專利名稱：一種可用于快速檢測小分子化合物的金標微孔試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
—種可用于快速檢測小分子化合物的金標微孔試劑盒技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于食品安全檢測領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種檢測動物源性食品中 小分子化合物殘留量的金標微孔試劑盒。
背景技術(shù)：
[0002]隨著生活水平的提高，動物源食品中的藥物和添加劑殘留日益受到人們的重視。 獸藥、農(nóng)藥、食品添加劑、霉菌毒素等由于其使用方法不當或不遵守休藥期規(guī)定等原因，造 成它們在畜產(chǎn)品中的殘留，嚴重威脅到人民的健康和生命安全，如產(chǎn)生過敏反應(yīng)、破壞胃腸 道菌群平衡和增強細菌耐藥性等。對這些危害物進行及時、準確、快捷的檢測，是保護人類 健康、維護社會安定的關(guān)鍵之一。[0003]對于小分子化合物常規(guī)的檢測方法主要分為理化分析方法和免疫分析方法。理化 分析方法有氣相色譜、高效液相色譜、薄層色譜、質(zhì)譜、串聯(lián)質(zhì)譜以及各方法之間的聯(lián)用技 術(shù)等，雖然這些方法準確度高，但是存在操作復(fù)雜，對檢測人員要求高，檢測時間長，成本高 等缺點，不適合現(xiàn)場使用，不利于及時發(fā)現(xiàn)和監(jiān)控管理。免疫分析方法包括放射免疫法、酶 聯(lián)免疫法、熒光免疫法。本發(fā)明一種可用于快速檢測小分子化合物的金標微孔試劑盒檢測 方法簡便、靈敏，不需要昂貴的儀器設(shè)備和專業(yè)的分析人員，特別適合企業(yè)進行現(xiàn)場監(jiān)測， 易于推廣。實用新型內(nèi)容[0004]本實用新型的目的是提供一種靈敏度高、成本低、操作簡單、檢測時間短的檢測小 分子化合物的試劑盒。[0005]本實用新型的特征在于試劑盒包括12個鋁箔袋，每個鋁箔袋內(nèi)裝I條微孔板、 微孔板有8個反應(yīng)孔；8個試紙條，試紙條由底板、附著在底板上依次緊密相連的樣品吸收 墊、反應(yīng)膜和吸水墊等組成，與常規(guī)試紙條不同的是，其中的小分子化合物單克隆抗體-膠 體金標記物不是包被在結(jié)合物釋放墊上，組裝入試紙條，而是凍干在微孔中。[0006]將金標抗體凍干在微孔試劑條中，這樣做的好處是在檢測過程中，能夠使金標抗 體與待檢樣品液充分接觸，充分反應(yīng)，從而減少誤差，增加整個體系的反應(yīng)靈敏度。[0007]沿樣品液流動方向，底板I分為三個區(qū)域加樣區(qū)、反應(yīng)膜設(shè)置區(qū)和吸水墊設(shè)置 區(qū)。反應(yīng)膜2設(shè)于反應(yīng)膜設(shè)置區(qū)上；樣品墊3設(shè)置于加樣區(qū)上；所述吸水墊設(shè)置區(qū)上設(shè)有吸 水墊4 ;所述反應(yīng)膜上設(shè)有T線5和C線6，其上分別包被有小分子化合物-載體蛋白偶聯(lián) 物構(gòu)成的檢測線印跡和包被抗抗體構(gòu)成的質(zhì)控線印跡，T線與C線相互平行且與樣品流動 方向垂直，組合排列可為紫紅色的條帶“ I I ”，所述T線靠近結(jié)合物釋放墊，所述C線靠近吸 水墊。[0008]試紙條還包括保護膜7，可覆蓋于所述試紙條兩端的樣品墊和吸水墊上，覆蓋在吸 水端上的為手柄端，覆蓋在樣品吸收墊上的為檢測端；所述保護膜為防水材質(zhì)，可用于固定 檢測卡的組件，避免樣品或試劑與外界環(huán)境中的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，影響檢測結(jié)果。[0009]所述樣品墊的長度可為18mm，所述反應(yīng)膜的長度可為20mm，所述吸水墊的長度可 為20mm。所述檢測線距離所述樣品墊的垂直距離可為6mm ;所述質(zhì)控線距離所述吸水墊的 垂直距離可為6_。[0010]所述反應(yīng)膜、所述樣品墊、所述結(jié)合物釋放墊和所述吸水墊可通過雙面膠固定于 盒體的底板上，它們與底板之間可設(shè)有高分子材料制成的背襯膜，用以阻止粘合劑中的有 機溶劑對包被的蛋白和抗體的破壞。