專利名稱：一種使用拭子采集體液檢測(cè)間日瘧的檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型是涉及生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種使用拭子采集體液檢測(cè)間日瘧的檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
瘧疾(malaria)是因瘧原蟲(chóng)寄生人體組織而引起的寄生原蟲(chóng)病。臨床上以間歇性發(fā)冷、發(fā)熱、肝脾腫大為主要特征。主要包括間日瘧、惡性瘧、三日瘧和卵形瘧。間日瘧是瘧疾的一種類型，為間日痕原蟲(chóng)(Plasmodium vivax)所引起,其特點(diǎn)為每隔48小時(shí)反復(fù)發(fā)作一次，主要表現(xiàn)為先冷后熱，出汗后恢復(fù)正常，兩次發(fā)作期間表現(xiàn)正常。其傳播媒介為中華按蚊。目前對(duì)間日瘧檢測(cè)的主要方法是對(duì)血液樣本進(jìn)行采集檢測(cè)間日瘧原蟲(chóng)，在膠體金的檢測(cè)方法中，有檢測(cè)間日瘧和惡性瘧抗原的報(bào)道，但使用口腔液拭子進(jìn)行IgG檢測(cè)尚未有相關(guān)報(bào)道。和傳統(tǒng)試劑相比，使用口腔液拭子進(jìn)行IgG檢測(cè)具有采樣容易，減少患者的痛苦，減少檢測(cè)人員的工作量的優(yōu)點(diǎn)。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是提供一種使用拭子采集體液檢測(cè)間日瘧的檢測(cè)試劑盒，具有采樣容易、操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。
本實(shí)用新型提供一種使用拭子采集體液檢測(cè)間日瘧的檢測(cè)試劑盒，其特征在于塑料支撐板(7) —端連接上樣墊(1)，上樣墊(I)的一端緊密壓接含有標(biāo)記間日瘧特異性的抗原的膠體金墊(2)，膠體金墊(2) —端緊密壓接硝酸纖維素(NC)膜(3)，硝酸纖維素膜包被有相互分離的檢測(cè)線T線(5)和質(zhì)控C線(6)，檢測(cè)線T (5)為包被在NC膜上的抗人IgG抗體，質(zhì)控(C)線(6)為包被在NC膜上的抗間日瘧特異性抗原的抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸樣墊(4)形成試紙。所述的一種使用拭子采集體液檢測(cè)間日瘧的檢測(cè)試劑盒，其特征在于其抗體的包被方法為:以0.0lM pH7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將抗人IgG抗體配制成5mg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以1-1.5ul/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線，包被T線，同時(shí)在NC膜上部包被間日瘧特異性抗原的抗體作為C線，劃線后將NC膜在干燥間，溫度20-25 V，濕度小于30 %，干燥2-5小時(shí)。將標(biāo)記好間日瘧特異性抗原的膠體金顆粒制成膠體金墊，與包被抗體的硝酸纖維素膜和其他輔料制備成試紙條。所述的一種使用拭子采集體液檢測(cè)間日瘧的檢測(cè)試劑盒，其特征在于其檢測(cè)方法為:用口腔拭子尼龍墊端從嘴的上牙齦一角開(kāi)始，從左慢慢壓拭到右，用時(shí)5到6秒，然后，從右慢慢壓拭到左，用時(shí)5到6秒，反復(fù)3次，然后反轉(zhuǎn)口腔拭子，從嘴的下牙齦一角開(kāi)始，重復(fù)上述過(guò)程，壓拭力度，以受檢者有酸脹感，且無(wú)明顯不適為準(zhǔn)；壓拭后，立即將口腔拭子浸入樣本緩沖液中，先后讓拭子的兩面緊貼試管壁，上下刮擦6-8次，管內(nèi)液體即為口腔液樣本，將試紙條平放，在上樣墊上加入IOOul樣品，使膠體金溶解并在NC膜上層析，然后用肉眼直接觀察在15分鐘內(nèi)C、T線的出現(xiàn)情況，并判定檢測(cè)結(jié)果。本實(shí)用新型的有益效果是:提供一種使用拭子采集體液檢測(cè)間日瘧的檢測(cè)試劑盒。和傳統(tǒng)試劑相比，使用口腔液拭子進(jìn)行IgG檢測(cè)具有采樣容易，減少患者的痛苦，減少檢測(cè)人員的工作量的優(yōu)點(diǎn)。

