專利名稱：β-興奮劑類ELISA檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及ー種檢測￠-興奮劑類藥物殘留量的試劑盒，特別是檢測組織、肝臟、尿液、血清、飼料、牛奶、奶粉中3 -興奮劑類藥物殘留量的酶聯(lián)免疫檢測(ELISA)試劑盒，ELISA (Enzyme Linked Immunosorbnent Assay)是酶聯(lián)免疫吸附劑測定的簡稱,它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種酶免技術(shù)。
背景技術(shù)：
@ -興奮劑(P -agonist)全稱@ -腎上腺素受體激動(dòng)劑(P -adrenoceptoragonist),又叫P -激動(dòng)劑，是ー類化學(xué)結(jié)構(gòu)和生理功能類似腎上腺素和去甲腎上腺素的 苯こ胺類藥物。常見的￠-興奮劑為克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、西馬特羅、馬布特羅、非諾特羅、特布他林等?！?興奮劑能選擇性地與細(xì)胞膜上的￠-腎上腺素受體結(jié)合，起到調(diào)節(jié)交感神經(jīng)興奮、松弛氣管平滑肌的功能，因此在臨床上常用于人和動(dòng)物哮喘類病癥的治療。20世紀(jì)80年代有研究表明，￠-興奮劑影響營養(yǎng)物質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)的流向和重新分配，使體內(nèi)的脂肪分解代謝增強(qiáng)、蛋白質(zhì)合成増加，顯著提高瘦肉率。興奮劑殘留會(huì)聚集在動(dòng)物可食用組織中，由于這類化合物具有ロ服活性，如果違法超量使用將會(huì)對人與動(dòng)物的肝、腎等內(nèi)臟器官產(chǎn)生毒副作用。因此世界各國已將這類物質(zhì)列為禁止用于食品動(dòng)物的化學(xué)物質(zhì)。目前國內(nèi)外關(guān)于P-興奮劑類藥物殘留的的主要檢測方法有色譜法，如氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣質(zhì)聯(lián)用法(GC-MS)、液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS)；免疫分析法，如酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫法、時(shí)間分辨免疫熒光測定等。色譜方法靈敏、準(zhǔn)確，特異性強(qiáng)、分離度好，可以同時(shí)測定多種藥物，但需要昂貴的儀器、樣品的前處理復(fù)雜、繁瑣費(fèi)時(shí)、檢測的成本較高，不能現(xiàn)場操作，而且需專業(yè)人員操作，所以限制了其應(yīng)用；與之相比，酶聯(lián)免疫方法具有特異性好、靈敏度高、操作簡便、檢測成本低、適合于批量樣品的篩選檢測等優(yōu)點(diǎn)，而且所需設(shè)備少，操作簡單易學(xué)，成本低廉，能夠更好地滿足我國畜禽養(yǎng)殖戶、屠宰場、食品企業(yè)、政府職能監(jiān)管部門等開展檢測工作。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型所要解決的問題是提供一種小巧輕便的P -興奮劑類藥物殘留量檢測試劑盒，其操作簡便，檢測快速、準(zhǔn)確、靈敏度高，成本低，穩(wěn)定性好，需要的技術(shù)含量不高，可進(jìn)行一次連續(xù)多個(gè)樣品中￠-興奮劑類藥物殘留量的測定，減少了檢測樣本所需要的時(shí)間。本實(shí)用新型可以檢測6種￠-興奮劑類藥物。本實(shí)用新型的技術(shù)方案是ー種P -興奮劑類ELISA檢測試劑盒，包括盒體和盒內(nèi)的ー塊96孔的酶標(biāo)板、一張蓋板膜、14瓶試劑和放試劑的下凹瓶位、一個(gè)自封袋、一份說明書和ー份質(zhì)檢報(bào)告，其特征在于酶標(biāo)板是采用96孔試劑板作為固相載體，在試劑盒微孔條上預(yù)包被3 -興奮劑類抗體制成的檢測板，14瓶試劑分別為7瓶標(biāo)準(zhǔn)品溶液、濃縮酶結(jié)合物、濃縮酶結(jié)合物稀釋液、底物液A液、底物液B液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液，下凹瓶位共15個(gè)。