[0011]本實用新型試劑盒中試紙條底板可為PVC底板；所述樣品吸收墊可為吸濾紙；所 述吸水墊可為吸水紙；所述反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜；保護膜為PE材質(zhì)保護膜；試劑盒盒體 為硬紙盒；包裝袋為鋁箔袋。[0012]本實用新型試劑盒的檢測原理為硝酸纖維素膜(NC)含有預(yù)先固定于測試區(qū)(T) 的包被抗原、控制區(qū)(C)的二抗。樣品中的被檢物在微孔中與膠體金標記的特異性抗體結(jié) 合，抑制了抗體和T區(qū)包被抗原的結(jié)合，使T區(qū)不顯色，結(jié)果為陽性；反之，T區(qū)出現(xiàn)一條肉 眼可見的紅色條帶，結(jié)果為陰性。[0013]本實用新型試劑盒具有以下特點[0014]1.靈敏度聞。本檢測試劑盒以I父體金標記聞未和力的單克隆抗體為基礎(chǔ)制備而 成，金標抗體中金顆粒與抗體分子之間無價健形成，二者通過異性電荷間的范德華力相結(jié) 合，膠體金對單克隆抗體特異性和親和力影響很小，且具有較高的標記率。因此，本實用新 型試劑盒具有較高的特異性和靈敏度。[0015]2.操作簡便快速。使用試劑盒檢測時無需任何其它試劑，只要將待檢樣品溶液滴 加于凍干有小分子化合物單克隆抗體-膠體金標記物的微孔試劑條中，混勻，孵育5min，將 試紙條樣品吸收墊端向下，插入孵育后的微孔試劑反應(yīng)，5min后觀察結(jié)果。[0016]3.顯示檢測結(jié)果形象、直觀準確。檢測是試紙條以顯示紅線色“ I I ”及“ I ”印跡作 為陰性和陽性標記，即在硝酸纖維素膜上顯示兩條紅線“ 11 ”印跡表示在被檢測樣本液中小 分子化合物的含量低于檢測限，一條紅線“ I ”印跡表示在被檢測樣本中小分子化合物含量 高于或等于檢測限，結(jié)果判定形象、直觀、準確、簡單明了，不容易出現(xiàn)結(jié)果誤判。[0017]4.成本低，投資少。使用本實用新型試劑盒，不需另配儀器設(shè)備及其他試劑，使現(xiàn) 場檢測一步到位，成本低廉，投資少，見效快。[0018]5.易于大范圍推廣應(yīng)用。試劑盒操作簡單，能較好滿足不同層次人員的需要，如專 業(yè)化驗、海關(guān)檢疫、衛(wèi)生防疫、質(zhì)量監(jiān)測、乳業(yè)企業(yè)等，具有廣闊的市場前景和較大的經(jīng)濟、 社會效益。


[0019]圖1為本實用新型試紙條結(jié)構(gòu)示意圖；[0020]圖2為本實用新型試紙條插入微孔中檢測樣品示意圖；[0021]圖3為本實用新型試紙條檢測結(jié)果判定圖；具體實施方式
[0022]一、小分子化合物檢測試劑盒組裝制備[0023]I試紙條[0024]反應(yīng)膜2、樣品吸收墊3、吸水墊4依次按順序黏貼在所述底板I上，樣品吸收墊的末端與反應(yīng)膜相連，反應(yīng)膜的末端與吸水墊相連，樣品吸收墊的始端與底板的始端對齊， 吸水墊的末端與底板的末端對齊，試紙兩端黏貼有保護膜7，檢測線5包被有小分子化合物-載體蛋白偶聯(lián)物，質(zhì)控線6包被有抗抗體。[0025]底板為PVC底板，樣品吸收墊為吸濾紙，反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜，吸水墊為吸水紙，保護膜為PE材質(zhì)保護膜。[0026]2微孔板[0027]微孔板8板孔中凍干有小分子化合物單克隆抗體-膠體金標記物。[0028]將試紙條和微孔板裝入鋁箔袋中。[0029]二、試劑盒的使用[0030]將待檢樣品溶液200 μ I滴加到凍干有小分子化合物單克隆抗體-膠體金標記物的微孔試劑中，混勻后，孵育5min，將試紙樣品吸收墊端向下，插入孵育后的微孔試劑條后， 5min內(nèi)觀察結(jié)果。[0031]三、檢測結(jié)果分析[0032]小分子化合物在樣本中的含量高于或等于檢測限時，與微孔試劑條中的小分子化合物單克隆抗體-膠體金標記物結(jié)合，從而在檢測區(qū)內(nèi)因為競爭反應(yīng)，金標抗體不會與小分子化合物-載體蛋白結(jié)合，檢測線不出現(xiàn)紅色條帶，金標抗體與抗抗體結(jié)合，質(zhì)控線呈紅色條帶；當小分子化合物在樣本中的含量低于檢測限時，金標抗體結(jié)合位點沒被封閉，會與小分子化合物-載體蛋白偶聯(lián)物結(jié)合而出現(xiàn)紅色條帶。