(huán)境的特殊要求，用于蘭花類(lèi)齒蘭環(huán)斑病毒的檢測(cè)。本實(shí)用新型試劑盒簡(jiǎn)捷快捷靈敏準(zhǔn)確，并且容易保存，使用方便，美觀大方?！?br> 權(quán)利要求1.一種快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒，包括盒體、盒蓋構(gòu)成的盒封閉體和置于盒體內(nèi)的膠體金試紙條，所述盒蓋上具有加樣孔、測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)和結(jié)果觀察孔；其特征在于所述測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)設(shè)在所述加樣孔和所述結(jié)果觀察孔之間，所述盒封閉體上下表面的一對(duì)對(duì)角為弧形，所述盒封閉體上還設(shè)有透氣孔，所述膠體金試紙條的金標(biāo)纖維墊包被有膠體金標(biāo)記的齒蘭環(huán)斑病毒單抗，所述膠體金試紙條的纖維素藥膜上的檢測(cè)線T線和對(duì)照線C線上分別包被有齒蘭環(huán)斑病毒單抗和兔抗小鼠IgG多抗。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒，其特征在于，所述透氣孔設(shè)在所述盒封閉體盒蓋一面。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒，其特征在于，所述透氣孔為多個(gè)，呈扇形排列。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒，其特征在于，所述盒體內(nèi)設(shè)有安裝膠體金試紙條的定位槽，當(dāng)所述膠體金試紙條放置于盒體內(nèi)的定位槽時(shí)，對(duì)應(yīng)于盒蓋加樣孔處為樣品纖維墊；對(duì)應(yīng)于測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)處為金標(biāo)纖維墊；對(duì)應(yīng)于所述結(jié)果觀察孔處為纖維素藥膜。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒，其特征在于，所述盒體設(shè)有連接裝置，所述盒蓋和盒體通過(guò)連接裝置可拆卸式連接。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒，其特征在于，所述盒蓋上對(duì)應(yīng)于盒體的一面設(shè)有多個(gè)小孔，所述盒體對(duì)應(yīng)于盒蓋的一面設(shè)有與所述盒體一體的凸起，所述凸起與所述盒蓋上的小孔數(shù)量大小相適配。
專(zhuān)利摘要本實(shí)用新型“一種快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒的試劑盒”屬于生物檢測(cè)耗材，其特征在于，所述測(cè)試項(xiàng)標(biāo)識(shí)設(shè)在所述加樣孔和所述結(jié)果觀察孔之間，所述盒封閉體上下表面的一對(duì)對(duì)角為弧形，所述盒封閉體上還設(shè)有透氣孔，所述膠體金試紙條的金標(biāo)纖維墊包被有膠體金標(biāo)記的齒蘭環(huán)斑病毒單抗，所述膠體金試紙條的纖維素藥膜上的檢測(cè)線T線和對(duì)照線C線上分別包被有齒蘭環(huán)斑病毒單抗和兔抗小鼠IgG多抗。本實(shí)用新型試紙條采用雙抗體夾心法原理以及膠體金技術(shù)快速檢測(cè)齒蘭環(huán)斑病毒，用于各類(lèi)蘭花齒蘭環(huán)斑病毒的檢測(cè)。本實(shí)用新型試劑盒簡(jiǎn)捷、快捷、靈敏、準(zhǔn)確、特異，并且容易保存，使用方便，美觀大方。
文檔編號(hào)G01N33/558GK202710559SQ201220287748
公開(kāi)日2013年1月30日 申請(qǐng)日期2012年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月15日
發(fā)明者張春山, 張永勝 申請(qǐng)人:北京中檢葆泰生物技術(shù)有限公司