:圖1使用拭子采集體液檢測(cè)間日瘧的檢測(cè)試劑盒試紙結(jié)構(gòu)示意圖。附圖符號(hào)說(shuō)明:1:上樣墊；2:膠體金墊；3:NC膜；4:吸樣墊5:檢測(cè)線Tl ；6:質(zhì)控(C)線；7:塑料支撐板。圖2采集口腔液拭子結(jié)構(gòu)示意圖附圖符號(hào)說(shuō)明:1:尼龍墊端；2:手持端。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例:制備間日瘧的檢測(cè)試劑盒試紙將間日瘧特異性抗原使用膠體金標(biāo)記，制成膠體金墊，以0.0lM pH7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將抗人IgG抗體配制成5mg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以1_1.5ul/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線，包被T線，同時(shí)在NC膜上部包被間日瘧特異性抗原抗體作為C線，劃線后將NC膜在干燥間，溫度20-25°C，濕度小于30%，干燥2_5小時(shí)。將膠體金墊和包被好的NC膜和其他輔料裝配成試紙條。 將已確診間日瘧IgG抗體陽(yáng)性的病人作為待檢者，將50例已確診間日瘧IgG抗體陰性的健康人作為對(duì)照組待檢者。用口腔拭子尼龍墊端從嘴的上牙齦一角開(kāi)始，從左慢慢壓拭到右，用時(shí)5到6秒，然后，從右慢慢壓拭到左，用時(shí)5到6秒，反復(fù)3次，然后反轉(zhuǎn)口腔拭子，從嘴的下牙齦一角開(kāi)始，重復(fù)上述過(guò)程，壓拭力度，以受檢者有酸脹感，且無(wú)明顯不適為準(zhǔn)；壓拭后，立即將口腔拭子浸入樣本緩沖液中，先后讓拭子的兩面緊貼試管壁，上下刮擦6-8次，管內(nèi)液體即為口腔液樣本，將試紙條平放，在上樣墊上加入IOOul樣品，使膠體金溶解并在NC膜上層析，然后用肉眼直接觀察在15分鐘內(nèi)C、T線的出現(xiàn)情況，并判定檢測(cè)結(jié)果O檢測(cè)結(jié)果的解釋:如果對(duì)照區(qū)內(nèi)的對(duì)照線沒(méi)有出現(xiàn)，檢測(cè)結(jié)果無(wú)效，如果僅在對(duì)照區(qū)出現(xiàn)一條線對(duì)照線，結(jié)果為陰性。如果檢測(cè)線和對(duì)照線都出現(xiàn)，即試紙上出現(xiàn)兩條線，則檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。通過(guò)臨床血清檢測(cè)，IgG為陽(yáng)性的樣本和IgG為陰性的樣本，本試劑檢測(cè)和臨床診斷結(jié)果完全一致。臨床檢測(cè)表明本試劑的性能和現(xiàn)有診斷手段相比無(wú)顯著性差異，適合用于臨床檢測(cè)。
權(quán)利要求1.一種使用拭子采集體液檢測(cè)間日瘧的檢測(cè)試劑盒，其特征在于塑料支撐板(7) —端連接上樣墊(1)，上樣墊(I)的一端緊密壓接含有標(biāo)記間日瘧特異性抗原的膠體金墊(2)，膠體金墊(2) —端緊密壓接硝酸纖維素膜(3)，硝酸纖維素膜包被有相互分離的檢測(cè)線T線(5)和質(zhì)控C線(6)，檢 測(cè)線T(5)為包被在硝酸纖維素膜上的抗人IgG抗體，質(zhì)控(C)線(6)為包被在硝酸纖維素膜上的抗間日瘧特異性抗原的抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸樣墊⑷形成試紙。
專利摘要本實(shí)用新型涉及生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種使用拭子采集體液檢測(cè)間日瘧的檢測(cè)試劑盒，采用拭子采集口腔液，用膠體金標(biāo)記間日瘧重組抗原，包被抗人IgG抗體實(shí)現(xiàn)對(duì)口腔液中抗間日瘧IgG抗體的檢測(cè)。具有操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/569GK203101393SQ20122059677
公開(kāi)日2013年7月31日 申請(qǐng)日期2012年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月12日
發(fā)明者祁軍, 劉寅, 于智睿, 劉振宇, 柴宏森, 左鋒, 于佳 申請(qǐng)人:中華人民共和國(guó)天津出入境檢驗(yàn)檢疫局