[0033]陰性當質(zhì)控線(C)顯示一條紅色條帶，檢測線(T)同時也顯示出一條紅色條帶， 且檢測線(T)顏色接近或淺于質(zhì)控線(C)時，判為陰性。[0034]陽性當質(zhì)控線(C)顯示一條紅色條帶，而檢測線(T)不顯色或顏色很淺時，判為陽性?！0035]無效當質(zhì)控線(C)不顯示出紅色條帶，則無論檢測線(T)顯示出紅色條帶與否， 該試紙條判為無效。[0036]四、檢測試劑盒中用到的材料制備方法如下[0037]1、小分子化合物-載體蛋白偶聯(lián)物的合成與鑒定[0038]小分子化合物，只有免疫反應(yīng)性，沒有免疫原性,不能誘發(fā)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答,必須與大分子載體蛋白偶聯(lián)后才具有免疫原性。[0039]將載體蛋白、小分子化合物、小分子化合物-載體蛋白偶聯(lián)物用pH7. 4的PBS配成 O. 5mg/ml的溶液，以O(shè). 01mol/L pH7. 4PBS調(diào)零，用紫外分光光度計在波長200_800nm范圍內(nèi)掃描，得到載體蛋白、小分子化合物、小分子化合物-載體蛋白偶聯(lián)物的吸收曲線。三者出現(xiàn)不同的吸收曲線，表明小分子化合物與載體蛋白偶聯(lián)成功。[0040]2、將小分子化合物單克隆抗體-膠體金標記物凍干到微孔中[0041]向每個微孔中加入100 μ I小分子化合物單克隆抗體-膠體金標記物，放入冷凍干燥機中，在冷阱溫度為-70°C條件下，預(yù)凍4h后，再凍干14h，即可取出，得到凍干有小分子化合物單克隆抗體-膠體金標記物的微孔。
權(quán)利要求1.一種檢測小分子化合物的金標微孔試劑盒，其特征在于試劑盒包括12個鋁箔袋、每個鋁箔袋內(nèi)裝I條微孔板、微孔板有8個反應(yīng)孔；8個試紙條，試紙條由底板、附著在底板上依次緊密相連的樣品吸收墊、反應(yīng)膜、吸水墊和保護膜組成，微孔中凍干有小分子化合物單克隆抗體-膠體金標記物。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測小分子化合物的金標微孔試劑盒，其特征在于所述反應(yīng)膜上具有包被有小分子化合物-載體蛋白偶聯(lián)物構(gòu)成的檢測線印跡和包被抗抗體構(gòu)成的質(zhì)控線印跡。
3.如權(quán)利要求2所述的檢測小分子化合物的金標微孔試劑盒，其特征在于所述檢測線和質(zhì)控線平行。
4.如權(quán)利要求2或3所述的檢測小分子化合物的金標微孔試劑盒，其特征在于所述檢測線距離所述樣品墊的垂直距離可為6mm，所述質(zhì)控線距離所述吸水墊的垂直距離可為 6mm ο
5.如權(quán)利要求4所述的檢測小分子化合物的金標微孔試劑盒，其特征在于，所述試紙條兩端貼有保護膜，覆蓋在吸水端上的為手柄端，覆蓋在樣品吸收墊上的為檢測端。
6.如權(quán)利要求1所述的檢測小分子化合物的金標微孔試劑盒，其特征在于所述底板為 PVC底板，樣品吸收墊為吸濾紙，反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜，吸水墊為吸水紙，保護膜為PE材質(zhì)保護膜。
7.如權(quán)利要求1所述的檢測小分子化合物的金標微孔試劑盒，其特征在于所述試劑盒盒體為硬紙盒。
專利摘要本實用新型提供了一種檢測小分子化合物的金標微孔試劑盒，試劑盒包括12個鋁箔袋、每個鋁箔袋內(nèi)裝1條微孔板、微孔板有8個反應(yīng)孔；8個試紙條，試紙條由底板、附著在底板上依次緊密相連的樣品吸收墊、反應(yīng)膜、吸水墊和保護膜組成，微孔中凍干有小分子化合物單克隆抗體—膠體金標記物，在反應(yīng)膜具有包被有小分子化合物—載體蛋白偶聯(lián)物構(gòu)成的檢測線和包被有抗抗體構(gòu)成質(zhì)控線。本實用新型試劑盒具有便攜性好，靈敏度高，檢測時間短等特點，可以在小分子化合物檢測中發(fā)揮重要作用。
文檔編號G01N33/558GK202854149SQ201220405198
公開日2013年4月3日 申請日期2012年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月16日
發(fā)明者徐飛, 何丹婷, 蘇麗芳, 李向梅 申請人:北京維德維康生物技術(shù)有限公司