酶標(biāo)板由外框支撐架及放置其上的可拆的12條酶標(biāo)反應(yīng)微孔條組成，每個(gè)可拆裝的酶標(biāo)反應(yīng)微孔條有8個(gè)反應(yīng)孔，放入真空鋁箔袋中，盒體為硬紙盒，下凹瓶位由塑料泡沫制成，以塑料硬膜為蓋板膜，蓋板膜大小與酶標(biāo)板橫切面大小一致，將14瓶試劑用不同大小、不同顔色的塑料瓶盛裝并固定在下凹瓶位中，與酶標(biāo)板、蓋板膜、自封袋、說明書、質(zhì)控報(bào)告一同封裝在硬紙盒內(nèi)，以便于攜帯和運(yùn)輸。14瓶試劑分別為7瓶Iml梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液、I. 3ml濃縮酶結(jié)合物、13ml濃縮酶結(jié)合物稀釋液、7ml底物液A液、7ml底物液B液、7ml終止液、40ml濃縮洗滌液、50ml濃縮復(fù)溶液。每ー個(gè)試劑盒中的試劑足夠進(jìn)行96次測定(包括標(biāo)準(zhǔn)分析孔)，既可進(jìn)行一次連續(xù)多個(gè)樣 品的檢測，也可以將板孔拆開多次檢測。將剩下的放回鋁箔袋中用自封袋密封，這樣可以保證試劑盒檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。檢測時(shí)，樣本中的殘留物(3 -興奮劑類藥物)將和酶標(biāo)抗原競爭酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被的3 _興奮劑類抗體，用底物液顯色，樣本吸光度值與其所含殘留物(3 -興奮劑類藥物)的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中P -興奮劑類藥物的含量，其操作簡便易行。經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明本試劑盒具有很高的靈敏度尿液、牛奶樣本的最低檢測限為
0.3 i! g/L，組織、肝臟樣本的最低檢測限為0. g/kg，血清樣本的最低檢測限為0. g/し奶粉樣本的最低檢測限為lug/kg，飼料樣本的最低檢測限為5i!g/kg。尿液、血清樣本的回收率為100%土20%，對組織、肝臟、牛奶、奶粉、飼料樣本的回收率為90%土20%。同克侖特羅的交叉反應(yīng)率為100%、同沙丁胺醇的交叉反應(yīng)率為106%、同塞布特羅的交叉反應(yīng)率為99%、同妥布特羅的交叉反應(yīng)率為95%、同溴布特羅的交叉反應(yīng)率為69%、同溴氯布特羅的交叉反應(yīng)率為60%、同特步它林的交叉反應(yīng)率為22%、同西馬特羅的交叉反應(yīng)率為2. 3%、同羥甲基克侖特羅的交叉反應(yīng)率為2. 7%、同萊克多巴胺的交叉反應(yīng)率< 0. 1%。相對于其他P -興奮劑類藥物檢測方法，本試劑盒所需儀器較少，只需要酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、渦旋儀、離心機(jī)和微量加樣器等，同類實(shí)驗(yàn)室一般均有配備，所需成本較低。本實(shí)用新型的有益效果是能快速、簡便、靈敏、準(zhǔn)確地用于組織、肝臟、尿液、血清、飼料、牛奶、奶粉中￠-興奮劑類藥物殘留量的檢測。

圖I為本實(shí)用新型酶標(biāo)板的側(cè)面縱剖面圖(長為8. 55cm)；圖2為本實(shí)用新型酶標(biāo)板的側(cè)面橫剖面圖(長為12. 8cm)；圖3為本實(shí)用新型酶標(biāo)板的俯視圖；圖4為本實(shí)用新型蓋板膜平面圖；圖5 5a、5b、5c、5d為本實(shí)用新型試劑瓶縱剖面平面圖；圖6為本實(shí)用新型固定泡沫模具的俯視圖；圖7為本實(shí)用新型盒體與固定泡沫模具的側(cè)視圖。參見附圖酶標(biāo)反應(yīng)微孔條(2)預(yù)包被￠-興奮劑類抗體(3)固定于酶標(biāo)板的外框支撐架(I)上，酶標(biāo)反應(yīng)微孔條(2)可隨要求拆卸；蓋板膜(4)用于酶標(biāo)板置水浴或恒溫箱內(nèi)反應(yīng)時(shí)封蓋酶標(biāo)反應(yīng)微孔條(2)，蓋板膜大小與酶標(biāo)板橫切面大小一致；透明帽的半透明PE塑料試劑瓶(5)用于封裝40ml濃縮洗滌液；藍(lán)色帽的半透明PE塑料試劑瓶(5)用于封裝50ml濃縮復(fù)溶液；白色帽的白色PE塑料試劑瓶(6)用于封裝7ml底物液A液，紅色帽的黑色PE塑料試劑瓶(6)用于封裝7ml底物液B液，黃色帽的白色PE塑料試劑瓶(6)用于封裝7ml終止液，紅色帽的白色PE塑料試劑瓶(7)用于封裝I. 3ml濃縮酶結(jié)合物，綠色帽的白色PE塑料試劑瓶(7)用于封裝13ml濃縮酶結(jié)合物稀釋液，黑色帽的棕色玻璃試劑瓶(8)用于封裝Iml/瓶的標(biāo)準(zhǔn)品溶液；泡沫塑料模具(10)有15個(gè)下凹瓶位，放置位置依次為40ml濃縮洗滌液瓶位(18)，50ml濃縮復(fù)溶液瓶位(11 )，7ml顯色液A液瓶位(14)，7ml顯色液B液瓶位(13)，7ml終止 液瓶位(12)，I. 3ml濃縮酶結(jié)合物瓶位(16)，13ml濃縮酶結(jié)合物稀釋液瓶位(15)，7個(gè)Iml/瓶各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液瓶位(17)，盒體(9)是硬紙盒。
