專利名稱：一種使用拭子采集體液檢測乙型肝炎的檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型是涉及生物應用技術領域，特別是涉及一種使用拭子采集體液檢測乙型肝炎的檢測試劑盒。
背景技術：
乙型肝炎病毒(h印atitis B virus)是指引起人類急、慢性肝炎的DNA病毒，也稱丹氏顆粒，簡稱HBV。乙型肝炎病毒(HBV)屬嗜肝DNA病毒科(hepadnaviridae),基因組長約3.2kb,為部分雙鏈環(huán)狀DNA。HBV的抵抗力較強，我國的乙肝病毒感染率約較高；乙肝表面抗原攜帶率約占總人口的7.18 %，以此計算，全國約有9300萬人攜帶乙肝病毒，其中乙肝患者大約有3000萬。乙肝核心抗體(HBcAb)是乙肝病毒核心抗原的對應抗體，它不是保護性抗體，它的存在反而是受到乙肝病毒侵害的指標之一。它包括IgM、IgA、IgG三種類型。IgM型是判定急性乙肝的重要指標，是機體感染乙肝病毒后在血液中最早出現(xiàn)的特異性抗體，一般持續(xù)3-6個月。假如HBcAb-1gM持續(xù)高滴度，表明乙肝有慢性化傾向。如果在慢性活動性乙肝患者中，HBcAb-1gM滴度高，說明乙肝病毒正在體內(nèi)復制活躍，是傳染性強的指標之一。HBcAb-1gG出現(xiàn)較晚，不是保護性抗體，檢測HBcAb-1gG具有流行病學調(diào)查意義。
·[0005]目前對乙型肝炎病毒檢測的主要方法是對血液樣本進行采集檢測抗體，在膠體金的檢測方法中，有檢測乙型肝炎病毒核心抗體的報道，但使用口腔液拭子進行IgG檢測尚未有相關報道。和傳統(tǒng)試劑相比，使用口腔液拭子進行IgG檢測具有采樣容易，減少患者的痛苦，減少檢測人員的工作量的優(yōu)點。
發(fā)明內(nèi)容。本實用新型的目的是提供一種使用拭子采集體液檢測乙型肝炎的檢測試劑盒，具有采樣容易、操作簡便、反應快速、敏感性高、特異性強、適合現(xiàn)場檢測等優(yōu)點。本實用新型提供一種使用拭子采集體液檢測乙型肝炎的檢測試劑盒，其特征在于塑料支撐板(7) —端連接上樣墊(1)，上樣墊(I)的一端緊密壓接含有標記乙肝核心抗體(鼠單抗)的膠體金墊(2)，膠體金墊⑵一端緊密壓接硝酸纖維素(NC)膜(3)，硝酸纖維素膜包被有相互分離的檢測線T線(5)和質(zhì)控C線(6)，檢測線T(5)為包被在NC膜上的乙肝核心抗原，質(zhì)控(C)線(6)為包被在NC膜上的羊抗鼠IgG抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸樣墊(4)形成試紙。所述的一種使用拭子采集體液檢測乙型肝炎的檢測試劑盒，其特征在于其抗原、抗體的包被方法為:以0.0lM ρΗ7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將乙肝核心抗原配制成5mg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以1-1.5ul/cm的參數(shù)進行劃線，包被T線，同時在NC膜上部包被羊抗鼠IgG抗體作為C線，劃線后將NC膜在干燥間，溫度20-25°C，濕度小于30%，干燥
2-5小時。[0009]將標記好的乙肝核心抗體(鼠單抗)膠體金顆粒制成膠體金墊，與包被抗體的硝酸纖維素膜和其他輔料制備成試紙條。所述的一種使用拭子采集體液檢測乙型肝炎的檢測試劑盒，其特征在于其檢測方法為:用口腔拭子尼龍墊端從嘴的上牙齦一角開始，從左慢慢壓拭到右，用時5到6秒，然后，從右慢慢壓拭到左，用時5到6秒，反復3次，然后反轉口腔拭子，從嘴的下牙齦一角開始，重復上述過程，壓拭力度，以受檢者有酸脹感，且無明顯不適為準；壓拭后，立即將口腔拭子浸入樣本緩沖液中，先后讓拭子的兩面緊貼試管壁，上下刮擦6-8次，管內(nèi)液體即為口腔液樣本，將試紙條平放，在上樣墊上加入IOOul樣品，使膠體金溶解并在NC膜上層析，然后用肉眼直接觀察在15分鐘內(nèi)C、T線的出現(xiàn)情況，并判定檢測結果。本實用新型的有益效果是:提供一種使用拭子采集體液檢測乙型肝炎的檢測試劑盒。和傳統(tǒng)試劑相比，使用口腔液拭子進行IgG檢測具有采樣容易，減少患者的痛苦，減少檢測人員的工作量的優(yōu)點。