具體實(shí)施方式
一、樣本的前處理I、配液配液I :0. 5mol/L PB稱取11. Og十二水合磷酸氫ニ鈉，34. 2g磷酸ニ氫鈉加入500ml去離子水充分溶解。配液2 0. 2mol/L鹽酸溶液量取8. 3ml濃鹽酸加入去離子水定容到500ml配液3:牛羊肉提取液稱取0. 44g十二水合磷酸氫ニ鈉，I. 37g磷酸ニ氫鈉和0. 75g檸檬酸加入500ml去離子水充分溶解。配液4 lmol/L氫氧化鈉溶液稱取4. Og氫氧化鈉加入IOOml去離子水充分溶解配液5:復(fù)溶工作液用去離子水將2 X濃縮復(fù)溶液按1:1體積比進(jìn)行稀釋(I份2X濃縮復(fù)溶液+1份去離子水)用于樣本的復(fù)溶。配液6 :洗滌工作液用去離子水將20 X濃縮洗滌液按1:19體積比進(jìn)行稀釋(I份20X濃縮洗滌液+19份去離子水)用于酶標(biāo)板的洗滌，洗滌工作液在4°C環(huán)境可保存ー個(gè)月。2、樣本處理步驟(I)尿液(豬尿、牛尿、羊尿)前處理方法取50iU清亮尿樣直接測定(如尿樣渾濁必須通過過濾或離心)，暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。(2)豬肉、豬肝前處理方法稱取2. 0g±0. 05g勻衆(zhòng)樣本至50ml聚苯こ烯離心管中；加入6ml 0. 5mol/L PB溶液和2ml 0. 2mol/L HCl溶液，用渦旋儀渦動(dòng)至均勻；3000g以上，室溫(20_25°C /68-77 °F)離心5min ;肝臟樣本取Iml上清液加入80 u I lmol/L氫氧化鈉溶液混勻(混勻以后測定pH值，大約為6. 5);肌肉樣本取Iml上清液加入50iU lmol/L氫氧化鈉溶液混勻(混勻以后測定pH值,大約為6. 5);取50 ii I用于分析。(3)雞肉、牛肉、羊肉前處理方法[0038]稱取2. 0g±0. 05g勻漿樣本至50ml聚苯こ烯離心管中；加入8ml牛羊肉提取液(稱取0. 44g十二水合磷酸氫ニ鈉，I. 37g磷酸ニ氫鈉和0. 75g檸檬酸加入500ml去離子水充分溶解。)，用渦旋儀渦動(dòng)至均勻；3000g以上，室溫(20-25°C /68-77 °F)離心5min ;取Iml上清液加入20 u I lmol/L氫氧化鈉溶液混勻(混勻以后測定pH值為6. 5-7);取50 ill用于分析。[0039](4)飼料(原料、濃縮料、配合料)前處理方法稱取I. 0g±0. 05g樣本至50ml聚苯こ烯離心管中，加入IOml甲醇，振蕩Imin ;3000g以上，室溫(20-25°C /68-77 °F)離心5min ;移取Iml上層有機(jī)相至IOml干凈玻璃試管中，于50-60°C水浴氮?dú)?空氣流下吹干；加入Iml正已燒，潤動(dòng)Imin,再加入Iml復(fù)溶工作液(用去離子水將濃縮復(fù)溶液按1:1體積比進(jìn)行稀釋)，渦動(dòng)30s ；3000g以上，室溫(20-250C /68-77 T)離心5min ;去除上層有機(jī)相，取100 U I下層水相，加400 U I復(fù)溶工作液混勻；取50 ii I用于分析。(5)血清(豬血清、牛血清)前處理方法取200 ii I血清樣本于2ml聚苯こ烯離心管中，再加入600 U I復(fù)溶工作液，充分混勻；取50 ii I用于分析。(6)牛奶(原奶、成品奶)前處理方法取50 ill牛奶樣本直接測定，暫不使用的樣本應(yīng)冷藏保存。(7)奶粉前處理方法稱取0. 5g±0. 05g奶粉樣本于IOml聚苯こ烯離心管中，加入4ml去離子水充分振蕩混勻；取50 ii I用于分析。ニ、使用試劑盒的操作步驟I、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫(2(T25°C)平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放回鋁箔袋，封ロ，保存于疒8°C。3、洗滌工作液在使用前也需回溫。4、編號將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。5、酶結(jié)合物工作液配制根據(jù)需要量用濃縮酶結(jié)合物稀釋液將濃縮酶結(jié)合物按1:10的比例稀釋成酶結(jié)合物工作液(即I份濃縮酶結(jié)合物加入到10份濃縮酶結(jié)合物稀釋液中)。6、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本及酶結(jié)合物工作液加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50 U I到對應(yīng)的微孔中，然后加入配制好的酶結(jié)合物工作液IOOiil/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25°C避光環(huán)境中反應(yīng)40min。7、洗板小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250 Ul/孔，充分洗滌4飛次，毎次間隔10s，用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。8、顯色加入底物液A液50 iil/孔，再加底物液B液50 iil/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25°C避光環(huán)境中反應(yīng)15min。9、測定加入終止液50 U I/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù))，測定每孔OD值。(若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測法可進(jìn)行判定)。三、結(jié)果判定結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第I種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與￠-興奮劑類的含量成負(fù)相關(guān)。I、用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(U g/L)。例如樣本I的吸光度值為0. 501，樣本2的吸光度值為0. 912，標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值分別是0ii g/L為 I.952 ；0. I y g/L 為 I. 580 ；0. 4 y g/L 為 I. 080 ; I. 6 y g/L 為 0. 603 ；6. 4 y g/L 為 0. 286 ；25. 6 ii g/L為0. 102。貝_本I的濃度范圍是I. 6^6. 4 u g/L再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得出樣本中￠-興奮劑類殘留的濃度范圍；樣本2的濃度范圍是0.ri.6i!g/L再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得出樣本中P-興奮劑類殘留的濃度范圍。2、定量分析(I)百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光率(％) =xlOOB——標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0——0 U g/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以克侖特羅標(biāo)準(zhǔn)品濃度(U g/L)的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為樣本中P -興奮劑類藥物的實(shí)際濃度。四、測定前的注意事項(xiàng)I、室溫低于20°C或試劑及樣本沒有回到室溫(2(T25°C )會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性、重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一歩操作。3、每加ー種試劑前需要將其搖勻。4、反應(yīng)終止液為2mol/L硫酸,避免接觸皮膚。5、不要使用過了有效期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試齊U，摻雜使用過了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。6、儲(chǔ)存條件保存試劑盒于2 8°C，不要冷凍，將不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。