:圖1使用拭子采集體液檢測乙型肝炎的檢測試劑盒試紙結構示意圖。附圖符號說明:1:上樣墊；2:膠體金墊；3:NC膜；4:吸樣墊5:檢測線Tl ；6:質(zhì)控(C)線；7:塑料支撐板。圖2采集口腔液拭子結構示意圖附圖符號說明:1:尼龍塾纟而;2:手持立而。
具體實施方式
實施例:制備乙型肝炎的檢測試 劑盒試紙將乙肝核心抗體(鼠單抗)使用原實用膠體金標記，制成膠體金墊，以0.0lMρΗ7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將乙肝核心抗原配制成5mg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以1-1.5ul/cm的參數(shù)進行劃線，包被T線，同時在NC膜上部包被羊抗鼠IgG抗體作為C線，劃線后將NC膜在干燥間，溫度20-25°C，濕度小于30%，干燥2_5小時。將膠體金墊和包被好的NC膜和其他輔料裝配成試紙條。將50例已確診乙型肝炎病毒核心抗體陽性的病人作為待檢者，將50例已確診乙型肝炎病毒核心抗體的健康人作為對照組待檢者。用口腔拭子尼龍墊端從嘴的上牙齦一角開始，從左慢慢壓拭到右，用時5到6秒，然后，從右慢慢壓拭到左，用時5到6秒，反復3次，然后反轉口腔拭子，從嘴的下牙齦一角開始，重復上述過程，壓拭力度，以受檢者有酸脹感，且無明顯不適為準；壓拭后，立即將口腔拭子浸入樣本緩沖液中，先后讓拭子的兩面緊貼試管壁，上下刮擦6-8次，管內(nèi)液體即為口腔液樣本，將試紙條平放，在上樣墊上加入IOOul樣品，使膠體金溶解并在NC膜上層析，然后用肉眼直接觀察在15分鐘內(nèi)C、T線的出現(xiàn)情況，并判定檢測結果。檢測結果的解釋:如果對照區(qū)內(nèi)的對照線沒有出現(xiàn)，檢測結果無效，如果僅在對照區(qū)出現(xiàn)一條線對照線，結果為陽性。如果檢測線和對照線都出現(xiàn)，即試紙上出現(xiàn)兩條線，則檢測結果為陰性。通過臨床血清檢測，乙型肝炎病毒核心抗體陽性的樣本和乙型肝炎病毒核心抗體陰性的樣本，本試劑檢測和臨床診斷結果完全一致。臨床檢測表明本試劑的性能和現(xiàn)有診斷手段相比無顯著性差異，適合用于`臨床檢測。
權利要求1.一種使用拭子采集體液檢測乙型肝炎的檢測試劑盒，其特征在于塑料支撐板(7) —端連接上樣墊(1)，上樣墊(I)的一端緊密壓接含有標記乙肝核心抗體(鼠單抗)的膠體金墊(2)，膠體金墊(2) —端緊密壓接硝酸纖維素膜(3)，硝酸纖維素膜(NC)包被有相互分離的檢測線T線(5)和質(zhì)控C線(6)，檢測線T(5)為包被在硝酸纖維素膜上的乙肝核心抗原，質(zhì)控(C)線(6)為包被在硝酸纖維素膜上的抗乙型肝炎病毒核心抗原的抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸樣墊 (4)形成試紙。
專利摘要本實用新型是涉及生物應用技術領域，特別是涉及一種使用拭子采集體液檢測乙型肝炎的檢測試劑盒，采用拭子采集口腔液，用膠體金標記抗乙肝核心抗體(鼠單抗)，包被乙肝核心抗原實現(xiàn)對口腔液中抗乙型肝炎病毒核心抗體的競爭性檢測。具有操作簡便、反應快速、敏感性高、特異性強、適合現(xiàn)場檢測和經(jīng)濟實用等優(yōu)點。
文檔編號G01N33/577GK203101400SQ20122059680
公開日2013年7月31日 申請日期2012年11月12日 優(yōu)先權日2012年11月12日
發(fā)明者祁軍, 于佳, 關淳, 左鋒, 蘇麗, 韓婧娜, 劉寅 申請人:中華人民共和國天津出入境檢驗檢疫局