7、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顔色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0. 5 (A450nm<0. 5)時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色15min即可。若顏色較淺,可延長反應(yīng)時(shí)間到20min (或更長),但不得超過30min。反之,則縮短反應(yīng)時(shí)間。[0076]9 、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25°C，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
權(quán)利要求1.ー種3 -興奮劑類ELISA檢測試劑盒，包括盒體和盒內(nèi)的ー塊96孔的酶標(biāo)板、ー張蓋板膜、14瓶試劑和放試劑的下凹瓶位、ー個(gè)自封袋、ー份說明書和ー份質(zhì)檢報(bào)告，其特征在于酶標(biāo)板是采用96孔試劑板作為固相載體，在試劑盒微孔條上預(yù)包被3 -興奮劑類抗體制成的檢測板，14瓶試劑分別為7瓶標(biāo)準(zhǔn)品溶液、濃縮酶結(jié)合物、濃縮酶結(jié)合物稀釋液、底物液A液、底物液B液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液，下凹瓶位共15個(gè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于盒體是硬紙盒；96孔的聚苯こ烯酶標(biāo)板，放于真空鋁箔袋內(nèi)；蓋板膜是塑料硬膜；標(biāo)準(zhǔn)品溶液用黒色帽的棕色玻璃瓶，濃縮酶結(jié)合物用紅色帽的白色PE塑料瓶，濃縮酶結(jié)合物稀釋液用綠色帽的白色PE塑料瓶，底物液A液用白色帽的白色PE塑料瓶，底物液B液用紅色帽的黒色PE塑料瓶，終止液用黃色帽的白色PE塑料瓶，濃縮洗滌液用透明帽的半透明PE塑料瓶，濃縮復(fù)溶液用藍(lán)色帽的半透明PE塑料瓶，下凹瓶位由塑料泡沫制成。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于酶標(biāo)板是由外框支撐架及放置其上的可拆的12條酶標(biāo)反應(yīng)微孔條組成，每個(gè)可拆裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條有8個(gè)反應(yīng)孔；蓋板膜大小與酶標(biāo)板橫切面大小一致；標(biāo)準(zhǔn)品溶液7瓶，Iml/瓶；濃縮酶結(jié)合物I瓶，I. 3ml ;濃縮酶結(jié)合物稀釋液I瓶，13ml ;底物液A液I瓶，7ml ;底物液B液I瓶，7ml ;終止液I瓶，7ml ;濃縮洗滌液I瓶，40ml ;濃縮復(fù)溶液I瓶，50ml。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種檢測組織、肝臟、尿液、血清、飼料、牛奶、奶粉中β-興奮劑類藥物殘留量的酶聯(lián)免疫試劑盒。該試劑盒組成包括96孔酶標(biāo)板、濃縮酶結(jié)合物、濃縮酶結(jié)合物稀釋液、7個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物液A液、底物液B液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液、蓋板膜、自封袋、說明書和質(zhì)檢報(bào)告。采用直接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被β-興奮劑類抗體，樣本中殘留的β-興奮劑類藥物將和酶標(biāo)抗原競爭酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被的β-興奮劑類抗體，用底物液顯色，利用樣本吸光度值計(jì)算出樣品中β-興奮劑類藥物的殘留量。與儀器分析技術(shù)相比具有操作簡便、費(fèi)用低廉、靈敏度高等特點(diǎn)，可在β-興奮劑類藥物的殘留量檢測中發(fā)揮重要作用。
文檔編號G01N33/544GK202794175SQ20122029693
公開日2013年3月13日 申請日期2012年6月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月19日
發(fā)明者馮才偉, 萬宇平, 羅貴昆, 陳娟, 何方洋, 邢維維, 楊昌松, 顧蓉蓉 申請人:北京勤邦生物技術(shù)有限公司